標準解讀

《GB/T 25168-2010 畜禽cDNA文庫構建與保存技術規程》是由中國國家標準化管理委員會發布的一項國家標準，旨在規范畜禽來源的cDNA（互補DNA）文庫構建及保存過程中所采用的技術方法和操作流程。該標準適用于以畜禽為材料進行基因表達研究時所需建立的cDNA文庫工作。

根據文檔內容，首先明確了術語定義，包括但不限于cDNA文庫、載體等關鍵概念，為后續章節的理解奠定基礎。接著詳細描述了實驗準備階段的要求，比如試劑的選擇與配置、實驗器材的清潔消毒以及樣本采集處理的具體步驟。對于cDNA合成部分，則具體介紹了從總RNA提取到第一鏈cDNA合成直至雙鏈cDNA制備完成整個過程的操作細節，并對每一步驟中可能遇到的問題給出了相應解決策略。此外，還特別強調了在構建cDNA文庫時選擇合適載體的重要性，并列舉了幾種常用的克隆載體類型及其特點。

針對文庫篩選與鑒定環節，《GB/T 25168-2010》提供了多種檢測手段，如PCR擴增法、限制性內切酶酶切分析等，用以評估文庫質量。同時，也指出了如何通過測序或雜交實驗來進一步驗證目標序列的存在與否。

最后，在保存方面，該標準提出了兩種主要方式：短期保存可采用-20℃條件下；長期保存則建議使用液氮罐（-196℃）。并且對于不同類型的cDNA文庫給出了具體的保存條件建議，確保其穩定性和可用性。


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....

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  • 現行
  • 正在執行有效
  • 2010-09-26 頒布
  • 2011-03-01 實施
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GB/T 25168-2010畜禽cDNA文庫構建與保存技術規程_第1頁
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文檔簡介

ICS6502030

B40..

中華人民共和國國家標準

GB/T25168—2010

畜禽cDNA文庫構建與保存技術規程

TechnicalregulationoffarmanimalscDNAlibraryconstructionandpreservation

2010-09-26發布2011-03-01實施

中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布

中國國家標準化管理委員會

GB/T25168—2010

前言

本標準由中華人民共和國農業部提出

。

本標準由全國畜牧業標準化技術委員會歸口

(SAC/TC274)。

本標準起草單位中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所

:。

本標準主要起草人馬月輝關偉軍陸濤峰李向臣佟春玲余露露劉鵬

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T25168—2010

畜禽cDNA文庫構建與保存技術規程

1范圍

本標準規定了畜禽文庫構建方法

cDNA。

本標準適用于豬牛羊馬驢雞鴨鵝等畜禽文庫構建與保存

、、、、、、、cDNA。

2規范性引用文件

下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款凡是注日期的引用文件其隨后所有

。,

的修改單不包括勘誤的內容或修訂版均不適用于本標準然而鼓勵根據本標準達成協議的各方研究

(),,

是否可使用這些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本適用于本標準

。,。

分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T6682

3術語和定義

下列術語和定義適用于本標準

。

31

.

cDNAcomplementarydeoxyribonucleicacid

以成熟為模板在反轉錄酶的作用下合成的鏈

mRNA,cDNA。

32

.

cDNA文庫cDNAlibrary

將處于特定發育階段真核生物體的特定器官或組織中提取的總經過反轉錄等一系列的生化

RNA,

反應合成雙鏈群體后再插入到適當的載體上經轉化寄主菌株構成特定的克隆群體

cDNA,,cDNA。

33

.

寡核苷酸oligonucleotide

一類只有個以下堿基對的短鏈核苷酸的總稱常用作探針確定或的結構

20,DNARNA。

34

.

噬菌斑plaque

被噬菌體感染的細菌所釋放的子代噬菌體會繼續感染周圍的細胞致使在瓊脂平板上生長的菌苔

,,

中有大量的細胞發生裂解形成的透明區域

,。

4試劑及溶液配制

除另有規定外試劑為分析純或生化試劑實驗用水符合一級用水的要求

,。GB/T6682。

41焦碳酸二乙酯diethypyrocarbonateDEPC處理水

.(,)

在去離子水中加入靜置高壓滅菌

1000mL1mLDEPC,37℃12h,(120℃30min)。

422mol/LMgSO4

.

稱取加雙蒸水溶解后定容到

246.50gMgSO4·H2O,400mL(doubledistilledH2O,ddH2O),

高壓滅菌

500mL,。

4310mmol/LMgSO4

.

量取加定容到高壓滅菌

1mL2mol/LMgSO4ddH2O200mL,,30min。

441mol/LTris-ClpH75

.(.)

稱取堿溶于中調至定容到高壓滅菌

121.14gTris,800mLddH2O,pH7.5,1L,。

45SM緩沖液

.

稱取量取

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