ICS.11.220B41中華人民共和國國家標準GB/T18649—2002牛傳染性胸膜肺炎(牛肺疫)診斷技術Diagnostictechniquesforcontagiousboyineepleuropneumonia2002-02-19發布2002-05-01實施中華：人民共；和國發布國家質量監督檢驗檢疫總局

中華人民共和國國國家標準牛傳染性胸膜肺炎(牛肺疫)診斷技術GGB/T18649-2002中中國標準出版社出版發行北京西城區復興門外三里河北街16號郵郵政編碼：100045電話：63787337、637874472002年7月第一版2004年11月電子版制作書號：155066·1-18548版權專有侵權必究舉報電話：（010)68533533

GB/T18649-2002牛肺疫是由絲狀支原體絲狀亞種(PG1)引起的一種牛屬動物的傳染病。健康牛和病牛接觸由呼吸道吸入病牛的“飛沫".是本病的主要傳染方式和感染途徑。暴發流行時多呈急性病演，呼吸系統癥狀非常明顯，體溫在41C以上稽留。但在病的常在地區多見亞急性和慢性病程，以地方流行性為特點。急性期病變為漿液滲出性纖維素性胸膜肺炎，肺間質多孔多汁,肺小葉出現各期肝變、多色，呈大理石樣肺，肺胸膜和肋胸膜粘連·以及胸腔滲出液大量留為特征。轉為慢性后逐漸形成肺包膜或壞死塊。慢性病牛長期帶菌，成為隱蔽的傳染源。在新發的地區對此病的檢驗應采取流行病學、臨床學、血清學、病理學和病原學綜合診斷方法為宜世界動物衛生組織WorldOrganizationforAnimalHealth(英）.OfficeintentionaldesEpizootic(法），OIEJ于1986年和1992年推薦采用稍加改進的Campbell和Turner的補體結合試驗作為牛肺疫血清學診斷的方法，但常出現非特異性反應。新中國成立后一直采用補體結合試驗檢驗牛肺疫，并于1979年將該法列入農業部頒布的《動物檢疫操作規程》中·但這種方法常出現1%～2%非特異性反應。近年來我國研制成功了特異性高的微量凝集反應檢驗方法,它不但降低了非特異性反應率，而且操作簡便，容易判定.應用效果良好。病原學診斷主要取病牛肺臟.胸腔滲出液和肺門淋巴結接種馬丁培養基，即可分離出牛肺疫病原體，此法對急性期病例的檢出率可達100%。本標準的附錄A、附錄B、附錄C、附錄D、附錄E都是標準的附錄本標準由中華人民共和國農業部提出。本標準由全國動物檢疫標準化技術委員會歸口。本標準起草單位：中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所本標準主要起草人：白文彬

中華人民共和國國家標準GB/T18649-2002牛傳染性胸膜肺炎(牛肺疫)診斷技術Diagnostictechniguesforcontagiousbovinepleuropneumonia1范圍本標準規定了牛傳染性胸膜肺炎的病原學檢查、補體結合試驗、微量凝集試驗診斷技術要求。本標準適用于生傳染性胸膜腦炎的檢驗。病原學檢查活用于急性、亞急性及慢性病生分離病原體補體結合試驗和微量凝集試驗適用于牛肺疫抗體的檢測。病原學檢查211材料準備培養基：10%馬血清馬丁肉湯.10%馬血清馬丁瓊脂見附錄A(標準的附錄）。2.2病料采集2.2.1用滅苗器械(剪刀、鍛子、吸管、青霉素瓶等)無菌采集肺臟、胸腔滲出液、肺門淋巴結,并將肺病科剪成3cm～5cm方塊。胸部淋巴結，以整個淋巴結為好，胸腔滲出液用吸管吸入青霉素瓶內。2.2.2受檢病料的保存：肺和淋巴結保存在用茶色廣口瓶盛裝的滅菌的40%～50%甘油生理鹽水中，胸腔滲出液不加任何保存液。病料均放入冰箱內保存，并應盡快送往實驗室檢驗2.3培養方法在無菌條件下剪肺病料或淋巴結小塊，用鉑金耳釣人10%馬血清馬丁肉湯內;胸腔滲出液用滅菌吸管吸取0.1mL～0.3ml接種于馬丁肉湯中即可。同時取剪碎病料小塊或直接取胸腔滲出液·用鉑金耳在10%馬血清馬丁瓊脂培養血上劃線接種,培養血用膠布封口,置37C～38C培養，每天觀察一次5d~7d后判定。2.4結果判定2.4.1培養特征培養性狀和菌落形態：牛肺疫病原微生物在10%馬血清馬丁肉湯內生長初期呈輕微混濁或呈白色點狀、絲狀生長·以后逐漸均勾混濁，半透明稍帶乳光，不產生菌膜或沉淀.也無顆粒懸浮。在10%馬血清馬丁瓊脂培養血上生長退緩,為極小的水滴狀圓形略帶灰色的微細菌落.中央有乳頭狀突起。菌落直徑約0.2mm～0.5mm,小的不易看見，需用放大鏡或低倍顯微鏡觀察。染色鏡檢取馬丁肉湯培養物涂片放溫箱中干燥.后在酒精燈上輕微火焰固定.再用3%～5%絡酸蒸留水溶液固定1min～2min,水洗，浸入用蒸留水稀釋的1：30的姬姆薩氏染液中染色，染片時染色缸放入普通冰箱內過夜，染色后取出用蒸留水輕洗，自然干燥后用800～1000倍顯微鏡觀察。菌形為多形態，以球點形最常見，大小在125nm～250nm.2.4.2生化特性糖發酵試驗.1取蛋白陳水(pH7.8～8.0)100mL·氯化鈉0.5g