第十六章體液免疫球蛋白測定免疫球蛋白（Ig）：抗體活性、化學結構與抗體相似重鏈性質，Ig分5類：IgG(γ)、IgA(α)、IgM(μ)、

IgD(δ)、IgE(ε)輕鏈性質，Ig分2型：κ、λIg占血漿蛋白總量：20%檢測意義：反應機體的免疫功能、診斷疾病Ig含量：血清IgG、IgA、IgM：g/L、IgD、IgE：mg/L

體液IgG、IgA、IgM：mg/L五類免疫球蛋白的特點與功能一、IgG

1.單體。血清中含量最高。可分為四個亞類，各亞類的生物學活性有差異。2.主要的抗感染抗體。具有抗菌、抗病毒、中和毒素、免疫調理及ADCC作用。3.唯一通過胎盤的抗體（有自然自動免疫作用）。4.半衰期約16～24天，故臨床應用以2～3周重復為宜。治療用的丙球的主要成分為IgG（有人工被動免疫作用）。5.某些自身抗體和引起Ⅱ、Ⅲ型超敏反應的抗體屬此類。二、IgM1.為五聚體。又稱巨球蛋白。激活補體和免疫調理作用較IgG強。2.個體發(fā)育中合成最早的Ig。3.半衰期較短，有助于感染性疾病的早期診斷。4.天然的血型抗體。5.單體的IgM是細胞膜表面型免疫球蛋白。IgM

J鏈IgM抗體結構分泌型IgM膜型IgMsIgM

IgaIgbIgaIgb

三、IgA1.有血清型和分泌型。血清型有兩個亞類。2.分泌型IgA（SIgA）存在于外分泌液中，初乳中含量較高。3.SIgA是皮膚和粘膜表面局部抗感染的重要因素（如免疫屏障、中和病毒及抑制病毒復制的作用）。四、IgE1.血清中含量極低。2.對肥大細胞及嗜堿性粒細胞有高度的親和力。與Ⅰ型超敏反應的發(fā)生有關。3.可能與機體抗寄生蟲免疫有關。五、IgD1.血清含量極低。

2.對蛋白酶敏感，極易降解。第一節(jié)血清IgG、IgA、IgM測定

IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白，是血液和細胞外液中的主要抗體，也是機體再次免疫的主要抗體。

IgA分為血清型和分泌型，是參與黏膜局部免疫的主要抗體，主要存在于胃腸道和支氣管分泌液、初乳、唾液和淚液中。

IgM是分子量最大的免疫球蛋白，是個體發(fā)育過程中最早合成和分泌的抗體，也是抗原刺激誘導的體液免疫應答中最早出現(xiàn)的抗體。一、血清IgG、IgA、IgM測定測定方法

單向環(huán)狀免疫擴散法

免疫濁度法原理誤差主要原因評價

單向環(huán)狀免疫擴散法示意圖

原理誤差主要原因評價

單向環(huán)狀免疫擴散法免疫濁度法

直接透射比濁法速率散射比濁法注意點評價二、血清IgG、IgA、IgM測定的臨床意義低Ig血癥:先天性低Ig血癥（免疫缺陷病）；獲得性低Ig血癥(蛋白丟失).

高Ig血癥:多克隆Ig增高（感染）；單克隆Ig增高（免疫增殖病）.不同年齡組血清中免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的含量特點目的研究不同年齡組間及成年男女不同性別間血清中免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)的含量特點.方法選取2010年1月至2012年2月的正常體檢及無慢性細菌感染、無先天和獲得性免疫性疾病的空腹血清標本共424例.將其分為:＜1、1～3、4～6、7～9、10～16歲；成人對照共6個組,成人對照又分為男女2個組.分別測定血清中IgG、IgA、IgM的含量,并進行統(tǒng)計分析.結果對IgG、IgA、IgM各年齡組進行S-N-K的方差分析,F值分別為131.8、192.4、15.7,P值均＜0.05.組間的兩兩比較結果如下:IgG、IgA各組之間均差異有統(tǒng)計學意義.IgM各組中,＜1歲組與其他各組之間的差異均有統(tǒng)計學意義.成人對照組與1～3歲組之間P＞0.05,差異無統(tǒng)計學意義,而與其他組之間差異均有統(tǒng)計學意義.4～6歲組、7～9歲組、10～16歲組之間的P＞0.05,差異無統(tǒng)計學意義.IgG、IgA、IgM成年男、女組的P值均＞0.05,差異無統(tǒng)計學意義.結論免疫球蛋白IgG、IgA,在＜1歲組中含量最少,隨著年齡的增大含量逐漸增加而接近成人水平.免疫球蛋白IgM,在＜1歲組中含量最少,到3歲時就可達到成人水平.而后含量又緩慢增加并超過成人,最后逐漸降到成人水平.成人男女之間IgG、IgA、IgM含量沒有差異.第二節(jié)血清IgD、IgE測定

正常人血清中IgD含量很低，膜結合型IgD(mIgD)構成BCR，是B細胞分化發(fā)育成熟的標志。

IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要由黏膜下淋巴組織中的漿細胞分泌，為親細胞抗體，引起I型超敏反應；與機體抗寄生蟲免疫也可能有關。一、血清IgD測定及臨床意義

測定方法：

放射免疫分析法化學發(fā)光免疫分析法免疫比濁法

酶聯(lián)免疫吸附法IgD：生物功能不詳

增高：類風濕性關節(jié)炎、變態(tài)反應性疾病、敗血癥、新生兒溶血病

降低：意義不大二、血清IgE測定及臨床意義測定方法總IgE測定：放射免疫分析法

化學發(fā)光免疫分析法免疫比濁法酶聯(lián)免疫吸附法特異性IgE測定：免疫斑點法酶聯(lián)免疫吸附法IgE臨床意義：

增高：變態(tài)反應性疾病、寄生蟲感染、病毒感染、自身免疫性疾病。

降低：意義不大第三節(jié)尿液及腦脊液Ig測定

正常人尿液中的Ig含量甚微，當機體的免疫功能異常或炎癥反應引起腎臟疾病時，可導致腎小球濾過膜分子屏障破壞或電荷屏障受損，從而引起球蛋白及其他大分子蛋白質漏出增多。生理情況下，Ig根據(jù)其分子量大小，通過血腦屏障的難易度不同，IgG、IgA、IgM在腦脊液中的濃度遞減。病理狀態(tài)時，腦脊液組分發(fā)生改變。一、尿液Ig測定及臨床意義尿液：

腎小球濾膜受損程度：選擇性蛋白尿指數(shù)SPISPI=(尿IgG/血清IgG）/（尿TRF/血清TRF）

TRF為轉鐵蛋白

增高有臨床意義：腎病、免疫增殖病可根據(jù)尿內Ig增高的類型幫助鑒別診斷腎小球疾病的種類二、腦脊液Ig測定及臨床意義腦脊液：生化儀檢測白蛋白

血腦屏障受損程度：白蛋白商值=CSF中白蛋白/血清中白蛋白）*1000CSF-IgG指數(shù)=（CSF中IgG*血清中白蛋白）/（血清IgG*CSF中白蛋白）

增高有臨床意義：多發(fā)性硬化癥、中樞神經系統(tǒng)感染第四節(jié)血清IgG亞類測定及臨床意義Ig亞類：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，其含量依次下降測定方法：

單向免疫擴散法免疫比濁法（常用）放射免疫分析法酶聯(lián)免疫吸附法臨床意義：IgG亞類的含量隨年齡的不同而變化免疫缺陷病降低明顯第五節(jié)M蛋白測定及臨床意義

M蛋白

B淋巴細胞或漿細胞單克隆異常增殖產生的異常單克隆免疫球蛋白（monoclonalproteinMP)

臨床上多見于多發(fā)性骨髓瘤、高丙種球蛋白血癥、惡性淋巴瘤、重鏈病、輕鏈病等

M蛋白測定蛋白區(qū)帶電泳：經典方法計算蛋白含量和百分比免疫比濁法：免疫球蛋白定量準確性高、快速免疫電泳：M蛋白分型免疫固定電泳：M蛋白分型及鑒定，分辨率高原理：區(qū)帶電泳＋雙向擴散1、將蛋白質抗原在凝膠中電泳分成肉眼不可見的若干區(qū)帶2、沿電泳方向挖一與之平行的抗體槽，加入相應抗血清進行雙向擴散。技術要點：制備瓊脂板打孔，加樣于孔內，電泳2～3mA/cm，0.5～1h后，槽內加入相應抗血清作雙向擴散。免疫電泳-+免疫電泳示意圖免疫電泳原理，不同之處是將抗血清直接加于電泳后的蛋白質區(qū)帶表面，抗原抗體在凝膠中直接發(fā)生沉淀反應，在適當位置形成抗原抗體復合物，經染色后，可對各類免疫球蛋白及其輕鏈進行分型原理區(qū)帶電泳＋沉淀反應免疫固定電泳GAMκλIgG-κ型M蛋白Marker免疫固定電泳模式圖

左圖為IgGκ型,中圖為IgGλ型，右為正常

SPGAMκλSPGAMκλSPGAMκλ免疫固定電泳示意圖第六節(jié)輕鏈測定及臨床意義本周蛋白的檢測

樣本：尿液方法：免疫電泳、加熱沉淀（50-60℃

），繼續(xù)加熱90℃

溶解（簡便易行）κ–Ig和λ-Ig定量檢測

樣本：尿液、血液方法：單向免疫擴散法、免疫比濁法（常用，準確、快速）應用：M蛋白血癥的分型及鑒定第七節(jié)冷球蛋白的檢測冷球蛋白：

在低溫（0-4℃）下發(fā)生沉淀，加溫（37℃

）后又復溶的免疫球蛋白在低溫時產生冷沉淀的機制尚不十分明確多數(shù)冷球蛋白為免疫復合物，其抗原可以是外源性的，也可以是內源性的冷球蛋白的類型及臨床意義

I型：為單克隆冷球蛋白型，占25%～40%;多見于免疫增生性疾病

Ⅱ型：單克隆和多克隆混合型冷球蛋白，占15%～25%;多見于自身免疫性疾病

Ш型：多克隆混合型冷球蛋白，約占50%;多見于自身免疫性疾病以及感染性疾病1.血清免疫球蛋白測定方法有哪些?2.比較單向免疫擴散法和速率散射比濁法優(yōu)缺點。3.免疫球蛋白IgG、IgA、IgM測定有何臨床意義？4.如何正確選擇測定M蛋白的實驗項目思考題

免疫球蛋白是由漿細胞所產生能與相應抗原特異性結合的球蛋白分為IgG、IgA、IgM、IgE和IgD五類，其相應重鏈分別稱為γ鏈、α鏈、μ鏈、δ鏈和ε鏈輕鏈分為κ型和λ型，