HPLC1100ChemStation

高級操作培訓授課教師紀學海2023年1月9日Update:2005-3-21Slide1HPLC1100ChemStation

高級操作培訓授課2023/1/9Slide2HPLC1100Advance操作培訓日程安排第一天上午：1課程簡介及相互介紹

2化學工作站各個工作界面介紹

3完整方法的編輯、修改、存儲及運行

4HPLC1100儀器配置及參數設置 下午：1數據分析參數設置

2色譜圖的優化處理

3積分事件及手動積分的選擇和應用

4高級校正表的編輯和設置第二天上午：1報告格式的選擇及設定

2光譜的提取、光譜庫的建立及檢索

3色譜峰純度檢測

4色譜條件的優化及色譜圖的提取 下午：1序列參數的設置以及統計功能的使用

2批處理功能的設置及應用 2023/1/8Slide2HPLC1100Advan2023/1/9Slide3第三天上午：1個性化報告的設定與編輯 2工作站故障診斷功能的應用 3結業考試

結業午餐

下午：1

化學工作站的重新安裝、配置及啟動(選修) 2

發結業證 3自由練習、討論2023/1/8Slide3第三天上午：1個2023/1/9Slide4第一章化學工作站各個工作界面介紹2023/1/8Slide4第一章化學工作站各個工作界面2023/1/9Slide5化學工作站各個工作界面的切換切換工作界面2023/1/8Slide5化學工作站各個工作界面的切換切2023/1/9Slide6化學工作站Views菜單Fullmenu/shortmenu切換顯示當前日記本，察看錯誤信息等內容2023/1/8Slide6化學工作站Views菜單Ful2023/1/9Slide7化學工作站的ChangeAccessLevel功能如果要使用密碼保護化學工作站，請選中此選項。2023/1/8Slide7化學工作站的ChangeAc2023/1/9Slide8化學工作站Scheduler的使用使用時要注意保存，否則工作站不予以執行。2023/1/8Slide8化學工作站Scheduler的2023/1/9Slide9化學工作站Scheduler的使用Result欄中可以顯示化學工作站執行Command的結果2023/1/8Slide9化學工作站Scheduler的2023/1/9Slide10選擇在線信號從View菜單,選擇OnlineSignals,單擊Change，在EditSignalPlot窗口中選擇要監控的信號。2023/1/8Slide10選擇在線信號從View菜單2023/1/9Slide11在線信號顯示2023/1/8Slide11在線信號顯示2023/1/9Slide12查看Logbook從View菜單選擇Logbook，單擊CurrentLogbook顯示當前Logbook內容。2023/1/8Slide12查看Logbook從View2023/1/9Slide13方法的概念：方法是一個參數集，它包括分析一個樣品所需要

的所有參數。方法文件名：xxx.m。方法的組成：方法信息(Methodinformation)儀器參數及采集參數(Instrument/Acquisition)數據分析參數(DataAnalysis)運行時間表(RunTimeChecklist)第二章方法編輯、保存2023/1/8Slide13方法的概念：方法是一個參數集2023/1/9Slide14使用EditEntireMethod

編輯一個完整的方法編輯一個完整的方法單擊圖標，也可以開始編輯一個完整的方法。2023/1/8Slide14使用EditEntire2023/1/9Slide15選擇所要編輯的內容2023/1/8Slide15選擇所要編輯的內容2023/1/9Slide16方法信息(MethodInformation)2023/1/8Slide16方法信息(MethodI2023/1/9Slide17包括：流量(Flow)，流動相組成(Solvents)，停止采集時間(StopTime)，后運行時間(PostTime)，梯度編程(Timetable)，壓力限制設定(PressureLimits)等泵的操作參數2023/1/8Slide17包括：流量(Flow)，流動2023/1/9Slide18標準自動進樣器參數2023/1/8Slide18標準自動進樣器參數2023/1/9Slide19標準進樣過程原理示意圖Meteringdevice6-portvalveSamplingunitFrompumpTocolumnTowaste準備位置抓取樣品瓶吸取樣品進樣和運行位置2023/1/8Slide19標準進樣過程原理示意圖Met2023/1/9Slide20標準自動進樣器的程序進樣2023/1/8Slide20標準自動進樣器的程序進樣2023/1/9Slide21Wellplate自動進樣器參數2023/1/8Slide21Wellplate自動進樣器2023/1/9Slide22控溫范圍：低于室溫10℃～80℃兩個單獨的加熱區

安裝切換閥可以進行柱切換

可以容納30cm長色譜柱

安裝柱識別可以自動記錄進樣次數柱溫箱參數設置2023/1/8Slide22控溫范圍：低于室溫10℃～82023/1/9Slide23可以選擇存儲5個信號信號波長范圍191-949nm可變狹縫：1,2,4,8,16nm可以時間編程可以保存數張或所有光譜DAD檢測器參數設置2023/1/8Slide23可以選擇存儲5個信號DA2023/1/9Slide24DAD參數優化StepandSlit:Agilent1100DAD狹縫寬度可以程序變化，變化步徑1，2，4，8，16nm。如果樣品濃度較高，而需要精細的光譜結構，建議使用1或2nm的狹縫寬度。如果樣品濃度較稀，建議使用8或16nm寬度狹縫。采集樣品的譜帶寬度至少要與狹縫寬度一樣。PeakWidth:

增加響應時間（峰寬）可以增加組成色譜信號中每個數據點的采集次數。因為檢測器的噪音與采集次數平方根成反比，所以增加響應時間可以降低噪音。但增加響應時間（峰寬）會降低定量分析的重復性。一般對于精確的定量分析，一個色譜峰要求采集20個數據點。設置峰寬的經驗：設置峰寬等于實際色譜峰的最窄峰寬。2023/1/8Slide24DAD參數優化2023/1/9Slide25SampleSignalandReferenceSignal:

設置樣品吸收波長與參比波長遵從下列規則：樣品吸收波長選擇在樣品的最大吸收波長，而且在此吸收波長下沒有流動相吸收的干擾。選擇樣品信號的譜帶寬度應覆蓋樣品吸收譜帶的半峰寬（假設樣品吸收譜帶為高斯峰）。參比吸收譜帶應選擇在盡量靠近樣品吸收譜帶，而且在此區域沒有或盡量低的吸收強度。參比峰譜帶寬度要大于或等于樣品譜帶寬度。注意：增加樣品譜帶寬度，會降低樣品的吸收強度，但會降低噪音。選擇合適的參比吸收波長可以減小梯度洗脫過程中的基線漂移。PeakSupression（峰抑制）:

DAD檢測器一個非常有趣的功能是進行峰抑制。例如有兩個樣品沒有分開，共同洗脫出來，可以設置某一個樣品的等吸收波長為參比波長，則被設為參比峰的樣品被抑制，而另一個樣品峰被分離。不過，此樣品峰的吸收強度要損失10％～30％。2023/1/8Slide25SampleSignal2023/1/9Slide26VWD檢測器參數設置2023/1/8Slide26VWD檢測器參數設置2023/1/9Slide27選擇在方法中要執行的項目可以選擇保存GLP數據可以將方法和數據保存在一起運行時間表(RunTimeChecklist)2023/1/8Slide27選擇在方法中要執行的項目運行2023/1/9Slide28從Method菜單選擇SaveMethod/SaveMethodas或從存貯方法工具圖標存貯方法。存儲方法單擊本圖標可以保存方法，務必注意不要發生方法覆蓋、丟失2023/1/8Slide28從Method菜單選擇Sav2023/1/9Slide29要分析單個樣品，先從RunControl菜單選擇SampleInfo...,輸入樣品信息。樣品信息包括：

操作者姓名(OperatorName)，存盤數據文件(DataFile)，樣品參數(SampleParameters)

樣品評述(comment)。然后運行方法(RunMethod)。運行方法2023/1/8Slide29要分析單個樣品，先從RunC2023/1/9Slide30用戶圖形友好界面(GUI)鼠標左鍵單擊任一模塊圖標均可彈出快捷菜單使用鼠標左鍵單擊各個模塊右下角圖標均可對該模塊進行控制：開、關或實現基線調零等功能。所有模塊同時開、關控制2023/1/8Slide30用戶圖形友好界面(GUI)鼠2023/1/9Slide31用戶圖形友好界面——各個模塊的控制2023/1/8Slide31用戶圖形友好界面——各個模塊2023/1/9Slide32用戶圖形界面——溶劑瓶的填充量2023/1/8Slide32用戶圖形界面——溶劑瓶的填充2023/1/9Slide33用戶圖形友好界面——各種參數的顯示點擊下拉菜單，可以分別顯示各種所需的參數：LC采集參數、數據分析參數等，且便于用戶改動。2023/1/8Slide33用戶圖形友好界面——各種參數2023/1/9Slide34Instrument菜單簡介設置各個模塊的參數開啟、關閉整個系統查看儀器Firmware及序列號查看、輸入色譜柱信息使用了Wellplate自動進樣器才出現該菜單對化學工作站進行儀器配置2023/1/8Slide34Instrument菜單簡介2023/1/9Slide35選擇InstrumentMorePumpAuxiliary…菜單，即可彈出下圖窗口。泵的輔助功能在該窗口可以設置泵的最大升流速率、泵沖程大小以及設置溶劑的壓縮補償因子。2023/1/8Slide35選擇Instrument2023/1/9Slide36自動進樣器的擴展功能2023/1/8Slide36自動進樣器的擴展功能2023/1/9Slide37色譜柱信息的輸入2023/1/8Slide37色譜柱信息的輸入2023/1/9Slide38VWD停泵掃描采集光譜使用VWD停泵掃描的功能，可以采集樣品的吸收光譜，主要操作步驟如下：1.在Online工作站界面的View菜單下打開VWDScans窗口；2.按照正常的進樣方式采集樣品色譜數據，并保證能夠在

OnlineSignal窗口中觀測到色譜信號；3.進樣后，色譜圖上出現基線時，掃描空白吸收光譜

在Instrument菜單下，選擇MoreVWD中的BlankScan4.色譜圖上出現色譜峰時，掃描樣品吸收光譜

在Instrument菜單下，選擇MoreVWD中的SampleScan

此時得到的是自動扣除空白吸收后的樣品吸收光譜。2023/1/8Slide38VWD停泵掃描采集光譜使用V2023/1/9Slide39可變波長檢測器VWD的停泵掃描功能進樣之前選擇VWDScans菜單，打開VWD光譜掃描窗口2023/1/8Slide39可變波長檢測器VWD的停泵掃2023/1/9Slide40可變波長檢測器VWD的停泵掃描功能進樣后，流動相流經流通池，給出色譜基線信號時，點擊MoreVWD菜單中的BlankScan，掃描空白流動相的吸收光譜，如下圖所示。2023/1/8Slide40可變波長檢測器VWD的停泵掃2023/1/9Slide41可變波長檢測器VWD的停泵掃描功能掃描所得的流動相吸收光譜2023/1/8Slide41可變波長檢測器VWD的停泵掃2023/1/9Slide42可變波長檢測器VWD的停泵掃描功能出現色譜峰時，點擊SampleScan，掃描樣品峰的吸收光譜2023/1/8Slide42可變波長檢測器VWD的停泵掃2023/1/9Slide43可變波長檢測器VWD的停泵掃描功能光譜窗口中給出扣除流動相吸收光譜后的樣品峰吸收光譜2023/1/8Slide43可變波長檢測器VWD的停泵掃2023/1/9Slide44第三章譜圖優化本章內容：譜圖調用空白譜圖的扣除譜圖優化譜圖加標注譜圖比較、處理2023/1/8Slide44第三章譜圖優化本章內容：譜2023/1/9Slide45調用數據文件在DataAnalysis界面，File菜單下選擇LoadSignal。扣除空白譜圖2023/1/8Slide45調用數據文件在DataAn2023/1/9Slide46扣除空白譜圖選擇需要扣除的空白運行色譜文件2023/1/8Slide46扣除空白譜圖選擇需要扣除的空2023/1/9Slide47選擇、規定一個方法中要進行調用、處理的信號SignalDetails2023/1/8Slide47選擇、規定一個方法中要進行調2023/1/9Slide48使用SignalOptions...

功能來優化色譜圖的顯示譜圖優化在DataAnalysis界面下，Graphics菜單下選擇SignalOptions...2023/1/8Slide48使用SignalOpti2023/1/9Slide49譜圖優化工具譜圖優化圖標譜圖顯示方式化合物名稱保留時間顯示標題顯示軸單獨/重疊顯示基線打印窗口色譜圖控制圖標移動標注文字標注設置標注格式線形標注刪除標注WMF圖標注拷貝2023/1/8Slide49譜圖優化工具譜圖優化圖標譜圖2023/1/9Slide50選擇:字體和字型字體大小字體顏色、旋轉角度等在色譜圖上加標注2023/1/8Slide50選擇:在色譜圖上加標注2023/1/9Slide51AddAnnotationDrawLineinWindowMoveAnnotationDeleteAnnotation譜圖處理工具譜圖處理工具2023/1/8Slide51AddAnnotation2023/1/9Slide52如何執行積分自動積分如何建立積分事件表如何使用積分事件表手動積分本章內容：第四章積分優化2023/1/8Slide52如何執行積分本章內容：第四章2023/1/9Slide53

增強積分方式可以提供:當基線波動時，基線的定位。使用初始峰高參數去除噪音峰。控制積分開始和結束的標識。在噪音中定位信號峰。使用二階導數確定肩峰。增強積分方式2023/1/8Slide53增強積分方式可2023/1/9Slide54當調用信號時，可以通過Integrateafterload選項自動積分。您也可以通過以下方式進行積分:從Integration菜單選擇積分或自動積分選擇積分工具。運行一個包括數據分析的完整方法。如何執行積分2023/1/8Slide54當調用信號時，可以通過Int2023/1/9Slide55自動積分檢查開始和結束區域，確定噪音。賦予初始SlopeSensitivity和HeightReject值.對第一次積分賦予一個臨時峰寬值。設置AreaReject為0。執行測試性積分，有可能重復幾次。基于較早洗脫出的色譜峰寬計算峰寬值。優化SlopeSensitivity和HeightReject。從初始的峰寬和噪音水平計算AreaReject。2023/1/8Slide55自動積分檢查開始和結束區域，2023/1/9Slide56積分事件初始值信號選項框高級基線選擇2023/1/8Slide56積分事件初始值信號選項框高級2023/1/9Slide57高級基線2023/1/8Slide57高級基線2023/1/9Slide58添加積分事件功能刪除積分事件功能積分事件表2023/1/8Slide58添加積分事件功能刪除積分事件2023/1/9Slide59積分任務對當前色譜圖積分自動積分積分事件設置BaselineNow設置BaselineHold設置拖尾切線撇去積分器開關設置斜率設置最小峰面積設置固定峰寬設置肩峰檢測積分工具欄2023/1/8Slide59積分任務對當前色自動積分積分2023/1/9Slide60Peakwidth:(半峰寬)如果沒有設置半峰寬的時間積分表，半峰寬在整個積分過程中自動變化，變化遵從0.75×exitingpeak+0.25×currentpeak。TimedEvents:(時間性積分事件)AreaSumONorOFF:設定某一時間段內進行峰面積加和，加和后保

留時間被分配到第一個峰的保留時間上。BaselineAllValleysOnorOFF:

設定是否進行峰谷積分。2023/1/8Slide60Peakwidth:(半2023/1/9Slide61BaselineHoldONorOFF:在BaselineHoldON與BaselineHoldOFF兩點間做水平基線。BaselineNow:

在某一時刻點重新設置基線。BaselineBack:

設置某一時刻點，從檢測到的基線向此點做水平基線。2023/1/8Slide61BaselineHold2023/1/9Slide62存貯積分事件到方法作為方法的一部分存貯積分參數保存方法2023/1/8Slide62存貯積分事件到方法作為方法的2023/1/9Slide63選擇積分工具對目前色譜圖進行積分自動積分積分事件手動積分畫基線手動積分負峰手動積分切線撇去手動積分裂分峰手動積分去除峰手動積分工具2023/1/8Slide63選擇積分工具對目前色譜自動積2023/1/9Slide64DrawBaselineNegativePeak(s)TangentSkimSplitpeaksDeletePeak(s)AllValleys手動積分2023/1/8Slide64DrawBaseline手2023/1/9Slide65峰類型符號峰起止點符號

B基線 P基線滲透

V峰谷點 H水平基線

M手動積分 T切線撇去其它符號

+參考峰 I內標峰

A+面積加和峰 N負峰

S溶劑峰 警示符號

+高于含量上限 －低于含量下限2023/1/8Slide65峰類型符號2023/1/9Slide66基線符號

BBBBB=基線BVBV=峰谷點B PBP=基線滲透BHHH=水平基線2023/1/8Slide66基線符號B2023/1/9Slide67如何建立校正表如何選擇校正表的設置如何進行再校正如何使用峰識別工具本章內容：第五章高級校正表的建立2023/1/8Slide67如何建立校正表本章內容：第五2023/1/9Slide68配置系列標樣*，然后逐一進樣分析。

*系列標樣濃度范圍要包含未知樣品濃度。

調用低濃度標樣數據，優化譜圖顯示。優化積分參數，獲得滿意的積分結果，

然后存貯積分事件到方法。用最低濃度標樣數據建立一級校正表。逐個對每個標樣進行優化譜圖，優化

積分后，分別加入校正表。檢查校正曲線，把校正曲線存入方法。建立校準表的過程2023/1/8Slide68配置系列標樣*，然后逐一進樣2023/1/9Slide69校正參數的建立Signaldetails2023/1/8Slide69校正參數的建立S2023/1/9Slide70AvailableSignals此框包括了所有要被處理的信號，可從此框選擇被處理的信號，通過AddtoMethod按鍵拷貝到方法中。拷貝之后可以編輯初始時間(Start)和中止時間(End)。只有在此時間范圍內的信號才被處理。如果初始時間和中止時間及延遲時間(DelayTime)均設置為0，被選定信號的所有數據均被處理。Delay可以通過設置時間延遲(Delay)來補償檢測器信號的延遲。例如：串聯使用兩個檢測器，對于同一信號會有時間延遲。通過設置Delay來補償時間延遲，這樣可以進行峰識別。通過時間延遲，還可以修改某個色譜數據的保留時間。保留時間設置區域沒有限制，而且數值可正可負。Align此功能用于LC/MSD。2023/1/8Slide70AvailableSign2023/1/9Slide71CalibrationSettings2023/1/8Slide71CalibrationSe2023/1/9Slide72校正參數的設置Title輸入校正表的標題。UseSampleData此對話框有兩種選擇：FromSampleDefaultsBelow:選擇此項后，可以設置下面SampleDefaults各參數，所有在SampleInfo.中所設置的參數均被新參數替代。

FromDataFile:所有涉及到的參數在數據處理過程中均以SampleInfo.表中參數為準。Amount此處濃度只在計算ESTD%和ISTD%時有效。Amount輸入樣品總濃度。2023/1/8Slide72校正參數的設置Title2023/1/9Slide73SampleISTD未知樣品中內標濃度。可以輸入幾個內標。I＃用于識別內標物。此處I＃與校正表中I＃一致。CalculateUncalibratedPeaks此選項用于定義未校正峰的響應因子。校正因子可以使用某一校正化合物的校正因子(UsingCompound)，也可以輸入某一響應因子數值(WithRspFactor)。Weight作標準曲線時，定義不同校正點的權重（重要性）。2023/1/8Slide73SampleISTD2023/1/9Slide74調用標樣進行積分參數優化2023/1/8Slide74調用標樣進行積分參數優化2023/1/9Slide75建立一級校正表2023/1/8Slide75建立一級校正表2023/1/9Slide76CalibrationTable可以通過兩種方法建立新校正曲線表：ManualSetup:手工輸入保留時間和響應因子。AutomaticSetupLevel:工作站自動將保留時間及其它色譜參數輸入校正表，用戶只需輸入標樣濃度，工作站自動計算響應因子。CalibrationMode此項選擇只在歸一化法(Norm%)中有效。選擇CalculateSignalsSeparately后，在計算時，每個信號被獨立報告。否則所有的信號均被歸一化。2023/1/8Slide76CalibrationTa2023/1/9Slide77填入:化合物名稱濃度選擇:參比峰內標內標標號#校正表的建立2023/1/8Slide77填入:校正表的建立2023/1/9Slide78校正表的選擇Compound,Amt,Area,RspFactor,Ref,ISTD,#Compound,Grp,Amt,LowLimit,HightLimitCompound,Amt,Area,Def,CurveType,OriginCompound,Area,Rsp%,Def,+-,PKUsage編輯校準表的內容峰加和2023/1/8Slide78校正表的選擇Compound2023/1/9Slide79每種校正表方式都有各自的缺省方式，用戶可根據自己的需要使用EditOptions…對每種方式進行編輯。在左側Columnsnotshown框中選擇所需內容后按“→”鍵，所需內容加到右側Columnsshown框中。2023/1/8Slide79每種校正表方式都有各自的缺省2023/1/9Slide80CompoundDetails2023/1/8Slide80CompoundDetai2023/1/9Slide81PeakDetailsPeakDetails表包含了校正曲線的信息。如果Def欄被選擇，校正曲線參數由CalibrationSettings中的參數決定。如果校正曲線參數在CalibrationSettings中發生改變，則CalibrationTable會自動更新。校正曲線參數包含：校正曲線類型、原點的選定以及各校正點的權重。2023/1/8Slide81PeakDetailsPe2023/1/9Slide82IdentificationDetailsIdentificationDetails中定義了每個峰的作用，并允許用戶定義特征峰。每個峰的最大吸收總被定義為主峰。Rsp%:

顯示響應比率（特征峰/主峰）。DefQualifierTolerance(Def):

選擇此欄使用缺省的響應比率偏差。＋－:

特征峰的響應占主峰響應的百分數。此欄設置用戶期待的響應比率偏差。例如此欄設置20，則偏差窗口為-10％～10％。2023/1/8Slide82Identification2023/1/9Slide83PeakUsage

顯示峰的選擇——Main,Qualifier或Ignore。儀器設定的缺省值為：化合物最大峰為Main（主峰），其它峰為Ignore。Main:主峰。此峰用作定量計算。主峰和特征峰一起用作定性。只能選擇一個主峰。Qualifier:特征峰。特征峰用于確定主峰屬于哪一期望化合物。一般情況下：一個化合物在不同的波長范圍有一恒定的響應比率。因此對于一個化合物，其特征峰的響應與主峰的響應為一恒定比率。可以通過+-欄設置允許的響應比率偏差。如果某一化合物的響應比率超出此設定值，則此化合物峰不被定量。Ignore:如果峰選擇此項，則此峰既不用于定量，也不用于定性。此峰在校正表中留作將來使用。可以用Delete鍵刪除此峰。2023/1/8Slide83PeakUsage2023/1/9Slide84CalibrationTableoptionCalibrationTableOption讓用戶選擇校正表中顯示哪些內容。CalibrationTableOption包括兩部分內容：Columnsnotshown顯示了哪些內容可以加到校正表中；Columnsshown顯示校正表中的內容。要選擇哪些內容加到校正表中，只需選擇Columnsnotshown中的內容，單擊->鍵把所需內容加Columnsshown中。2023/1/8Slide84CalibrationTa2023/1/9Slide85峰加和功能主要用于石化或制藥行業某些特殊應用，該功能可以對某個時間段內連續或不連續的色譜峰進行總含量定量計算。如下圖所示，需要測量除四個主要目標化合物峰aaa、bbb、ccc、ddd以外的所有4~13min時間段內的雜質峰總含量時，即可使用PeakSumming功能。PeakSumming2023/1/8Slide85峰加和功能主要用于石化或制藥2023/1/9Slide86調用標樣數據，并對所有峰(包括雜質峰)進行積分參數優化，得到各個峰的準確峰面積。在Calibration菜單下，建立標準的校正表，即在校正表中輸入aaa、bbb、ccc、ddd四個標準化合物的含量。選擇CalibrationTableOption…選項中PeakSumming。此命令執行后，校準表變成峰加和型校正表，如下所示。輸入4~13min時間段的片斷名稱，如impurity，并指定所需的RF因子。如果UseReference項中選擇None，則可以在ResponseFactor欄中手工輸入所需的RF數值。2023/1/8Slide86調用標樣數據，并對所有峰(包2023/1/9Slide87峰加和表編輯好，選擇Report菜單下SpecifyReport選項，在SpecifyReport窗口，選中AddSummedPeaksTable選擇，并規定使用外標法定量。調用未知樣品，選擇Report菜單下PrintReport，發現得到的報告中除正常的外標報告以外還有如下內容：==============================================================SummedPeaksReport==============================================================Signal1:DAD1B,Sig=305,190Ref=550,100NameStartTimeEndTimeTotalAreaAmount[min][min][mAU*s][ng/ul]|||||impurity4.00013.0002098.379312.0984Totals:2.0984注：此處用于雜質定量計算的RF值為手工輸入的0.001。2023/1/8Slide87峰加和表編輯好，選擇Repo2023/1/9Slide88調用信號——加入二級校正輸入二級標樣含量2023/1/8Slide88調用信號——加入二級校正輸入2023/1/9Slide89加入更多的級別輸入對應標樣含量線性相關系數2023/1/8Slide89加入更多的級別輸入對應標樣含2023/1/9Slide90SaveTabletoMethod把校正表存入方法2023/1/8Slide90SaveTableto2023/1/9Slide91再校正當校正曲線上的點發生偏移，需要對相應的濃度點做再校正。再校正過程如下：進一針相應濃度的標樣。調用此數據文件。在Calibration菜單下，選擇Recalibrate…,選擇需要再校正的級別，然后選擇如何再校正－Average或Replace。工作站自動進行再校正。2023/1/8Slide91再校正當校正曲線上的點發生偏2023/1/9Slide92此項功能讓用戶設置如何對現有校正表進行再校正。NoUpdate:不進行再校正。AverageAllCalibrations:與原有的校正表進行平均。FloatingAverageNew%：新的校正數據在平均時所占的比例。AdvancedCalibration2023/1/8Slide92此項功能讓用戶設置如何對現有2023/1/9Slide93CalibrationReportOption此項功能可以設置再校正報告在序運行許過程中如何打印。2023/1/8Slide93CalibrationRe2023/1/9Slide94第六章設定報告格式本章內容:如何定義一個報告類型報告文件的存貯方式報告類型選擇如何使用系統適用性報告GLP報告中內容如何存貯GLP數據如何執行自動庫檢索如何獲得峰純度信息2023/1/8Slide94第六章設定報告格式本章內容2023/1/9Slide95定義報告FromDataAnalysis:2023/1/8Slide95定義報告FromData2023/1/9Slide96定義報告:報告輸出目的地

報告的輸出目的地可以是打印機、屏幕或者存貯成報告文件。報告可以存貯成下列文件格式：.TXT-只有報告文本，存貯成純文本文件.WMF-每個報告的圖形存貯成metafile.DIF-數據存貯成EXCEL的DIF格式(DataInterchangeFormat)只適用于短報告格式.CSV-數據存貯成數據庫文件(CommaSeparatedValues),適用于短報告.XLS-EXCEL報告格式.HTM-超文本格式,可以使用Internet瀏覽器瀏覽2023/1/8Slide96定義報告:報告輸出目的地2023/1/9Slide97使用網絡瀏覽器IE查看報告2023/1/8Slide97使用網絡瀏覽器IE查看報告2023/1/9Slide98報告類型選擇NoneShortDetailHeader+ShortGLP+ShortGLP+DetailShort+SpectrumDetail+SpectrumFullLibrarySearchPerformancePerformance+NoisePerformance+LibrarySearchExtendedPerformance2023/1/8Slide98報告類型選擇None2023/1/9Slide99儀器參數曲線編輯2023/1/8Slide99儀器參數曲線編輯2023/1/9Slide100報告格式存貯到方法中2023/1/8Slide100報告格式存貯到方法中2023/1/9Slide101打印報告打印報告2023/1/8Slide101打印報告打印報告2023/1/9Slide102報告工具選擇校正工具定義報告打印預覽打印報告顯示/隱藏當前色譜圖2023/1/8Slide102報告工具選擇校正工具定義報2023/1/9Slide103

化學工作站一共有四種系統適用性報告格式：Performance,Performance+Noise,Performance+LibSearch,ExtendedPerformance。每種報告格式包含不同的報告內容。Performance:

根據EditPerformanceLimits對話框中設定的限度給出系統適用性報告。對于未校正的方法，報告結果包括：峰號，保留時間，峰面積，峰高，信號描述，半峰寬，對稱性，K’，塔板數和分辨率；對于校正的方法，報告結果包括：峰號，保留時間，化合物名稱，濃度，信號描述，半峰寬，對稱性，K’，塔板數和分辨率。Performance+LibSearch:

包括Performance報告及庫檢索報告。Performance+Noise:

包括Performance報告及噪音檢測報告。ExtendedPerformance:包括Performance報告格式及每個峰的色譜圖。此報告格式只用于校正峰。

系統適用性報告2023/1/8Slide103化學工作站一2023/1/9Slide104系統適應性報告(SystemSuitability)在日常分析前或分析中，您可以用系統適用性報告檢查分析系統的性能。此報告允許用戶設定保留時間、峰高、峰面積、濃度、半峰寬、K’、塔板數、分辨率、選擇性、庫匹配以及校正峰純度的上下限。同時可以測量基線噪音和基線漂移。噪音檢測：選擇EditNoiseRanges命令進入噪音編輯對話框，在此對話框內可以編輯7組噪音檢測區間。噪音檢測區間不要選在有色譜峰出現的區域。2023/1/8Slide104系統適應性報告(Syste2023/1/9Slide105在SpecifyReport中選擇Performance+Noise報告格式，噪音檢測報告會單獨給出。噪音檢測報告包括三種噪音計算方法的結果（六倍標準偏差法，峰對峰測量法及ASTM測量法），噪音的來回漂移(wander)及噪音漂移(drift)。同時計算每個峰的信噪比。噪音檢測方法原理見《了解您的化學工作站》第249頁。2023/1/8Slide105在SpecifyRepo2023/1/9Slide106編輯系統性能限度：選擇EditPerformanceLimits命令進入編輯系統性能限度對話框。此框內可以設定不同系統參數的上下限。例如在Retentiontime參數設置框內輸入期望保留時間范圍（下限和上限）。2023/1/8Slide106編輯系統性能限度：2023/1/9Slide107在SpecifyReport報告中選擇Performance報告格式，如果樣品測量值超出設定的限制范圍，報告中會用>或<標記。>代表測量值超出設定上限，<代表測量值低于下限。2023/1/8Slide107在SpecifyRepo2023/1/9Slide108化學工作站中有兩種GLP報告格式：GLP＋Short，GLP＋Detail。GLP+Short:包括標題頁，樣品信息，操作條件，Logbook，色譜圖和定量結果。標題頁存貯在Method子目錄下，文件名為RPTHEAD.TXT，可以對其進行修改。GLP+Detail:包括標題，樣品信息，操作條件，Logbook，色譜圖，定量結果和校正曲線。標題存貯在Method子目錄下，文件名為RPTHEAD.TXT。可以對此文件進行修改。存貯GLP數據在運行時間表(RunTimeChecklist)中，選擇SaveGLPData。GLP數據與分析方法以二進制方式記錄在GLPSave.Reg文件中。此文件不可修改。GLPSave.Reg中包括以下信息：儀器設定參數；儀器性能參數；信號；積分結果；定量結果；數據分析方法；LogbookGLP報告類型2023/1/8Slide108化學工作站中有兩種GLP報2023/1/9Slide109查看GLP數據2023/1/8Slide109查看GLP數據2023/1/9Slide110自動庫檢索要得到一個庫檢索報告，首先從SpecifyReport中選擇LibrarySearch或Performance+LibSearch報告形式。選擇AutomatedLibrarySearch命令，進入自動檢索編輯對話框，通過此對話框可以編輯檢索參數。2023/1/8Slide110自動庫檢索要得到一個庫檢索2023/1/9Slide111TimeRange:

定義檢索時間范圍。Library:

選擇標準譜庫，可以同時選擇四個譜庫。EditSearchParms:

編輯檢索參數。利用LeftWindow[%]和RightWindow[%]可以定義檢索區間。PeakPurityCheck:

是否進行峰純度檢測。如果進行峰純度檢測，還可以設置庫檢索匹配閾值。庫檢索匹配閾值決定樣品的檢索結果。如果樣品的庫檢索匹配閾值低于設定值，則此樣品與標準譜庫檢索譜圖不匹配。自動庫檢索參數設置LibrarySearchModes:

有三種庫檢索方式：Identificationbyspectrallibrarysearch:

在設定檢索區間內對每個化合物進行庫檢索。Targetcompoundanalysisusingthecalibrationtable:

在規定檢索區間內對校正表給定的化合物進行檢索。Targetcompoundanalysisusingthespectralibrary:

在檢索區間內對校正表給的化合物進行檢索。校正表內給定的化合物名稱一定要與標準譜庫中檢索到的標準物名稱一致以保證匹配度。2023/1/8Slide111TimeRange:定2023/1/9Slide112庫檢索報告檢索報告中不同欄中有不同的標記，這些標記解釋如下：u:化合物在峰上坡處檢測到不純。d:化合物在峰下坡處檢測到不純。X:匹配因子低于設定閾值。??:搜索到的化合物名稱已經分配給另一個匹配度更好的色譜峰。對于該色譜峰，無法找到一個匹配度更好的化合物與之對應。2023/1/8Slide112庫檢索報告檢索報告中不同欄2023/1/9Slide113化學工作站有三種報告格式可以進行峰純度分析：Short+Spectra:

包括儀器操作條件，定量結果以及峰純度譜圖。Detail+Spectra:包括標題，儀器操作條件，定量結果，校正曲線和峰純度譜圖。Full:包括標題，樣品信息，儀器操作條件，Logbook，色譜圖定量結果以及峰純度譜圖。自動峰純度分析2023/1/8Slide113化學工作站有三種報告格式可2023/1/9Slide114DisplayOptions顯示紫外譜圖第七章DAD高級功能2023/1/8Slide114DisplayOptio2023/1/9Slide115光譜選項-紫外譜圖2023/1/8Slide115光譜選項-紫外譜圖2023/1/9Slide116

自動扣除背景

平滑譜圖

使用導數譜圖光譜選項2023/1/8Slide116自動扣除背景光譜選項2023/1/9Slide117紫外譜圖顯示紫外譜圖和參比譜圖扣除背景的紫外譜圖2023/1/8Slide117紫外譜圖顯示紫外譜圖和參比2023/1/9Slide118譜圖處理工具圖標光譜選項選擇色譜圖上任意一點紫外譜圖選擇峰頂紫外譜圖平均譜圖選擇一組紫外譜圖選擇第一個參比選擇第二個參比峰選擇峰純度譜圖處理工具2023/1/8Slide118譜圖處理工具圖標光譜選項選2023/1/9Slide119提出色譜峰上的吸收光譜光譜圖與譜庫中光譜比較打印出匹配系數Match:998選擇某一色譜峰250300Wavelength(nm)250300Wavelength(nm)紫外譜庫:原理2023/1/8Slide119提出色譜峰上的吸收光譜光譜2023/1/9Slide120紫外譜圖不特征。紫外譜圖依賴于流動相的變化而變化。未分離開的峰會給出錯誤結論。重疊峰會給出錯誤結論。沒有商業譜庫。紫外譜庫:當前的局限性2023/1/8Slide120紫外譜圖不特征。紫外譜圖依2023/1/9Slide121狹縫寬度步徑保留時間窗口吸收閾值背景噪音譜圖噪音導數譜圖影響譜圖匹配的因素2023/1/8Slide121狹縫寬度步徑保留時間窗口吸2023/1/9Slide122創建譜庫2023/1/8Slide122創建譜庫2023/1/9Slide123輸入譜庫名稱及描述2023/1/8Slide123輸入譜庫名稱及描述2023/1/9Slide124提取化合物光譜圖2023/1/8Slide124提取化合物光譜圖2023/1/9Slide125把譜圖加入譜庫2023/1/8Slide125把譜圖加入譜庫2023/1/9Slide126

工作站自動標出物質的最大吸收和最小吸收波長。波長表2023/1/8Slide126工作站自動標2023/1/9Slide127譜圖管理2023/1/8Slide127譜圖管理2023/1/9Slide128存貯譜庫文件2023/1/8Slide128存貯譜庫文件2023/1/9Slide129開始譜圖檢索-打開譜庫

可以打開自己工作站中的譜庫，也可以通過網絡調用網上的譜庫。2023/1/8Slide129開始譜圖檢索-打開譜庫2023/1/9Slide130檢索模板2023/1/8Slide130檢索模板2023/1/9Slide131檢索譜圖2023/1/8Slide131檢索譜圖2023/1/9Slide132檢索結果2023/1/8Slide132檢索結果2023/1/9Slide133編輯譜庫標題信息打印譜庫中譜圖退出當前譜庫編輯譜庫中譜圖向譜庫添加光譜進行譜庫檢索編輯譜庫檢索條件

譜圖處理工具

調用譜庫

保存譜庫檢索工具2023/1/8Slide133編輯譜庫標題信息打印譜庫中2023/1/9Slide134峰純度檢測

在峰的洗脫過程中，可以通過比較所記錄的吸收光譜圖來評估色譜峰是否包含不純的物質。光譜處理工具圖標峰純度檢測2023/1/8Slide134峰純度檢測2023/1/9Slide135峰純度檢測峰純度檢測就是確認一個色譜峰是純物質還是含有其它物質的過程。這個過程是要依靠峰流出中所記錄到的光譜進行比較而實現的。通常對每個峰以三個光譜圖來確認純度。其中兩個光譜取自于固定點（斜率上升點和斜率下降點），另一個取自于最高點（最高點或頂點光譜）。如果需要，還可以選擇5、7、9或All光譜圖來進行純度計算。如果這些光譜不相同，理論上講這個峰含有不純物。這種光譜不純可能是由一個或多個化合物引起的，也可能是由背景吸收引起的。要進行峰純度檢測，首先選擇Spectra菜單下SpectraOption，進行峰純度參數編輯。2023/1/8Slide135峰純度檢測峰純度檢測就是確2023/1/9Slide136Spectra:

此選項允許用戶選擇光譜處理參數，工作站按用戶選擇的參數進行譜圖處理，然后顯示在屏幕上。此選項共有三組參數：WavelengthRange:

設定光譜在屏幕上的顯示范圍。并且可通過此參數范圍的設定去除流動相或背景噪音吸收的干擾。SpectraPerPeak:

選擇從色譜峰上提取光譜圖個數。例如選擇7，則從色譜峰上等距離選擇7個點進行處理。同時選擇Threshold,去除雜質峰——只有高于設定Threshold值的峰才被顯示。SpectraProcessing:

選擇光譜處理過程。SmoothFactor:當噪音干擾非常利害，即噪音光譜與樣品光譜吸收強度相近時，峰純度檢測的可靠性受到限制，選用平滑參數處理譜圖，可以降低系統噪音，使得平滑后的光譜圖更可靠，同時改變譜圖輪廓。此值越高，譜圖平滑越利害。建議在作譜圖間比較時，使用相同的平滑參數。SplineFactor:

當采集譜圖時使用低靈敏度，得到的譜圖可能象個多邊形。通過SplineFactor選擇，在原始數據點之間加入新數據點進行數學處理，產生一條平滑的曲線，使譜圖更美觀。此值越大，新增數據點越多。Logarithm:

對每張譜圖取對數，以縮小顯示比例。DerivativeOrder:對選擇的譜圖取導數，以揭示譜圖更細節的信息。峰純度參數設置2023/1/8Slide136Spectra:此選項2023/1/9Slide137Reference:

設定參比吸收，然后從選擇的樣品譜圖中扣除參比吸收。None:

不設置參比波長。Manual:

當選擇一個參比時間時，此參比時間的光譜被所選擇的樣品譜 圖扣除。當選擇兩個參比時間，兩個參比時間的參比光譜用內 插法重建一個參比光譜，然后被所選擇的樣品光譜扣除。Automatic:

工作站自動選擇參比光譜。2023/1/8Slide137Reference:設定2023/1/9Slide138Display:

規定譜圖顯示的格式。Multi-Spectra:

顯示重疊譜圖還是分別顯示譜圖。Display:

顯示譜圖的內容。2023/1/8Slide138Display:規定譜圖2023/1/9Slide139Purity:

允許用戶選擇適當的閾值或通過工作站自動計算閾值。

Peakcontrolledspectraldatafile

Threshold：定義控制譜圖的限制，高于此限制的色譜峰則為純峰。限制范圍為0～1000。AllSpectradatafileCalculateThreshold：基于每個峰的信噪比，工作站自動計算每個峰的峰純度閾值。（只適應于數據文件中用ALL或ALLinPEAK存貯的樣品）FixedThreshold：用戶自己設定閾值限制，而不用計算機自動計算。2023/1/8Slide139Purity:允許用戶選2023/1/9Slide140Advanced：

選擇峰純度計算方法及擬合曲線的顯示方式。2023/1/8Slide140Advanced：選擇峰2023/1/9Slide141等高圖3D顯示峰純度信息峰純度分析窗口閾值曲線模擬曲線SpectralOverlay2023/1/8Slide141等高圖3D顯示峰純度信息2023/1/9Slide142峰純度檢測屏幕顯示峰起點參考譜圖每張光譜圖的相似性模擬曲線閾值曲線峰終點參考譜圖超出閾值未超閾值紅色：超出Threshold綠色：未超出Threshold2023/1/8Slide142峰純度檢測屏幕顯示峰起點參2023/1/9Slide143SpectraSimilarityCurve:

給出峰純度的詳細信息。一個色譜峰上所有光譜圖與某一個或多個譜圖（缺省值為平均譜）。理想的絕對純的色譜峰的SimilarityCurve為在1000處一平坦的直線。（見下圖左側圖）由于在峰的起始和終止位置信噪比下降，背景噪音對峰譜圖的影響非常明顯，致使SimilarityCurve變成右側圖形狀。ThresholdCurve:

顯示給定SimilarityCurve的噪音效果。實際上ThresholdCurve是一條受到背景噪音影響的純色譜峰的相似曲線。2023/1/8Slide143SpectraSimil2023/1/9Slide144下圖給出峰純度高的兩條曲線（左側）和不純峰的曲線（右側）。峰純度判別：

ThresholdCurve和SimilarityCurve非常平滑，沒有交叉，且ThresholdCurve位于SimilarityCurve之上。PurityFactor值大于Threshold。2023/1/8Slide144下圖給出峰純度高的兩條曲線2023/1/9Slide145xandyaremeasuredabsorbancesinthefirstandsecondspectrumrespectively,atthesamewavelength;nisthenumberofdatapoints

isthesumofthedata.Attheextremes,amatchfactorof0indicatesnomatchand1000indicatesidenticalspectra.Generally,valuesabove990indicatethatthespectraaresimilar.Valuesbetween900and990indicatethereissomesimilarity,buttheresultshouldbeinterpretedwithcare.Allvaluesbelow900indicatethespectraaredifferent.匹配因子受很多參數影響,這些參數由樣品和分離方法決定。它們包括化合物特性，流動相波譜吸收，噪音干擾水平以及背景吸收和譜圖漂移等。匹配因子的計算:2023/1/8Slide145xandyarem2023/1/9Slide146峰純度信息-純峰2023/1/8Slide146峰純度信息-純峰2023/1/9Slide147峰純度信息-不純峰2023/1/8Slide147峰純度信息-不純峰2023/1/9Slide148差譜-純峰差譜-不純峰附加信息-差譜2023/1/8Slide148差譜-純峰差譜-不2023/1/9Slide149化合物特征。媒介化合物（溶劑）的吸收。噪音大小。化合物的波譜范圍。影響峰純度的因素:優化條件:使用光強度大的光源，對檢測器進行常規維護。選擇合適的流動池和狹縫。采集足夠的數據點。Peakwidth設置值合理。樣品濃度應在檢測器的線性范圍內。峰純度性能2023/1/8Slide149化合物特征。影響峰純度的因2023/1/9Slide150等高圖（IsoabsorbancePlot）吸收強度、波長和保留時間作為等吸收的曲線圖。選擇最大吸收波長2023/1/8Slide150等高圖（Isoabsorb2023/1/9Slide151CursorQuickViewZoomSignalSpectrum

等吸收圖（IsoabsorbancePlot）黑色色譜圖表示當前波長下的色譜圖2023/1/8Slide151CursorQu2023/1/9Slide152最大吸收波長的選擇：在命令選項框中選擇Cursor為QuickView方式，把十字光標放置在某一保留時間，然后垂直移動光標，觀察mAU數值的變化，此數值越大，則說明吸收越強。同時下面的顯示區可得到分離良好的色譜圖。 某一特定波長色譜圖的優化：（此功能可以對某一波長吸收的色譜圖進行優化）1·選擇Cursor為QuickView方式。2·移動十字光標直至屏幕下方的色譜圖達到最佳。3·在此位置用Mark鍵作標記。4·把Cursor的狀態改為Signal方式，移動光標至標記位置。5·選擇參比譜帶寬度。6·用Copy鍵拷貝優化后的色譜圖。7·最小化等高圖，查看提取的色譜圖。8·如果需要，用窗口拷貝存貯此色譜圖。提取特定波長紫外譜圖：選擇Cursor狀態為Spectrum方式，選擇某一保留時間的紫外譜圖后，用Copy鍵拷貝此紫外譜圖。最小化等高圖，可以在屏幕左下方窗口查看此紫外譜圖。2023/1/8Slide152最大吸收波長的選擇：2023/1/9Slide1533DPlot2023/1/8Slide1533DPlot2023/1/9Slide154本章內容如何建立序列表如何執行自動再校正如何作循環再校正數據文件如何命名如何使用SequenceSummary如何執行序列文件的批處理第八章序列及批處理2023/1/8Slide154本章內容第八章序列及批處2023/1/9Slide1551進入MethodandRunControl

界面。2.從Sequence

菜單，選擇NewSequence。3編輯SequenceParameters.4.編輯SequenceTable.5.選擇SequenceOutput.6.存貯序列。7.從RunControl菜單或從SequenceTable運行序列。編輯序列進行自動分析2023/1/8Slide1551進入Methodan2023/1/9Slide156編輯SequenceParameters2023/1/8Slide156編輯SequencePa2023/1/9Slide157OperatorName:建立序列表人的姓名。姓名最多可以輸入29個字母，此姓名將在報告中打印出來。DataFile:序列表運行過程中各采集樣品的存盤數據名。可以設置自動存貯或以Prefix/Counter形式存貯。還可以設置存盤路徑。PartofMethodtoRun:此欄可選擇序列的運行方式：用戶可以選擇運行整個方法，或只做數據采集，或者對已有的數據進行數據再分析。AccordingtoRuntimeChecklist：遵從序列表中所用方法的運行時間對照表的規定。AcquisitionOnly：只對序列表中指定的樣品進樣，采集數據，但不進行數據分析。ReprocessingOnly：只對已有數據進行數據處理并打印報告，并不采集新的數據。序列參數設置2023/1/8Slide157OperatorName2023/1/9Slide158UseSampleTableInformation:使用序列表中的樣品信息。如果選擇此項，則報告中按序列表中的樣品信息打印，否則按原來采集樣品時的樣品信息打印。Waittime:運行序列當中，調用另一個新方法后，儀器所需的平衡時間。Shutdown:選擇Post-sequenceCmd/Macro，用戶可以輸入command或macro。如果序列運行過程中出現錯誤，則儀器執行設置的命令或macro。STANDBY：系統處于待命狀態，泵和燈均關閉；

LAMPALLOFF：關閉所有的燈；

PUMPALLOFF：關閉泵；

macro“SHUTDOWN.MAC”,go：關閉整個系統。如果沒有輸入command或macro，儀器執行nRdyTim