注射劑的無菌保證和工藝研究藥品管理法與藥品生產2001年2月28日修訂的《藥品管理法》第十條，經修訂后明確要求：“藥品必須按照（原法規：工藝規程）國家藥品標準和國務院藥品監督管理部門批準的生產工藝進行生產，…。改變影響藥品質量的生產工藝的，必須報原批準部門審核批準。”生產工藝的源頭：藥品研發中經工藝研究與驗證獲得的申報工藝2注射劑的無菌保證和工藝研究目錄一、注射劑的特點二、注射劑的無菌三、相關知識簡介四、注射劑的無菌保證工藝研究五、總結3注射劑的無菌保證和工藝研究一、注射劑的特點不通過人體固有的保護屏障，直接進入血液起效快、安全性要求高。無菌嚴格控制熱原及雜質4注射劑的無菌保證和工藝研究二、注射劑的無菌歷史的教訓：1970-1975年，美國因輸液污染導致敗血癥400多起，但問題產品全部通過了無菌檢查。2006年，安徽華源的“欣氟”事件：滅菌工藝與無菌檢查5注射劑的無菌保證和工藝研究方法本身是否經過充分驗證——05版藥典的新要求。檢測結果有無代表性。抽檢，樣本數一般為20/批。樣本數、污染率及通過無菌檢查（取不到污染樣）的概率遵循二項式定律（泊松分布）通過無菌檢查的概率P=(1-q)n式中：q為批產品污染率

n為樣本數無菌檢查的局限性6注射劑的無菌保證和工藝研究計算實例假設當某批藥品的實際染菌率為5%時，如果根據通常取樣的數量為20支，則該批藥品通過無菌檢查的概率P=(1-q)n=（1-0.05）20=0.359

即有35.9%的可能性，該批藥品將會被判定為無菌。

7注射劑的無菌保證和工藝研究無菌檢查特性數據表編號污染率通過無菌檢查的概率n=1n=2n=4n=10n=15n=20n=30001595908160463621090816635211231585725220944208064411141577.6422.36560.1%5%中國藥典現取樣數為：20，如污染率為5%，從曲線得，檢出概率為64%。8注射劑的無菌保證和工藝研究如何保證注射劑無菌合格呢？9注射劑的無菌保證和工藝研究質量控制的三種模式檢驗控制質量（QualitybyTest）不夠全面生產控制質量（QualitybyManufacture）將質控延伸到生產環節設計控制質量（QualitybyDesign，QbD）

全方位的控制、發展的方向三者互為補充，后者包括前者

10注射劑的無菌保證和工藝研究保證注射劑無菌的措施研究階段研究設計出符合無菌要求的產品（包括合適的劑型、滅菌工藝、包裝材料）——前提與源頭生產階段批產后應嚴格按照研究驗證后的工藝進行生產11注射劑的無菌保證和工藝研究三、相關知識簡介D值（微生物的耐熱參數）：在一定溫度下，將微生物殺滅90%所需的時間，以分鐘為單位。一般小于1分鐘。F0值：產品在121℃下的標準滅菌時間。滅菌率L：某溫度下滅菌1分鐘所對應的F0值。12注射劑的無菌保證和工藝研究Z=10℃時，不同溫度下的滅菌率和所相當的滅菌時間溫度（℃）滅菌率L滅菌時間（分鐘）1211.001.001200.7941.2591150.2513.9841100.07912.6001050.02540.0001000.008125.0013注射劑的無菌保證和工藝研究濕熱滅菌法：將物品置于滅菌柜內利用高壓飽和蒸汽、過熱水噴淋等手段使微生物菌體中的蛋白質、核酸發生變性而殺滅微生物的方法。濕熱滅菌法通常分為過度殺滅法和殘存概率法兩種。14注射劑的無菌保證和工藝研究過度殺滅法F0不低于12適用于熱穩定性好的產品以徹底殺滅任何污染的微生物為實現無菌的手段無菌保證值不小于615注射劑的無菌保證和工藝研究殘存概率法滅菌過程8≤F0<12分鐘適用于熱穩定性不很好的產品通過控制工藝過程的微生物污染和滅菌工藝參數使產品無菌無菌保證值不小于616注射劑的無菌保證和工藝研究其它濕熱滅菌工藝F0值低于8的滅菌工藝熱穩定性很差的產品以無菌生產工藝為基礎，滅菌是提高無菌保證水平的輔助手段不計算F0值，污染概率不大于0.1%除血液制品外，發達國家的大容量注射劑很少采用此類工藝小容量注射劑也較少采用17注射劑的無菌保證和工藝研究SAL

（無菌保證水平）：產品經滅菌后微生物殘存概率的負對數。國際上規定，濕熱滅菌法的SAL不得低于6。SAL＝F0/D121–lgN0N0：滅菌前的染菌量

SAL除了和F0有關，還與染菌量（N0）及所染菌的耐熱參數（D121）有關。18注射劑的無菌保證和工藝研究F0和SAL的關系：

F0=8N0=100SAL＝8/1–lg100

=6D121=1時注意：污染菌在不同的產品中的耐熱性可能不同，故驗證時應采用實際的藥液。

eg:嗜熱脂肪芽孢桿菌（常規D值在1.5-3.0分鐘）在復方氨基酸注射液中的D值為0.8分鐘左右，在30％的葡萄糖溶液中的D值為2.2分鐘。19注射劑的無菌保證和工藝研究無菌保證水平應用實例1假定N0為100cfu/瓶，D值為1分鐘，要達到SAL不小于6，滅菌F0值應達到多少？相當于115℃下滅菌多少分鐘？F0=（SAL＋lgN0）×D=（6+lg100）×1=8分鐘。換算成115℃下的F0/L115=8/0.25=32分鐘。殘存概率法有效的基礎：N0≤100，D≤1。20注射劑的無菌保證和工藝研究某輸液采用110℃，30分鐘的滅菌程序，起始污染微生物仍為100cfu/瓶，D值為0.5分鐘，經計算此時的無菌保證值和殘存微生物污染的概率為：SAL=F0/D-lgN0=L110×t/D-lg100=0.08×30/0.5-2=2.8殘存微生物的概率為10-2.8＝0.158％通過無菌檢查的概率為(1-0.158％)20=96.9%。無菌檢查的結果不能保證產品的SAL符合要求（

≤6）。無菌保證水平應用實例221注射劑的無菌保證和工藝研究四、注射劑的無菌保證工藝研究無菌保證理化指標滅菌和化學指標的平衡點？22注射劑的無菌保證和工藝研究國食藥監注[2008]7號通知

08年1月10日國家局發布了化學藥品注射劑基本技術要求。國家局已受理但尚未批準注冊的化學藥品注射劑應參照《技術要求》進行研究。已經批準注冊的化學藥品注射劑也應參照《技術要求》進行相關研究（完善滅菌工藝等），并在申報再注冊時提供相關研究資料。24注射劑的無菌保證和工藝研究劑型選擇的合理性要權衡考慮各劑型的無菌保證水平、雜質的控制水平、工藝的可行性、臨床使用的方便等。首先要考慮被選劑型可采用的滅菌工藝的無菌保證水平的高低。原則上首選劑型應能采用終端滅菌工藝，并保證SAL不小于6。對于有充分的依據證明不適宜采用終端滅菌工藝且臨床必需注射給藥的品種，可考慮選擇采用無菌生產工藝的劑型。通常無菌生產工藝僅限于粉針劑或部分小容量注射劑。

25注射劑的無菌保證和工藝研究輸液產品滅菌工藝的選擇原則

應采取終端滅菌工藝，建議首選過度殺滅法（F0≥12）。例如：氯化鈉大輸液。如產品不能耐受，可采用殘存概率法(8≤F0<12)，但均應保證產品滅菌后的SAL不小于6。采用其它F0值小于8的終端滅菌條件的工藝，原則上不予認可。如產品不能耐受終端滅菌工藝條件，應盡量優化處方工藝，以改善制劑的耐熱性。如確實無法耐受，則應考慮選擇其他劑型，而非大容量注射劑。

26注射劑的無菌保證和工藝研究工藝驗證要求主要包括以下試驗：滅菌前微生物污染水平測定，包括滅菌前產品中的污染菌及其耐熱性；熱穿透試驗；微生物挑戰試驗：生物指示劑的耐熱性及數量應對滅菌工藝構成必要的挑戰。過度殺滅法（F0≥12）不要求此項驗證

27注射劑的無菌保證和工藝研究粉針劑的工藝與驗證粉針劑的無菌保證水平應能保證SAL不大于10-3。常規的工藝驗證試驗包括：培養基模擬灌裝試驗：至少在線灌裝三批，每批的批量詳見附表，每瓶產品均應進行無菌檢查。除菌過濾系統適應性驗證：包括過濾系統相容性測試、過濾前后濾膜完整性測試，必要時尚需進行濾膜的微生物截留量測試。

28注射劑的無菌保證和工藝研究附表：培養基灌裝試驗的批量與判斷合格的標準批量（瓶）3000475063007760允許染菌的數量（瓶）012329注射劑的無菌保證和工藝研究小容量注射劑的工藝與驗證應首選終端滅菌工藝，相關技術要求同大容量注射劑。如有充分的依據證明不能采用終端滅菌工藝，且為臨床必需注射給藥的品種，可考慮采用無菌生產工藝，相關技術要求同凍干粉針劑。

30注射劑的無菌保證和工藝研究歐盟1999年8月正式開始執行滅菌方法選擇的決策樹決策樹的作用是在考慮各種復雜因素的情況下，輔助選擇最佳的滅菌方法歐盟滅菌方法選擇的決策樹31注射劑的無菌保證和工藝研究32注射劑的無菌保證和工藝研究決策樹越往下，風險越大需要提供的研究與驗證的證據也越多33注射劑的無菌保證和工藝研究工藝選擇的基本原則:無菌產品應在灌裝到最終容器后進行最終滅菌（首選）如因產品對熱不穩定不能進行