I酶___酶。（3）本實(shí)驗(yàn)選用的運(yùn)載體是圖中的___pBR質(zhì)粒和Ti質(zhì)粒__，他們的基本單位是____脫氧核苷酸___。（4）下列關(guān)于質(zhì)粒運(yùn)載體的說(shuō)法正確的是（ACDE）（多選）。A．質(zhì)粒運(yùn)載體作用之一是防止目的基因被核酸酶降解B．質(zhì)粒運(yùn)載體只能在與目的基因重組后進(jìn)入細(xì)胞C．目的基因插人質(zhì)粒后，不能影響質(zhì)粒運(yùn)載體的復(fù)制和表達(dá)D．③中Ti質(zhì)粒的T-DNA片段可以協(xié)助目的基因?qū)胫参锛?xì)胞E．沒(méi)有限制酶就無(wú)法使用質(zhì)粒運(yùn)載體3.胚胎工程和基因工程目前在生物技術(shù)中發(fā)展較快，回答下列問(wèn)題：(1)在哺乳動(dòng)物的核移植實(shí)驗(yàn)中，一般通過(guò)電脈沖（或電刺激）（物理方法）將受體細(xì)胞激活，使其進(jìn)行細(xì)胞分裂并發(fā)育，當(dāng)胚胎發(fā)育到桑葚胚或囊胚階段時(shí)，將胚胎植入另一雌性（代孕）動(dòng)物體內(nèi)。(2)在“試管?！钡呐嘤^(guò)程中，要使精子和卵母細(xì)胞在體外成功結(jié)合，需要對(duì)精子進(jìn)行獲能處理。另外，培養(yǎng)的卵母細(xì)胞需要發(fā)育至減數(shù)第二次分裂中期），該時(shí)期在顯微鏡下可觀察到次級(jí)卵母細(xì)胞和第一極體。(3)利用體細(xì)胞進(jìn)行核移植技術(shù)的難度明顯高于利用胚胎細(xì)胞進(jìn)行核移植的原因是體細(xì)胞分化程度高，不易恢復(fù)全能性.(4)若要使獲得的轉(zhuǎn)基因牛分泌的乳汁中含有人干擾素，則所構(gòu)建的基因表達(dá)載體必須包括：某種牛乳腺分泌蛋白基因及其啟動(dòng)子、人干擾素基因（或目的基因）、終止子、標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)等。目前常用的措施是將該基因表達(dá)載體導(dǎo)入牛的受精卵（填“受精卵”或“乳腺細(xì)胞”），導(dǎo)入方法是顯微注射法。4.基因工程基本操作流程如圖，請(qǐng)據(jù)圖分析回答：（1）圖中A是__運(yùn)載體___；形成重組DNA分子的操作步驟叫做___目的基因與運(yùn)載體連接___。（2）在基因工程中，過(guò)程②需要在__限制性核酸內(nèi)切酶___酶的作用下才能完成剪切過(guò)程，剪切的結(jié)果是形成__黏性末端___，需要__DNA連接酶__酶的作用下才能完成拼接過(guò)程。（3）利用基因工程技術(shù)可以培育抗蟲(chóng)棉，相比誘變育種和雜交育種，具有____目的性強(qiáng)__和___克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙（育種周期短）__等突出的優(yōu)點(diǎn)。5.降鈣素是一種多肽類激素，臨床上用于治療骨質(zhì)疏松癥等。人的降鈣素活性很低，半衰期較短。某科學(xué)機(jī)構(gòu)為了研發(fā)一種活性高、半衰期長(zhǎng)的新型降鈣素，預(yù)期新型從降鈣素的功能出發(fā)，推測(cè)相應(yīng)的脫氧核苷酸序列，并人工合成了兩條各含72個(gè)堿基的DNA單鏈，兩條鏈通過(guò)18個(gè)堿基對(duì)形成部分雙鏈DNA片段，再利用Klenow酶補(bǔ)平，獲得雙鏈DNA，過(guò)程如圖。在此過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，合成較長(zhǎng)的核苷酸單鏈易產(chǎn)生缺失堿基的現(xiàn)象。分析回答下列問(wèn)題：（1）Klenow酶是一種__DNA聚合__酶，合成的雙鏈DNA有__126_個(gè)堿基對(duì)。（2）獲得的雙鏈DNA經(jīng)EcoRⅠ(識(shí)別序列和切割位點(diǎn)-G↓AATTC-)和BamHⅠ(識(shí)別序列和切割位點(diǎn)-G↓GATCC-)雙酶切后插入到大腸桿菌質(zhì)粒中，篩選含重組質(zhì)粒的大腸桿菌并進(jìn)行DNA測(cè)序驗(yàn)證。①大腸桿菌是理想的受體細(xì)胞，這是因?yàn)樗黖__繁殖快，單細(xì)胞，遺傳物質(zhì)相對(duì)較少___。（2分）②設(shè)計(jì)EcoRⅠ和BamHⅠ雙酶切的目的是__保證目的基因和載體的定向連接____。（2分）③大腸桿菌質(zhì)粒中含有標(biāo)記基因是為了要進(jìn)行重組質(zhì)粒的鑒定和篩選。（3）經(jīng)DNA測(cè)序表明，最初獲得的多個(gè)重組質(zhì)粒，均未發(fā)現(xiàn)完全正確的基因序列，最可能的原因是___合成的核苷酸單鏈較長(zhǎng)，產(chǎn)生缺失堿基的現(xiàn)象。__。（4）上述制備該新型降鈣素，運(yùn)用的現(xiàn)代生物工程技術(shù)是__蛋白質(zhì)工程_。6.如圖是科學(xué)家培育生產(chǎn)人血清白蛋白(hALB)的乳腺生物反應(yīng)器的流程圖，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：（1）為獲得更多的卵母細(xì)胞，在過(guò)程A中常對(duì)良種奶牛注射_______。體外受精前，需對(duì)精子進(jìn)行__促性腺激素___處理。（2）過(guò)程C使用的酶是__限制酶和DNA連接酶__，為讓hALB基因在牛的乳腺細(xì)胞中表達(dá)，需將hALB基因與___乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起。在分子水平上檢測(cè)hALB基因是否在轉(zhuǎn)基因牛體內(nèi)成功表達(dá)的方法是___抗原—抗體雜交__。（3）過(guò)程D使用的技術(shù)為