關于檢驗的確認與驗證第一頁，共二十九頁，2022年，8月28日為什么要檢驗驗證這里所說的驗證不光是指方法驗證，還包括一個儀器設備確認（有些單位也叫驗證，不過國外一般稱之為Qualification，一般譯成確認），甚至還有一個叫做系統適用性試驗。

看似簡單的檢驗，其實需要建立在相當的一定層面上。檢驗可以理解為一個金字塔，最底層也是最關鍵的是儀器設備確認，試想你的儀器都不好使，你檢出的結果怎么能夠相信。舉例：尺子（刻度為英尺）天平（最小稱量50mg）第二頁，共二十九頁，2022年，8月28日檢驗驗證還包括哪些儀器確認再往上是方法驗證。方法驗證中也包括了確認、交叉驗證、轉移驗證等內容，不外乎是你需要做什么樣的試驗，來確保你檢測結果是可信的，在你的實驗室是可以實現和完成的。再往上是系統適用性試驗，這可能也是國內大家做得比較少的，往往藥典對它也不是太關注，頂多是有點重復性的概念。其實以下幾個方面我個人認為也可以是系統適用性試驗的一部分，它包括空白干擾、對照品檢查（即雙份對照品的平行性檢查）、括號對照品檢查（即檢查系統沒有發生漂移，以及溶液穩定）、有關物質的定量限、分離度（包括峰谷比）等。只有建立在這個系統適用性試驗通過的基礎上，本次試驗的結果才是可信的。第三頁，共二十九頁，2022年，8月28日1、儀器設備確認這是個在新版GMP中引進的概念，以前只有工藝驗證、生產設備和公用工程系統等概念。其實這個概念由來已久，簡單的理解可以說是3Q（對于分析儀器基本上不需要設計確認，都是成型的東西，頂多需要個URS），再加上個校準就差不多了。可能國內很多單位甚至一些所謂的“磚家”認為檢定就是儀器設備的全部，其實我個人對檢定是最不感冒的：第一，儀表、標準器械類的一般沒有問題；第二，儀器設備類的可能與我們行業的要求及用戶需要有很大不同；第三，很多檢測是沒有標準的，就給你一個校驗結果，你自己看去；第四，有相當一部分根本就不做，有些讓客戶自己做，讓他做還有什么意義，只是收錢而已。在我看來，儀器設備的檢定、檢測那是給一些官老爺們看的，確認才是給自己用的（很多官老爺不懂也不看）。目的明確了，確認也就好做了。

第四頁，共二十九頁，2022年，8月28日3QIQ：不外乎是要看一下水、電、氣、環境、東西是否正確齊全、安裝人員的資質、軟件等等是否符合要求，與你的合同是否一致。OQ：主要是看你的儀器設備是否能夠正常運行，包括功能鍵、密碼等是否能夠正確通過；儀器設備的主要指標是否能夠滿足。PQ：主要是看儀器設備是否能夠滿足用戶的需求。

有很多儀器設備的OQ和PQ并不一定能夠界定得很清楚，沒有必要一定強行去劃分，最重要的是能夠滿足你的要求，而且沒必要做多次重復和工作。還有很多儀器設備并不需要進行OQ和PQ，甚至同一儀器目的不同也會有所差別。例如一臺干燥箱，如果只是烘玻璃器皿，那就不需要進行OQPQ確認；還有一些儀器，由于每次使用都需要進行校準，那么這種儀器對于所謂的確認要求也可以降低，例如pH計等；還有一些儀器設備，他的作用只是輔助的，準確與否對你實驗的結果影響不大，這時你也不需要進行確認，例如離心機、磁力攪拌器等。第五頁，共二十九頁，2022年，8月28日天平的日常校驗天平在所有儀器設備里是一種比較特殊的儀器，除了需要進行正常的確認外，還要每天進行日校（更合適的應該叫做日常檢查）。這是因為天平在檢驗中非常關鍵，而且本身也容易受各種條件的影響而發生偏移。個人覺得在進行日校時應設立警戒限和行動限，所謂警戒限就是指當天平超出這個值時你要做重新校正（例如內校或外校），以使之不會再發生更大的偏移；所謂行動限就是指當天平走出這個值時你需要對過去一天以來的所有數據進行回顧和調查（可以通過偏差調查的方式），以確定哪些檢驗結果是有效的，哪些數據是無效的。如果平時不進行日校，那么你根本無法確定當發現問題的這段時間哪些數據還可用。還有一種所謂的日校，就是日校時首先清零，再外校，再檢查。就相當于你把罪證都已經銷毀了，再自己查一次，說，“沒問題”，那不是自己騙自己嗎！不過相信還是比從來都沒做過強。前幾天去做供應商審計，結果發現人家根本連砝碼都沒有，還校啥呀，問他們怎樣認為天平有問題，答曰“天平沒回到零點”，然后找計量院來看看。第六頁，共二十九頁，2022年，8月28日儀器設備的OQPQ舉例HPLC：泵流速（準確性和波動性）、進樣器（重復性和殘留量）、紫外檢測器（波長準確性、燈能量、噪音和漂移）、多元混合器（梯度準確性和波動性）。

UV：波長準確性、吸收值準確性和重復性、基線平直度、分辨率、噪音和漂移等。

恒溫（包括恒濕）箱：不同溫度（濕度）分布、準確性和波動性。

滅菌鍋：除溫度分布外，還有程序升溫曲線以及熱穿透性。

第七頁，共二十九頁，2022年，8月28日2、分析方法驗證這部分內容在ICHQ2部分有明確的闡述，但只是在概念上比較清晰，在實踐應用中卻不是特別明確，在這里只是對其需要特別注意的事項作一個補充。

有關物質檢測的方法驗證具有一定的特殊性，也是最容易被質疑的方法，這里暫不提到，更多的是其他方面的常見問題。

驗證的方法與檢驗方法不一致是最常見的問題！即使CDE和一些藥檢機構可能也沒有注意到這一點，而且由于國內注冊中大家都知道的原因造成沒有大量數據的積累，進而不會在注冊中發現這個問題所造成的巨大影響，舉個例子說明。

第八頁，共二十九頁，2022年，8月28日研磨制備供試品（1）很多國人在制定含量（固體制劑）測定時，都采用研磨后稱取的方法制備供試品溶液，甚至在一些口岸所都將進口標準中的投片法給改為研磨法；而在方法驗證中即沒有采用研磨法，所以看上去驗證的結果很美，但你得到的結果卻可能是個偽結論。因為很多小規格的產品在研磨過程中都會存在吸附現象，這種現象會因為不同的人、不同的研磨工具、不同的力度和時間等因素而有所不同，最經典的結果就是經常會發現含量測定的結果要低于均勻度測定的平均值！那么請注意，如果你要采用研磨法制備樣品，請在驗證時也要將對照品研于空白輔料或樣品（加樣回收）中，而不是直接投入容量瓶里！如果你要直接投入容量瓶中，只有你的方法是投片法，或者全轉移的方法！第九頁，共二十九頁，2022年，8月28日3、分析方法確認這里單獨提出來是因為在新版GMP中提出了這個概念，而國內官方沒有給出明確的概念。GMP第223條：對不需要進行驗證的檢驗方法，企業應當對檢驗方法進行確認，以確保檢驗數據準確、可靠。分析方法確認是指一個方法對于你的產品（或物料）、實驗條件在你的實驗室能否進行的一種適用性檢測。即：確認本實驗室具備檢驗條件和能力，能確保檢驗數據準確可靠。第十頁，共二十九頁，2022年，8月28日比如說你的工藝與其他人家不同，你的雜質分布也會有可能不同，因此藥典的方法不一定能夠適合你的產品，所以你要進行確認。至于你確認哪些項目，在美國藥典附錄1226中有所描述，但由于各家對其理解有所不同，它被認為是最低要求，你要根據自己的情況適當地進行增補。第十一頁，共二十九頁，2022年，8月28日如何進行方法確認當然并不是所有的藥典方法都要做確認，已使用多年的、通用的方法是不需要做確認的，例如熾灼殘渣、干燥失重、pH等實驗室日常測試。一般需要做確認的方法通常是指色譜法，但并不局限于此。第十二頁，共二十九頁，2022年，8月28日如何進行方法確認方法確認=簡要的方法驗證以含量為例，一般應確認：準確度、精密度（系統重復性、分析重現性）、專屬性。操作及限度要求同方法驗證。一是確認產品是否適用這個檢驗方法，尤其是制劑處方中的輔料是否有干擾。二是確認實驗室的條件能否用這個方法獲得準確的結果，包括儀器設備、環境、人員等。第十三頁，共二十九頁，2022年，8月28日如何進行方法確認參見下表驗證項目第1類方法第2類方法第3類方法第4類方法定量分析限度試驗準確度是是＊＊否精密度是是否是否專屬性是是是是是檢出限否否是＊否定量限否是否＊否線性＊＊否＊否范圍＊＊＊＊否第十四頁，共二十九頁，2022年，8月28日＊：表示根據特殊實驗的性質決定是否需要第1類方法：定量測定散裝藥品中主成分或成品藥中活性成分的分析方法。第2類方法：測量散裝藥品中雜質或成品藥中降解化合物的分析方法。第3類方法：測量藥品性能特性（如溶出度、釋放度）的分析方法。第4類方法：鑒別試驗第十五頁，共二十九頁，2022年，8月28日方法轉移還有一個概念與確認比較相近，叫做方法轉移。在我看來，方法轉移可以認為是方法確認加上重現性，更重要的是指你實驗室的檢測結果與原實驗室的檢測結果是一致的。第十六頁，共二十九頁，2022年，8月28日4、系統適用性試驗（SST）這一部分是國內很多實驗室都不太關注的地方，其實這一部分對于檢驗是非常關鍵的。簡單的說，你的檢驗結果是否可信、是否有效、是否有說服力全在這里了。SST一般主要考察哪些方面（主要從色譜角度）：

（1）重復性：檢查通過則表明你的系統一直處于穩定狀態，你的儀器沒有問題。如果你的檢驗結果有問題，要么是你的制備有問題，要么是你的樣品有問題，儀器出現問題的機會很小。第十七頁，共二十九頁，2022年，8月28日括號對照品檢查重復性國內有相當的企業都在做，但另外一個概念很多企業都不太關注：括號對照品檢查。意思是什么呢，你的樣品被對照品進樣包著，形成一個括號，括號沒有問題，才表明你的樣品檢測沒有問題，否則你后面的對照品與前面的樣品不一致，你怎么保證你的樣品在檢測時沒有問題。在一些要求嚴格的企業，如果供試品后面沒有括號檢查，那么可以認為這期間你所有的樣品的檢測結果都是無效的。第十八頁，共二十九頁，2022年，8月28日分離度考查（2）分離度考查：這往往是有關物質檢測SST最常見的要求（但國內很多標準，尤其是進口注冊標準，居然將它轉移至含量測定中去，估計連自己都不知道在干什么）。由于國外對于雜質研究的比較透徹，所以它并不會像國內那樣去比較供試品和未知雜質的分離情況，更多的是以加標的方法來考查。第十九頁，共二十九頁，2022年，8月28日定量限考查（3）定量限考查：在一些較先進的方法中，往往規定了配制定量限溶液，以之進樣，檢測信噪比，要求不得小于10，否則雜質無法準確定量，這往往要優于你在方法驗證中所做的用信噪比去篩濃度的作法，因為信噪比會受儀器本身、流動相、電信號、柱子、溫度等多方面的影響，甚至有不同數量級的差別，因此后者往往沒有任何實際意義。（4）理論板數、拖尾因子等。自己看藥典去，與前三個概念一比，沒有值得說的地方。

除了這些，以下的內容也可以被認為是SST的一部分，超出規定的范圍也被認為是無效數據：第二十頁，共二十九頁，2022年，8月28日平行對照品（5）平行對照品：如果兩份對照品不平行，那么說明你配制過程中可能存在問題，你無法確定哪一個是正確的，因此兩份都無效，你也不需要再往下進樣，直接重新配制再進樣就OK了，對照品無效，那么檢驗的樣品數據也就無效了。第二十一頁，共二十九頁，2022年，8月28日平行樣品（6）平行樣品：同平行對照品，兩份不平行則說明至少你樣品制備有問題，除非你能證明你的方法有問題，既然制備有問題，檢驗結果當然無效了。如果這時有一個數據為OOS結果，你也大也不必進行調查，因為這是無效數據，OOS只有是在有效數據的情況下再進行調查。例如含量要求98.0%-102.0%，平行要求不得過2.0%，結果是99.0%和102.5%，那么你不需要進行OOS調查；而如果結果是101.0%和102.5%，你就需要進行OOS調查。要記住，你的平行樣品的規定是你自己要求的。第二十二頁，共二十九頁，2022年，8月28日為什么要平行測定含量測定時都采用雙對照品，請問：計算時應該采用A還是B，或者是A和B的平均值，抑或其他，為什么？采用兩份的平均值會不會增加準確性？為什么要做兩份，做三份、五份行不行？

第二十三頁，共二十九頁，2022年，8月28日平行測定的目的做兩份的目的是用以證明你的稱量和配制過程是沒有問題的！任何操作本身就有誤差，就如我們前面所說的那樣，你所用的儀器設備都要確認過的，而且像天平每天都要做校驗，但仍然不能避免誤差，更何況還有可能出現人為誤差，而這些誤差并不見得你在操作過程中就可以發現（發現了你就該重新配了）。在你的儀器例如HPLC已經確認完成的基礎上，進樣平行樣品，如果有操作導致的誤差可能被發現（當然三份時發現的機會就更大）。簡單舉個例子，你在稱量時出現灑的機率是1%，那么稱兩份時出現灑的機率就是萬分之一。第二十四頁，共二十九頁，2022年，8月28日如何計算計算時應該采用哪個呢，A、B還是平均值？答案其實是都可以，只要檢查通過！因為二者都是正確的，而且你也沒辦法證明哪個更準確，也就不能說明平均值會更好。第二十五頁，共二十九頁，2022年，8月28日平行測定的意義在你的儀