第十一章抗生素類藥物分析第十一章抗生素類藥物分析第十一章抗生素類藥物分析在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活動有特異抑制作用的化學物質的總稱β–內酰胺類(介紹）四環素類（介紹）大環內酯類多烯大環類多肽類氨基糖苷類1.抗生素（antibiotics）2.分類中國藥科大學藥學院藥分教研室一、概述第十一章抗生素類藥物分析第十一章抗生素類藥物分析第十一章抗生1在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活動有特異抑制作用的化學物質的總稱β–內酰胺類(介紹）四環素類（介紹）大環內酯類多烯大環類多肽類氨基糖苷類1.抗生素（antibiotics）2.分類中國藥科大學藥學院藥分教研室一、概述在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活

化學純度較低活性組分易發生變異穩定性差3.來源4.抗生素的特點化學合成半合成生物合成（發酵）生產工藝復雜發酵過程不易控制，易受污染原因中國藥科大學藥學院藥分教研室一、概述化學純度較低3.來源4.抗生素的特抗生素的種類1.青霉素又被稱為青霉素G、peillinG、盤尼西林、配尼西林、青霉素鈉、芐青霉素鈉、青霉素鉀、芐青霉素鉀一，以及頭孢類、非典型類β-內酰胺類中一大類抗生素。青霉素是抗菌素的一種，是指從青霉菌培養液中提制的分子中含有青霉烷、能破壞細菌的細胞壁并在細菌細胞的繁殖期起殺菌作用的一類抗生素，是第一種能夠治療人類疾病的抗生素。青霉素類抗生素是β-內酰胺類中一大類抗生素的總稱。2.紅霉素、麥迪霉素、螺旋霉素、乙酰螺旋霉素、交沙霉素、柱晶白霉素等大環內酯的一類抗生素。抗生素的種類1.青霉素抗生素的種類3.金霉素（chlotetracycline)、土霉素（oxytetracycline）、四環素（tetracycline）及半合成衍生物甲烯土霉素、強力霉素、二甲胺基四環素等由放線菌產生的四環素類廣譜抗生素4.鏈霉素，是一種從鏈霉菌(灰色鏈絲菌)培養液中提取出來的抗生素。鏈霉素的硫酸鹽是白色或微黃色的粉末或結晶，易溶于水，比較穩定，對某些桿菌，特別是結核桿菌，具有顯著的抑菌乃至殺菌作用。鏈霉素主要用于治療結核病、鼠疫、百日咳、細菌性痢疾和泌尿道感染等。5.氯霉素，是從委內瑞拉鏈霉菌(Streptomycesvenezuela)中分離提取的廣譜抗生素。抗生素的種類3.金霉素（chlotetracycline)抗生素使用歷史1877年，Pasteur和Joubert首先認識到微生物產品有可能成為治療藥物，他們發表了實驗觀察，即普通的微生物能抑制尿中炭疽桿菌的生長。1928年，弗萊明爵士發現了能殺死致命細菌的青霉菌。青霉素治愈了梅毒和淋病，而且在當時沒有任何明顯的副作用。1936年，磺胺的臨床應用開創了現代抗微生物化療的新紀元。1944年在新澤西大學分離出來第二種抗生素鏈霉素，它有效治愈了另一種可怕的傳染病：結核病。1947年出現氯霉素，它主要針對痢疾、炭疽病菌，治療輕度感染。抗生素使用歷史1877年，Pasteur和Joubert首先抗生素使用歷史1948年四環素出現，這是最早的廣譜抗生素。在當時看來，它能夠在還未確診的情況下有效地使用。今天四環素基本上只被用于家畜飼養。1956年禮來公司發明了萬古霉素被稱為抗生素的最后武器。因為它對G+細菌細胞壁、細胞膜和RNA有三重殺菌機制，不易誘導細菌對其產生耐藥。1980年代喹諾酮類藥物出現。和其他抗菌藥不同，它們破壞細菌染色體，不受基因交換耐藥性的影響。1992年，這類藥物中的一個變體因為造成肝腎功能紊亂被美國取締，但在發展中國家仍有使用。抗生素使用歷史1948年四環素出現，這是最早的廣譜抗生素。在中國是抗生素使用大國，也是抗生素生產大國：年產抗生素原料大約21萬噸，出口3萬噸，其余自用（包括醫療與農業使用)，人均年消費量138克左右(美國僅13克)。據2006～2007年度衛生部全國細菌耐藥監測結果顯示，全國醫院抗菌藥物年使用率高達74%。而世界上沒有哪個國家如此大規模地使用抗生素，在美英等發達國家，醫院的抗生素使用率僅為22%～25%。中國是世界上濫用抗生素問題最嚴重的國家之一中國是抗生素使用大國，也是抗生素生產大國：年產抗生素中國的婦產科長期以來都是抗生素濫用的重災區，上海市長寧區中心醫院婦產科多年的統計顯示，目前青霉素的耐藥性幾乎達到100%。中國的住院患者中，抗生素的使用率則高達70%，其中外科患者幾乎人人都用抗生素，比例高達97%。另據1995～2007年疾病分類調查，中國感染性疾病占全部疾病總發病數的49%，其中細菌感染性占全部疾病的18%～21%，也就是說80%以上屬于濫用抗生素，每年有8萬人因此死亡。中國的婦產科長期以來都是抗生素濫用的重災區，上海市長阿齊紅霉素頭孢呋辛氧氟沙星紅霉素阿齊紅霉素頭孢呋辛氧氟沙星紅霉素第十一章抗生素類藥物分析課件青霉素Penicillin青霉素采用生物學法與物理化學法鑒別：理化方法、微生物法檢查：水分、異常毒性、熱原、細菌內毒素、降壓物質等含量/效價測定：微生物法：與臨床療效吻合，靈敏度高，但操作復雜費時；理化方法：準確度與專屬性較高，且操作簡便，但與臨床療效有偏差5.抗生素質量分析一、概述中國藥科大學藥學院藥分教研室采用生物學法與物理化學法5.抗生素質量分析一、概述中1.化學結構包括青霉素類和頭孢菌素類青霉素類：6-APA為母核頭孢菌素類：7-ACA為母核中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類1.化學結構包括青霉素類和頭孢菌素類青霉素類：6-APA為酸性較強（pKa2.5-2.8）臨床常用其堿金屬鹽（水溶性好）酸性(羧基)有多個手性碳旋光性青霉素類：苯環取代基頭孢菌素類：母核有共軛結構UV（共軛）干燥條件較穩定，溶液不穩定穩定性(內酰胺)2、主要理化性質降解失效氧化劑、酸、堿酶、金屬離子、Δ青霉素中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類酸性較強（pKa2.5-2.8）酸性(羧基)有多個手性碳旋

2、主要理化性質中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類2、主要理化性質中國藥科大學藥學院1）羥肟酸鐵反應：

β–內酰胺類羥肟酸顯色2）茚三酮反應

α-氨基藍紫色3）雙縮脲反應

β–內酰胺類紫色4）光譜法（紫外光譜UV、核磁共振NMR）5）色譜法（高效液相色譜HPLC、薄層色譜TLC）NH2OH·HClNaOHFe3+H+茚三酮Δ

堿性酒石酸銅呈色反應3、鑒別中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類1）羥肟酸鐵反應：NH2OH·HClFe3+茚三酮堿性酒石酸頭孢利定別名，先鋒瑞丁、頭孢拉丁、頭孢握定、頭孢雷定、己環胺菌素、頭孢環己烯、環己烯胺頭孢菌素、環烯頭孢菌素，該品為白色或類白色結晶性粉末；微臭。該品在水中略溶，在乙醇、氯仿、乙醚中幾乎不溶。適用癥適用于敏感菌所致的急性咽炎、扁桃體炎、中耳炎、支氣管炎和肺炎等呼吸道感染、泌尿生殖道感染及皮膚軟組織感染等，為口服制劑，不宜用于嚴重感染。藥理作用該品為廣譜、高效、低毒抗生素，對革蘭氏陽性及陰性菌均有殺菌作用。該品不受青毒素酶的影響，對大多數產生青霉素酶的金黃色葡萄球菌和大腸桿菌亦有顯著活性。副作用該品的副反應與其他頭孢菌素相似，偶可見胃腸道功能紊亂、舌炎、胃灼熱、惡心、嘔吐、腹瀉、蕁麻疹、關節痛和輕微嗜酸性粒細胞增多，個別病人出現乳酸脫氫酶，血清轉氯酶暫性升高。二、β–內酰胺類頭孢利定二、β–內酰胺類3、鑒別---------頭孢利定的NMR鑒別法(JP14)

NMR鑒別法單峰信號取本品50mg溶于0.5ml重水中，測定NMR光譜時，應顯示多重峰信號多重峰信號δ=3.8附近δ=6.9～7.5δ=7.9～9.0235強度比中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類3、鑒別---------頭孢利定的NMR鑒別法(JP頭孢氨芐物化特性：該品為白色或乳黃色結晶性粉末；微臭。該品在水中微溶，在乙醇、氯仿或乙醚中不溶。主要成分（6R，7R）-3-甲基-7-[（R）-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜雙環[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸—水合物藥理作用：該品通過抑制細胞壁的合成，使細胞內容物膨脹至破裂溶解，從而達到殺菌作用。該品為廣譜抗生素。對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有抗菌作用，注射后吸收迅速而完全，生物利用率高。特別加入增效抗炎因子，使該品具有標本兼治得效果，其殺菌能力比青霉素類大20倍，比磺胺類大10倍、比喹諾酮類大5倍。二、β–內酰胺類頭孢氨芐二、β–內酰胺類二、β–內酰胺類適用癥廣譜抗菌素類藥。主用于革蘭氏陽性菌和陰性菌感染，如：流行性感冒，出血性敗血癥、鏈球菌病、豬丹毒、炭疽、氣腫疽、惡性水腫、放線菌病、壞死桿菌病、鉤端螺旋體病等所引起的敗血性高熱（41～43℃）或持續低溫（37℃以下）、消化不良、喜喝冷水、無神嗜睡、行走拐跛、耳部變藍、流淚等。同時用于治療各種炎癥疾患，如：傳染性胸膜肺炎、肺疫肺炎、萎縮性鼻炎、藍耳病、乳腺炎、子宮炎、口腔炎、尿道炎等引起的咳嗽氣喘、呼吸困難、懷孕低、死胎多或仔豬出生7-10天后死亡，乳房紅腫、乳汁變壞、產乳下降、口蹄潰爛、流涎不止、生瘡化膿等。副作用

1、惡心、嘔吐、腹瀉和腹部不適較為多見。2、皮疹、藥物熱等過敏反應，偶可發生過敏性休克。3、頭暈、復視、耳鳴、抽搐等神經系統反應。4、應用該品期間偶可出現一過性腎損害。5、偶有患者出現血清氨基轉移酶升高、Coombs試驗陽性。溶血性貧血罕見，中性粒細胞減少和偽膜性結腸炎也有報告。二、β–內酰胺類適用癥廣譜抗菌素類藥。主用于革蘭氏陽性菌3、頭孢氨芐鑒別的TLC條件

CHP（2000）5mg/ml2μl硅膠G0.1mol/L枸櫞酸液-0.2mol/LNa2HPO4-丙酮(120:80:3)0.1%茚三酮溶液顯色USP（24）25mg/ml5μl硅膠醋酸乙酯-水-乙腈-冰HAc(48:18:14:14)短波長UV光檢出BP（1999）0.4%(W/V)1μl硅烷化硅膠HF25415.4%NH4Ac(pH6.2)-丙酮(85:15)254nm檢出中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類英國藥典美國藥典中國藥典3、頭孢氨芐鑒別的TLC條件CHP（2000）5mg/ml4、特殊雜質檢查--------聚合物、有關物質、異構體等色譜條件與系統適用性試驗測定法頭孢他啶中聚合物測定頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查色譜條件與系統適用性試驗異構體和有關物質舉例：中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類4、特殊雜質檢查--------聚合物、有關物質、異構體等色頭孢他啶中聚合物測定-------色譜條件與系統適用性試驗葡聚糖凝膠G-10理論板數應不低于900，拖尾因子在0.75～1.5254nm檢測流動相A：含3.5%硫酸銨的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液藍色葡聚糖2000中國藥科大學藥學院藥分教研室頭孢他啶中聚合物測定-------色譜條件與系統適用性試驗頭孢他啶中聚合物測定-------色譜條件與系統適用性試驗葡聚糖凝膠G-10峰面積的RSD應小于5.0%254nm檢測流動相B：0.01%十二烷基硫酸鈉溶液頭孢他啶對照品溶液中國藥科大學藥學院藥分教研室頭孢他啶中聚合物測定-------色譜條件與系統適用性試驗

頭孢他啶中聚合物測定-----測定法葡聚糖凝膠G-10254nm檢測流動相A：含3.5%硫酸銨的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液頭孢他啶樣品（20mg/ml）外標法計算，本品含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計不得超過0.3%AS中國藥科大學藥學院藥分教研室頭孢他啶中聚合物測定-----測定法葡聚糖凝膠G-1025頭孢他啶中聚合物測定-----------測定法葡聚糖凝膠G-10254nm檢測流動相B：0.01%十二烷基硫酸鈉溶液頭孢他啶對照品溶液AR外標法計算，本品含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計不得超過0.3%中國藥科大學藥學院藥分教研室頭孢他啶中聚合物測定-----------測定法葡聚糖凝膠頭孢呋辛酯理化特性：非處方藥，白色或類白色粉末；幾乎無臭，味苦。本品在丙酮中易溶，在氯仿中溶解，在甲醇或乙醇中略溶，在乙醚中微溶，在水中不溶。主要成分（6R，7R)-7-[2-呋喃基（甲氧亞氨基)乙酰氨基]-3-氨基甲酰氧甲基-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜雙環[4.2.0]辛-2-烯-2-羧酸，1-乙酰氧基乙酯適用癥：該品適用于溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌（耐甲氧西林株除外）及流感嗜血桿菌、大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇異變形桿菌等腸桿菌科細菌敏感菌株所致成人急性咽炎或扁桃體炎、急性中耳炎、上頜竇炎、慢性支氣管炎急性發作、急性支氣管炎、單純性尿路感染、皮膚軟組織感染及無并發癥淋病奈瑟菌性尿道炎和宮頸炎。兒童咽炎或扁桃體炎、急性中耳炎及膿皰病等。不良反應：1、常見腹瀉、惡心和嘔吐等胃腸反應。2、少見皮疹、藥物熱等過敏反應。3、偶見假膜性腸炎、嗜酸粒細胞增多、血膽紅素升高、血紅蛋白降低、腎功能改變、Coombs試驗陽性和一過性肝酶升高。頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查頭孢呋辛酯A，B異構體之間、頭孢呋辛酯A異構體與頭孢呋辛酯△2-異構體之間的分離度應大于1.5；色譜條件：ODS分析柱；0.2mol/L磷酸二氫銨-甲醇（62:38）為流動相；流速1ml/min；檢測波長278nm。系統適用性試驗：理論板數按頭孢呋辛酯A異構體峰計算，應不低于1500。中國藥科大學藥學院藥分教研室頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查頭孢呋辛酯A，B異構體之40020600302010時間(min)峰高(mAU)654A異構體B異構體113.95411.9192.401B異構體峰的相對保留時間約為0.85，A異構體峰的相對保留時間為1.0。供試品色譜圖中,A異構體峰的面積與A、B異構體峰的面積和之比應為0.48～0.55。頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查中國藥科大學藥學院藥分教研室異構體40020600302010時間(min)峰高(mAU)65供試品溶液：0.2mg/ml(流動相溶）對照溶液:供試品溶液，加流動相稀釋成6g/ml

對照溶液進樣20l，調節儀器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的10%取供試品溶液和對照品溶液各20l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時間的2.5倍供試品溶液如顯雜質峰，量取各雜質峰面積的和，不得大于對照溶液主峰的面積中國藥科大學藥學院藥分教研室頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查有關物質供試品溶液：0.2mg/ml(流動相溶）中國藥科大5、含量測定----碘量法（ChP2000）二、β–內酰胺類中國藥科大學藥學院藥分教研室原理：青霉素與頭孢菌素本身不與碘反應，但其堿性降解產物可消耗碘青霉素族頭孢菌素族NaOH水解4I2H+8I-I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6定量過量剩余5、含量測定----碘量法（ChP2000）二、β–5、含量測定----碘量法（ChP2000）

中國藥科大學藥學院藥分教研室反應分兩步進行：水解反應(按化學計算量進行)氧化-還原反應(無定量關系，受溫度、pH值和時間等因素影響，應嚴格控制反應條件并采用標準品平行對照測定)5、含量測定----碘量法（ChP2000）中國藥科5、含量測定

-----碘量法（ChP2000）中國藥科大學藥學院藥分教研室因樣品中雜質會消耗碘，故應作空白試驗。加入樣品，不加堿；其余試劑（醋酸鹽緩沖液，碘液，硫代硫酸鈉）都要加堿。空白試驗:空白試驗與經典空白試驗不同：5、含量測定-----碘量法（ChP2000）中國藥科5、含量測定-----碘量法（ChP2000）

中國藥科大學藥學院藥分教研室試驗條件:（I2氧化）弱酸性（pH4.5）20分鐘后，耗碘量隨時間的變化較小堿↑I2→IO3-+I-酸↑某些藥物與碘生成復鹽沉淀溫度（24～26℃）溫度＞38℃時未水解的供試品亦消耗碘反應時間：（20分鐘）5、含量測定-----碘量法（ChP2000）中國藥5、含量測定-----碘量法（ChP2000）中國藥科大學藥學院藥分教研室含量％＝×

×對照品％V樣空-V樣W對V對空-

V對W樣靈敏度高：樣品:碘=1:8反應條件、實驗操作要求高1份含量V對、V對空V樣、V樣空加試劑次序、反應時間、滴定速度相同特點：5、含量測定-----碘量法（ChP2000）中國藥科5、含量測定----電位配位滴定法（汞量法）中國藥科大學藥學院藥分教研室原理：青霉素不與汞鹽反應，其堿性降解產物可與Hg2+絡和。Hg++2R-SH(RS)2Hg+2H+方法說明：

a、空白試驗與碘量法類似，加樣品，不加NaOHb、與碘量法相比，汞量法不需對照試驗5、含量測定----電位配位滴定法（汞量法）三、四環素類（包括土霉素和金霉素）土霉素，鹽酸地霉素，氧四環，為淡黃色片或糖衣片，屬于四環素類適用癥1、該品可作為下列疾病的選取用藥物：⑴立克次體病，包括流行性斑疹傷寒、地方性斑疹傷寒、落基山熱、恙蟲病和Q熱。⑵支原體屬感染。⑶衣原體屬感染，包括鸚鵡熱、性病、淋巴肉牙腫、非特異性尿道炎、輸卵管炎、宮頸炎及沙眼。⑷回歸熱。⑸布魯菌病。⑹霍亂。⑺兔熱病。⑻鼠疫。2、該品可用于對青霉素類過敏的沙眼紅眼病破傷風、氣性壞疽、雅司、梅毒、淋病和鉤端螺旋體病以及放線菌屬、李斯特菌感染的患者。3、可用于急性腸道阿米巴病和中、重度痤瘡患者作為輔助治療。三、四環素類（包括土霉素和金霉素）土霉素，鹽酸地霉素，氧四金霉素：又稱氯四環素，其抗菌譜與四環素相似，對革蘭氏陽性球菌，特別是葡萄球菌、肺炎球菌有效。適應癥于敏感金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌等革蘭陽性菌及流感嗜血桿菌等敏感革蘭陰性菌所致淺表眼部感染的治療；也可用于沙眼衣原體所致沙眼的治療。不良反應1、輕微刺激感。2、偶見過敏反應，出現充血，眼癢，水腫等癥狀。金霉素：又稱氯四環素，其抗菌譜與四環素相似，對革蘭氏陽性球菌中國藥科大學藥學院藥分教研室三、四環素類1.化學結構中國藥科大學藥學院藥分教研室三、四中國藥科大學藥學院藥分教研室三、四環素類-OH：酸性N(CH3)2：堿性與酸、堿均可成鹽臨床多用鹽酸鹽兩性旋光性易發生異構化，降解等反應，性質不穩定穩定性酚羥基、烯醇基與Ca2+、Mg2+絡合顯色與金屬離子絡合2、主要理化性質UV和熒光中國藥科大學藥學院藥分教研室三、四中國藥科大學藥學院藥分教研室三、四環素類

2.主要理化性質堿性C環開環，形成內酯異四環素弱酸性（pH2-6）A環C-4異構化差向四環素酸性（pH<2）C環脫水脫水四環素中國藥科大學藥學院藥分教研室三、四中國藥科大學藥學院藥分教研室三、四環素類AApH2.0~6.0差向異構體DDDCBBCBC脫水四環素類中國藥科大學藥學院藥分教研室三、四異四環素OH-三、四環素類中國藥科大學藥學院藥分教研室異四環素OH-三、四環素類中國藥科大學藥學院中國藥科大學藥學院藥分教研室三、四環素類3.鑒別1）濃硫酸反應2）FeCl3反應：（酚羥基）顯紅色~褐色3）TLC、HPLC4）熒光：（含共軛雙鍵）紫外燈照射下產生不同顏色熒光ChP、USP：HPLC法

JP：比色法4.檢查TLC、HPLC法雜質吸收度（降解產物顏色較深）5.含量中國藥科大學藥學院藥分教研室三、四中國藥科大學藥學院藥分教研室四、高分子雜質的檢查內源性：藥物自身聚合物來源于生產過程、貯存過程、使用不當外源性：蛋白、多肽、多糖及其與藥物的結合物來源于發酵過程臨床應用其硫酸鹽高分子雜質凝膠色譜法：葡聚糖凝膠SephadexG-10雜質控制方法中國藥科大學藥學院藥分教研室四、高謝謝觀看！謝謝觀看！ 謝謝大家！ 謝謝大家！48第十一章抗生素類藥物分析第十一章抗生素類藥物分析第十一章抗生素類藥物分析在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活動有特異抑制作用的化學物質的總稱β–內酰胺類(介紹）四環素類（介紹）大環內酯類多烯大環類多肽類氨基糖苷類1.抗生素（antibiotics）2.分類中國藥科大學藥學院藥分教研室一、概述第十一章抗生素類藥物分析第十一章抗生素類藥物分析第十一章抗生49在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活動有特異抑制作用的化學物質的總稱β–內酰胺類(介紹）四環素類（介紹）大環內酯類多烯大環類多肽類氨基糖苷類1.抗生素（antibiotics）2.分類中國藥科大學藥學院藥分教研室一、概述在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活

化學純度較低活性組分易發生變異穩定性差3.來源4.抗生素的特點化學合成半合成生物合成（發酵）生產工藝復雜發酵過程不易控制，易受污染原因中國藥科大學藥學院藥分教研室一、概述化學純度較低3.來源4.抗生素的特抗生素的種類1.青霉素又被稱為青霉素G、peillinG、盤尼西林、配尼西林、青霉素鈉、芐青霉素鈉、青霉素鉀、芐青霉素鉀一，以及頭孢類、非典型類β-內酰胺類中一大類抗生素。青霉素是抗菌素的一種，是指從青霉菌培養液中提制的分子中含有青霉烷、能破壞細菌的細胞壁并在細菌細胞的繁殖期起殺菌作用的一類抗生素，是第一種能夠治療人類疾病的抗生素。青霉素類抗生素是β-內酰胺類中一大類抗生素的總稱。2.紅霉素、麥迪霉素、螺旋霉素、乙酰螺旋霉素、交沙霉素、柱晶白霉素等大環內酯的一類抗生素。抗生素的種類1.青霉素抗生素的種類3.金霉素（chlotetracycline)、土霉素（oxytetracycline）、四環素（tetracycline）及半合成衍生物甲烯土霉素、強力霉素、二甲胺基四環素等由放線菌產生的四環素類廣譜抗生素4.鏈霉素，是一種從鏈霉菌(灰色鏈絲菌)培養液中提取出來的抗生素。鏈霉素的硫酸鹽是白色或微黃色的粉末或結晶，易溶于水，比較穩定，對某些桿菌，特別是結核桿菌，具有顯著的抑菌乃至殺菌作用。鏈霉素主要用于治療結核病、鼠疫、百日咳、細菌性痢疾和泌尿道感染等。5.氯霉素，是從委內瑞拉鏈霉菌(Streptomycesvenezuela)中分離提取的廣譜抗生素。抗生素的種類3.金霉素（chlotetracycline)抗生素使用歷史1877年，Pasteur和Joubert首先認識到微生物產品有可能成為治療藥物，他們發表了實驗觀察，即普通的微生物能抑制尿中炭疽桿菌的生長。1928年，弗萊明爵士發現了能殺死致命細菌的青霉菌。青霉素治愈了梅毒和淋病，而且在當時沒有任何明顯的副作用。1936年，磺胺的臨床應用開創了現代抗微生物化療的新紀元。1944年在新澤西大學分離出來第二種抗生素鏈霉素，它有效治愈了另一種可怕的傳染病：結核病。1947年出現氯霉素，它主要針對痢疾、炭疽病菌，治療輕度感染。抗生素使用歷史1877年，Pasteur和Joubert首先抗生素使用歷史1948年四環素出現，這是最早的廣譜抗生素。在當時看來，它能夠在還未確診的情況下有效地使用。今天四環素基本上只被用于家畜飼養。1956年禮來公司發明了萬古霉素被稱為抗生素的最后武器。因為它對G+細菌細胞壁、細胞膜和RNA有三重殺菌機制，不易誘導細菌對其產生耐藥。1980年代喹諾酮類藥物出現。和其他抗菌藥不同，它們破壞細菌染色體，不受基因交換耐藥性的影響。1992年，這類藥物中的一個變體因為造成肝腎功能紊亂被美國取締，但在發展中國家仍有使用。抗生素使用歷史1948年四環素出現，這是最早的廣譜抗生素。在中國是抗生素使用大國，也是抗生素生產大國：年產抗生素原料大約21萬噸，出口3萬噸，其余自用（包括醫療與農業使用)，人均年消費量138克左右(美國僅13克)。據2006～2007年度衛生部全國細菌耐藥監測結果顯示，全國醫院抗菌藥物年使用率高達74%。而世界上沒有哪個國家如此大規模地使用抗生素，在美英等發達國家，醫院的抗生素使用率僅為22%～25%。中國是世界上濫用抗生素問題最嚴重的國家之一中國是抗生素使用大國，也是抗生素生產大國：年產抗生素中國的婦產科長期以來都是抗生素濫用的重災區，上海市長寧區中心醫院婦產科多年的統計顯示，目前青霉素的耐藥性幾乎達到100%。中國的住院患者中，抗生素的使用率則高達70%，其中外科患者幾乎人人都用抗生素，比例高達97%。另據1995～2007年疾病分類調查，中國感染性疾病占全部疾病總發病數的49%，其中細菌感染性占全部疾病的18%～21%，也就是說80%以上屬于濫用抗生素，每年有8萬人因此死亡。中國的婦產科長期以來都是抗生素濫用的重災區，上海市長阿齊紅霉素頭孢呋辛氧氟沙星紅霉素阿齊紅霉素頭孢呋辛氧氟沙星紅霉素第十一章抗生素類藥物分析課件青霉素Penicillin青霉素采用生物學法與物理化學法鑒別：理化方法、微生物法檢查：水分、異常毒性、熱原、細菌內毒素、降壓物質等含量/效價測定：微生物法：與臨床療效吻合，靈敏度高，但操作復雜費時；理化方法：準確度與專屬性較高，且操作簡便，但與臨床療效有偏差5.抗生素質量分析一、概述中國藥科大學藥學院藥分教研室采用生物學法與物理化學法5.抗生素質量分析一、概述中1.化學結構包括青霉素類和頭孢菌素類青霉素類：6-APA為母核頭孢菌素類：7-ACA為母核中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類1.化學結構包括青霉素類和頭孢菌素類青霉素類：6-APA為酸性較強（pKa2.5-2.8）臨床常用其堿金屬鹽（水溶性好）酸性(羧基)有多個手性碳旋光性青霉素類：苯環取代基頭孢菌素類：母核有共軛結構UV（共軛）干燥條件較穩定，溶液不穩定穩定性(內酰胺)2、主要理化性質降解失效氧化劑、酸、堿酶、金屬離子、Δ青霉素中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類酸性較強（pKa2.5-2.8）酸性(羧基)有多個手性碳旋

2、主要理化性質中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類2、主要理化性質中國藥科大學藥學院1）羥肟酸鐵反應：

β–內酰胺類羥肟酸顯色2）茚三酮反應

α-氨基藍紫色3）雙縮脲反應

β–內酰胺類紫色4）光譜法（紫外光譜UV、核磁共振NMR）5）色譜法（高效液相色譜HPLC、薄層色譜TLC）NH2OH·HClNaOHFe3+H+茚三酮Δ

堿性酒石酸銅呈色反應3、鑒別中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類1）羥肟酸鐵反應：NH2OH·HClFe3+茚三酮堿性酒石酸頭孢利定別名，先鋒瑞丁、頭孢拉丁、頭孢握定、頭孢雷定、己環胺菌素、頭孢環己烯、環己烯胺頭孢菌素、環烯頭孢菌素，該品為白色或類白色結晶性粉末；微臭。該品在水中略溶，在乙醇、氯仿、乙醚中幾乎不溶。適用癥適用于敏感菌所致的急性咽炎、扁桃體炎、中耳炎、支氣管炎和肺炎等呼吸道感染、泌尿生殖道感染及皮膚軟組織感染等，為口服制劑，不宜用于嚴重感染。藥理作用該品為廣譜、高效、低毒抗生素，對革蘭氏陽性及陰性菌均有殺菌作用。該品不受青毒素酶的影響，對大多數產生青霉素酶的金黃色葡萄球菌和大腸桿菌亦有顯著活性。副作用該品的副反應與其他頭孢菌素相似，偶可見胃腸道功能紊亂、舌炎、胃灼熱、惡心、嘔吐、腹瀉、蕁麻疹、關節痛和輕微嗜酸性粒細胞增多，個別病人出現乳酸脫氫酶，血清轉氯酶暫性升高。二、β–內酰胺類頭孢利定二、β–內酰胺類3、鑒別---------頭孢利定的NMR鑒別法(JP14)

NMR鑒別法單峰信號取本品50mg溶于0.5ml重水中，測定NMR光譜時，應顯示多重峰信號多重峰信號δ=3.8附近δ=6.9～7.5δ=7.9～9.0235強度比中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類3、鑒別---------頭孢利定的NMR鑒別法(JP頭孢氨芐物化特性：該品為白色或乳黃色結晶性粉末；微臭。該品在水中微溶，在乙醇、氯仿或乙醚中不溶。主要成分（6R，7R）-3-甲基-7-[（R）-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜雙環[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸—水合物藥理作用：該品通過抑制細胞壁的合成，使細胞內容物膨脹至破裂溶解，從而達到殺菌作用。該品為廣譜抗生素。對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有抗菌作用，注射后吸收迅速而完全，生物利用率高。特別加入增效抗炎因子，使該品具有標本兼治得效果，其殺菌能力比青霉素類大20倍，比磺胺類大10倍、比喹諾酮類大5倍。二、β–內酰胺類頭孢氨芐二、β–內酰胺類二、β–內酰胺類適用癥廣譜抗菌素類藥。主用于革蘭氏陽性菌和陰性菌感染，如：流行性感冒，出血性敗血癥、鏈球菌病、豬丹毒、炭疽、氣腫疽、惡性水腫、放線菌病、壞死桿菌病、鉤端螺旋體病等所引起的敗血性高熱（41～43℃）或持續低溫（37℃以下）、消化不良、喜喝冷水、無神嗜睡、行走拐跛、耳部變藍、流淚等。同時用于治療各種炎癥疾患，如：傳染性胸膜肺炎、肺疫肺炎、萎縮性鼻炎、藍耳病、乳腺炎、子宮炎、口腔炎、尿道炎等引起的咳嗽氣喘、呼吸困難、懷孕低、死胎多或仔豬出生7-10天后死亡，乳房紅腫、乳汁變壞、產乳下降、口蹄潰爛、流涎不止、生瘡化膿等。副作用

1、惡心、嘔吐、腹瀉和腹部不適較為多見。2、皮疹、藥物熱等過敏反應，偶可發生過敏性休克。3、頭暈、復視、耳鳴、抽搐等神經系統反應。4、應用該品期間偶可出現一過性腎損害。5、偶有患者出現血清氨基轉移酶升高、Coombs試驗陽性。溶血性貧血罕見，中性粒細胞減少和偽膜性結腸炎也有報告。二、β–內酰胺類適用癥廣譜抗菌素類藥。主用于革蘭氏陽性菌3、頭孢氨芐鑒別的TLC條件

CHP（2000）5mg/ml2μl硅膠G0.1mol/L枸櫞酸液-0.2mol/LNa2HPO4-丙酮(120:80:3)0.1%茚三酮溶液顯色USP（24）25mg/ml5μl硅膠醋酸乙酯-水-乙腈-冰HAc(48:18:14:14)短波長UV光檢出BP（1999）0.4%(W/V)1μl硅烷化硅膠HF25415.4%NH4Ac(pH6.2)-丙酮(85:15)254nm檢出中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類英國藥典美國藥典中國藥典3、頭孢氨芐鑒別的TLC條件CHP（2000）5mg/ml4、特殊雜質檢查--------聚合物、有關物質、異構體等色譜條件與系統適用性試驗測定法頭孢他啶中聚合物測定頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查色譜條件與系統適用性試驗異構體和有關物質舉例：中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類4、特殊雜質檢查--------聚合物、有關物質、異構體等色頭孢他啶中聚合物測定-------色譜條件與系統適用性試驗葡聚糖凝膠G-10理論板數應不低于900，拖尾因子在0.75～1.5254nm檢測流動相A：含3.5%硫酸銨的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液藍色葡聚糖2000中國藥科大學藥學院藥分教研室頭孢他啶中聚合物測定-------色譜條件與系統適用性試驗頭孢他啶中聚合物測定-------色譜條件與系統適用性試驗葡聚糖凝膠G-10峰面積的RSD應小于5.0%254nm檢測流動相B：0.01%十二烷基硫酸鈉溶液頭孢他啶對照品溶液中國藥科大學藥學院藥分教研室頭孢他啶中聚合物測定-------色譜條件與系統適用性試驗

頭孢他啶中聚合物測定-----測定法葡聚糖凝膠G-10254nm檢測流動相A：含3.5%硫酸銨的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液頭孢他啶樣品（20mg/ml）外標法計算，本品含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計不得超過0.3%AS中國藥科大學藥學院藥分教研室頭孢他啶中聚合物測定-----測定法葡聚糖凝膠G-1025頭孢他啶中聚合物測定-----------測定法葡聚糖凝膠G-10254nm檢測流動相B：0.01%十二烷基硫酸鈉溶液頭孢他啶對照品溶液AR外標法計算，本品含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計不得超過0.3%中國藥科大學藥學院藥分教研室頭孢他啶中聚合物測定-----------測定法葡聚糖凝膠頭孢呋辛酯理化特性：非處方藥，白色或類白色粉末；幾乎無臭，味苦。本品在丙酮中易溶，在氯仿中溶解，在甲醇或乙醇中略溶，在乙醚中微溶，在水中不溶。主要成分（6R，7R)-7-[2-呋喃基（甲氧亞氨基)乙酰氨基]-3-氨基甲酰氧甲基-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜雙環[4.2.0]辛-2-烯-2-羧酸，1-乙酰氧基乙酯適用癥：該品適用于溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌（耐甲氧西林株除外）及流感嗜血桿菌、大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇異變形桿菌等腸桿菌科細菌敏感菌株所致成人急性咽炎或扁桃體炎、急性中耳炎、上頜竇炎、慢性支氣管炎急性發作、急性支氣管炎、單純性尿路感染、皮膚軟組織感染及無并發癥淋病奈瑟菌性尿道炎和宮頸炎。兒童咽炎或扁桃體炎、急性中耳炎及膿皰病等。不良反應：1、常見腹瀉、惡心和嘔吐等胃腸反應。2、少見皮疹、藥物熱等過敏反應。3、偶見假膜性腸炎、嗜酸粒細胞增多、血膽紅素升高、血紅蛋白降低、腎功能改變、Coombs試驗陽性和一過性肝酶升高。頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查頭孢呋辛酯A，B異構體之間、頭孢呋辛酯A異構體與頭孢呋辛酯△2-異構體之間的分離度應大于1.5；色譜條件：ODS分析柱；0.2mol/L磷酸二氫銨-甲醇（62:38）為流動相；流速1ml/min；檢測波長278nm。系統適用性試驗：理論板數按頭孢呋辛酯A異構體峰計算，應不低于1500。中國藥科大學藥學院藥分教研室頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查頭孢呋辛酯A，B異構體之40020600302010時間(min)峰高(mAU)654A異構體B異構體113.95411.9192.401B異構體峰的相對保留時間約為0.85，A異構體峰的相對保留時間為1.0。供試品色譜圖中,A異構體峰的面積與A、B異構體峰的面積和之比應為0.48～0.55。頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查中國藥科大學藥學院藥分教研室異構體40020600302010時間(min)峰高(mAU)65供試品溶液：0.2mg/ml(流動相溶）對照溶液:供試品溶液，加流動相稀釋成6g/ml

對照溶液進樣20l，調節儀器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的10%取供試品溶液和對照品溶液各20l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時間的2.5倍供試品溶液如顯雜質峰，量取各雜質峰面積的和，不得大于對照溶液主峰的面積中國藥科大學藥學院藥分教研室頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查有關物質供試品溶液：0.2mg/ml(流動相溶）中國藥科大5、含量測定----碘量法（ChP2000）二、β–內酰胺類中國藥科大學藥學院藥分教研室原理：青霉素與頭孢菌素本身不與碘反應，但其堿性降解產物可消耗碘青霉素族頭孢菌素族NaOH水解4I2H+8I-I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6定量過量剩余5、含量測定----碘量法（ChP2000）二、β–5、含量測定----碘量法（ChP2000）

中國藥科大學藥學院藥分教研室反應分兩步進行：水解反應(按化學計算量進行)氧化-還原反應(無定量關系，受溫度、pH值和時間等因素影響，應嚴格控制反應條件并采用標準品平行對照測定)5、含量測定----碘量法（ChP2000）中國藥科5、含量測定

-----碘量法（ChP2000）中國藥科大學藥學院藥分教研室因樣品中雜質會消耗碘，故應作空白試驗。加入樣品，不加堿；其余試劑（醋酸鹽緩沖液，碘液，硫代硫酸鈉）都要加堿。空白試驗:空白試驗與經典空白試驗不同：5、含量測定-----碘量法（ChP2000）中國藥科5、含量測定-----碘量法（ChP2000）

中國藥科大學藥學院藥分教研室試驗條件:（I2氧化）弱酸性（pH4.5）20分鐘后，耗碘量隨時間的變化較小堿↑I2→IO3-+I-酸↑某些藥物與碘生成復鹽沉淀溫度（24～26℃）溫度＞38℃時未水解的供試品亦消耗碘反應時間：（20分鐘）5、含量測定-----碘量法（ChP2000）中國藥5、含量測定-----碘量法（ChP2000）中國藥科大學藥學院藥分教研室含量％＝×

×對照品％V樣空-V樣W對V對空-

V對