靈芝三萜類物質抗高血壓實驗研究

作者：劉冬孫海燕

李世敏【關鍵詞】

靈芝；,,三萜類物質；,,降壓；,,子實體；,,菌絲體摘要：目的研究靈芝三萜類物質對原發性高血壓大鼠（spontaneouslyhypertensiverats,SHR）的降壓作用。方法以SHR和正常wistarkyoto(WKY)大鼠為實驗對象，1次ig給藥，觀察靈芝三萜類物質對SHR和WKY血壓的影響。結果給藥劑量分別為450mg/kg（體重）和900mg/kg（體重）時，靈芝三萜類物質對SHR大鼠具有顯著降壓效果（P＜0.05或P＜0.01），3h后降壓幅度分別達（20.5±11.9）mmHg和（25.1±13.8）mmHg；給藥3h后SHR血壓降至最低點，此后15h內血壓趨于穩定，15h后SHR血壓開始回升，至21h血壓基本恢復到給藥前水平，且靈芝三萜類物質對正常WKY大鼠無明顯降壓作用。相同質量（45g）靈芝子實體和菌絲體靈芝三萜提取物喂食SHR大鼠，子實體提取物具有明顯降壓效果（P＜0.05），而菌絲體提取物降壓效果不明顯。結論靈芝三萜類物質對SHR大鼠具有明顯的降壓作用。關鍵詞：靈芝；

三萜類物質；

降壓；

子實體；

菌絲體StudyonAntihypertensiveEffectofTriterpenesFromGanodermaluciduminvivoAbstract：ObjectiveTostudytheantihypertensiveeffectoftriterpenesonspontaneouslyhypertensiverats(SHR)invivo.MethodsThesystolicbloodpressure(SBP)oftheSHRandtheWKYweremeasuredaftertakingdifferentdosesbyig.ResultsTheresultsshowedthattriterpenesmarkedlyreducedthesystolicbloodpressure(SBP)ofSHRatasingledosageof900mg/kgbodyweightor450

mg/kgbodyweight,theSBPdecreasedto（20.5±11.9）mmHg

and（25.1±13.8）mmHgat3hafteradministrationrespectively,theeffectwasmaximalat3hafteradministrationandcouldlast15h,SBPbegantoriseat15handreturnedtoinitiallevelat21hafteradministration.

However,thetriterpenesdidnotchangetheSBPofnormotensiveWistar-Kyoto(WKY)ratssignificantly.

TriterpenesextractfromfermentedmyceliacouldnotreducetheSBPofSHRsignificantly,comparedwiththeantihypertensiveeffectoftheextractfromthefruitingbodyofthesamequality.ConclusionGanodermatriterpeneshavetheantihypertensiveeffectonSHRinvivo.

Keywords：Ganodermalucidum;

Triterpene;

Antihypertension;

Fermentedmycelia;

Fruitingbody

靈芝在我國已有兩千多年的藥用歷史。它具有增強機體免疫力、抗腫瘤、抗衰老、治療和預防心血管疾病等多種功效。靈芝中最主要的活性成分是靈芝多糖和靈芝三萜。靈芝多糖的增強機體免疫力等功效已通過大量的研究報道而得到公認。靈芝三萜（triterpenes）是近年來從靈芝中分離得到的另一類具有廣泛藥理活性的物質，是當今靈芝研究的又一熱點。研究表明靈芝三萜具有保肝護肝、抗腫瘤、抗HIV1及HIV1蛋白酶活性、抑制膽固醇合成、鎮痛、降血脂等多種藥理作用［1］。此外，Morigiwa等［2］還報道從紅芝的70%乙醇提取物中分離出的8種靈芝三萜具有體外抑制豬腎血管緊張素轉化酶（agiotensinconvertingenzyme,ACE）活性的作用。ACE的高活性是高血壓病發病的重要因素，因此推斷靈芝三萜可能具有體內降低血壓功效，但至今未見靈芝三萜降血壓效果動物實驗研究報道。本文針對這一問題，研究了靈芝三萜類物質的體內降壓作用，并比較了靈芝菌絲體和子實體的降壓效果。1

器材1.1

藥品1.1.1

靈芝子實體由赤芝GanodermalucidumAs.565栽培，為成熟期子實體，菌種由中科院廣州微生物研究所提供。1.1.2

靈芝菌絲體由赤芝菌種As.565按文獻介紹的方法（無錫輕工大學，王林，2004碩士論文《靈芝酸發酵及抗慢性支氣管炎活性研究》）經深層液體培養制得，培養時間100h。1.1.3

靈芝三萜類物質粗樣品稱取粉碎、烘干靈芝子實體，按1∶50（m/m）加入無水乙醇，超聲1h，45℃水浴回流浸提24h，0.45μm濾膜過濾，濾液45℃減壓濃縮得黑色浸膏，浸膏復溶于CHCl3中，用飽和NaHCO3溶液(體積比為1∶1)萃取3次，取NaHCO3溶液層，用6mol/L鹽酸酸化至pH3～5后用等量CHCl3再萃取3次，合并CHCl3層，減壓濃縮得淡黃色粉狀固體，即為靈芝三萜（酸性組分）組樣品。用分光光度法［3］測定粗樣中靈芝三萜物質含量。備用。1.1.4

卡托普利（Captopril）汕頭金石制藥總廠生產，批號050106。1.2

動物原發性高血壓大鼠SHR和正常血壓大鼠WKY，12周齡，體重250～300g，全部為雄性，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司〔（許可證號：SGXK（滬）20020010〕提供。標準顆粒飼料喂養。1.3

儀器多道生理信號采集處理系統RM－6240BD，四川成都儀器廠；恒溫電子烘箱，上海醫療器械廠。2

方法2.1

動物篩選SHR大鼠50只，測量尾動脈血壓，收縮壓高于180mmHg用于實驗，低于180mmHg的予以剔除；最終40只符合實驗要求。WKY大鼠30只，測量尾動脈血壓，收縮壓低于140mmHg的用于實驗，高于140mmHg的予以剔除；最終24只符合實驗要求。所有大鼠分籠飼養，每籠2只，均自由飲水進食，活動不限。溫度：(25±1)℃，濕度：(55±5)％，光照和黑暗各12h。所有大鼠均于實驗前訓練1周后開始正式實驗。2.2

大鼠血壓測量方法采用尾動脈容積法［4］。測量收縮壓（systolicbloodpressure，SBP），以mmHg表示（1mmHg≈0.133kPa）。2.3

統計分析數據均以±s表示，采用組間t檢驗，P＜0.05為具有顯著的統計學差異。2.4

靈芝三萜降壓效果實驗2.4.1

不同劑量靈芝三萜對SHR血壓影響取SHR大鼠24只，均衡隨機分為5組：①空白對照組；②靈芝三萜大劑量組（900mg/kg）；③靈芝三萜中劑量組（450mg/kg）；④靈芝三萜小劑量組（225mg/kg）；⑤卡托普利組（10mg/kg）。各組分別測定給藥前收縮壓。靈芝三萜組和卡托普利組灌胃給藥1次，空白對照組給予等量生理鹽水，分別測定各組給藥后3h的血壓。計算給藥前后血壓變化的差值進行統計。結果見表1。2.4.2

單次給藥后SHR大鼠24h血壓變化測定取SHR大鼠16只，均衡隨機分為2組：①空白對照組；②靈芝三萜組（450mg/kg）。分別灌胃給予生理鹽水和靈芝三萜粗樣1次，測定給藥后24h內血壓變化情況。2.4.3

靈芝三萜對WKY大鼠血壓的影響WKY大鼠24只，均衡隨機分為3組：①空白對照組；②靈芝三萜組（450mg/kg），③卡托普利組（10mg/kg）。靈芝三萜組和卡托普利組灌胃給藥1次，空白對照組給予等量生理鹽水，分別測定各組給藥后24h內血壓變化情況。結果見圖2。2.4.4

靈芝子實體和菌絲體三萜類物質降壓效果比較分別取45g靈芝子實體和菌絲體按1.1方法制備靈芝三萜粗樣（靈芝三萜類物質含量分別為（0.47g和0.13g），提取物分別全部溶于5ml水中。SHR大鼠24只，均衡隨機分為3組：①空白對照組；②靈芝子實體三萜組；③靈芝菌絲體三萜組。各組分別測定給藥前收縮壓。靈芝三萜各組灌胃給藥1次，空白對照組給予等量生理鹽水，測定給藥3h后血壓變化。計算給藥前后血壓變化的差值進行統計。3

結果3.1

不同劑量靈芝三萜對SHR血壓的影響見表1。表1

不同劑量靈芝三萜類物質對SHR血壓的影響（略）與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；n=8結果表明，與空白對照組相比，靈芝三萜小劑量組給藥前后血壓變化無顯著性差異(P＞0.05)；靈芝三萜中劑量組可以明顯降低SHR大鼠血壓（P＜0.05），靈芝三萜大劑量組藥后3h血壓降低幅度達(25.1±13.8)mmHg，呈非常顯著變化（P＜0.01），且用藥劑量和效果之間存在著較好的量-效關系。表明，靈芝三萜類物質不但具有如文獻報道的體外抑制ACE生物學活性，而且具有高效的體內降血壓活性。3.2

靈芝三萜單次給藥后SHR大鼠24h血壓變化見圖1。圖1

單次給藥后24h內SHR收縮壓的變化（略）結果表明，空白對照組SHR24h血壓都處于較平穩狀態。SHR大鼠給藥后血壓開始下降，3h降至最低點（179.2±9.3）mmHg，與空白對照組比較血壓降低顯著（P＜0.05），3h后血壓不再繼續下降，從3～15h血壓趨于穩定，從第15h血壓開始上升，直至21h時，血壓基本恢復給藥前水平。3.3

靈芝三萜對WKY大鼠血壓的影響見圖2。圖2

單次給藥后24h內WKY收縮壓的變化（略）圖2顯示，空白組WKY大鼠自身血壓在24h之內變化范圍在117～121mmHg之間，但呈不顯著性波動（P＞0.05）。靈芝三萜給藥組，給藥后3h血壓降至最低點血壓（117.0±4.3）mmHg，但與空白組比較血壓降低無顯著性差異（P＞0.05）。卡托普利組，給藥后4h血壓降至最低點血壓（113.8±7.6）mmHg，與空白組比較也無顯著性差異（P＞0.05）。說明，靈芝三萜類物質對正常大鼠的血壓無顯著的降壓作用。3.4

靈芝子實體和菌絲體三萜類物質降血壓效果比較相同質量的靈芝子實體和菌絲體經提取后，對SHR的降血壓效果見表2。表2

靈芝子實體和菌絲體降血壓效果比較（略）與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；n=8結果表明，相同質量（45g）靈芝子實體和菌絲體靈芝三萜提取物喂食SHR大鼠，子實體提取物具有明顯降壓效果（P＜0.05），而菌絲體提取物降壓效果不明顯，其原因可能是靈芝菌絲體經過100h的培養，靈芝三萜類物質含量仍然很低，而子實體中具有降壓作用的靈芝三萜含量較高，這與邢增濤等［5］對不同品種靈芝中三萜類化合物的比較研究報道一致。4

討論高血壓病的發病機理多樣，其中腎素血管緊張素系統（reininangiotensinsystem,RAS）中血管緊張素轉化酶（ACE）活性異常增高導致強收縮血管物質AngII增多引起血壓升高是重要機理之一。臨床廣泛應用的ACEI藥物通過抑制ACE的活性而降低血壓。Morigiwa等［2］首次報道了8個靈芝三萜類化合物在體外對ACE酶的作用，發現ganodericacidF對ACE抑制作用最顯著，其IC50為4.7×106mol?L1，說明靈芝三萜類物質也是一類ACE抑制劑，通過抑制ACE活性而降低血壓。本研究表明，靈芝三萜類物質經口服給藥對SHR大鼠具有顯著降壓效果，且靈芝三萜類物質對正常WKY大鼠無明顯降壓作用，從而進一步表明，靈芝三萜類物質不但具有如文獻報道的體外抑制ACE生物學活性，而且具有高效的體內降血壓活性。本研究也表明，相同質量（25g）靈芝子實體和菌絲體,其靈芝三萜提取物經喂食SHR大鼠，子實體提取物具有明顯降壓效果，而菌絲體提取物降壓效果不明顯，說明菌絲體中三萜類物質含量較少。靈芝三萜類化合物可通過從靈芝子實體或發酵菌絲體中獲得，其中通過深層液體發酵法獲取菌絲體再制備靈芝三萜類物質可以縮短生產周期而成為近幾年的研究熱點，但SheauFarnYeh和RongsueyChyr等［6，7］的研究表明，液體發酵培養至7d時靈芝菌絲體的三萜類化合物的含量很低，培養至30d左右時才達到高峰，因此，如果希望通過液體發酵來獲得以靈芝三萜類化合物為主的產品，必須通過菌種的篩選、發酵條件的優化及適當延長培養時間來實現。參考文獻：［1］

羅

俊,林志彬.靈芝三萜類化合物藥理作用研究進展［J］.藥學學報，2002,37(7)：574.［2］

MorigiwaA,KitabatakeK,FujimotoY,etal.Angiotensinconvert