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文檔簡介
缺血性心臟病的基因治療南京醫科大學第一附屬醫院心內科楊志健編輯課件缺血性心臟病的基因治療南京醫科大學第一附屬醫院編輯課件1現有治療藥物治療PCICABG
具有局限性！………無法血運重建………細胞喪失編輯課件現有治療藥物治療具有局限性！編輯課件2生物學治療基因治療、細胞成形術優化現有的治療為終末期患者提供新的治療途徑編輯課件生物學治療基因治療、細胞成形術編輯課件3基因治療的目的在于修復、替代體內突變、缺失的基因或加強某些被不良抑制基因的功能，或抑制某些不當過強表達基因的功能，以達到使機體異常的功能、代謝得以改善、恢復的目的。編輯課件基因治療的目的在于修復、替代體內突變、缺失的基因或加強某些被4編輯課件編輯課件5編輯課件編輯課件6編輯課件編輯課件7AngiogenesisStatusSince1999–amassivewaveofangiogenesis-stimulatingdrugsinclinicaltrials:5drugsforcoronaryarterydisease;
6
5drugsforperipheralvasculardisease;
2drugsforstroke;10drugsforwoundhealing;LaserDopplerbloodflowinischemichindlimbmodel編輯課件AngiogenesisStatusSince19998血管內皮生長因子（VEGF）：形成最初的血管叢血管生成細小，有滲漏基因治療：編輯課件血管內皮生長因子（VEGF）：基因治療：編輯課件9VEGF-121進行了人下肢缺血性治療的二期臨床試驗(863)編輯課件VEGF-121進行了人下肢缺血性治療的二期臨床試驗(86310血管生成素（Ang）：穩定新生血管壁血管口徑增大編輯課件血管生成素（Ang）：編輯課件11VEGF165和Ang1基因
促血管生成和抗缺血研究編輯課件VEGF165和Ang1基因
促血管生成和抗缺血研究12研究內容構建Ad5-VEGF165和Ad5-Ang1聯合轉染促血管生成作用研究聯合轉染抗心肌缺血作用研究機制探討編輯課件研究內容構建Ad5-VEGF165和Ad5-Ang1編輯課13研究結果編輯課件研究結果編輯課件14更強的促血管生成作用編輯課件更強的促血管生成作用編輯課件15進一步減少心肌梗死面積編輯課件進一步減少心肌梗死面積編輯課件16Ang1組和聯合組與對照組均有顯著性差異，但VEGF組無顯著性差異；Ang1組和聯合組與VEGF組均有顯著性差異高調心肌Bcl-2，抗凋亡編輯課件Ang1組和聯合組與對照組均有顯著性差異，但VEGF組無顯著17單獨轉染組以及聯合組PI3K活性均比對照組顯著性增高；聯合組比VEGF單獨轉染組顯著升高，但與Ang1組無差異。進一步活化心肌PI3K信號編輯課件單獨轉染組以及聯合組PI3K活性均比對照組顯著性增高；聯合組18腺病毒介導肝細胞生長因子治療缺血性心臟病(863,973)編輯課件腺病毒介導肝細胞生長因子治療缺血性心臟病(863,973)編19
HGF在心血管方向的研究現狀抗心肌細胞凋亡，促進血管新生，抗心肌組織纖維化促梗死周遍區心肌肥厚可能改善梗死后室壁擴張，有待進一步研究體外實驗中發現HGF誘導骨髓干細胞分化成心肌細胞以及能誘導特異的前體細胞沿濃度梯度定向遷移至梗死區
通過阻NF－kappaB旁路，起到抗炎作用編輯課件HGF在心血管方向的研究現狀抗心肌細胞凋亡，促進血管新生20研究目的考察經非梗死相關動脈轉染Ad5-HGF對梗死后心衰的改善作用
研究轉染Ad5-HGF后，局部心肌中CD117+干細胞動員情況對比經非梗死相關動脈移植骨髓間充質干細胞（BM-MSCs）或轉染Ad5-HGF對心梗死后心衰治療作用編輯課件研究目的考察經非梗死相關動脈轉染Ad5-HGF對梗死后心衰研21
實驗技術方法對照組急性心梗模型建立MSCs培養移植（4周后）門控心肌顯像，冠狀動脈造影處死，免疫組織化學Ad5-HGF組BM-MSCs組
3周后再次心肌顯像，冠脈造影編輯課件實驗技術方法對照組急性心梗模型建立MSCs培養移植（4周后22開胸結扎前降支，建立模型編輯課件開胸結扎前降支，建立模型編輯課件23門控心肌核素顯像A:對照組4周和7周對比B:Ad5-HGF組4周和7周對比編輯課件門控心肌核素顯像A:對照組4周和7周對比B:Ad5-HGF24
心功能編輯課件心功能編輯課件25冠狀動脈造影：側支循環分析A:對照組4周和7周對比B:Ad5-HGF組4周和7周對比編輯課件冠狀動脈造影：側支循環分析A:對照組4周和7周對比B:Ad526
免疫組化ELISA法檢測心肌組織中HGF蛋白表達編輯課件免疫組化ELISA法檢測心肌組織中H27編輯課件編輯課件28Ⅷ因子陽性血管A:BM-MSCs治療組
B:Ad5-HGF治療組
編輯課件Ⅷ因子陽性血管A:BM-MSCs治療組B:Ad5-HG29SMA陽性血管A:BM-MSCs治療組B:Ad5-HGF治療組
編輯課件SMA陽性血管A:BM-MSCs治療組B:Ad5-HGF30編輯課件編輯課件31
CD117+細胞結果
A:對照組B：Ad5-HGF組編輯課件CD117+細胞結果A:對照組B：Ad5-HGF組32編輯課件編輯課件33連續切片CD117和C-Met抗體免疫組織化學檢測A：顯示細胞呈CD117+
B：顯示細胞也呈C-Met+
編輯課件連續切片CD117和C-Met抗體免疫組織化學檢測A：顯示34
結論經冠脈轉染Ad5-HGF能使心肌高度表達HGF蛋白，HGF對心肌梗死慢性期的側枝循環形成，心肌灌注及心功能均有改善作用
經非梗死相關動脈移植BM-MSCs或肝細胞生長因子均能促進梗死心臟心功能改善和促進血管再生；BM-MSCs移植或Ad5-HGF轉導，未顯示何者更具優勢。
編輯課件結論經冠脈轉染Ad5-HGF能使心肌高度表達35
HGF能增加動員至缺血區的CD117+骨髓干細胞，并且該類細胞表達c-Met+；HGF改善心功能及心肌灌注的作用不僅僅是血管新生，可能還涉及到對干細胞的動員召集作用。
編輯課件HGF能增加動員至缺血區的CD117+骨髓干細胞，并且該類36文章被引用VEGF165andangiopoietin-1decreasedmyocardiuminfarctsizethroughphosphatidylinositol-3kinaseandBcl-2pathways.
2005GeneTherapy編輯課件文章被引用VEGF165andangiopoietin-37Ad-HGFClinicalTrialPhaseⅠinChina
編輯課件Ad-HGFClinicalTrialPhaseⅠin3823CHDpatients,dividedinto3groupsbydifferentdoseofAd-HGF5×109pfuAd-HGF1×1010pfuAd-HGF2×1010pfuAd-HGF編輯課件23CHDpatients,dividedinto39Lowdosegroup:6casesMiddledosegroup:6casesHighdosegroup:11cases11patientsonlyreceivedHGFtherapy編輯課件Lowdosegroup:6cases編輯課件40Safety2patientshavetransientfever(38.0-38.50C)withinoneweekaftergenetherapy，andrecoveredafter2-3daysAllsubjectshaveroutineexaminationofblood,biochemicalindex,andtumormarker,allofthemhavenosignificantchange編輯課件Safety2patientshavetransien41EfficiencyEvaluatetheefficiencyinpatientsreceivedHGFtherapyonly編輯課件EfficiencyEvaluatetheeffic42CodeH-01NameLYNASexMaleAge72Birthdate1934.03.25Diagnosis1.Coronaryarterydisease；2.unstableanginaAnginagrading(Canada）ⅢAngiography：1.LADproximalsegment90%stenosis；2.LCXproximalmiddlesegment80%，middlesegment:totaloccluded；3.RCAmildstenosisLAD、LCXwithHGF
編輯課件CodeH-01NameLYNASex43After5weeksAnginograding（Canada）ⅡECT：aftertreatment,theperfusionofinferiorwallimproved,LVdiameterdiminished編輯課件After5weeks編輯課件44編輯課件編輯課件45Pre
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postPerfusionLVd編輯課件Pre
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p46M-02Name:SXBASexFemaleName74BirthDate1932.08.14Diagnosis1.CHD；2.unstableanginaAnginagrading（Canada）ⅢAngiography1.LADproximalsegmenttotaloccluded；2.LCXmiddleanddistalsegment90%stenosis；3.RCAproximalsegment70%stenosisLAD、LCXwithHGF編輯課件M-02Name:SXBASexFemale47After5weeksAnginagrading(Canada)ⅡECT：anteriorandposteriorwallperfusionimproved編輯課件After5weeks編輯課件48編輯課件編輯課件49Pre
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p50M-03NameGSBISexmaleAge52Birthdate1954.04.25Diagnosis1.CHD；2.StableanginaAnginagrading（Canada）ⅡAngiography1.LADproximalsegment50%stenosis，middlesegment30％stenosis；2.LCXstenosisinstent，distalsegmentmildirregular3.RCArestenosisinstent，proximalsegmentofstent30-50%stenosis，distal30%LAD,LCXwithHGF編輯課件M-03NameGSBI51After5weeksAnginagrading(Canada)ⅠECT：LVanterior,IVS,inferiorwallperfusionsignificantlyimproved。LVdiameterdiminished.編輯課件After5weeks編輯課件52編輯課件編輯課件53Pre
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p54M-05NameLGSHSexmaleAge76Birthdate1930.07.06Diagnosis1.CHD；2.unstableanginaAnginagrading（Canada）ⅢAngiography:LADproximalandmiddlesegment70-80%stenosis，LCX70%，middlesegment80%stenosis，OM1proximalsegment80%stenosis，RCAproximalsegment70%，distalsegment90%LAD、LCX、RCAwithHGF編輯課件M-05NameLGSHSexmale55After5weeksAnginagrading(Canada)ⅢECT：anteriorandposteriorwallperfusionsignificantimproved。編輯課件After5weeks編輯課件56編輯課件編輯課件57Pre
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p58B-01nameXJLISexMAge69DiagnosisCHD,AMI，Myocardialdysfunction，Hypertension，DMtype2Anginagrading（Canada）IIIAngiography:LM90%，LAD、LCX75-90%stenosis，RCAlongstenosis，occludedindistalsegmentLAD、LCX、RCAwithHGF編輯課件B-01nameXJLISexM59Treatmentfor5weekAnginagrading（Canada）IIIECT：Nosignificantimprovment編輯課件Treatmentfor5week編輯課件60編輯課件編輯課件61Pre
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Pr62B-03nameTZHESexMAge71DiagnosisCHD、AMI，Hypertension、DMAnginagrading（Canada）2AngiographyLADproximalsegment90%，middlesegmenttotalocclusion，LCXdistalsegment80%stenosis，RCAdistalsegment60%stenosisLADwithHGF編輯課件B-03nameTZHESexMAge63Treatmentfor5weeksAnginagrading(Canada):1ECT：Perfusionofanteriorwall,inferiorwallandlateralwallsignificantlyimproved,cardiacchamberalsodiminished。編輯課件Treatmentfor5weeks編輯課件64編輯課件編輯課件65Pre
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p66ConclusionInall11patients7patientsclinicalsyndromeimproved5patientsmyocardiumperfusionimproved(5of6)Commonmedicaltherapyforallpatients(ASA,statin,ACEI,β-blocker,etc)Ad-HGFtherapysafe,effective編輯課件ConclusionInall11patients編輯67冠心病患者冠狀動脈內注射給藥，對受試者的生命體征、血液生化等均無影響冠心病患者冠狀動脈內注射給藥受試者的中、大劑量組心肌供血改善，顯示Ad-HGF對彌漫性病變,藥物治療很難奏效,又不能承受外科手術或血管成型術的患者提供了一種新的有效的方法。編輯課件冠心病患者冠狀動脈內注射給藥，對受試者的生命體征、血液生化等68II期臨床試驗即將批準!編輯課件II期臨床試驗即將批準!編輯課件69
謝謝編輯課件謝謝編輯課件70缺血性心臟病的基因治療南京醫科大學第一附屬醫院心內科楊志健編輯課件缺血性心臟病的基因治療南京醫科大學第一附屬醫院編輯課件71現有治療藥物治療PCICABG
具有局限性！………無法血運重建………細胞喪失編輯課件現有治療藥物治療具有局限性！編輯課件72生物學治療基因治療、細胞成形術優化現有的治療為終末期患者提供新的治療途徑編輯課件生物學治療基因治療、細胞成形術編輯課件73基因治療的目的在于修復、替代體內突變、缺失的基因或加強某些被不良抑制基因的功能，或抑制某些不當過強表達基因的功能，以達到使機體異常的功能、代謝得以改善、恢復的目的。編輯課件基因治療的目的在于修復、替代體內突變、缺失的基因或加強某些被74編輯課件編輯課件75編輯課件編輯課件76編輯課件編輯課件77AngiogenesisStatusSince1999–amassivewaveofangiogenesis-stimulatingdrugsinclinicaltrials:5drugsforcoronaryarterydisease;
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5drugsforperipheralvasculardisease;
2drugsforstroke;10drugsforwoundhealing;LaserDopplerbloodflowinischemichindlimbmodel編輯課件AngiogenesisStatusSince199978血管內皮生長因子（VEGF）：形成最初的血管叢血管生成細小，有滲漏基因治療：編輯課件血管內皮生長因子（VEGF）：基因治療：編輯課件79VEGF-121進行了人下肢缺血性治療的二期臨床試驗(863)編輯課件VEGF-121進行了人下肢缺血性治療的二期臨床試驗(86380血管生成素（Ang）：穩定新生血管壁血管口徑增大編輯課件血管生成素（Ang）：編輯課件81VEGF165和Ang1基因
促血管生成和抗缺血研究編輯課件VEGF165和Ang1基因
促血管生成和抗缺血研究82研究內容構建Ad5-VEGF165和Ad5-Ang1聯合轉染促血管生成作用研究聯合轉染抗心肌缺血作用研究機制探討編輯課件研究內容構建Ad5-VEGF165和Ad5-Ang1編輯課83研究結果編輯課件研究結果編輯課件84更強的促血管生成作用編輯課件更強的促血管生成作用編輯課件85進一步減少心肌梗死面積編輯課件進一步減少心肌梗死面積編輯課件86Ang1組和聯合組與對照組均有顯著性差異，但VEGF組無顯著性差異；Ang1組和聯合組與VEGF組均有顯著性差異高調心肌Bcl-2，抗凋亡編輯課件Ang1組和聯合組與對照組均有顯著性差異，但VEGF組無顯著87單獨轉染組以及聯合組PI3K活性均比對照組顯著性增高；聯合組比VEGF單獨轉染組顯著升高，但與Ang1組無差異。進一步活化心肌PI3K信號編輯課件單獨轉染組以及聯合組PI3K活性均比對照組顯著性增高；聯合組88腺病毒介導肝細胞生長因子治療缺血性心臟病(863,973)編輯課件腺病毒介導肝細胞生長因子治療缺血性心臟病(863,973)編89
HGF在心血管方向的研究現狀抗心肌細胞凋亡，促進血管新生，抗心肌組織纖維化促梗死周遍區心肌肥厚可能改善梗死后室壁擴張，有待進一步研究體外實驗中發現HGF誘導骨髓干細胞分化成心肌細胞以及能誘導特異的前體細胞沿濃度梯度定向遷移至梗死區
通過阻NF－kappaB旁路，起到抗炎作用編輯課件HGF在心血管方向的研究現狀抗心肌細胞凋亡，促進血管新生90研究目的考察經非梗死相關動脈轉染Ad5-HGF對梗死后心衰的改善作用
研究轉染Ad5-HGF后，局部心肌中CD117+干細胞動員情況對比經非梗死相關動脈移植骨髓間充質干細胞（BM-MSCs）或轉染Ad5-HGF對心梗死后心衰治療作用編輯課件研究目的考察經非梗死相關動脈轉染Ad5-HGF對梗死后心衰研91
實驗技術方法對照組急性心梗模型建立MSCs培養移植（4周后）門控心肌顯像，冠狀動脈造影處死，免疫組織化學Ad5-HGF組BM-MSCs組
3周后再次心肌顯像，冠脈造影編輯課件實驗技術方法對照組急性心梗模型建立MSCs培養移植（4周后92開胸結扎前降支，建立模型編輯課件開胸結扎前降支，建立模型編輯課件93門控心肌核素顯像A:對照組4周和7周對比B:Ad5-HGF組4周和7周對比編輯課件門控心肌核素顯像A:對照組4周和7周對比B:Ad5-HGF94
心功能編輯課件心功能編輯課件95冠狀動脈造影：側支循環分析A:對照組4周和7周對比B:Ad5-HGF組4周和7周對比編輯課件冠狀動脈造影：側支循環分析A:對照組4周和7周對比B:Ad596
免疫組化ELISA法檢測心肌組織中HGF蛋白表達編輯課件免疫組化ELISA法檢測心肌組織中H97編輯課件編輯課件98Ⅷ因子陽性血管A:BM-MSCs治療組
B:Ad5-HGF治療組
編輯課件Ⅷ因子陽性血管A:BM-MSCs治療組B:Ad5-HG99SMA陽性血管A:BM-MSCs治療組B:Ad5-HGF治療組
編輯課件SMA陽性血管A:BM-MSCs治療組B:Ad5-HGF100編輯課件編輯課件101
CD117+細胞結果
A:對照組B：Ad5-HGF組編輯課件CD117+細胞結果A:對照組B：Ad5-HGF組102編輯課件編輯課件103連續切片CD117和C-Met抗體免疫組織化學檢測A：顯示細胞呈CD117+
B：顯示細胞也呈C-Met+
編輯課件連續切片CD117和C-Met抗體免疫組織化學檢測A：顯示104
結論經冠脈轉染Ad5-HGF能使心肌高度表達HGF蛋白，HGF對心肌梗死慢性期的側枝循環形成，心肌灌注及心功能均有改善作用
經非梗死相關動脈移植BM-MSCs或肝細胞生長因子均能促進梗死心臟心功能改善和促進血管再生；BM-MSCs移植或Ad5-HGF轉導，未顯示何者更具優勢。
編輯課件結論經冠脈轉染Ad5-HGF能使心肌高度表達105
HGF能增加動員至缺血區的CD117+骨髓干細胞，并且該類細胞表達c-Met+；HGF改善心功能及心肌灌注的作用不僅僅是血管新生，可能還涉及到對干細胞的動員召集作用。
編輯課件HGF能增加動員至缺血區的CD117+骨髓干細胞，并且該類106文章被引用VEGF165andangiopoietin-1decreasedmyocardiuminfarctsizethroughphosphatidylinositol-3kinaseandBcl-2pathways.
2005GeneTherapy編輯課件文章被引用VEGF165andangiopoietin-107Ad-HGFClinicalTrialPhaseⅠinChina
編輯課件Ad-HGFClinicalTrialPhaseⅠin10823CHDpatients,dividedinto3groupsbydifferentdoseofAd-HGF5×109pfuAd-HGF1×1010pfuAd-HGF2×1010pfuAd-HGF編輯課件23CHDpatients,dividedinto109Lowdosegroup:6casesMiddledosegroup:6casesHighdosegroup:11cases11patientsonlyreceivedHGFtherapy編輯課件Lowdosegroup:6cases編輯課件110Safety2patientshavetransientfever(38.0-38.50C)withinoneweekaftergenetherapy，andrecoveredafter2-3daysAllsubjectshaveroutineexaminationofblood,biochemicalindex,andtumormarker,allofthemhavenosignificantchange編輯課件Safety2patientshavetransien111EfficiencyEvaluatetheefficiencyinpatientsreceivedHGFtherapyonly編輯課件EfficiencyEvaluatetheeffic112CodeH-01NameLYNASexMaleAge72Birthdate1934.03.25Diagnosis1.Coronaryarterydisease；2.unstableanginaAnginagrading(Canada）ⅢAngiography：1.LADproximalsegment90%stenosis；2.LCXproximalmiddlesegment80%，middlesegment:totaloccluded；3.RCAmildstenosisLAD、LCXwithHGF
編輯課件CodeH-01NameLYNASex113After5weeksAnginograding（Canada）ⅡECT：aftertreatment,theperfusionofinferiorwallimproved,LVdiameterdiminished編輯課件After5weeks編輯課件114編輯課件編輯課件115Pre
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p116M-02Name:SXBASexFemaleName74BirthDate1932.08.14Diagnosis1.CHD；2.unstableanginaAnginagrading（Canada）ⅢAngiography1.LADproximalsegmenttotaloccluded；2.LCXmiddleanddistalsegment90%stenosis；3.RCAproximalsegment70%stenosisLAD、LCXwithHGF編輯課件M-02Name:SXBASexFemale117After5weeksAnginagrading(Canada)ⅡECT：anteriorandposteriorwallperfusionimproved編輯課件After5weeks編輯課件118編輯課件編輯課件119Pre
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p120M-03NameGSBISexmaleAge52Birthdate1954.04.25Diagnosis1.CHD；2.StableanginaAnginagrading（Canada）ⅡAngiography1.LADproximalsegment50%stenosis，middlesegment30％stenosis；2.LCXstenosisinstent，distalsegmentmildirregular3.RCArestenosisinstent，proximalsegmentofstent30-50%stenosis，distal30%LAD,LCXwithHGF編輯課件M-03NameGSBI121After5weeksAnginagrading(Canada)ⅠECT：LVanterior,IVS,inferiorwallperfusionsignificantlyimproved。LVdiameterdiminished.編輯課件After5weeks編輯課件122編輯課件編輯課件123Pre
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p124M-05NameLGSHSexmaleAge76Birthdate1930.07.06Diagnosis1.CHD；2.unstableanginaAnginagrading（Canada）ⅢAngiography:LADproximalandmiddlesegment70-80%stenosis，LCX70%，middlesegment80%stenosis，OM1proximalsegment80%stenosis，RCAproximalsegment70%，distalsegment90%LAD、LCX、RCAwithHGF編輯課件M-05NameLGSHSexmale125After5weeksAnginagrading(Canada)ⅢECT：anteriorandposteriorwallperfusionsignificantimproved。編輯課件After5weeks編輯課件126編輯課件編輯課件127Pre
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