第五章藥物的雜質(zhì)分析雜質(zhì)第一節(jié)藥物中的雜質(zhì)與雜質(zhì)限量一、藥物的雜質(zhì)與純度藥品純度雜質(zhì)?任何影響藥品純度的物質(zhì)均稱為雜質(zhì)。?藥物的純潔程度，是反映藥品質(zhì)量的一項重要指標。藥物純度的綜合評定：外觀性狀、理化常數(shù)、雜質(zhì)檢查、含量測定令藥物的含量不可用100%?雜質(zhì)含量％表示二、雜質(zhì)的來源在原料藥的合成過程中，起始物質(zhì)生產(chǎn)過程中不純或未反響完全、反響的中間體引入的雜質(zhì)與反響副產(chǎn)物在精制時未能完全除去而引入雜質(zhì)貯藏過程中

引入的雜質(zhì)?在溫度、濕度、日光、空氣等外界條件影響下，或因微生物的作用，引起藥物發(fā)生水解、氧化、分解、異構(gòu)化、晶型轉(zhuǎn)變、聚合、潮解和發(fā)霉等變化,使藥物中產(chǎn)生有關的雜質(zhì)。貯藏過程中

引入的雜質(zhì)1、原料藥生產(chǎn)中引入的雜質(zhì)例如：安乃近的生產(chǎn)4-氨基氨替比林96H5甲酸化“4-氨基氨替比林96H5甲酸化“Vxn-ch3甲基化「H8OH"(CH3)2SO4,NaOHOHC-HNch3FAA4-甲酰氨基氨替比林96H5。、N縮合-V^n-ch3NaHSO3,HCHOH3C—NCH3CH2SO3Na96H5。、N縮合-V^n-ch3NaHSO3,HCHOH3C—NCH3CH96H5。、N縮合-V^n-ch3NaHSO3,HCHOH3C—NCH3CH2SO3Na4?甲氨基氨替比林Ih3cFMAA4?甲酰甲氨基氮替比林可能引入的雜質(zhì)為中間體MAA中存在少量的AA與甲醛、亞硫酸氫鈉縮合產(chǎn)生的4-N-去甲基安乃近，以及微量MAA、雙甲氨基安替比林甲烷(MAA-CH2-MAA)、甲醛亞硫酸氫鈉和亞硫酸氫鈉等。(試劑、溶劑、還原劑等)（二）HPLC法1、外標法測定法供試品溶液

對照品溶液進樣記錄色譜圖：A、和Ar計算例如：卡托普利及其片劑中卡托普利二硫化物的檢查供試品溶液：0.5mg/ml對照品溶液：卡托普利二硫化物對照品，5ug/ml混合溶液：卡托普利和卡托普利二硫化物對照品O.lmg/ml和15|ig/ml適用性試驗：用混合溶液R（卡托普利和卡托普利二硫化物）大于4.0以峰面積計算其含量，原料藥中的二硫化物不得超過1.0%,片劑中的不得超過卡托普利標示量的3.0%2、加校正因子的主成分自身對照測定法適用于雜質(zhì)的控制。用雜質(zhì)對照品測定f雜質(zhì)，f雜質(zhì)和相對保存時間直接載入各品種質(zhì)量標準中，在常規(guī)檢驗時用相對保存時間定位，以f雜質(zhì)校正該雜質(zhì)的實測峰面積。4?/Pr分子：雜質(zhì)對照品的峰面積，分母：藥物對照品的峰面積一消除雜質(zhì)與主成分的響應可能不同所引起的測定誤差供試品溶液的制備對照溶液的制備調(diào)節(jié)檢測靈敏度：對照溶液主成分色譜峰的峰高約為滿量程的10%?25%進樣：供試品溶液、對照溶液分析時間：主成分色譜峰、保存時間的2倍判斷：供試品溶液中各雜質(zhì)的峰面積分別乘以相應的校正因子后，與對照溶液中主成分的峰面積比擬。

例如：紅霉素A中紅霉素B、C組分及有關物質(zhì)的檢查供試品溶液：4mg/ml對照溶液：0.2mg/ml調(diào)節(jié)檢測靈敏度：對照溶液主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%進樣：供試品溶液、對照溶液分析時間：主成分色譜峰保存時間的4倍TOC\o"1-5"\h\z校正峰面積：f紅霉素B0.7紅霉素烯醇酸0.09雜質(zhì)10.15結(jié)果判斷：A紅毒素B校正＜A紅毒素A對照液A紅毒素c校正vA紅毒素a對照液A紅毒素烯醇酸校正＜0?6A紅毒素4對照液A雜質(zhì)1校正＜86A紅毒素裊對照液其他單個雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積3、不加校正因子的主成分自身對照法適用于沒有雜質(zhì)對照品的情況對照溶液：供試品的稀釋液調(diào)節(jié)檢測靈敏度進樣：供試品溶液、對照溶液分析時間：供試品溶液（主成分色譜峰保存時間的2倍）供試品溶液中各雜質(zhì)的峰面積與對照溶液主成分的峰面積比擬N自身對照液供試品溶液供試品溶液供試品溶液供試品溶液A雜總=A]+A?+A3例如：甲氨蝶吟中有關物質(zhì)的檢查供試品溶液：1mg/ml、稀釋對照溶液：5pg/ml進樣：供試品溶液對照溶液分析時間：供試品溶液主成分色譜峰保存時間的4倍判斷：單個雜質(zhì)的峰面積不得大于對照溶液的主峰面積(0.5%),各雜質(zhì)的峰面積的和不得大于對照溶液的主峰面積的4倍(2.0%)4、面積歸一化法適用于粗略測量供試品中雜質(zhì)的含量。計算各雜質(zhì)峰面積及其總和占總峰面積(含藥物的峰面積，而不含溶劑峰面積)的百分率。該法一般不宜用于微量雜質(zhì)的檢查。VA￡%=———x100%

X4+4注意以下問題①檢測器的選擇：應根據(jù)對雜質(zhì)結(jié)構(gòu)的分析進行有目的的選擇。對于在紫外光區(qū)吸收較弱或無吸收的雜質(zhì)，可采用其他通用型檢測器(如蒸發(fā)光散射檢測器、質(zhì)譜檢測器等)。二極管陣列檢測器(diodearraydetector,DAD)是雜質(zhì)研究，特別是復方制劑中雜質(zhì)研究的有效手段。通過該檢測器可獲得各雜質(zhì)的光譜信息，有助于判斷雜質(zhì)檢測波長選擇的合理性，并可進行峰純度檢查。②檢測波長的選擇：應選用對各雜質(zhì)均有較強吸收的波長作為檢測波長，當一個測定波長無法兼顧所有雜質(zhì)時，可選用不同波長分別測定。例如在氯喳那多(chlorquinaldol)及有關物質(zhì)的HPLC分析中，用DAD檢測器選擇測定波長，氯喳那多在251nm和360nm處有最大吸收，有關物質(zhì)的最大吸收分別在251,253,254nm處，為了兼顧氯喳那多的含量測定，選擇測定波長在251nm處。(三)氣相色譜法主要用于藥物中揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查。方法：方法同HPLC標準溶液加入法>標準溶液加入法雜質(zhì)對照品液

+供試液雜質(zhì)對照品液

+供試液雜質(zhì)對照品液

+供試液外標法或

內(nèi)標法測定

總量雜質(zhì)對照品液

+供試液外標法或

內(nèi)標法測定

總量總量一加入的雜質(zhì)對照品的量=雜質(zhì)的量采用以下公式計算：4s=4s=Px+、Px4Px=\pxPx"（念/4）-1L=Cx/C樣義100%px供試品中組分X的濃度；Ax供試品中組分X的色譜峰面積；Apx加入的濃度的待測組分對照品的濃度；Ais加入對照品后組分X的色譜峰面積例如：異氟烷中的有關物質(zhì)的檢查供試品溶液：0.1%（v/v）系統(tǒng)適用性試驗：理論板數(shù)按異氟烷峰計算不低于15000異氟烷峰與相鄰雜質(zhì)峰的別離度應符合要求。進樣：供試品溶液判斷：各雜質(zhì)峰面積的和不得大于總峰面積的0.5%。（四）毛細管電泳法檢查方法與高效液相色譜法相同。例如：鹽酸頭抱吐月虧中N-甲基毗咯烷的檢查電泳條件：彈性石英毛細管（內(nèi)徑75口m,有效長度56cm）,柱溫25℃,操作緩沖溶液為pH4.7咪嗖-醋酸緩沖溶液，檢測波長214nm,操作電壓30kV,壓力進樣。系統(tǒng)適用性試驗：遷移順序：乙胺和N-甲基咄咯烷，N-甲基毗咯烷峰與乙胺峰的別離度應大于2。進樣數(shù)次，RSD不得過5.0%。供試品溶液：20mg/ml,內(nèi)標物0.1mg/ml對照品溶液：N-甲基叱咯烷對照品，0.1mg/ml進樣：供試品溶液對照品溶液按內(nèi)標法以峰面積計算，不得過0.3%四、熱分析法（一）熱重分析法（thermogravimetricanalysis,TGA）在程序升溫下，測量物質(zhì)的質(zhì)量與溫度的關系，研究物質(zhì)在加熱同時失重的情況下，所發(fā)生的質(zhì)的變化。應用：藥物穩(wěn)定性的研究；貴重和易氧化藥物的干燥失重測定；藥物結(jié)晶水和吸附水的區(qū)別以及結(jié)晶水含量的測定。方法：將樣品置熱天平中，按一定速度升溫，記錄樣品重量隨溫度的變化，即熱重曲線。吸附水失去為漸進過程；結(jié)晶水失去在特定溫度發(fā)生突躍，可以區(qū)分。4010020030040-80℃：CuSO4-5H2O->CuSO4-3H2O+2H2O80~120℃：CuSO4-3H2O^CuSO4-H2O+2H2O200~250℃：CuSO4?H2。-C11SO4+H2O

（二）差示熱分析（differentialthermalanalysis,DTA）40100200300是在程序升溫下，測量被測物質(zhì)和參比物之間的溫差與溫度關系的一種技術(shù)。參比物是一種惰性物質(zhì)，在加熱過程中不發(fā)生相變和化學變化。因此溫差（AT）只與被測物質(zhì)的變化有關。△T=0被測物未發(fā)生吸熱或放熱反響；△T=-為吸熱峰（負峰）；△T=+為放熱峰（正峰）。典型的差熱曲線DTA在藥物分析中的應用測定藥物的熔點藥物的定性分析：尖峰為物理變化、寬峰為化學變化、估測藥物的純度例如：草酸鈣在加熱過程中的變化134?226℃：CaC2O4-H2O^CaC2O4+H20398?478℃：CaC2O4^CaCO3+COT635?838℃：CaCO3->CaO+CO2T失h2o失h2oDTA曲線分解出co?（三）差示掃描熱分析（differentialscanningcalorimetry,DSC）在程序升溫下，維持樣品和參比物的溫度相同，測量輸給待測物質(zhì)和參比物的能量差與溫度（或時間）關系。DSC與DTA的區(qū)別：記錄方式不同，DSC記錄系統(tǒng)供給的能量；吸熱供給能量，放熱減少供給的能量。DSC-TG常聯(lián)合用。五、藥物中雜質(zhì)檢查例如以藥物中的無機雜質(zhì)和殘留溶劑的檢查為例進行討論。（一）氯化物的檢查法1、原理Cl+Ag+稀硝酸?AgCl（白色渾濁）2、方法：比擬濁度標準氯化鈉溶液：以50ml中含50?80ug的C1為宜酸度以50ml供試溶液中含稀硝酸10ml為宜S：供試品溶液R：標準溶液3、干擾的排除（1）供試品有色采用內(nèi)消色法，按ChP附錄規(guī)定的方法處理。AgNO3放置lOmiii反復過濾澄清溶液標準NaClAgNO3放置lOmiii反復過濾澄清溶液標準NaCl溶液對，、、、溶液暗處放置5min后比濁1、原理：SO42+Ba2+HC1-BaSO4（白色渾濁）2、方法酸度：稀鹽酸2ml/50mlfSO42-lO.lmg?0.5mg/50mL即相當于標準硫酸鉀溶液1?5ml比擬濁度3、干擾的排除有色供試品采用內(nèi)消色法排除干擾。（三）鐵鹽檢查法1、原理HC1Fe3++6SCN———[Fe（SCN）6]3-（紅色）2、方法標準鐵溶液：以硫酸鐵鏤配制。加入硫酸，防止跳鹽水解。50ml溶液中含F(xiàn)e3+為5?90陷時，溶液的吸收度與濃度呈良好線性關系。鹽酸酸性：防止Fe3+的水解3、干擾的排除（1）當有Fe2+存在時，加氧化劑過硫酸鏤將Fe2+氧化成Fe3+HNO,+SCN+H+fNOSCN+HQ（紅色）（2）當供試溶液管與標準溶液管色調(diào)不一致時，或所呈硫氟酸鐵顏色較淺不便比擬時，可分別移入分液漏斗，各加正丁醇或異戊醇提取，分別取提取液比色。四、重金屬檢查法重金屬：在規(guī)定實驗條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì)，如銀、鉛、汞、銅、鎘、錫、睇、鈿等。在藥品生產(chǎn)過程中遇到鉛的機會較多，鉛在體內(nèi)又易積蓄中毒，故檢查時以鉛為代表。ChP2010收載三種檢查方法第一法硫代乙酰胺法第二法熾灼后的硫代乙酰胺法第三法硫化鈉法

第一法：硫代乙酰胺法適用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物，是最常用的方法。1、原理ch3csnh2+h2o—ch3conh2+h2spH3.5IH2S+Pb2+?PbS1+2H+2、方法[Pb2"]=10pg?20|jg/25ml,相當于標準鉛溶液1?2ml。酸度：pH3.0?3.5當丙管中顯出的顏色不淺于甲管時，乙管中顯出的顏色與甲管比擬，不得更深。如丙管中顯出的顏色淺于甲管，應取樣按第二法重新檢查。3、干擾的排除（1）供試品有色：可采用外消色法消除干擾。標準溶液稀焦糖溶液標準溶液

調(diào)色后的樣品溶液標準溶液稀焦糖溶液標準溶液

調(diào)色后的樣品溶液（2）供試品中有微量Fe3+干擾F63+H2sS混濁，比照色有影響弱酸性排除Fe3+VcB

排除Fe3+VcB

鹽酸羥胺適用于含芳環(huán)、雜環(huán)以及難溶于水、稀酸及乙醇的有機藥物。1、原理：重金屬可能會與芳環(huán)、雜環(huán)形成較牢固的價鍵，需先將供試品熾灼(500?600℃)破壞，殘渣加硝酸進一步破壞，蒸干。加鹽酸轉(zhuǎn)化為易溶于水的氯化物，再按第一法進行檢查。2、考前須知熾灼溫度應在500?600℃。溫度過高，重金屬損失。加硝酸加熱處理后，必須蒸干，除盡氧化氮，否那么亞硝酸可氧化硫化氫析出硫，影響比色。消除鹽酸或其他試劑中可能夾雜重金屬的影響。對于含鈉鹽或氟的有機藥物，應用伯土甘煙或硬質(zhì)玻璃蒸發(fā)皿。第三法：硫化鈉法適用于溶于堿性水溶液而難溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的藥物。原理：在堿性條件下用硫化鈉作顯色劑。Pb2++S2->PbS;硫化鈉試液應臨用新制。五、碑鹽檢查法碎鹽是劇毒物質(zhì)，多由藥物生產(chǎn)過程中所使用的無機溶劑引入。(一)古蔡(Gutzeit)氏法1、原理AV++3ZI1+3H+——?3Zn2++AsH3\AsO33+3Zn+9H+，3Zn2++3H.O+AsHjAsO43+4Zn+llH+4Zn2++4H2O+AsH3AsH3+3HgBr2——?3HBr+As(HgBr)3(黃色)2As(HgBr)3+AsH3,3A§H(HgBr)2(棕色)As(HgBr)3+AsH3?3HBr+As2Hg3(黑色)2、裝置與試劑作用(1)驗碑儀

①KLSnCh試液AsO43+2I+2H+->AsO33+I2+H2OAsO43+Sn2++2H+——>AsO33+Sn4++H2OL+Sn2+——>21+Sn4+4I+Zn2+一［Znl4］2-匚）有利于H3As的形成氯化亞錫在鋅粒外表形成Zn-Sn齊，起去極化的作用，有利于H2均勻連續(xù)發(fā)生。②Pb(Ac)2棉鋅粒及供試品中可能含有少量硫化物，在酸性液中能產(chǎn)生硫化氫氣體，與漠化汞作用生成硫化汞的色斑，干擾試驗結(jié)果，故用醋酸鉛棉花吸收硫化氫。S2+2H+——>H,SH2S+HgBr2一>2HBr+HgSH2S+Pb(Ac)2—>2HAc+PbS3、干擾的排除(1)供試品為S入SO32\S2O32S2、SO32.S2O32HH+h2sHgBr?試紙］H+H+h2sHgBr?試紙］HNO3氧化SO42除去干擾HgS,Hg珅鹽的檢查(黑色)干擾珅斑檢查(2)供試品為鐵鹽(Fe3+)珅鹽的檢查干擾:消耗KI、SnCb，氧化ASH3排除：可以先加足量的KI或先加入酸性氯化亞錫試液，將Fe3+還原為Fe?+。例：枸椽酸鐵錢中神鹽檢查(3)含睇藥物例如：葡萄糖酸睇鈉干擾：SbH3+HgBr2>SbH2(HgBr)+HBr(灰色)干擾珅斑檢查排除：改用白田道夫(Bcttcrdorff)法。2As3++3SnCI2+6HCI-2A§1+3SnCI4+6H+.(棕褐色的膠態(tài)碑)與一定量標準碑溶液用同法處理后的顏色比擬

2、制劑生產(chǎn)中引入的雜質(zhì)例如：腎上腺素注射液抗氧劑—焦亞硫酸鈉穩(wěn)定齊I」——EDTA-2Na腎上腺素n亞硫酸根腎上腺素磺酸3、藥物貯藏中引入的雜質(zhì)易發(fā)生氧化反響的結(jié)構(gòu)：酸、醛、酚羥基、筑基、亞硝基、雙鍵等氧化反響：利血平一一氧化產(chǎn)物無降壓作用水解：鹽酸普魯卡因水解產(chǎn)物對氨基苯甲酸及二乙氨基乙醇令嚴格控制藥品的貯藏條件，是保證臨床用藥平安、有效的一個重要方面>在藥物的純度研究中，必須重視異構(gòu)體和多晶型對藥物有效性和平安性的影響，應控制藥物中低效、無效以及有毒的異構(gòu)體和晶型。三、雜質(zhì)的種類與分類按來源分按來源分按來源分一般雜質(zhì)在自然界中分布較廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中容易引入的雜質(zhì)。如酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、重金屬、珅鹽等殊雜質(zhì)在個別藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中引入的雜質(zhì)。如阿司匹林中的游離水楊酸、甲硝哇中的按來源分一般雜質(zhì)在自然界中分布較廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中容易引入的雜質(zhì)。如酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、重金屬、珅鹽等殊雜質(zhì)在個別藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中引入的雜質(zhì)。如阿司匹林中的游離水楊酸、甲硝哇中的2-甲基-5-硝基咪哇等。信號雜質(zhì)水平，稱其為“信號”雜質(zhì)按毒性分如氯化物、號雜質(zhì)。于信毒性雜質(zhì)對人體有毒害的雜質(zhì)。如重金屬、神鹽、氟化物等應嚴格加以控制，以保證用藥安全。信號雜質(zhì)水平，稱其為“信號”雜質(zhì)按毒性分如氯化物、號雜質(zhì)。于信毒性雜質(zhì)對人體有毒害的雜質(zhì)。如重金屬、神鹽、氟化物等應嚴格加以控制，以保證用藥安全。工藝雜質(zhì)葡萄糖注射液中的5賽基糠醛本身一般無害，但其含量的

多少可以反映出藥物的純度

（4）環(huán)狀藥物環(huán)狀藥物須進行有機破壞，方法有：①堿破壞法：樣品加Ca（0H）2小火灼燒，再于500℃?600C熾灼至完全灰化。例：酚磺醐、吠塞米檢查中碑鹽檢查②堿融破壞法：適用于環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機酸堿金屬鹽用石灰法不能破壞完全的情況。以無水Na2c。3無水碳酸鈉進行堿融破壞例：苯甲酸鈉中碎鹽檢查（二）二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag?DDC法）C2H5、：N—CAgC2H5/、/1、原理As(DDC)3+6Ag+3(紅色)-HDDC利用碑化氫與Ag-DDC毗咤溶液作用，使Ag-DDC中的銀還原為紅色膠態(tài)銀，以Ag-DDCAs(DDC)3+6Ag+3(紅色)-HDDCAsH3+6Ag(DDC)+32、裝置與試劑作用試劑的作用：同古蔡法有機堿：毗咤（USP法）、三乙胺-氯仿溶液（ChP法）、三乙醇胺、麻黃堿等本反響可逆，加入有機堿使與HDDC結(jié)合，有利于反響向右定量進行完全。六、酸堿度檢查法1、酸堿滴定法規(guī)定消耗滴定液的體積例：己酸羥孕酮中正己酎、對甲苯磺酸的檢查(NaOH0.02mol/L)本品0.20g本品0.20g本品0.20g中性乙醇澳麝香草酚高Vml顯微藍色本品0.20g中性乙醇澳麝香草酚高Vml顯微藍色2、指示劑法將一定量指示液的變色pH值范圍作為供試液中酸堿性雜質(zhì)的限度指標。3、pH值測定法用電位法測定供試品溶液的pH值，衡量其酸堿性雜質(zhì)是否符合限量規(guī)定。

七、殘留溶劑測定法主要檢查在合成原料藥，輔料或制劑生產(chǎn)的過程中使用的，但在工藝中未能完全除去有機溶劑。第一類：應該防止使用第二類：應該限制使用第三類：GMP或其他質(zhì)控要求限制使用第四類：尚無足夠毒理學資料(-)測定方法ChP規(guī)定采用GC法第一法：毛細管柱頂空進樣等溫法適用于所需要檢查的有機溶劑數(shù)量不多，并且極性差異較小的情況。第二法：毛細管柱頂空進樣程序升溫法適用于所需要檢查的有機溶劑數(shù)量較多并且極性差異較大時的情況。第三法：溶液直接進樣法采用填充柱，亦可采用適宜極性的毛細管柱。色譜柱類型毛細管柱固定液/固定相非極性100%的二甲基聚硅氧烷色譜柱類型毛細管柱極性聚乙二醇(PEG-20M)(35%)二苯基「(6荻)甲基聚氧硅烷,(50%)二苯基-(50%)二甲基聚氧硅烷，(35%)二苯基-(65%)二甲基亞芳基聚氧硅中極性烷，(14%)氟丙基苯基-(86%)二甲基聚氧硅烷(6%)氟丙基苯基-(94%)二甲基聚氧硅烷(5%)苯基二(95%)甲基聚氧硅烷，弱極性(5%)二苯基-(95%)二甲基亞芳基硅氧烷共聚物乙二烯苯.乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他適宜的填料(二)系統(tǒng)適用性試驗(1)用待測物的色譜峰計算，毛細管色譜柱的N>5000,填充柱的N〉1000。(2)色譜圖中，待測物色譜峰與其相鄰色譜峰的別離度(R)應大于1.5。(3)以內(nèi)標法測定時，對照品溶液連續(xù)進樣5次，所得待測物與內(nèi)標物峰面積之比的RSD<5%；以外標法測定，所得待測物峰面積的RSD<10%。頂空條件的選擇時間：一般平衡30min?45min溫度：根據(jù)供試品中殘留溶劑的沸點選擇頂空平衡溫度，并低于溶解供試品所用溶劑的沸點10℃以下。對沸點較高的殘留溶劑，通常選擇較高的頂空平衡溫度；但應兼顧試品的熱分解特性。(三)計算法限度檢查：內(nèi)標法：被測溶劑峰面積與內(nèi)標峰面積之比不得大于對照品溶液的相應比值外標法：被測溶劑峰面積不得大于對照品溶液的相應峰面積

第四節(jié)降解物和雜質(zhì)的別離與鑒定雜質(zhì)和降解產(chǎn)物的報告、鑒定和質(zhì)控限度最大日劑量報告限度鑒定限度質(zhì)控限度原料藥Tii0.05%0.10%^1.0mg0.15%^1.0mg>2g0.03%0.05%0.05%0.1%LO%或5pgTDI0.1%LO%或5pgTDI0.5。6或20KgTDI0.2%或2mgTDI0.10%1.0%或50KgTDI0.5%或200jigTDI0.2%戰(zhàn)3mgTDI0.15%>lg0.05%<lmglmg-lOmg>10mg-2g>2g<lOmglOmg-lOOmg>100mg>2g報告限度(ReportingThreshold)：超出此限度的雜質(zhì)均應在檢測報告中報告，并應報告具體的檢測數(shù)據(jù)。鑒定限度(IdentificationThreshold)：超出此限度的雜質(zhì)均應進行定性分析，確定其化學結(jié)構(gòu)。質(zhì)控限度(QualificationThreshold)：質(zhì)量標準中一般允許的雜質(zhì)限度，如制訂的限度高于此限度，那么應有充分的依據(jù)。雜質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定方法1、雜質(zhì)對照品法推斷最有可能產(chǎn)LCMS推斷最有可能產(chǎn)LCMS法對照品推斷最有可能產(chǎn)LCMS法對照品生的雜質(zhì)推斷最有可能產(chǎn)LCMS法對照品生的雜質(zhì)初步測定2、別離制備雜質(zhì)樣品法當對雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不易進行初步估計時，那么需采用適當?shù)膭e離方法如柱色譜法、半制備或制備高效液相色譜法等，將雜質(zhì)從藥物中別離出來，經(jīng)純化后，采用元素分析、紫外光譜法、紅外光譜法、NMR法和MS法確證雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)。3、雜質(zhì)對照品法與別離制備雜質(zhì)樣品相結(jié)合的方法當樣品中有多個雜質(zhì)需要進行結(jié)構(gòu)鑒定時，如果采用一種方法不能滿足分析要求，可將第一法與第二法結(jié)合使用完成多個雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)鑒定。第五節(jié)雜質(zhì)分析方法認證用于限度檢查的分析方法的驗證側(cè)重于專屬性、檢測限和耐用性。用于雜質(zhì)定量測定方法的驗證那么強調(diào)專屬性、定量限度、線性、范圍、準確性、精密度、耐用性。一、專屬性專屬性試驗主要考查各種可能存在的雜質(zhì)以及分解產(chǎn)物與主藥的別離能力。（一）在可以獲得雜質(zhì)的情況下，根據(jù)制備工藝，向原料藥或制劑中加入一定量的雜質(zhì)，作為測試品進行系統(tǒng)適用性研究，考察產(chǎn)品中各雜質(zhì)峰及主成分峰相互間的別離度是否符合要求。（二）在不能獲得雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的情況下，可通過與另一種已證明合理但別離或檢測原理不同、或具較強分辨能力的方法進行結(jié)果比擬來確定。二、線性與范圍在雜質(zhì)的定量測定方法中，范圍應根據(jù)初步實測結(jié)果，擬訂出規(guī)定限度的±20%。三、準確性雜質(zhì)的定量方法的正確性可以按以下的方法測定?向原料藥或制劑中加入量雜質(zhì)進行測定。?如果不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測定結(jié)果與另一成熟的方法進行比擬，如藥典標準或絲過驗證的方竺。?研究幾種不同色譜條件甚至不同測定原理的方法進行比擬選用。?如不能測得雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的相對響應因子,可在線測定雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的相關數(shù)據(jù)。四、靈敏度檢測限和定量限的驗證方法：直觀法、信噪比法、計算方法均應用一定數(shù)量的樣品（一般n=5?6）,其濃度為近于或等于檢測限或定量限，進行分析。對有異常功效的、有毒的或有意外藥理作用的雜質(zhì)，其檢測限度和定量限度應與該雜質(zhì)必須被限制的水平相當。掌握藥物雜質(zhì)限量的定義與計算方法，掌握藥物雜質(zhì)檢查的依據(jù)與方法。熟悉藥物雜質(zhì)的來源與分類，熟悉氯化物、重金屬、神鹽和溶劑殘留的檢查原理、方法和注意事項，熟悉雜質(zhì)分析認證的工程。了解雜質(zhì)鑒定的方法。

按化學類別和特性分類無機雜質(zhì)有機雜質(zhì)來源于生產(chǎn)過程，一般是的和確定的，直接影響藥物的穩(wěn)定性，反映生產(chǎn)工藝情況合成中未反響完全的原料、中間體、副產(chǎn)物、降解產(chǎn)物等殘留溶劑一生產(chǎn)中使用的有機溶劑按化學類別和特性分類無機雜質(zhì)有機雜質(zhì)來源于生產(chǎn)過程，一般是的和確定的，直接影響藥物的穩(wěn)定性，反映生產(chǎn)工藝情況合成中未反響完全的原料、中間體、副產(chǎn)物、降解產(chǎn)物等殘留溶劑一生產(chǎn)中使用的有機溶劑1、定義：藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量2、表示：百分之幾或百萬分之幾（ppm）3、計算：雜質(zhì)限量=雜質(zhì)的最大允許量

供試品的量x100%=標準液濃度雜質(zhì)限量=雜質(zhì)的最大允許量

供試品的量x100%=標準液濃度x體積

供試品的量X100%rxK

￡（%）=-——x100%

S>藥物中的雜質(zhì)在不影響療效和不發(fā)生毒性的原那么下允許有一定限量。通常不測定其準確含量，只檢查雜質(zhì)的量是否超過限量，所以稱為雜質(zhì)的限量檢查。>檢查方法：取一定量雜質(zhì)對照品與一定量供試品在相同條件下處理后，比擬結(jié)果，以確定雜質(zhì)含量是否超過規(guī)定量。藥物中雜質(zhì)的限量除考慮雜質(zhì)本身的性質(zhì)外，還要結(jié)合實際的生產(chǎn)水平，參考各國藥典的標準來制訂。五、檢查方法檢套方法對照法限度檢查法靈敏度法定量測定對照法限度檢查法靈敏度法定量測定1、對照法考前須知：平行操作原那么。C?VL=--x100%S樣品管標準管

2、靈敏度法在供試品溶液中加入一定量的試劑，在一定反響條件下不得有正反響出現(xiàn)，從而判斷供試品中所含雜質(zhì)是否符合限量規(guī)定令乳酸中草酸鹽檢、葡萄糖中亞硫酸鹽與可溶性淀粉檢查3、比擬法取一定量供試品依法檢查，測定特定待檢雜質(zhì)的參數(shù)與規(guī)定的限量比擬，不得更大。令腎上腺素中酮體的檢查：取本品，加鹽酸溶液(9-2000)制成每1ml中含2.0mg的溶液，照分光光度法在310nm的波長處測定，吸收度不得過0.05o例如1茶苯海明中氯化物的檢查25一：5=0.30gx——,C-X^Lig/ml,V=\.5M,求：L=?200.TCxV10x10~6x1.51nnn/nn/in/解：L=x100%=x100%=0.04%S…八250.30x—200例如2谷氨酸鈉中重金屬的檢查：S=1.0g,C=10pg/ml,L=10xl0-6,求：V=?.〃LxS10xIO-6x1.0-解：V===1.0(4)C10XW6例如3腎上腺素中酮體的檢查：￡：；=435,A=0.05,求：L=?解：c酮體1.15x10-6(g/解：c酮體1.15x10-6(g//，435100,樣品=,樣品=,樣品=0.2Too=2.0x/ml,樣品=0.2Too=2.0x/ml￡(%)=x100%=x100%=0.06%。品2.0x10-3令計算中應注意①單位一致②稀釋體積③ppm的表示方法

第二節(jié)藥物中雜質(zhì)的檢查方法藥物中雜質(zhì)檢查的原理質(zhì)差異化學性質(zhì)差異外觀分配對光性狀或吸附的吸收化原質(zhì)

氧還性化學

反響化學性質(zhì)差異外觀分配對光性狀或吸附的吸收化原質(zhì)

氧還性化學

反響常用方法I化學方法色譜方法光譜方法物理方法一、化學法與試劑反響產(chǎn)生顏色：鐵鹽檢查與試劑反響產(chǎn)生沉淀：硫酸鹽檢查與試劑反響產(chǎn)生氣體：碳酸鹽檢查雜質(zhì)限量檢測方法藥典應用例如產(chǎn)生顏色目視比色，分光光度法顏色鐵鹽、氟、硒產(chǎn)生沉淀比濁法氯化物、硫酸鹽、重金屬、鋼鹽產(chǎn)生氣體氣體檢杳法珅'硫、碳酸鹽、氨、氨化物例：葦氨睡嗪中芳香第一胺的檢查分子結(jié)構(gòu)中無芳香第一胺基，不能發(fā)生重氮化-偶合反響，而芳香第一胺雜質(zhì)可以發(fā)生反響而產(chǎn)生顏色，采用分光光度法檢查。h2nNIH,O?h2nNIH,O?NH可用于配置檢驗亞硝酸的顯色劑（還含有對氨基苯磺酸），作用時亞硝酸先把對氨基苯磺酸重氮化，在與N-1-蔡基乙二胺鹽酸鹽偶聯(lián)成紫紅色的偶氮。

二、光譜方法依據(jù)藥物和雜質(zhì)對光選擇吸收性質(zhì)差異進行檢查。(-)紫外吸收光譜法在某一波長處雜質(zhì)有最大吸收，藥物無吸收。例如：地意酚中二羥基慈醍的檢查地慈酚二羥基意醍地慈酚二羥基意醍地慈酚二羥基意醍均有紫外吸收地慈酚二羥基意醍均有紫外吸收在432nm處，地意酚無吸收，二羥基慈醍有最大吸收規(guī)定0.01%地慈酚氯仿溶液A432nm<0.12例如：兩性霉素B中兩性霉素A的檢查在305nm處兩性霉素A的吸收最強，而兩性霉素B的吸收很小，ChP通過測定兩性霉素B供試品溶液在305n