目錄一、腸桿菌科二、弧菌科三、非發酵革蘭陰性桿菌四、其他革蘭陰性苛養菌目錄一、腸桿菌科1腸桿菌科革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗標準課件2第一節概述革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗標準課件3腸桿菌科（Enterobacteriaceae）細菌是一大群形態、生物學性狀相似，需氧或兼性厭氧的革蘭陰性桿菌或球桿菌在自然界中廣泛分布，可棲生在人和動物的腸道內，多數為條件致病菌，少數為致病菌致病菌：沙門菌、志賀菌、耶爾森菌等條件致病菌：埃希菌、克雷伯菌、枸櫞酸桿菌、腸桿屬菌、沙雷菌、變形桿菌等與醫學的關系分類腸桿菌科（Enterobacteriaceae）細菌是一大群41）形態與染色革蘭陰性桿狀或球桿狀細菌，無芽孢，多數有鞭毛，能運動，少數細菌有莢膜或包膜，有致病性的菌株多數有菌毛共同特性1）形態與染色革蘭陰性桿狀或球桿狀細菌，無芽孢，多52）培養特性需氧或兼性厭氧，營養要求不高，在普通培養基如血瓊脂和麥康凱培養基上容易生長，大部分菌屬在22~35℃生長良好大腸埃希菌菌落特征（血平板）大腸埃希菌菌落特征（MAC）2）培養特性需氧或兼性厭氧，營養要求不高，在普通培養6SS培養基（沙門志賀培養基）乳糖、中性紅指示劑、膽鹽、煌綠等抑制劑強選擇培養基大腸埃希菌產酸桃紅色乳糖發酵菌落傷寒沙門菌無色乳糖不發酵菌落膽鹽、煌綠：抑制大腸埃希菌及G+菌，提高腸道致病菌檢出率乳糖發酵中性紅呈紅色乳糖不發酵SS培養基（沙門志賀培養基）強選擇培養基大腸埃希菌7EMB（伊紅美藍培養基），乳糖、伊紅、美蘭弱選擇培養基大腸埃希菌（非致病菌）乳糖發酵產酸伊紅結合美藍形成紫黑色金屬光澤化合物有色的乳糖發酵菌落傷寒沙門菌等（致病菌）乳糖不發酵伊紅美藍不能結合無色的乳糖不發酵菌落EMB（伊紅美藍培養基），乳糖、伊紅、美蘭弱選擇培養基大腸埃83)生化反應

非常活潑。發酵葡萄糖（產酸或產酸產氣）、觸酶陽性、氧化酶陰性、硝酸鹽還原陽性4）抗原結構：O抗原菌體抗原H抗原菌毛抗原表面抗原3)生化反應非常活潑。發酵葡萄糖（產酸或產酸產氣）、95）變異性多樣。如S-R變異、H-O變異，生化反應變異、耐藥性變異6）抵抗力不強。加熱60℃30min既被殺死，對干燥、化學消毒劑敏感、耐低溫、耐膽鹽、煌綠（可抑制非致病菌）5）變異性多樣。如S-R變異、H-O變異，生化反應變異10臨床意義（一）腸道外感染除志賀菌外，多數腸桿菌科細菌均可引起腸道外感染，且往往為獲得性的感染鼠疫耶爾森菌可引起自然疫源烈性傳染病鼠疫，傷寒沙門菌可經糞口傳播引起血流感染（二）腸道內感染是人和動物腸道感染的重要病原菌。比較明確的腸道病原菌有埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬和耶爾森菌屬等臨床意義（一）腸道外感染11微生物檢驗KIA（AA＋－）MIU（＋＋－）IMVC:＋＋――微生物檢驗KIA（AA＋－）MIU（＋＋－）IMVC:＋＋―12第二節埃希菌屬第二節埃希菌屬13埃希菌屬主要有5個種，1）大腸埃希菌臨床最常見2）蟑螂埃希菌3）弗格森埃希菌4）赫爾曼埃希菌5）傷口埃希菌革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗標準課件14一、生物學特性形態與染色為革蘭陰性短桿狀，多數有周鞭毛和菌毛培養特性兼性厭氧，營養要求不高，在血瓊脂平板上某些菌株可產生β-溶血，在SS瓊脂平板上少數菌株可發酵乳糖，形成粉紅色菌落。在麥康凱平板上菌落呈粉紅色。在伊紅美藍瓊脂平板上呈有金屬光澤的紫黑色菌落。在液體培養基中，呈渾濁生長一、生物學特性形態與染色為革蘭陰性短桿狀，多數有周鞭毛和15一、生物學特性生化反應特征：發酵多種糖，產酸、產氣KIA產酸/產酸、產氣IMViC中4個試驗的結果為＋＋――MIU中3個試驗結果為＋＋―氧化型發酵型產堿型陽性:紅色陰性:淡黃色硝酸鹽還原實驗OF實驗一、生物學特性生化反應特征：氧化型發酵型產堿型陽性:紅色陰性16※營養要求高，以布氏瓊脂為基礎培養基，需加用適量全血或胎牛血清作為補充物才能生長。采集標本立即送檢，如不能及時送檢，應將標本置于3.截止7點，該院已累計收治了7例疑似霍亂病人，病人的臨床表現劇烈腹瀉，先瀉后吐，無腹痛、無發熱，發病時間分別為9月18、19日。※在腸道選擇性培養基上因不發酵乳糖，菌落透明或半透明，有些能產生硫化氫的菌株，在SS瓊脂平板上可形成中心黑色的菌落比較明確的腸道病原菌有埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬和耶爾森菌屬等2、培養特性需氧或兼性厭氧菌，營養要求不高，在普通培養基上經培養，形成微白色半透明菌落；1：結合臨床表現，你初步懷疑什么菌感染？主要引起泌尿系感染，發病率僅次于大腸埃希菌，醫源性感染較多見。5%，在無鹽培養基上不生長。條件致病菌：埃希菌、克雷伯菌、枸櫞酸桿菌、腸桿屬菌、沙雷菌、變形桿菌等黏質沙雷菌是細菌中最小者，可用于檢查除菌濾器的除菌效果生化反應分解葡萄糖產酸產氣，不分解乳糖；2、培養特性專性需氧，部分菌株兼性厭氧，營養要求不高。大腸埃希菌產酸桃紅色乳糖發酵菌落1）腸道外感染大腸埃希菌是臨床分離的革蘭陰性桿菌中最常見的菌種，可引起各種類型的感染，主要是引起人類泌尿系感染肥達試驗：

H1:40，O1：160，PA1：20，PB<1:20。廣泛存在于污水、土壤和蔬菜中，是腸道正常菌叢的成員，能引起多種條件致病性感染。※幽門螺桿菌的傳播途徑主要是消化道，幽門螺桿局的感染可能與胃癌有關1）腸道外感染大腸埃希菌是臨床分離的革蘭陰性桿菌中最常見的菌種，可引起各種類型的感染，主要是引起人類泌尿系感染屬于危害程度第二類的病原微生物一、生物學特性4.抗原構造1)O（菌體）抗原：脂多糖，耐熱2)H（鞭毛）抗原：蛋白質，不耐熱3)K（表面）抗原：莢膜多糖，耐熱，能阻止O抗原凝集反應※營養要求高，以布氏瓊脂為基礎培養基，需加用適量全血或胎牛血17一、生物學特性5.抵抗力自然狀態下較強。加熱60℃30min既被殺死，耐低溫，對常用化學消毒劑敏感、對膽鹽、煌綠有選擇性抑制作用，對鏈霉素、卡那霉素等敏感，但易耐藥一、生物學特性5.抵抗力自然狀態下較強。加熱60℃30m18二、臨床意義1.致病因素1）侵襲力：K抗原和菌毛與侵襲力有關。K抗原有抗吞噬作用，菌毛有黏附作用2）內毒素：細胞壁上的脂多糖（LPS）3）腸毒素：大腸埃希菌可產生兩種腸毒素：一種是不耐熱腸毒素（LT）；另一種是耐熱腸毒素（ST）二、臨床意義1.致病因素19二、臨床意義2.所致疾病1）腸道外感染大腸埃希菌是臨床分離的革蘭陰性桿菌中最常見的菌種，可引起各種類型的感染，主要是引起人類泌尿系感染腸道外感染（多為內源性感染）化膿性感染——定位轉移腹膜炎、闌尾炎、創傷感染、手術刀口感染等泌尿道感染——病原菌來自病人腸道（上行性）占泌尿道感染首位、女性多見（尿道炎、膀胱炎、腎盂腎炎等）二、臨床意義2.所致疾病腸道外感染（多為內源性感染）20二、臨床意義2）腸道內感染

是人和動物腸道的正常菌群，但其中有些菌株能引起輕微腹瀉至霍亂樣嚴重腹瀉，根據其不同的血清型別、毒力和所致臨床癥狀的不同，將引起人腹瀉的大腸埃希菌分為5類：二、臨床意義2）腸道內感染是人和動物腸道的正常菌群，但21三、微生物學常規檢驗1.標本采集腸外感染的標本：取血液、痰液、膿液、分泌物等腸內感染的標本：取腹瀉和食物中毒者的糞便、肛拭和殘留食物三、微生物學常規檢驗22三、微生物學常規檢驗2.腸道外感染標本的常規檢驗

１）檢驗程序２）檢驗方法直接檢查→分離培養→鑒定（KIA、MIU）3.腸道內感染標本的常規檢驗1)分離培養：選擇培養基2)鑒定：生化反應、血清學試驗、毒素或毒力試驗三、微生物學常規檢驗2.腸道外感染標本的常規檢驗23第三節沙門菌屬第三節沙門菌屬24案例

一男性病人，高熱10天，有納差、腹部不適、全身酸痛的前驅癥狀。腹部有壓痛，肝脾腫大。肥達試驗：

H1:40，O1：160，PA1：20，PB<1:20。醫生懷疑病人得了腸熱癥。

請問：1、為明確診斷，應采集哪些標本來進行微生物學檢驗？

2、所采集的標本應做哪些微生物學檢驗才能有助于疾病的診斷？

3、為了明確診斷，是否還可以再抽血做肥達試驗？

案例

一男性病人，25一、生物學特性1.形態與染色

革蘭陰性桿菌，不產生芽孢，無莢膜，除少數菌株（雞沙門菌和雛沙門菌）外，一般都有周鞭毛，能運動一、生物學特性1.形態與染色26醫生懷疑病人得了腸熱癥。人類致病的主要有霍亂弧菌和副溶血性弧菌，分別引起霍亂和食物中毒。腸桿菌科發酵葡萄糖，氧化酶陰性。主要引起泌尿系感染，發病率僅次于大腸埃希菌，醫源性感染較多見。菌血癥或敗血癥4.尿液：中段尿離心后取沉淀物一端單鞭毛多見于胎兒亞種，兩端單鞭毛多見于空腸彎曲菌，無芽孢、無莢膜。本屬細菌主要致病菌為嗜肺軍團菌。臨床上常見的有：產氣腸桿菌、陰溝腸桿菌、坂崎腸桿菌、泰洛腸桿菌、聚團腸桿菌、格高菲腸桿菌5個菌種。發酵多種糖，產酸、產氣黏質沙雷菌是引起腸道外感染的主要病原菌，與許多醫院內感染的暴發流行有關案例

一男性病人，高熱10天，有納差、腹部不適、全身酸痛的前驅癥狀。1、致病物質粘附因子（主要為菌毛）、毒素2、培養特性需氧或兼性厭氧菌，營養要求不高，最適NaCL濃度為3.※溶血性弧菌是一種嗜鹽性細菌，主要來自海產品。采集標本立即送檢，如不能及時送檢，應將標本置于3.3：霍亂采樣的注意事項有哪些？應做哪些微生物學檢查？在堿性蛋白胨水中，經35℃培養6-9h形成菌膜。發酵葡萄糖產酸不產氣，不發酵乳糖。一、生物學特性2.培養特性※兼性厭氧，對營養的要求不高，在普通營養瓊脂平板上生長的菌落為半透明、S型菌落，可出現粗糙型的菌落（S-R）變異。※在腸道選擇性培養基上因不發酵乳糖，菌落透明或半透明，有些能產生硫化氫的菌株，在SS瓊脂平板上可形成中心黑色的菌落醫生懷疑病人得了腸熱癥。一、生物學特性2.培養特性27一、生物學特性3.生化反應※發酵葡萄糖產酸、產氣（傷寒沙門菌不產氣），不發酵乳糖。※多數沙門菌反應特征為：KIA：KA++，MIU：+--，IMViC：-+-+/-一、生物學特性3.生化反應28二、臨床意義1、致病因素1．侵襲力菌毛和Vi抗原構成2．內毒素

3．腸毒素

2、所致疾病

沙門菌主要通過污染食品和水源經口感染1.臨床常見傷寒和副傷寒：腸熱癥2.胃腸炎3.菌血癥或敗血癥4.攜帶者二、臨床意義1、致病因素29二、臨床意義菌毛穿入淋巴液胸導管第二次菌血癥遲發型變態反應腸壁壞死、潰瘍高熱、肝脾腫大、玫瑰疹、白細胞↓等全身中毒癥狀肝脾腎淋巴結膽囊尿排菌糞便排菌發病期（1-4W）潛伏期2W腸熱癥傷寒沙門菌等經口吸附小腸黏膜細胞上在腸壁、腸系膜淋巴組織中繁殖（致敏）血流（第一次菌血癥）腸出血、腸穿孔二、臨床意義菌毛穿入淋巴液胸導管第二次菌血癥遲發型變態反應高30三、微生物檢驗標本采集1周取血，2、3周取糞，3周取尿液，全病程骨髓，血清學診斷應在病程的不同時期分別采集2～3份標本食物中毒：糞便、嘔吐物、可疑食物帶菌者：糞便尿液：中段尿離心后取沉淀物分離鑒定增菌（血、骨髓）→EMB、SS→生化反應→血清鑒定三、微生物檢驗標本采集31三、微生物檢驗三、微生物檢驗32三、微生物檢驗鑒定1）生化反應鑒定：可以菌落革蘭染色，若為革蘭陰性桿菌，進行氧化酶、觸酶和硝酸鹽還原試驗，氧化酶陰性，后兩者為陽性者可做KIA和MIU等生化反應進一步鑒定KIA（KA－＋）MIU（＋－－）三、微生物檢驗鑒定KIA（KA－＋）33四、微生物檢驗2）血清學鑒定定屬：多價O抗血清對沙門菌分離株進行定屬定群：每個O血清群的單價因子血清定群定型：用單價H因子血清與待測菌做玻片凝集試驗3）血清學診斷（肥達試驗）用已知的傷寒沙門菌O.H抗原、副傷寒沙門菌A、B、C的H抗原，檢測受檢血清中有無相應的抗體的半定量凝集試驗。結果解釋：正常值傷寒沙門菌O抗體效≥1:80，H抗體效價≥1:160，副傷寒沙門菌A、B、C的H抗體效價≥1:80才有臨床意義四、微生物檢驗2）血清學鑒定34第四節志賀菌屬第四節志賀菌屬35

案例

男性，35歲。因腹痛，膿血便2天來診。

患者3天前出差回來后突然發熱達38℃，無寒戰，同時有腹痛、腹瀉，大便每日10余次，為少量膿血粘液便，伴里急后重。醫生接診后，懷疑患者患了細菌性痢疾。

請問：1、為做病原學上的檢查，應該采集什么標本？

2、應該選用什么標本來進行分離培養？對可疑菌落需做哪些生化反應和血清學試驗來鑒定？

案例

男性36※兼性厭氧，對營養的要求不高，在普通營養瓊脂平板上生長的菌落為半透明、S型菌落，可出現粗糙型的菌落（S-R）變異。鼠疫耶爾森菌傳染性極強※在SS平板上，蠟滴狀，不易挑起，挑起有黏絲狀非發酵菌可能氧化酶陽性或陰性，不發酵葡萄糖。非發酵菌可能氧化酶陽性或陰性，不發酵葡萄糖。3、生化反應氧化酶、觸酶試驗陽性，硝酸鹽還原試驗陽性，發酵葡萄糖產酸不產氣，吲哚試驗陽性，O/129敏感本屬細菌主要致病菌為嗜肺軍團菌。1）侵襲力：K抗原和菌毛與侵襲力有關。代表菌為流感嗜血桿菌。與弧菌屬鑒別：本菌屬在≥6％NaCL培養基不生長，分解甘露醇，O/129耐藥。B群為福氏志賀菌：我國多見在臨床標本中最常檢出的是陰溝腸桿菌和產氣腸桿菌，能引起呼吸道、泌尿道及傷口感染，也可引起敗血癥、腦膜炎等。D群宋內志賀菌（★）這是因為葡萄球菌能合成Ⅴ因子釋放于培養基中，從而促進流感嗜血桿菌的生長。案例

一男性病人，高熱10天，有納差、腹部不適、全身酸痛的前驅癥狀。2、培養特性專性需氧，營養要求不高。與腸桿菌科和非發酵菌鑒別：本菌屬氧化酶陽性，發酵葡萄糖；IMViC中4個試驗的結果為＋＋――賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸：---；臨床最常見的是糞產堿桿菌，大部分感染是條件致病志賀菌屬細菌是引起人類細菌性痢疾的主要腸道病原菌之一志賀菌屬可用特異性抗血清將其分為4個血清群（種）：A群為痢疾志賀菌：癥狀最重B群為福氏志賀菌：我國多見C群為鮑特志賀菌D群為宋內志賀菌：癥狀最輕，我國多見※兼性厭氧，對營養的要求不高，在普通營養瓊脂平板上生長的菌37一、生物學特性1.形態與染色為革蘭陰性短桿菌，無芽胞，無莢膜，無鞭毛，某些菌株有菌毛2.培養特性兼性厭氧，營養要求不高，在腸道鑒別培養基上可形成乳糖不發酵、中等大小、無色半透明的菌落，宋內志賀菌常形成粗糙型菌落，且能遲緩分解乳糖，培養48h后可形成乳糖發酵的粉紅色菌落。一、生物學特性1.形態與染色38一、生物學特性3.生化反應發酵葡萄糖產酸不產氣，不發酵乳糖。KIA：KA-；MIU：--/+-；IMViC：-/++--一、生物學特性3.生化反應KIA：KA-；MIU：--/+-39一、生物學特性4、抗原構造與分類志賀菌屬菌種有O抗原，無H抗原，部分菌種有K抗原。O抗原是分類的依據，有群特異性和型特異性兩種抗原。根據生化反應和O抗原的不同，將志賀菌屬分為4個血清群（A、B、C、D）和40余個血清型A群痢疾志賀菌B群福氏志賀菌（★）C群鮑氏志賀菌D群宋內志賀菌（★）一、生物學特性4、抗原構造與分類40一、生物學特性5.變異性（1）S-R變異：宋內志賀菌（診斷血清中含有兩相血清）（2）耐藥性變異（3）毒力變異6.抵抗力本屬細菌對理化因素的抵抗力較其他腸桿菌科細菌為低。對酸較敏感，在運送培養時須使用含有緩沖劑的培養基，以免被糞便中其他細菌代謝中的酸所殺死。一、生物學特性5.變異性41二、臨床意義致病因素1）侵襲力2）內毒素：志賀菌主要致病物質3）外毒素2.所致疾病

主要引起人類細菌性痢疾，主要有以下3種臨床類型：1）急性細菌性痢疾2）慢性菌痢3）帶菌者二、臨床意義致病因素42二、臨床意義細菌（菌毛）吸附腸黏膜上皮細胞穿入細胞并擴散周圍及深入黏膜下層釋放內毒素、外毒素腸局部黏膜炎癥（變性、壞死、脫落）出血、壞死、潰瘍膿血便/黏液血便刺激腸壁植物神經腸蠕動↑腸肌痙攣腺體分泌↑水分吸收↓腹痛、腹瀉刺激直腸肛門括約肌里急后重便數增加吸收入血發熱、白細胞↑高熱、休克中毒性腦病DIC死亡毒血癥中毒性菌痢二、臨床意義細菌（菌毛）吸附腸黏膜上皮細胞穿入細胞并擴散周圍43三、微生物學檢驗1.標本采集取糞便或肛拭標本。

發病早期采集黏液膿血便做床邊接種。

若不能及時送檢（甘油保存液或卡-布運送培養基內）三、微生物學檢驗44三、微生物學檢驗KIA（KA－－）MIU（－－－）IMVC（－＋－－）三、微生物學檢驗KIA（KA－－）MIU（－－－）IMVC（45三、微生物學檢驗3.檢驗方法1）分離培養2）鑒定先進行氧化酶、觸酶和硝酸鹽還原試驗（-++）

后做KIA和MIU等生化反應試驗三、微生物學檢驗46醫生接診后，懷疑患者患了細菌性痢疾。本屬細菌主要致病菌為嗜肺軍團菌。采集標本立即送檢，如不能及時送檢，應將標本置于3.埃希菌屬主要有5個種，①與腸桿菌科及非發酵菌的鑒別：本屬氧化酶陽性，能發酵葡萄糖增菌（血、骨髓）→EMB、SS→生化反應→血清鑒定5%NaCL蛋白胨水或卡布培養基中送檢。為革蘭陰性短桿菌，無芽胞，無莢膜，無鞭毛，某些菌株有菌毛為革蘭陰性短桿菌，無芽胞，無莢膜，無鞭毛，某些菌株有菌毛2）分離培養TCBS瓊脂平板和3.非發酵菌可能氧化酶陽性或陰性，不發酵葡萄糖。代表菌為流感嗜血桿菌。1、致病物質鞭毛、菌毛和霍亂腸毒素（主要致病物質）1、標本采集采取患者糞便、肛拭、可疑食物。賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸：++-主要通過食物和水傳播，引起人類腸道感染和各種腸道外感染。3）分離培養堿性瓊脂平板和TCBS瓊脂平板專性需氧，營養要求很高，常用鮑-金培養基進行分離培養。泌尿道感染——病原菌來自病人腸道（上行性）沙雷菌屬是腸桿菌科中能引起醫院感染的一個重要的菌屬，臨床標本中以黏質沙雷菌最常見。第五節克雷伯菌屬醫生接診后，懷疑患者患了細菌性痢疾。第五節克雷伯菌屬47克雷伯菌屬：腸桿菌科中的一屬，為條件致病菌，臨床感染中以肺炎克雷伯菌多見，也是引起醫院感染的重要病原菌革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗標準課件48一、生物學特性1.形態與染色肺炎克雷伯菌為革蘭陰性桿菌，單個、成雙或者短鏈狀排列，有明顯莢膜，無芽孢，無鞭毛，有菌毛2.培養特性兼性厭氧，營養要求不高，在普通瓊脂平板上，形成較大、灰白色、黏液型的菌落，相鄰菌落容易發生融合，用接種針沾取時可挑出長絲狀細絲在麥康凱或SS瓊脂平板上，形成較大、紅色、黏液型菌落。在血平板上不溶血。粘絲試驗BAP菌落特征染色形態一、生物學特性1.形態與染色粘絲試驗BAP菌落特征染色形態49一、生物學特性3.生化反應分解葡萄糖、乳糖產酸產氣，KIA：AA+-；MIU：--+；IMViC:--++4.抗原結構：O抗原K抗原：莢膜多糖，用以分型一、生物學特性3.生化反應50二、臨床意義克雷伯菌屬的細菌多感染免疫力低下的人群，是醫院感染中最重要的條件致病菌肺炎克雷伯菌是臨床標本中常見的細菌，可引起典型的原發性肺炎肺炎克雷伯菌肺炎亞種還能引起各種肺外感染二、臨床意義克雷伯菌屬的細菌多感染免疫力低下的人群，是醫院感51三、微生物學檢驗1.采集標本主要有痰液、血液、尿液、膿、腦脊液、糞便、胸腹水等。2.檢驗方法1）直接檢查：膿、痰直接涂片染色鏡檢，尿、腦脊液取離心沉渣涂片染色鏡檢。可見革蘭陰性球桿菌，有明顯的莢膜。2）分離培養：血液、腦脊液標本先經肉湯增菌培養，其他標本接種血平板或麥康凱瓊脂平板進行分離培養。3）鑒定①生化反應：革蘭染色，氧化酶、觸酶和硝酸酶、KIA、MIU、IMViC②莢膜腫脹試驗三、微生物學檢驗1.采集標本主要有痰液、血液、尿液、膿52第六節變形桿菌屬

第六節變形桿菌屬

53變形桿菌屬是腸桿菌科中的一菌屬，是一群動力活潑、產硫化氫、可形成遷徙生長，是條件致病菌和醫院感染的常見菌。變形桿菌屬是腸桿菌科中的一菌屬，是一群動力活潑、產硫化氫、可541.形態與染色革蘭陰性桿菌，呈多形性，有周身鞭毛，運動活潑，無芽胞，無莢膜。2.培養特性

兼性厭氧，對營養無特殊要求，在營養瓊脂和血瓊脂平板上，普通變形桿菌和奇異變形桿菌多呈遷徙生長，是本屬細菌的重要特征。在腸道選擇培養基上，形成透明或半透明的無色菌落。產生硫化氫，在SS平板上形成無色黑心菌落。普通變形桿菌、奇異變形桿菌的一些菌株和產黏變形桿菌在血平板上溶血。一、生物學特性1.形態與染色革蘭陰性桿菌，呈多形性，有周身鞭毛，運動553.生化反應分解葡萄糖產酸產氣，不分解乳糖；KIA：KA++；MIU:++/-+；IMViC:+/-+--

迅速分解尿素（2-4h），苯丙氨酸脫氨酶試驗陽性4.抗原構造變形桿菌X19、X2、Xk菌株的O抗原,即OX19、OX2和OXK某些立克次體有共同抗原成分，臨床上用OX19、OX2和OXK代替立克次體的抗原，與病人血清進行凝集試驗，用以輔助診斷立克次體病，此試驗稱為外斐試驗。一、生物學特性3.生化反應分解葡萄糖產酸產氣，不分解乳糖；一、生物學特性561）侵襲力：K抗原和菌毛與侵襲力有關。腸桿菌科發酵葡萄糖，氧化酶陰性。氧化酶、觸酶、硝酸鹽還原陽性，發酵葡萄糖等糖類產酸產氣，O/129耐藥。增菌（血、骨髓）→EMB、SS→生化反應→血清鑒定培養特性兼性厭氧，營養要求不高，在血瓊脂平板上某些菌株可產生β-溶血，在SS瓊脂平板上少數菌株可發酵乳糖，形成粉紅色菌落。在TCBS上，因發酵蔗糖產酸形成較大黃色菌落。乳糖、中性紅指示劑、膽鹽、煌綠等抑制劑1）侵襲力：K抗原和菌毛與侵襲力有關。此外還可引起菌血癥、腹瀉、某些腸道外感染及多菌混合感染，導致延長住院時間及死亡1、致病物質溶血毒素和細胞毒素臨床最常見的是糞產堿桿菌，大部分感染是條件致病采集標本主要有痰液、血液、尿液、膿、腦脊液、糞便、胸腹水等。穿入細胞并擴散周圍及深入黏膜下層所致疾病主要引起人類細菌性痢疾，主要有以下3種臨床類型：傷寒沙門菌無色乳糖不發酵菌落結合菌落特征和菌體形態，作出初步報告。在臨床標本中最常檢出的是陰溝腸桿菌和產氣腸桿菌，能引起呼吸道、泌尿道及傷口感染，也可引起敗血癥、腦膜炎等。H抗原菌毛抗原1)分離培養：選擇培養基（1）S-R變異：宋內志賀菌（診斷血清中含有兩相血清）二、臨床意義變形桿菌屬中由普通變形桿菌、奇異變形桿菌引起的感染最為常見。主要引起泌尿系感染，發病率僅次于大腸埃希菌，醫源性感染較多見。此外還可以引起食物中毒、呼吸道感染、創口感染及多個部位感染等。1）侵襲力：K抗原和菌毛與侵襲力有關。二、臨床意義變形桿菌571、標本采集有血液、尿、腦脊液、膿液、痰液、糞便，可疑食物等。2、檢驗方法1）直接檢查2）分離培養3）鑒定4）鑒別三、微生物學檢驗1、標本采集有血液、尿、腦脊液、膿液、痰液、糞便，可疑58

第七節腸桿菌屬

第七節腸桿菌屬59廣泛存在于污水、土壤和蔬菜中，是腸道正常菌叢的成員，能引起多種條件致病性感染。臨床上常見的有：產氣腸桿菌、陰溝腸桿菌、坂崎腸桿菌、泰洛腸桿菌、聚團腸桿菌、格高菲腸桿菌5個菌種。廣泛存在于污水、土壤和蔬菜中，是腸道正常菌叢的成員，能引起多601、形態與染色革蘭陰性粗短桿菌，有周身鞭毛，無芽胞，部分菌株有莢膜2、培養特性兼性厭氧，營養要求不高，在普通培養基上能夠生長，形成較大的、灰白色或黃色的黏液狀菌落，在腸道選擇培養基上，形成發酵乳糖的紅色菌落。3、生化特性多數菌株分解葡萄糖、乳糖產酸產氣；KIA：AA+-；MIU：+--/+；IMViC:--++一、生物學特性1、形態與染色革蘭陰性粗短桿菌，有周身鞭毛，無芽胞，部61腸桿菌屬廣泛存在于自然環境中，是腸道正常菌群的成員，能引起醫院感染中多種條件致病性感染在臨床標本中最常檢出的是陰溝腸桿菌和產氣腸桿菌，能引起呼吸道、泌尿道及傷口感染，也可引起敗血癥、腦膜炎等。坂崎腸桿菌能引起新生兒腦膜炎和菌血癥，死亡率高達75％二、臨床意義腸桿菌屬廣泛存在于自然環境中，是腸道正常菌群的成員，能引起醫621.標本采集血液、尿液、膿液、痰液、腦脊液等。2.檢驗方法1）直接檢驗2）分離培養3）鑒定MAC上稍大而粘稠的菌落SS上如果生長，為白色或乳白色、不透明粘稠狀的菌落三、微生物學檢驗1.標本采集血液、尿液、膿液、痰液、腦脊液等。三、微63

第八節其他常見腸桿菌科細菌

第八節其他常見腸桿菌科細菌64一、沙雷菌屬二、耶爾森菌屬三、愛德華菌屬四、枸櫞酸桿菌屬五、哈夫尼亞菌屬一、沙雷菌屬65一、沙雷菌屬一、沙雷菌屬66沙雷菌屬是腸桿菌科中能引起醫院感染的一個重要的菌屬，臨床標本中以黏質沙雷菌最常見。條件致病菌，可引起肺炎、敗血癥、腦膜炎、心內膜炎、泌尿道感染等。佩戴隱形眼鏡所引起的紅眼病。沙雷菌屬是腸桿菌科中能引起醫院感染的一個重要的菌屬，671、形態與染色本屬細菌為革蘭陰性小桿菌，有周身鞭毛，能運動，氣味沙雷菌有微莢膜，其余菌種無莢膜、無芽胞。黏質沙雷菌是細菌中最小者，可用于檢查除菌濾器的除菌效果2、培養特性兼性厭氧，營養要求不高，在營養瓊脂上能夠生長，形成不透明，白色或有色（紅色、粉紅色）的菌落。色素的產生在室溫中更為明顯。所產生的兩種不同色素是：非水溶性的靈菌紅素和水溶性的吡羧酸。在伊紅美藍和麥康凱瓊脂平板上形成無色的大而粘稠的菌落。一、生物學特性1、形態與染色本屬細菌為革蘭陰性小桿菌，有周身鞭毛，能68該菌曾一度被認為是無害的環境污染菌，但由于該菌具有侵襲性并對許多常用抗菌藥物有耐藥性，現已成為一種重要的條件病原菌黏質沙雷菌是引起腸道外感染的主要病原菌，與許多醫院內感染的暴發流行有關二、臨床意義該菌曾一度被認為是無害的環境污染菌，但由于該菌具有侵襲性并對69KIA：KA--MIU：+--IMViC：--/+++賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸：++-DNA酶陽性三、生化反應KIA：KA--三、生化反應70二、耶爾森菌屬二、耶爾森菌屬71與人類疾病密切相關的有3個菌種，包括鼠疫耶爾森菌、小腸結腸炎耶爾森菌、假結核耶爾森菌，都是人畜共患病病原菌。與人類疾病密切相關的有3個菌種，包括鼠疫耶爾森菌、小腸結腸72鼠疫耶爾森菌在我國傳染病防治法中被列為甲類傳染病，曾在世界上造成多次大流行，引起大批患者死亡，造成人類重大災害，由于世界上鼠疫自然疫源尚未全部消滅，至今仍有人間或鼠間流行，因此，必須予以重視。鼠疫耶爾森菌有兩種毒素：內毒素和鼠毒素臨床類型

有3種常見的臨床類型：（1）腺鼠疫（2）敗血型鼠疫（3）肺鼠疫此外尚有較為少見的皮膚鼠疫、腸鼠疫、腦膜炎型鼠疫、眼鼠疫等鼠疫耶爾森菌鼠疫耶爾森菌在我國傳染病防治法中被列為甲類傳染病，曾在世界上73為革蘭染色陰性直桿狀或球桿狀，兩端鈍圓，兩極濃染，有莢膜，無芽孢，無鞭毛鼠疫耶爾森菌兼性厭氧，耐低溫，在4～43℃均能生長，最適生長溫度為25～28℃，最適pH為6．9～7．2。在普通培養基上可生長，但發育緩慢。在血瓊脂平板上培養以37℃最好，48小時后形成柔軟、粘稠的粗糙菌落。在肉湯培養基中開始混濁生長，24小時后表現為沉淀生長，48小時后逐漸形成菌膜，稍加搖動后菌膜呈鐘乳石狀下垂。肝臟新鮮壓片顯微鏡下形態特征為革蘭染色陰性直桿狀或球桿狀，兩端鈍圓，兩極濃染，有莢膜，無74鼠疫耶爾森菌檢驗程序鼠疫耶爾森菌傳染性極強屬于危害程度第二類的病原微生物采取嚴格的防護措施并嚴格遵守實驗室對烈性傳染病的操作規程方可進行操作鼠疫耶爾森菌檢驗程序鼠疫耶爾森菌傳染性極強75鼠疫耶爾森菌分解葡萄糖產酸不產氣，對大多數糖不分解；KIA：KA--；MIU：---；IMViC：--+-；賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸：---；不液化明膠；當穿刺培養時，培養物表面成膜狀，細菌沿穿刺線呈縱樹狀生長。鼠疫耶爾森菌分解葡萄糖產酸不產氣，對大多數糖不分解；KIA：76沙雷菌屬是腸桿菌科中能引起醫院感染的一個重要的菌屬，臨床標本中以黏質沙雷菌最常見。另一種是耐熱腸毒素（ST）2、培養特性兼性厭氧，營養要求不高，在腸道選擇鑒別培養基上，形成不發酵乳糖的無色菌落，TCBS平板上不生長。※在腸道選擇性培養基上因不發酵乳糖，菌落透明或半透明，有些能產生硫化氫的菌株，在SS瓊脂平板上可形成中心黑色的菌落本屬細菌因人工培養時必須加含X、V因子的血液而得名。本屬細菌主要致病菌為嗜肺軍團菌。結合菌落特征和菌體形態，作出初步報告。采集標本立即送檢，如不能及時送檢，應將標本置于3.采集標本立即送檢，如不能及時送檢，應將標本置于3.屬于危害程度第二類的病原微生物迅速分解尿素（2-4h），苯丙氨酸脫氨酶試驗陽性苛養菌是指對生長環境、營養要求較苛刻的細菌，在普通環境中不能或難以生長。1、致病物質鞭毛、菌毛和霍亂腸毒素（主要致病物質）1、形態與染色革蘭陰性球桿菌，常呈雙排列。O抗原特異性高，O1和O139群引起霍亂，O1型根據特異性分為古典生物型和埃爾托生物型3：霍亂采樣的注意事項有哪些？應做哪些微生物學檢查？不分解糖類、不液化明膠、不分解尿素，V-P和甲基紅試驗均陰性。IMViC中4個試驗的結果為＋＋――本屬細菌對理化因素的抵抗力較其他腸桿菌科細菌為低。發酵多種糖，產酸、產氣小腸結腸炎耶爾森菌小腸結腸炎耶爾森菌可寄居在鼠、家畜和兔多種動物體內，多表現為小腸炎和結腸炎，癥狀與菌痢和闌尾炎相似。小腸結腸炎耶爾森菌為革蘭陰性球桿菌，無芽孢，無莢膜，22-25℃培養有周鞭毛，呈翻滾螺旋狀運動，35℃無動力。兼性厭氧，耐低溫。具有嗜冷性，在4℃增菌3周可分離純化；25℃時動力+，37℃時動力-;VP試驗25℃時+，37℃時-；KIA：KA--；賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸：-+-沙雷菌屬是腸桿菌科中能引起醫院感染的一個重要的菌屬，臨床標本77小腸結腸炎耶爾森菌檢驗程序小腸結腸炎耶爾森菌檢驗程序78三、愛德華菌屬三、愛德華菌屬79四、枸櫞酸桿菌四、枸櫞酸桿菌80枸櫞酸桿菌屬枸櫞酸桿菌屬以前僅有3個種，即弗勞地枸櫞酸桿菌，異型枸櫞酸桿菌和無丙二酸鹽枸櫞酸桿菌。枸櫞酸桿菌屬是人和動物腸道的正常菌群，也是條件致病菌，能引起腹瀉和腸道外感染如菌血癥、腦膜炎和腦膿腫等枸櫞酸桿菌屬枸櫞酸桿菌屬以前僅有3個種，即弗勞地枸櫞酸桿菌，81本菌屬是腸桿菌科中的一屬，為條件致病菌與臨床及醫院感染相關的病原菌主要是弗勞地枸櫞酸桿菌，科澤枸櫞酸桿菌和布拉克枸櫞酸桿菌臨床最常見的感染部位是泌尿道，常為老年男性患者（≥65歲）此外還可引起菌血癥、腹瀉、某些腸道外感染及多菌混合感染，導致延長住院時間及死亡科澤枸櫞酸桿菌還可引起嬰幼兒腦膜炎和腦膿腫本菌屬是腸桿菌科中的一屬，為條件致病菌821、形態與染色本屬細菌為革蘭陰性桿菌，有周身鞭毛、無芽孢、無莢膜2、培養特性兼性厭氧，營養要求不高，在MAC、EBME、SS上為無色透明或紅色。弗勞地枸櫞酸桿菌可產生硫化氫，在SS瓊脂上形成有黑色中心的菌落。本菌屬的部分生化特性和抗原結構（O抗原）與沙門菌屬相似，應注意鑒別1、形態與染色本屬細菌為革蘭陰性桿菌，有周身鞭毛、無芽83

3.枸櫞酸桿菌的基本生化反應特征：三糖鐵瓊脂中產酸/產酸產氣或產堿/產酸、產氣、產生硫化氫，枸櫞酸鹽陽性，脲酶陰性/陽性，吲哚陽性/陰性，動力陽性，VP陰性，鳥氨酸陽性/陰性，精氨酸陽性，賴氨酸陰性枸櫞酸桿菌屬與類似菌屬的鑒別3.枸櫞酸桿菌的基本生化反應特征：三糖鐵瓊脂中產酸/產酸產84腸桿菌科小結腸桿菌科細菌是革蘭陰性桿菌中最主要的成員，也是臨床最常見的病原菌，是臨床泌尿道、呼吸道、腸道、腹腔和盆腔等感染的常見病原菌現已發現與人類感染有關的腸桿菌科細菌有33個菌屬，約有40種以上的腸桿菌科的細菌可在臨床標本中檢測出腸桿菌科細菌為革蘭陰性桿狀或球桿狀、無芽孢、多數有鞭毛，能運動，有致病性的菌株多數有菌毛腸桿菌科小結腸桿菌科細菌是革蘭陰性桿菌中最主要的成員，也是臨85需氧或兼性厭氧，營養要求不高，在普通培養基上生長良好主要生化特性為發酵葡萄糖、觸酶陽性、氧化酶陰性、硝酸鹽還原陽性革蘭氏陰性桿菌除腸桿菌科外，還有弧菌科和非發酵菌，所以首先應與這些菌進行鑒別，鑒別可用形態、葡萄糖氧化或發酵、氧化酶、鞭毛等加以區別腸桿菌科細菌的檢驗要點為直接涂片檢查，分離培養，細菌鑒定，必要時還要作血清學鑒定及毒素檢測需氧或兼性厭氧，營養要求不高，在普通培養基上生長良好86實驗室抗菌藥物敏感試驗抗菌藥物的選擇，需參照相關標準的基礎上，咨詢醫院相關專業人士，結合醫院的具體情況來選擇實驗室提供的抗菌藥物敏感試驗結果對臨床合理使用抗生素意義重大同時細菌的耐藥譜，還可作為醫院感染流行病學調查的一個重要實驗室依據實驗室抗菌藥物敏感試驗抗菌藥物的選擇，需參照相關標準的基礎上87弧菌科弧菌科88案例2014年9月19日下午5點，李滄區下午5點，李滄區疾控中心接到市八醫的電話報告：9月19日下午4：00，該院腸道門診接診2例腹瀉病患者，癥狀相似，腹瀉十余次，嘔吐四次。截止7點，該院已累計收治了7例疑似霍亂病人，病人的臨床表現劇烈腹瀉，先瀉后吐，無腹痛、無發熱，發病時間分別為9月18、19日。區疾控中心應急處置分隊對7例病人進行了個案流行病學檢查，發現7例病人均為附近某小區居民，9月17日中午，均參加了村民姜先生在手拉手餐館舉辦的結婚午宴，同時霍亂快診O139陽性。請問：1：結合臨床表現，你初步懷疑什么菌感染？2：應采集幾級防護？除個人防護用品外，還應準備什么？3：霍亂采樣的注意事項有哪些？應做哪些微生物學檢查？

案例89一、弧菌屬弧菌屬分布廣泛，以水中最多。人類致病的主要有霍亂弧菌和副溶血性弧菌，分別引起霍亂和食物中毒。一、弧菌屬90（一）霍亂弧菌※

霍亂弧菌是霍亂的病原菌，該病為一種急性烈性腸道傳染病，發病急，傳染性強，病死率高，屬于國際檢疫傳染病，為我國甲類傳染病。※

霍亂弧菌包括兩個生物型：古典生物型和埃爾托（Eltor）生物型。（一）霍亂弧菌91一、生物學特性1.形態與染色革蘭陰性，弧形或逗點狀，單端鞭毛，運動活潑。取患者米泔樣糞便作懸滴觀察，可見該菌呈穿梭樣或流星狀運動，做涂片染色鏡檢，可見“魚群狀”排列一、生物學特性1.形態與染色革蘭陰性，弧形或逗點狀，922、培養特性需氧或兼性厭氧菌，營養要求不高，最適溫度35℃，耐堿不耐酸，最適pH8.8-9.9,在堿性蛋白胨水中，經35℃培養6-9h形成菌膜，可達快速增菌目的。在堿性瓊脂平板上，形成較大、圓形、扁平、無色透明或半透明似水滴狀菌落。在TCBS上，因發酵蔗糖產酸形成較大黃色菌落。在亞碲酸鉀瓊脂平板上，菌落中心呈灰褐色。在血平板上，Eltor生物型有β溶血。2、培養特性需氧或兼性厭氧菌，營養要求不高，最適溫度3933、生化反應4、抗原結構及分型H抗原弧菌屬所共有，特異性低O抗原特異性高，O1和O139群引起霍亂，O1型根據特異性分為古典生物型和埃爾托生物型5、抵抗力抵抗力弱，不耐熱，耐堿不耐酸。埃爾托（Eltor）生物型較古典生物型強。3、生化反應941、致病物質鞭毛、菌毛和霍亂腸毒素（主要致病物質）2、所致疾病引起霍亂，人是唯一易感者，通過污染的水源或經食物經口感染。霍亂后可獲得牢固的免疫二、臨床意義1、致病物質鞭毛、菌毛和霍亂腸毒素（主要致病物質）二951、標本采集發病早期及未服抗生素前采樣。可采取患者糞便、嘔吐物或肛拭子。采集標本及時接種于堿性蛋白胨水中2、檢驗程序三、微生物學檢驗1、標本采集發病早期及未服抗生素前采樣。可采取患者糞便963、檢驗方法1）直接鏡檢①革蘭染色鏡檢，如見魚群狀排列的革蘭陰性弧菌，可初步報告。②動力及制動試驗：去病人米泔水樣便或嘔吐物，懸滴法鏡檢，可見流星樣運動的細菌。加入O1群霍亂弧菌多價血清后動力消失，制動試驗陽性，可早期報告2）增菌培養堿性蛋白胨水

3）分離培養堿性瓊脂平板和TCBS瓊脂平板4）血清學鑒定3、檢驗方法97（二）溶血性弧菌※溶血性弧菌是一種嗜鹽性細菌，主要來自海產品。引起食物中毒。（二）溶血性弧菌98一、生物學特性1、形態與染色革蘭陰性，直或微彎的桿狀，在不同培養基上菌體形態差異較大。兩極濃染，單端鞭毛，運動活潑。一、生物學特性1、形態與染色革蘭陰性，直或微彎的992、培養特性需氧或兼性厭氧菌，營養要求不高，最適NaCL濃度為3.5%，在無鹽培養基上不生長。在堿性蛋白胨水中，經35℃培養6-9h形成菌膜。※在3.5%NaCL瓊脂平板上，呈蔓延生長，菌落周圍不整齊，凸起，光滑濕潤，不透明，※在TCBS上，不發酵蔗糖，菌落綠色（與霍亂弧菌相區別）。※在羊血瓊脂平板上，形成圓形、凸起，光滑濕潤，灰白色菌落，有β溶血。※在SS平板上，蠟滴狀，不易挑起，挑起有黏絲狀2、培養特性需氧或兼性厭氧菌，營養要求不高，最適NaC100革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗標準課件1013、生化反應致病菌株能使人或兔紅細胞發生溶血，對馬紅細胞不溶血，稱神奈川試驗。4、抵抗力抵抗力弱，不耐熱，耐堿不耐酸。3、生化反應致病菌株能使人或兔紅細胞發生溶血，對馬紅細胞1021、致病物質粘附因子（主要為菌毛）、毒素2、所致疾病引起食物中毒二、臨床意義1、致病物質粘附因子（主要為菌毛）、毒素二、臨床意義1031、標本采集采取患者糞便、肛拭、可疑食物。采集標本立即送檢，如不能及時送檢，應將標本置于3.5%NaCL蛋白胨水或卡布培養基中送檢。2、檢驗方法1）增菌培養3.5%NaCL蛋白胨水2）分離培養TCBS瓊脂平板和3.5%NaCL瓊脂平板3）鑒定三、微生物學檢驗1、標本采集采取患者糞便、肛拭、可疑食物。采集標本立即104二、氣單胞菌屬氣單胞菌屬廣泛分布于自然界，可引起腹瀉和腸道外感染二、氣單胞菌屬105一、生物學特性1、形態與染色革蘭陰性直桿狀，有時成球桿狀或絲狀，單極鞭毛，運動極為活潑，無芽孢，有窄的莢膜。2、培養特性需氧或兼性厭氧菌，營養要求不高，在普通培養基上經培養，形成微白色半透明菌落；在血平板上，形成較大、扁平菌落，有β溶血；在腸道培養基上，形成扁平、無色菌落；在TCBS上，生長不良；液體培養基呈均勻渾濁。3、生化反應發酵葡萄糖產酸，氧化酶和觸酶試驗陽性，在6%NaCL中不生長一、生物學特性1、形態與染色革蘭陰性直桿狀，有時成球1061、致病物質溶血毒素和細胞毒素2、所致疾病主要引起人類腸內感染（腹瀉）和腸外感染（傷口感染和敗血癥）。二、臨床意義1、致病物質溶血毒素和細胞毒素二、臨床意義1071、標本采集采取患者糞便、肛拭、血液、膿液、腦脊液、尿液等標本。2、檢驗方法1）直接涂片革蘭陰性短桿菌，懸滴法細菌運動活潑2）分離培養４℃冷增菌3）鑒定４）鑒別①與腸桿菌科及非發酵菌的鑒別：本屬氧化酶陽性，能發酵葡萄糖②與鄰單胞菌和弧菌屬的鑒別：本菌屬對O/129耐藥，TCBS平板上不生長三、微生物學檢驗1、標本采集采取患者糞便、肛拭、血液、膿液、腦脊液、尿108三、鄰單胞菌屬鄰單胞菌屬只有一個種即類志賀鄰單胞菌。引起人類水樣腹瀉和食物中毒。三、鄰單胞菌屬1091、染色及形態本菌為革蘭陰性桿菌，1-5根極端鞭毛，運動活潑2、培養特性兼性厭氧，營養要求不高，在腸道選擇鑒別培養基上，形成不發酵乳糖的無色菌落，TCBS平板上不生長。3、生化反應氧化酶、觸酶試驗陽性，硝酸鹽還原試驗陽性，發酵葡萄糖產酸不產氣，吲哚試驗陽性，O/129敏感4、鑒別試驗1）與志賀菌屬鑒別：氧化酶和動力試驗為陽性，志賀菌屬均為陰性

2）與氣單胞菌和弧菌屬的鑒別：本菌屬對O/129敏感，TCBS平板上不生長1、染色及形態本菌為革蘭陰性桿菌，1-5根極端鞭毛，運110一、生物學特性1.形態與染色革蘭陰性，直或微彎的桿狀，在不同培養基上菌體形態差異較大。兩極濃染，單端鞭毛，運動活潑。一、生物學特性1.形態與染色革蘭陰性，直或微彎的1112、培養特性需氧或兼性厭氧菌，營養要求不高，最適NaCL濃度為3.5%，在無鹽培養基上不生長。在堿性蛋白胨水中，經35℃培養6-9h形成菌膜。※在3.5%NaCL瓊脂平板上，呈蔓延生長，菌落周圍不整齊，凸起，光滑濕潤，不透明，※在TCBS上，不發酵蔗糖，菌落綠色（與霍亂弧菌相區別）。※在羊血瓊脂平板上，形成圓形、凸起，光滑濕潤，灰白色菌落，有β溶血。※在SS平板上，蠟滴狀，不易挑起，挑起有黏絲狀2、培養特性需氧或兼性厭氧菌，營養要求不高，最適NaC1121、致病物質粘附因子（主要為菌毛）、毒素2、所致疾病引起食物中毒二、臨床意義1、致病物質粘附因子（主要為菌毛）、毒素二、臨床意義1131、標本采集采取患者糞便、肛拭、可疑食物。采集標本立即送檢，如不能及時送檢，應將標本置于3.5%NaCL蛋白胨水或卡布培養基中送檢。2、檢驗方法1）增菌培養3.5%NaCL蛋白胨水2）分離培養TCBS瓊脂平板和3.5%NaCL瓊脂平板3）鑒定三、微生物學檢驗1、標本采集采取患者糞便、肛拭、可疑食物。采集標本立即114弧菌科小結

霍亂是烈性傳染病，凡在流行季節和地區有腹瀉癥狀的患者均應快速準確作出病原學診斷。標本直接檢查有助于快速診斷。將標本直接接種于堿性胨水后，轉種TCBS等平板觀察菌落形態。可疑菌落應使用O1群和O139群霍亂弧菌多價和單價抗血清進行凝集。結合菌落特征和菌體形態，作出初步報告。進一步純培養，依據全面生化反應，血清學分群及分型進行最后鑒定。符合霍亂弧菌的菌株尚需區分古典生物型和El-Tor生物型弧菌科小結霍亂是烈性傳染病，凡在流行季節和地區有腹瀉115

副溶血性弧菌具有嗜鹽性，在不含NaCl的培養基上不生長。主要引起食物中毒和急性腹瀉，從腹瀉患者中分離到的菌株95%以上能使人或兔紅細胞發生溶血，對馬紅細胞不溶血，為神奈川現象副溶血性弧菌具有嗜鹽性，在不含NaCl的培養基上不生116

氣單胞菌屬是革蘭陰性直桿菌、球桿菌或絲狀菌，極端單鞭毛，動力陽性，來自人類菌種（嗜溫菌）在10～42℃生長；來自魚類或環境菌種（嗜冷菌）在22～25℃生長。氧化酶、觸酶、硝酸鹽還原陽性，發酵葡萄糖等糖類產酸產氣，O/129耐藥。引起腹瀉和菌血癥等。與腸桿菌科和非發酵菌鑒別：本菌屬氧化酶陽性，發酵葡萄糖；腸桿菌科發酵葡萄糖，氧化酶陰性。非發酵菌可能氧化酶陽性或陰性，不發酵葡萄糖。與弧菌屬鑒別：本菌屬在≥6％NaCL培養基不生長，分解甘露醇，O/129耐藥。氣單胞菌屬是革蘭陰性直桿菌、球桿菌或絲狀菌，極端單鞭117非發酵革蘭陰性桿菌非發酵革蘭陰性桿菌118

非發酵菌是一大群不發酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧、無芽胞的革蘭陰性桿菌廣泛存在于人體體表、開放體腔，以及醫院相關的外環境中，多為條件致病菌。醫院感染中銅綠假單胞菌、不動桿菌占重要地位。 非發酵菌是一大群不發酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧119

假單胞菌屬※為一群嚴格需氧、有鞭毛、無芽胞、無莢膜的革蘭陰性桿菌。※氧化酶和觸酶試驗陽性。可產生大量水溶性色素，如綠膿素、紅膿素 假單胞菌屬120

一、銅綠假單胞菌屬

假單胞菌屬的代表菌屬，產生水溶性色素綠膿素，使膿液或培養基呈綠色，而得名。為條件致病菌，是醫院感染的常見菌。 一、銅綠假單胞菌屬121

1、形態與染色革蘭陰性桿菌，球桿狀或絲球狀，長短不一。單個、呈雙或短鏈狀排列。無芽孢，有莢膜，有1-3根鞭毛，運動活潑，臨床分離株常有菌毛。2、培養特性專性需氧，部分菌株兼性厭氧，營養要求不高。在普通瓊脂平板和SS平板上生長良好，可生長溫度25-42℃，最適生長溫度35℃，4℃不生長而42℃生長是該菌的鑒別點之一。※在血平板和麥康凱平板上形成不同形態菌落，生姜氣味。※在SS瓊脂平板上，經48h培養菌落中央呈棕綠色（與沙門菌和志賀菌相區別）※在普通瓊脂平板上，可產生多種色素，以綠膿素和青膿素為主一、生物學性狀 1、形態與染色革蘭陰性桿菌，球桿狀或絲球狀，長短122革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗標準課件1233、生化反應葡糖糖、木糖氧化；觸酶、氧化酶陽性；利用枸櫞酸鹽、還原硝酸鹽并產生氮氣；液化明膠，吲哚陰性；4、抵抗力比其他無芽孢細菌抵抗力強。革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗標準課件124二、臨床意義

1、致病物質產生多種致病性的毒素和侵襲性的酶2、所致疾病條件致病菌，在抵抗力低時引起皮膚、呼吸道、泌尿道及燒傷創面等感染，可導致菌血癥、敗血癥、心內膜炎及嬰幼兒嚴重腹瀉。醫院常見病原菌3、免疫性免疫原性強，可刺激機體產生特異性抗體，具有一定的抗感染作用二、臨床意義

1、致病物質產生多種致病性的毒素和侵襲125三、微生物學檢驗

1、標本采集按疾病和檢查目的分別采取不同的臨床標本，醫院環境檢測可從空氣、水、物體表面等處采樣。2、檢驗方法1）直接涂片染色鏡檢2）分離培養3）鑒定4）鑒別三、微生物學檢驗

1、標本采集按疾病和檢查目的分別采取126

二、產堿桿菌屬

產堿桿菌屬典型的菌種是糞產堿桿菌。 二、產堿桿菌屬127

一、生物學性狀1、形態與染色革蘭陰性桿菌，常呈單、雙或鏈狀排列。具有周鞭毛，無芽孢，多數菌株無莢膜。2、培養特性專性需氧，營養要求不高。在普通瓊脂平板上生長良好。麥康凱和SS平板上，形成不發酵乳糖的無色透明菌落。在蛋白胨的肉湯中產氨，可使培養基pH增至8.6以上二、臨床意義臨床最常見的是糞產堿桿菌，大部分感染是條件致病三、微生物學檢驗 一、生物學性狀128

三、不動桿菌屬

不動桿菌屬歸屬于奈瑟菌科，臨床上分離出來的絕大多數為鮑曼不動桿菌。 三、不動桿菌屬129

一、生物學性狀1、形態與染色革蘭陰性球桿菌，常呈雙排列。無芽孢，無鞭毛，有莢膜。2、培養特性專性需氧，營養要求不高。在普通培養基和麥康凱培養基上。3、生化反應觸酶陽性，O/F為氧化型，氧化酶陰性，動力，硝酸鹽還原試驗陰性（三陰）二、臨床意義本菌的分離率是僅次于銅綠假單胞菌而位居第二位的非發酵菌病三、微生物學檢驗 一、生物學性狀130其他革蘭陰性苛養菌其他革蘭陰性苛養菌131苛養菌是指對生長環境、營養要求較苛刻的細菌，在普通環境中不能或難以生長。體外培養需添加特殊因子或其他營養成分。常見苛養菌有嗜血桿菌屬、鮑特菌屬、軍團菌屬、布魯菌屬。苛養菌是指對生長環境、營養要求較苛刻的細菌，在普通環境中不能132一、流感嗜血桿菌本屬細菌因人工培養時必須加含X、V因子的血液而得名。代表菌為流感嗜血桿菌。一、流感嗜血桿菌133一、生物學性狀流感嗜血桿菌簡稱流感桿菌，革蘭陰性菌短小桿菌，無鞭毛、無芽孢、黏液型菌株有莢膜。需氧或兼性厭氧，生長時需要X因子、V因子或二者之一。在巧克力平板上，形成圓形、光滑、透明似露珠的小菌落。一、生物學性狀134當流感嗜血桿菌與金黃色葡萄球菌一起培養時，可見到金黃色葡萄球菌周圍的流感嗜血桿菌菌落較大，而遠離葡萄球菌的流感嗜血桿菌菌落較小，這種現象稱為衛星現象。這是因為葡萄球菌能合成Ⅴ因子釋放于培養基中，從而促進流感嗜血桿菌的生長。這一現象有助于對流感嗜血桿菌的鑒定。當流感嗜血桿菌與金黃色葡萄球菌一起培養時，可見到金135二、臨床意義本菌主要寄生在人的鼻咽眼及陰道粘膜中，人是唯一的傳染源和帶菌者。三、微生物學檢查1、標本采集2、檢驗方法3、鑒定二、臨床意義136二、鮑特菌屬本屬細菌以百日咳鮑特菌為代表菌。（一）生物學性狀革蘭陰性球桿菌，無鞭毛、無芽孢，光滑型菌株有莢膜。專性需氧，營養要求很高，常用鮑-金培養基進行分離培養。新分離的菌株為光滑型，稱I相菌，具有菌體和表面抗原。（二）臨床意義百日咳外毒素是百日咳的主要毒力因子。二、鮑特菌屬137三、軍團菌屬本屬細菌主要致病菌為嗜肺軍團菌。（一）生物學性狀常用鍍銀染色和吉姆薩染色法（二）臨床意義致病物質主要為菌毛、毒素和多種酶類嗜肺軍團菌為胞內寄生菌，細胞免疫在抗感染中其主要作用。四、布魯菌屬本屬細菌主要致病物質為內毒素、莢膜、侵襲性的酶。主要引起布魯菌病。以細胞免疫為主。三、軍團菌屬138

五、彎曲菌屬對人類致病的主要為空腸彎曲菌和胎兒彎曲菌。前者是人類腹瀉最常見的病原菌之一，后者在免疫功能低下時可引起敗血癥、腦膜炎。

139一、生物學特性（1）為革蘭氏陰性、細長、螺旋形或海鷗展翅狀、S形的彎曲桿菌。陳舊培養物可呈球形或長絲狀。一端或兩端具有單鞭毛，運動活潑，有時呈螺旋狀運動。一端單鞭毛多見于胎兒亞種，兩端單鞭毛多見于空腸彎曲菌，無芽孢、無莢膜。（2）微需氧菌，初次分離時需在含5%O2、85%N2、10%CO2氣體環境中生長，傳代培養時能在10%CO2環境中生長。一、生物學特性140（3）營養要求高，在普通培養基上不能生長，需加血液、血清。（4）該菌屬生化反應不活潑。不分解糖類、不液化明膠、不分解尿素，V-P和甲基紅試驗均陰性。氧化酶均為陽性，大多數彎曲菌還能還原硝酸鹽，觸酶試驗為陽性，空腸彎曲菌馬尿酸水解試驗陽性。（5）耐寒，在4℃冰箱或水中可存活4周。（3）營養要求高，在普通培養基上不能生長，需加血液、血清。141二、臨床意義主要通過食物和水傳播，引起人類腸道感染和各種腸道外感染。該菌屬中的空腸彎曲菌是引發散發性細菌性腸炎的最常見菌種之一，胎兒彎曲菌主要引起腸道外感染，其中胎兒亞種為主要的人類致病菌。三、微生物學檢驗二、臨床意義142六、螺桿菌屬※對人類致病的主要為幽門螺桿菌（Hp）※在胃黏膜層中呈魚群樣排列。※營養要求高，以布氏瓊脂為基礎培養基，需加用適量全血或胎牛血清作為補充物才能生長。※快速脲酶強陽性，是鑒定的重要依據。※幽門螺桿菌的傳播途徑主要是消化道，幽門螺桿局的感染可能與胃癌有關六、螺桿菌屬143Thankyou!Thankyou!144臨床意義（一）腸道外感染除志賀菌外，多數腸桿菌科細菌均可引起腸道外感染，且往往為獲得性的感染鼠疫耶爾森菌可引起自然疫源烈性傳染病鼠疫，傷寒沙門菌可經糞口傳播引起血流感染（二）腸道內感染是人和動物腸道感染的重要病原菌。比較明確的腸道病原菌有埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬和耶爾森菌屬等臨床意義（一）腸道外感染145二、臨床意義1.致病因素1）侵襲力：K抗原和菌毛與侵襲力有關。K抗原有抗吞噬作用，菌毛有黏附作用2）內毒素：細胞壁上的脂多糖（LPS）3）腸毒素：大腸埃希菌可產生兩種腸毒素：一種是不耐熱腸毒素（LT）；另一種是耐熱腸毒素（ST）二、臨床意義1.致病因素146一、生物學特性2.培養特性※兼性厭氧，對營養的要求不高，在普通營養瓊脂平板上生長的菌落為半透明、S型菌落，可出現粗糙型的菌落（S-R）變異。※在腸道選擇性培養基上因不發酵乳糖，菌落透明或半透明，有些能產生硫化氫的菌株，在SS瓊脂平板上可形成中心黑色的菌落一、生物學特性2.培養特性147一、生物學特性3.生化反應發酵葡萄糖產酸不產氣，不發酵乳糖。KIA：KA-；MIU：--/+-；IMViC：-/++--一、生物學特性3.生化反應KIA：KA-；MIU：--/+-148鼠疫耶爾森菌分解葡萄糖產酸不產氣，對大多數糖不分解；KIA：KA--；MIU：---；IMViC：--+-；賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸：---；不液化明膠；當穿刺培養時，培養物表面成膜狀，細菌沿穿刺線呈縱樹狀生長。鼠疫耶爾森菌分解葡萄糖產酸不產氣，對大多數糖不分解；KIA：1491、形態與染色本屬細菌為革蘭陰性桿菌，有周身鞭毛、無芽孢、無莢膜2、培養特性兼性厭氧，營養要求不高，在MAC、EBME、SS上為無色透明或紅色。弗勞地枸櫞酸桿菌可產生硫化氫，在SS瓊脂上形成有黑色中心的菌落。本菌屬的部分生化特性和抗原結構（O抗原）與沙門菌屬相似，應注意鑒別1、形態與染色本屬細菌為革蘭陰性桿菌，有周身鞭毛、無芽1502、培養特性需氧或兼性厭氧菌，營養要求不高，最適NaCL濃度為3.5%，在無鹽培養基上不生長。在堿性蛋白胨水中，經35℃培養6-9h形成菌膜。※在3.5%NaCL瓊脂平板上，呈蔓延生長，菌落周圍不整齊，凸起，光滑濕潤，不透明，※在TCBS上，不發酵蔗糖，菌落綠色（與霍亂弧菌相區別）。※在羊血瓊脂平板上，形成圓形、凸起，光滑濕潤，灰白色菌落，有β溶血。※在SS平板上，蠟滴狀，不易挑起，挑起有黏絲狀2、培養特性需氧或兼性厭氧菌，營養要求不高，最適NaC151（3）營養要求高，在普通培養基上不能生長，需加血液、血清。（4）該菌屬生化反應不活潑。不分解糖類、不液化明膠、不分解尿素，V-P和甲基紅試驗均陰性。氧化酶均為陽性，大多數彎曲菌還能還原硝酸鹽，觸酶試驗為陽性，空腸彎曲菌馬尿酸水解試驗陽性。（5）耐寒，在4℃冰箱或水中可存活4周。（3）營養要求高，在普通培養基上不能生長，需加血液、血清。152目錄一、腸桿菌科二、弧菌科三、非發酵革蘭陰性桿菌四、其他革蘭陰性苛養菌目錄一、腸桿菌科153腸桿菌科革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗標準課件154第一節概述革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗標準課件155腸桿菌科（Enterobacteriaceae）細菌是一大群形態、生物學性狀相似，需氧或兼性厭氧的革蘭陰性桿菌或球桿菌在自然界中廣泛分布，可棲生在人和動物的腸道內，多數為條件致病菌，少數為致病菌致病菌：沙門菌、志賀菌、耶爾森菌等條件致病菌：埃希菌、克雷伯菌、枸櫞酸桿菌、腸桿屬菌、沙雷菌、變形桿菌等與醫學的關系分類腸桿菌科（Enterobacteriaceae）細菌是一大群1561）形態與染色革蘭陰性桿狀或球桿狀細菌，無芽孢，多數有鞭毛，能運動，少數細菌有莢膜或包膜，有致病性的菌株多數有菌毛共同特性1）形態與染色革蘭陰性桿狀或球桿狀細菌，無芽孢，多1572）培養特性需氧或兼性厭氧，營養要求不高，在普通培養基如血瓊脂和麥康凱培養基上容易生長，大部分菌屬在22~35℃生長良好大腸埃希菌菌落特征（血平板）大腸埃希菌菌落特征（MAC）2）培養特性需氧或兼性厭氧，營養要求不高，在普通培養158SS培養基（沙門志賀培養基）乳糖、中性紅指示劑、膽鹽、煌綠等抑制劑強選擇培養基大腸埃希菌產酸桃紅色乳糖發酵菌落傷寒沙門菌無色乳糖不發酵菌落膽鹽、煌綠：抑制大腸埃希菌及G+菌，提高腸道致病菌檢出率乳糖發酵中性紅呈紅色乳糖不發酵SS培養基（沙門志賀培養基）強選擇培養基大腸埃希菌159EMB（伊紅美藍培養基），乳糖、伊紅、美蘭弱選擇培養基大腸埃希菌（非致病菌）乳糖發酵產酸伊紅結合美藍形成紫黑色金屬光澤化合物有色的乳糖發酵菌落傷寒沙門菌等（致病菌）乳糖不發酵伊紅美藍不能結合無色的乳糖不發酵菌落EMB（伊紅美藍培養基），乳糖、伊紅、美蘭弱選擇培養基大腸埃1603)生化反應

非常活潑。發酵葡萄糖（產酸或產酸產氣）、觸酶陽性、氧化酶陰性、硝酸鹽還原陽性4）抗原結構：O抗原菌體抗原H抗原菌毛抗原表面抗原3)生化反應非常活潑。發酵葡萄糖（產酸或產酸產氣）、1615）變異性多樣。如S-R變異、H-O變異，生化反應變異、耐藥性變異6）抵抗力不強。加熱60℃30min既被殺死，對干燥、化學消毒劑敏感、耐低溫、耐膽鹽、煌綠（可抑制非致病菌）5）變異性多樣。如S-R變異、H-O變異，生化反應變異162臨床意義（一）腸道外感染除志賀菌外，多數腸桿菌科細菌均可引起腸道外感染，且往往為獲得性的感染鼠疫耶爾森菌可引起自然疫源烈性傳染病鼠疫，傷寒沙門菌可經糞口傳播引起血流感染（二）腸道內感染是人和動物腸道感染的重要病原菌。比較明確的腸道病原菌有埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬和耶爾森菌屬等臨床意義（一）腸道外感染163微生物檢驗KIA（AA＋－）MIU（＋＋－）IMVC:＋＋――微生物檢驗KIA（AA＋－）MIU（＋＋－）IMVC:＋＋―164第二節埃希菌屬第二節埃希菌屬165埃希菌屬主要有5個種，1）大腸埃希菌臨床最常見2）蟑螂埃希菌3）弗格森埃希菌4）赫爾曼埃希菌5）傷口埃希菌革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌檢驗標準課件166一、生物學特性形態與染色為革蘭陰性短桿狀，多數有周鞭毛和菌毛培養特性兼性厭氧，營養要求不高，在血瓊脂平板上某些菌株可產生β-溶血，在SS瓊脂平板上少數菌株可發酵乳糖，形成粉紅色菌落。在麥康凱平板上菌落呈粉紅色。在伊紅美藍瓊脂平板上呈有金屬光澤的紫黑色菌落。在液體培養基中，呈渾濁生長一、生物學特性形態與染色為革蘭陰性短桿狀，多數有周鞭毛和167一、生物學特性生化反應特征：發酵多種糖，產酸、產氣KIA產酸/