電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網址：本產品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質檢測技術有限公司第第頁吲哚乙酸氧化酶活性檢測試劑盒說明書注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。貨號：UPLC-MS-4306規(guī)格：100T/48S

微量法產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體60mL×1瓶2-8℃保存試劑一粉劑×1瓶2-8℃保存試劑二粉劑×2瓶2-8℃保存試劑三粉劑×1瓶-20℃保存試劑四液體30mL×1瓶2-8℃保存試劑五粉劑×1瓶2-8℃保存標準品粉劑×1支-20℃保存溶液的配制：1、試劑一：臨用前加入5mL蒸餾水備用，2-8℃保存兩周。213mL蒸餾水備用，2-8℃保存一周（1100T1瓶粉劑。、5.71L50%乙醇（乙醇V：H2O（V）1：1）20℃周，避免反復凍融。4、試劑五：臨用前加入15mL試劑四溶解備用，2-8℃保存兩周。、10g1.14mL50%VHV1150μo/mL的標準溶液，-20℃分裝保存兩周，避免反復凍融。產品說明：IAA氧化酶能調節(jié)植物體內吲哚乙酸的的水平，從而影響植物的生長。IAA在無機酸條件下與FeCl3作用生成紅色產物，在530nm下有最大吸收峰。酶活力的大小可用消耗IAA的速率表示。IAA

IndoleaceticAcidOxidase(IAAO)

3-MethyleneoxindoleIAA+FeCl3 RedChelate(530nm)注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。需自備的儀器和用品：可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋、超聲破碎儀、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、乙醇、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）10.1g1mL12000g4℃15min25001mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（200W3s10s30次。12000g，4℃15min清，置冰上待測。二、測定步驟1、可見分光光度計/酶標儀預熱30min，波長調至530nm，分光光度計蒸餾水調零。2、標準液的稀釋：將標準溶液用蒸餾水稀釋為0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125μmol/mL的標準液。3、標準液稀釋可參考下表：序號稀釋前濃度（μmol/mL）標準液體積（μL）蒸餾水體積（μL）稀釋后濃度（μmol/mL）15040960222803200.430.42002000.240.22002000.150.12002000.0560.052002000.02570.0252002000.0125備注：實驗中每個標準管需80μL標準溶液。4、加樣表：試劑名稱（μL）測定管對照管標準管空白管提取液4040--試劑一88--試劑二88--試劑三1616--樣本8上述試劑混勻后置于30℃水浴鍋中準確反應30min--試劑四80808080樣本-8--標準品--80-蒸餾水8010000g常溫離心10min，取上清液待測--上清液130130--標準品混合液130130試劑五70707070置于置于30℃水浴鍋中避光放置530nmAAAA計算ΔA測定=A對照-A標準=A標準-A測1-2次。三、吲哚乙酸氧化酶酶活計算1、標準曲線的繪制：為xΔA標準為yΔA帶入方程中計算得到樣本濃度（x，μmol/mL）。2、吲哚乙酸氧化酶活力計算：按蛋白濃度計算：單位的定義：每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘消耗1nmolIAA的酶量定義為一個酶活性單位。IAA氧化酶酶活（U/mgprot）=x×V酶促×1000÷(V樣×Cpr)÷T=333×x÷Cpr按樣本質量計算：單位的定義：每g組織在反應體系中每分鐘消耗1nmolIAA的酶量定義為一個酶活性單位。IAA氧化酶酶活（U/g質量）=x×V酶促×1000÷(W÷V提取×V樣)÷T=333×x÷W按細胞或細菌數量計算：單位的定義：每104個細胞或細菌在反應體系中每分鐘消耗1nmolIAA的酶量定義為一個酶活性單位。IAA氧化酶酶活（U/104cell）=x×V酶促×1000÷(500÷V提取×V樣)÷T=0.667×xCpr1mL；500：500注意事項：1、當ΔA大于0.4或者A對