電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網址：本產品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質檢測技術有限公司第第頁糖原合成酶（GCS）活性檢測試劑盒說明書注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。貨號：UPLC-MS-4178規格：100T/96S

微量法產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系工作人員。試劑名稱規格保存條件提取液液體110mL×1瓶2-8℃保存試劑一液體25mL×1瓶2-8℃保存試劑二液體7.5mL×1瓶2-8℃保存試劑三液體20μL×1支2-8℃保存試劑四粉劑×2支-20℃保存試劑五粉劑×2支-20℃保存試劑六液體45μL×1支2-8℃保存試劑七粉劑×2支-20℃保存試劑八粉劑×2瓶2-8℃保存溶液的配制：111.5mL試劑一充分溶解，-20℃4周，避免反復凍融；211.5mL試劑一充分溶解，-20℃4周，避免反復凍融；310μL7mL1.5mL1.5.mL試劑五，充分混合（66T），現用現配，也可根據樣本量按比例配制；4、試劑八的配制：12.5mL1支試劑七溶解，可-20℃4避免反復凍融；14μL1.46mL上述（1）中溶液，充分混合（36T），現用現配，也可根據樣本量按比例配制。產品說明：糖原合成酶（Glycogensynthase,GCS）將UDPG的糖基加到原有糖原或是糖原蛋白的非還原端，以α-1,4糖苷鍵連接。GCS是動物機體糖原合成過程的限速酶，同時也是胰島素作用的主要靶酶，在糖代謝及維持血糖相對穩定的過程中有著重要作用。GCS催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UDP，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH生成NAD+，在340nm下測定NADH的下降速率，即可反映GCS活性。UDPG+[Glucose]nUDP+PEP

GCS PK

[Glucose]n+1+UDPUTP+PyruvatePyruvate+NADH(340nm)+H+ LDH NAD++Lacticacid注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。需自備的儀器和用品：紫外分光光度計//96孔UV研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）提取液體積(mL)1:5~10的比例（0.1g1mL提取液）行冰浴勻漿，然后，8000g，4℃10min，取上清置于冰上待測。（104個）:提取液體積（mL）（5001mL提取液（373min）；8000g，4℃10min，取上清置于冰上待測。血清等液體：直接檢測。（若溶液渾濁則離心后取上清進行測定）二、測定步驟1、紫外分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長至340nm，紫外分光光度計蒸餾水調零。2、臨用前將工作液與試劑八置于37℃水浴鍋中預熱5min（工作液用多少預熱多少）。3、操作表：在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入下列試劑：試劑名稱（μL）空白管測定管樣本10蒸餾水10試劑八4040工作液150150340nm10sA11min10sA=A1-A2A=A1-A2ΔA-ΔA（空1-2次）。三、GCS酶活計算A、按微量石英比色皿計算：按蛋白濃度計算酶活定義：每毫克蛋白每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。GCS酶活（U/mgprot）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷（V樣×Cpr）÷T=3215.4×ΔA÷Cpr按樣本質量計算酶活定義：每克樣本每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。GCS酶活（U/g質量）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷（V樣×W÷V樣總）÷T=3215.4×ΔA÷W按照細菌或細胞數量計算酶活定義：每104個細胞每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。GCS酶活（U/104cell）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷（V樣÷V樣總×細胞數量（萬個））÷T=3215.4×ΔA÷細胞數量（萬個）按液體體積計算酶活定義：每毫升液體每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。GCS酶活（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷V樣÷T=3215.4×ΔA摩爾消光系數，6.22×1031mol=109nmol；Vmg/mL；W質量，g；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應