實驗四

血凝及血凝抑制實驗

實驗目的1.了解血凝及血凝抑制實驗原理2.掌握血凝及血凝抑制試驗方法3.掌握基本操作技術,了解其實用價值實驗原理凝集試驗：顆粒性抗原與相應抗體結合后發生凝集的血清學試驗?？乖c抗體復合物在電解質作用下，經過一定時間，形成肉眼可見的凝集團塊。試驗可在玻板上進行，稱為玻板凝集試驗，可用已知抗原檢查未知抗體，或用于已知抗體診斷未知抗原，；亦可在試管中進行，稱試管凝集試驗，主要用于抗血清效價測定。血凝試驗原理血凝素（hemagglutininHA）：（HA，從H1—H15),呈柱狀由病毒基因編碼的糖蛋白刺突。功能：①吸附細胞：與細胞上受體結合,使病毒侵入細胞②凝集多種動物的紅細胞（血凝試驗）：HA能與人或其它動物多種紅細胞表面N－乙酰神經氨酸酶受體結合引起紅細胞凝集③具抗原性：其抗體能中和病毒---中和抗體：抑制血凝（血凝抑制試驗）血凝素（HA）柱狀流感病毒結構模式圖血凝原理血凝抑制原理血凝抑制試驗原理

病毒引起的血凝現象能被相應的抗血凝素抗體所抑制，即抗體與病毒結合后，血凝素無法吸附于紅細胞表面的受體上，用免疫血清阻止紅細胞凝集的現象，稱為血凝抑制．

實驗材料器材：U型或V型微量反應板、微量移液器、槍頭試劑：1%雞紅細胞、NDIV血凝素、NDIV抗血清、生理鹽水血凝試驗結果判定效價判定：凝集特別顯著：“＋＋＋＋”凝集現象次之：“＋＋＋”凝集清楚可見：“＋＋”稍顯凝集者：“＋”血凝效價：呈“＋＋”凝集時的最高稀釋度。此時的稀釋度即為1個血凝單位。血凝抑制1.取96孔V型反應板1塊置于水平實驗臺上，在第1排1-10孔內加入25ul生理鹽水，第11孔不加。第12孔加25ul生理鹽水。2.在第1孔內加入被檢血清25ul，混勻后吸出25ul加入第2孔內，再混勻后吸出25ul加入第3孔內，依次類推至第10孔時棄掉25ul。第12孔不加作陰性對照孔。3.在1-12孔內均加入“四價”血凝素25ul，震蕩后，室溫靜止作用5min。4.在1-12孔內均加入1%的雞紅細胞懸液25ul，震蕩，室溫感作15-30min，每5min觀察一次結果。5.觀測結果，記錄實驗數據．血凝抑制試驗結果判定測定孔RBC沉于孔底中心，呈紐扣狀。(+)凝集（-）病毒對照孔：凝集RBC對照孔：無自凝血凝抑制試驗效價：呈完全血凝抑制的最高血清稀釋度。

思考問題1.計算出病毒的凝集價、血凝抑制價2.血凝試驗中為什么要加補充液？3.為什么加病毒液和紅細胞懸液時要反向加？4.病毒凝集紅細胞是不是一種特異的抗原體反應?血凝抑制實驗是不是特異的抗原抗體反應?為什么?孔號1234567891011(+)12（-)HA稀釋度248163264128256、、、、棄生理鹽25252525252525252525x25血凝素2525252525252525252525血凝素x生理鹽水2525252525252525252525251%雞紅細胞252525252525252525252525結果預測++++++++++++++++++++++++++--++++_孔號1234567891011(+)12（-)HI稀釋度248163264128256、、、、棄生理鹽25252525252525252525X25待檢血清2525252525252525252525x4HA血凝素25252525252525252525