螺傳寄生蟲病及螺類感染檢測寄生蟲病研究所陸紹紅ZHEJIANGACADEMYOFMEDICALSCIENCES

創新服務螺傳寄生蟲病血吸蟲病廣州管圓線蟲病華支睪吸蟲病并殖吸蟲病布氏姜片蟲病……螺類感染檢測病原學檢測：分子檢測：PCRLAMP一、螺傳寄生蟲病一、螺傳寄生蟲病吸蟲主要特點蟲卵必須入水才能發育；生活史復雜，第一中間宿主多為淡水螺。成蟲背腹扁平，具口、腹吸盤，寄生于人及哺乳動物體內。囊蚴為感染期，經口感染。吸蟲基本發育過程：卵→多種幼蟲（毛蚴→胞蚴≡﹥雷蚴≡﹥尾蚴→囊蚴）→成蟲。毛蚴胞蚴雷蚴尾蚴囊蚴流行現狀：全球有76個國家和地區有血吸蟲的流行，在我國主要分布在長江流域及以南12個省/自治區/直轄市，湖沼地區是我國目前最主要的血吸蟲病流行區。

2008年底,衛生部、農業部等聯合組織的全國血吸蟲病疫情現狀考評結果顯示,全國454個血吸蟲病流行縣(市、區)人畜血吸蟲感染率均已降至5%以下,全部達到疫情控制標準。2010年全年急感報告病例數在50萬例以下，目前病人總數已降至40萬以下。防治策略：以傳染源控制為主的綜合防治流行因素：傳染源：病人、病牛等。傳播環節：含蟲卵的糞便污染水源；水體中的釘螺；接觸含尾蚴的疫水。治療藥物：吡喹酮、青蒿素、蒿甲醚六種寄生于人體的血吸蟲

日本血吸蟲（S．japonicum）曼氏血吸蟲（S．mansoni）埃及血吸蟲（S．haematobium）間插血吸蟲（S．intercalatum）湄公血吸蟲（S．mekongi）馬來血吸蟲（S．malayensis）日本血吸蟲曼氏血吸蟲埃及血吸蟲間插血吸蟲湄公血吸蟲血吸蟲中間宿主—釘螺山丘型釘螺水網型釘螺湖沼型釘螺擬釘螺細鉆螺方格短溝卷煙管螺華支睪吸蟲Clonorchissinensis病原：成蟲寄生在人體的肝膽管內，又稱肝吸蟲。病變：主要表現為肝受損，膽管呈腺瘤樣病變，出現膽管炎、膽囊炎或阻塞性黃疸。嚴重時在門脈區出現纖維組織增生和肝細胞的萎縮變性，繼發肝硬化。分布：主要分布在亞洲，我國有25個省、市、自治區有不同程度流行。其中，廣東省感染率相對較高。感染方式：食入生的或半生熟的含活囊蚴的淡水魚、蝦而感染；不良衛生習慣，如抓魚后不洗手或用口叼魚；盛過生魚的器皿盛熟食物品等。治療：吡喹酮、阿苯達唑

華支睪吸蟲生活史并殖吸蟲Paragonimus病原：世界報道有50多種，中國有32個種2個型，以衛氏并殖吸蟲為代表的人獸共患型和以斯氏貍殖吸蟲為代表的獸主人次型。分布：世界性分布，在我國27個省、市、自治區均有報道。

感染方式：以各種方式食入生或半生的含活囊蚴的溪蟹或蝲蛄等。臨床表現:

1、亞臨床型（隱性感染）

2、急性并殖吸蟲病，常表現為全身過敏反應、高熱、胸腹痛、氣促、肝大并伴有蕁麻疹等。3、胸肺型并殖吸蟲病最典型臨床表現：咳嗽、胸痛、咯血、痰帶腥味

并殖吸蟲致病肺部蟲囊切片肺吸蟲病人常誤診為肺腫瘤

并殖吸蟲中間宿主放逸短溝蜷方格短溝蜷川蜷螺布氏姜片吸蟲生活史成蟲童蟲蟲卵毛蚴胞蚴兩代雷蚴尾蚴囊蚴在人或豬體內在水中（小腸內）扁卷螺水生植物隨糞排出經口食入布氏姜片吸蟲中間宿主——扁卷螺

廣州管圓線蟲

AngiostrongyluscantonesisFemaleadultMaleadult流行：主要流行于東南亞、太平洋島嶼、日本和美國等30多個國家和地區；我國的自然疫源地主要分布在浙江、福建、江西、湖南、廣東、廣西、海南和臺灣地區，多數呈散在分布。目前全世界已有3000多病例報道，2006年在北京市發生的廣州管圓線蟲病暴發中，從6月24日發現首例病人至9月24日，北京市各醫院共確診160例病人，其中138系因食涼拌福壽螺肉所致，此次本病暴發成為北京市的重大突發公共衛生事件。我國已有9個省（自治區/直轄市）報告了廣州管圓線蟲病例，2008年底共計報告380多例，其中90%發生于群體感染。中間宿主：56余種，在我國發現的要有褐云瑪瑙螺、福壽螺和銅銹環棱螺。2006~2007年全國廣州管圓線蟲病自然疫源地調查發現，福壽螺、褐云瑪瑙螺和蛞蝓的平均感染率分別為6.8%、13.4%和6.5%。傳染源：最主要的是鼠類，以褐家鼠和黑家鼠較為普遍。經口感染：1）生食或半生生食螺類、魚、蝦、蟹等：爆炒或麻辣福壽螺、涼拌螺肉等為主要原因；2）幼蟲污染手或食物：用螺類喂養家禽或加工螺類的人員；3）生食蔬菜：陸地蝸牛或蛞蝓爬過蔬菜時含幼蟲的分泌物可能粘在蔬菜上；4）飲生水：含幼蟲的中間宿主分泌物也可排入水中。廣州管圓線蟲

Angiostrongyluscantonesis廣州管圓線蟲生活史螺內寄生蟲的病原學檢測

壓片法：逸蚴法：將單只釘螺置于指形試管內，加脫氯水至試管口，用尼龍紗蓋好管口。置20～25℃、光照條件下，4～8h后用放大鏡或解剖鏡在燈光下觀察指管水面有無血吸蟲尾蚴，必要時可用白金耳取表面水滴于載玻片，在鏡下觀察。病理切片法：消化法：將螺體軟組織剪碎，按1g組織加25ml消化液（7g胃蛋白酶，7mlHCl，1LddH2O）的比例置于37℃孵育1h，適當孔徑的分子篩過濾后鏡檢。組織勻漿鏡檢法：螺肺囊鏡檢法：將福壽螺壓碎剔殼，沿外套膜的左側至后側的基部剪開，將外套膜向右翻開取外套膜的后半部分的約為24mm×l6mm大小的橢圓形囊狀結構“肺囊”。然后剪開囊袋(雙層)兩邊沿，翻開囊袋呈單層后鋪平．光鏡觀察幼蟲結節（0.07mm*0.13mm~0.24mm*0.34mm大小，圓形或橢圓形的白色結節）。若囊袋層壁較厚，盡量拉平，或用解剖針撥動等手段觀察囊壁組織的幼蟲結節。福壽螺肺囊鏡檢法幼蟲結節1.KumagaiT,Furushima-ShimogawaraR,OhmaeH,WangTP,LuS,ChenR,WenL,OhtaN:DetectionofearlyandsingleinfectionsofSchistosomajaponicumintheintermediatehostsnail,Oncomelaniahupensis,byPCRandloop-mediatedisothermalamplificationassay.

AmJTropMedHyg2010,83:542-548.2.ChenJH,WenLY,ZhangXZ,ZhangJF,YuLL,HongLD:[DevelopmentofaPCRassayfordetectingSchistosomajaponicum-infectedOncomelaniahupensis].

ZhongguoJiShengChongXueYuJiShengChongBingZaZhi2006,24:204-207.3.VidigalTH,MagalhaesKG,KissingerJC,CaldeiraRL,SimpsonAJ,CarvalhoOS:AMultiplex-PCRapproachtoidentificationoftheBrazilianintermediatehostsofSchistosomamansoni.

MemInstOswaldoCruz2002,97Suppl1:95-97. 4.WeiFR,LiuHX,LvS,HuL,ZhangY:[MultiplexPCRassayforthedetectionofAngiostrongyluscantonensislarvaeinPomaceacanaliculata].

ZhongguoJiShengChongXueYuJiShengChongBingZaZhi2010,28:355-358.5.魏紀玲,周衛川,邵碧英,余書生,王壽昆,陳文炳,陳壽鈴:PCR檢測螺類感染廣州管圓線蟲方法的建立與應用.

中國人獸共患病學報2008,24:1136-1140.螺內廣州管圓線蟲、血吸蟲的PCR檢測野外采集小管福壽螺172只，肺檢法檢測后，進行多重PCR擴增。多重PCR的敏感性為93.8%(45／48)，特異性為80.6％(100／124)。多重PCR法的陽性檢出率為40.1％(69／172)；肺檢法的陽性檢出率為27.9％(48／172)，差異具有統計學意義。小管福壽螺中廣州管圓線蟲III期幼蟲的PCR檢測Loop-MediatedIsothermalAmplification（LAMP）methodTargetgene(DNAorRNA)Primers（FIP,F3,BIP,B3）DNAPolymerasewithstranddisplacementactivitydNTPsBuffersolutionRTase(forRNA)65℃,15–60min.DetectionSimpleRapid(highefficiency)Specific(highspecificity)CosteffectiveAugust,2011PapersaboutLAMPintheworldAugust,2011LAMPdevelopedinparasitesstudy螺內廣州管圓線蟲、血吸蟲的LAMP檢測1. KumagaiT,Furushima-ShimogawaraR,OhmaeH,WangTP,LuS,ChenR,WenL,OhtaN:DetectionofearlyandsingleinfectionsofSchistosomajaponicumintheintermediatehostsnail,Oncomelaniahupensis,byPCRandloop-mediatedisothermalamplification(LAMP)assay.

AmJTropMedHyg2010,83:542-548.2. ChenR,TongQ,ZhangY,LouD,KongQ,LvS,ZhuoM,WenL,LuS:

Loop-mediatedisothermalamplification:rapiddetectionofAngiostrongyluscantonensisinfectioninPomaceacanaliculata.

ParasitVectors2011,4:204.3.LiuCY,SongHQ,ZhangRL,ChenMX,XuMJ,AiL,ChenXG,ZhanXM,LiangSH,YuanZG,etal:SpecificdetectionofAngiostrongyluscantonensisinthesnailAchatinafulicausingaloop-mediatedisothermalamplification(LAMP)assay.

MolCellProbes2011,25:164-167. DesignofprimersfortheLAMPmethodTarget

DNA5'3'5'3'FIPPrimerF25'3'F1cF3PrimerF1cF2cF3cB1B2B3B1cB2cB3cF1F2F35'F33'BIPPrimerB3Primer3'B2B1c5'5'3'B3TargetDNA:Sj28SrDNA

Primers:FIP、BIP、F3、B3ProtocaloftheLAMPmethodDetection

DNApurification:

AddNaOH(50mM)Crushsnails,boiledat95℃for30minCentrifugeat10000rpmfor5minandtake50ulsupernatantAdd50ul1MTris-HClpH8.0Mixwithvotexandspindown

2×ReactionBuffer10μlPrimer:FIP32pmolBIP32pmolB38pmolF38pmolBstDNApolymerase0.8μlIntercalatingdye0.8μlTotal

20μl65℃,60minDetectionResultofSensit