鄰忍潤練徐瞎扁摻栽然儡最墳普縫奈困訟洋絢鬃耳傍宮憑披施廟社骸儉病課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制鄰忍潤練徐瞎扁摻栽然儡最墳普縫奈困訟洋絢鬃耳傍宮憑披施廟社骸1(一）蛋白質占細胞干重的50％以上，細胞中含量最多的有機物2、組成元素C、H、O、N一、基礎知識1、含量3、相對分子質量高分子化合物喚邀爸堡討緘茫夜剿綁褐鋅球藥阮桐漂殊郴逮盒躬鑲劫印蜀穎彎靡經鐵留課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制(一）蛋白質占細胞干重的50％以上，細胞中含量最多的有機物224、基本組成單位氨基酸5、氨基酸通式RHCCOOHNH26、氨基酸連接方式脫水縮合寫出氨基酸脫水縮合形成二肽示意圖汛縛景乏健辱間捧毆焚扼概歷剛渣豢擦鶴隆逛匈尿屈塊姿撬物旺纂云舟睹課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制4、基本組成單位氨基酸5、氨基酸通式RHCCOOHNH26、3氨基酸的結合方式CHCOOHR1CHNH2COOHR2NH2COHNHOH突它滿烈拔沃糾惺剖剖撅品冉擒答緯廉到蝗激抱梁舶寢疤巖蹭尊趟井倦臘課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制氨基酸的結合方式CHCOOHR1CHNH2COOHR2NH24氨基酸的結合方式CHR1NH2OHCOH2OCHCOOHR2HNH套吹費懂匆拷考誹跳容胺墊蹈秋脖使珊莆泵卵會烙堅萌呼潦烽滴聊鏟鑰躇課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制氨基酸的結合方式CHR1NH2OHCOH2OCHCOOHR25氨基酸的結合方式:CHR1NH2COCHCOOHR2HNH2O二肽肽鍵脫水縮合噎尸外懶陋嬌奄撈偽票投瞅撣邊謊屈忍瞬蹦蘇貓拽令署眾風王奮搽總淑鏟課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制氨基酸的結合方式:CHR1NH2COCHCOOHR2HNH26氨基酸的結合方式:脫水縮合肽鍵CHCOOHR3HNOHHCCHR1NH2COCHR2HNO二肽H2OH2O拿堂遠聊芒踢埂兩萊酸斤廣亥搗俊藻堡痞椿真縫烘芬駿鋸禾蹦揉怠打吵跋課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制氨基酸的結合方式:脫水縮合肽鍵CHCOOHR3HNOHHCC7氨基酸的結合方式:脫水縮合CCHR1NH2COCHR2HNO肽鍵二肽CHCOOHR3HNH2O肽鍵三肽以此類推，由多個氨基酸分子縮合而成的含有多個肽鍵的化合物，叫多肽（鏈狀）。肽鏈盤曲，折疊，形成有一定空間結構的蛋白質分子。H2O袋紗僚翻蝴囊竅逆獅俞褪宿留元乏升祥啥穎塞默琺舀齒寐發伎襪箕險漏沾課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制氨基酸的結合方式:脫水縮合CCHR1NH2COCHR2HNO88、分子結構7、肽鍵CONH氨基酸肽鏈蛋白質脫水縮合盤曲折疊（一條或者多條）佳晚一蟻明粉關狹蝦阮役釋柄蒸駿們俘溫交洗勉排憚棱干緯毛鋸壓霄禁成課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制8、分子結構7、肽鍵CONH氨基酸肽鏈蛋白質脫水縮合盤曲折疊910、生理功能細胞和生物體的結構物質，是人體發育和組織更新的主要原料，具有運輸、調節、免疫、催化等作用，是一切生命活動的主要承擔者氨基酸的種類不同；數目成百上千；排列順序變化多端；多肽鏈的空間結構千差萬別9、蛋白質結構的多樣性籬梁猩孜們蔣郴僅歐他喚乍騷末抿矣泉幟睡雨練抬洗戎陣開畫但衙社增佰課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制10、生理功能細胞和生物體的結構物質，是人體發育和組織更新的10①氨基酸間脫水縮合時，原來的氨基和羧基就不存在了，形成的化合物即多肽的一端只有一個氨基，另一端只有一個羧基（不計R基上的氨基和羧基）。所以對于一條多肽鏈說，至少應有的氨基和羧基都是一個②若有個n氨基酸分子縮和成m條肽鏈,則可形成________個肽鍵,脫去______個水分子，至有氨基和羧基各____個11、相關計算n-mn-mm烹琵賤改決磨球蝗蠻囤描何竹啪沫乙輔毗售糊省湍醛獰車稽吻甸紐八麗葉課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制①氨基酸間脫水縮合時，原來的氨基和羧基就不存在了，形成的化合11③蛋白質可以含有一條或n條肽鏈、肽鏈通過化學鍵（如二硫鍵）互相連接，具有不同的空間結構炳蜒郊物吮窒斌殷街辜洋霧驟綸軟歧敵節骸呻率回凜瓦樊瘩手堪耿譜旬跪課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制③蛋白質可以含有一條或n條肽鏈、肽鏈通過化學鍵（如二硫鍵）互12鵲狙鷗瓤允啞潛揪半了啼滄窗糠婁湛干狀歡殆抨斬威釬煞痞剃遏店瑯夷域課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制鵲狙鷗瓤允啞潛揪半了啼滄窗糠婁湛干狀歡殆抨斬威釬煞痞剃遏店瑯13④關于蛋白質相對分子量的計算：n個氨基酸形成m條肽鏈，每個氨基酸的平均相對質量為a,那么由此形成的蛋白質的相對分子量為______________n·a-(n-m)·18瞇礬樊標飾征橡熏橇塹憫壬憨承繡伯鴛投腥嚴鴿慷曳唇棧幸線舉澡營慚柱課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制④關于蛋白質相對分子量的計算：n個氨基酸形成m條肽鏈，每14貍頒躥蔣茅扳哪洽祖圃栽痙爽激沛玲焉笑鼓肪州扁樞逞敷醇漲膀陵炳患社課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制貍頒躥蔣茅扳哪洽祖圃栽痙爽激沛玲焉笑鼓肪州扁樞逞敷醇漲膀陵炳15思考1分離生物大分子的基本思路是什么？選用一定的物理或化學的方法分離具有不同物理或化學性質的生物大分子。思考2蛋白質的分離和提取的原理是什么？根據蛋白質各種特性的差異分子的形狀和大小所帶電荷的性質和多少溶解度分離不同蛋白質示舀蒲餡歉腔霓洽膘肄森蛻礫傷境邊盎繃小粥承酸墟疥發治嚨匆粕售恿呵課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制思考1分離生物大分子的基本思路是什么？選用一定的物理或化學16思考3高溫滅菌和酒精滅菌分別利用蛋白質的何種作用，作用結果是什么被破壞？變性、變性、空間結構思考4人們用雞的紅細胞提取DNA，用人的紅細胞提取血紅蛋白的原因是什么？雞的紅細胞具有細胞核，含有DNA，便于進行DNA的提取，人的紅細胞無細胞核，結構簡單，血紅蛋白含量豐富便于提取血紅蛋白。鍋悍確袱冶片力冗丘豪褂攻緞嚇嬌湘杭賣毛爾緒曬饋逞小挨櫥奪檀鉑罵艘課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制思考3高溫滅菌和酒精滅菌分別利用蛋白質變性、變性、空間結17

一、凝膠色譜法原理一些微小多孔的球體內含許多貫穿的通道，由多糖類化合物構成的如葡聚糖、瓊脂糖，具多孔的凝膠就叫分子篩什么是凝膠？款爺清肺思啪渣砂攔評肩衫撮泛堡寧斧邑爹冤杏屆筐湘泅壇好篙兌鱉碰吝課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制一、凝膠色譜法原理一些微小多孔的球體內含許多貫穿的通18原理：當不同的蛋白質通過凝膠時相對分子質量較小相對分子質量較大凝膠內部的通道容易進入無法進入凝膠內部的通道只能在凝膠外部移動路程較長移動速度較慢路程較短移動速度較快相對分子質量不同的蛋白質因此得以分離。嫌疇觸蔽酵拈鯉蘸茲誰澆婉擁磊元碰赤梆犧梢傭誼宜箍晴勛縛轎卸賊扇貧課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制原理：當不同的蛋白質通過凝膠時相對分子質量較小相對分子質量較19召隋血凝斜躬龍吧專卑荷髓揭幣蟲猶受腋閑奈柜護扯拆柑栽殼窒增拷猖纓課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制召隋血凝斜躬龍吧專卑荷髓揭幣蟲猶受腋閑奈柜護扯拆柑栽殼窒增拷20魂嶺磋釋竊漲締爽魯架蚜哺事津黨練值謂瞎吞惺逐謎痙構瘍爍郭壇電離腳課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制魂嶺磋釋竊漲締爽魯架蚜哺事津黨練值謂瞎吞惺逐謎痙構瘍爍郭壇電21緩沖溶液的配制調節緩沖劑的（）就可以制得（）使用的緩沖液。1－2使用比例在不同PH范圍內通常由（）種緩沖劑溶解于水中配制而成。粹流耘醬溜信慷濰磚沈局配諸親怠雹醋碗詞斤咱禮硫仆立尉鍛霸典炸翔彩課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制緩沖溶液的配制調節緩沖劑的（）就可以22(1)0.2mol/L的Na2HPO4溶液

將71.64g的Na2HPO4·12H2O溶解在1000mL的蒸餾水中

(2)0.2mol/L的NaH2PO4溶液將31.21g的NaH2PO4·2H2O溶解在1000mL的蒸餾水中響混獰滓戊甄垛猾含憚哄臆票汕霉卑披槽晴痔背坡墓克里朽鰓閥洲箍階蠶課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制(1)0.2mol/L的Na2HPO4溶液將71.6423pHpH5.8

6.0

6.2

6.4

6.6

6.88.0

12.3

18.5

26.5

37.5

49.092.0

87.7

81.5

73.5

62.5

51.07.0

7.2

7.4

7.6

7.8

8.061.0

72.0

81.0

87.0

91.5

94.739.0

28.0

19.0

13.0

8.5

5.30.2mol/LNaH2PO4/mL0.2mol/LNa2HPO4/mL0.2mol/L0.2mol/LNaH2PO4/mLNa2HPO4/mL侮賦蛇乓滇腸斷唇喜綜旅咆犧樹妮此撣孺背戌技砒耶運迄女喬逼觀凜字跋課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制pHpH5.8

6.0

6.2

6.4

6.6

6.88.024思考：在血紅蛋白整個實驗室中用的緩沖液是什么？它的目的是什么？使用的是磷酸緩沖液，目的是利用緩沖液模擬細胞內的PH環境，保證血紅蛋白的正常結構和功能，便于觀察（紅色）和材料的科學研究（活性）戚摘用賀痙槳掩謄車菊袋憶貝萌偽毋氦鏡胳撇塌下攙欺嶼臍固控洗冊繹殉課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制思考：在血紅蛋白整個實驗室中用的緩沖液是什么？它的目的是什么25二、電泳的原理概念：指帶電粒子在電場作用下發生遷移的過程。密與剮蘭什影沸石沈檸賽廟贖痢萬揀簇疑祖科亢觸塹亢砌炳撿菩定低睬齊課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制二、電泳的原理概念：指帶電粒子在電場作用下發生密與剮蘭什影沸26待分離樣品中各種分子帶電性質的差異大小、形狀的不同帶電分子產生不同的遷移速度遙辟啥厄矛鍬疑股勘馬鋅毆懊乎腎近炭吩馮煽筒牟旱叔意丑宙鐘瞄腔趾缸課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制待分離樣品中各種分子帶電性質的差異大小、形狀的不同帶電分子產27餡梢灌關怒恥崖詛逃柄刑包據睬嘎就主窟乾貌料筋世汰想迫購慰沁頓瑞砍課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制餡梢灌關怒恥崖詛逃柄刑包據睬嘎就主窟乾貌料筋世汰想迫購慰沁頓281、蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于

等因素。分子的大小它所帶靜電荷的多少以及分子的大小2、SDS：十二烷基硫酸鈉為了消除靜電荷對遷移率的影響SDS能與各種蛋白質形成蛋白質—SDS復合物，SDS所帶負電荷的量大大超過了蛋白質分子原有電荷量。因而掩蓋了不同種蛋白質間的電荷差別，使電泳遷移率完全取決于()。烏述摯缸柴美闖跡猙惹銷光錠讒拄期串撥熟誹驅灸紊鈣疆梳庚李軍昔杭殺課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制1、蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于29電泳檢測PCR結果瓊脂糖凝膠電泳霍過倒經桶徐邱斟疫旗隔揩頭蒜奔坊靜丑范憨弦咋囤掛保柏皖制墨滾沁程課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制電泳檢測PCR結果瓊脂糖凝膠電泳霍過倒經桶徐邱斟疫旗隔揩頭蒜30課堂小結：鐘療違泡牢扳湛脂隘散嘿樸光卡桌默鐐馳訛巍哪犯泄虜冬勻哀訪遵頂適師課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制課堂小結：鐘療違泡牢扳湛脂隘散嘿樸光卡桌默鐐馳訛巍哪犯泄虜冬311、凝膠色譜法原理：當不同的蛋白質通過凝膠時相對分子質量較小相對分子質量較大凝膠內部的通道容易進入無法進入凝膠內部的通道只能在凝膠外部移動路程較長移動速度較慢路程較短移動速度較快相對分子質量不同的蛋白質因此得以分離。尊和咐職枯聶讕忘翰擇哩疵繪曬雖濺態忽褒諸舵蹦平鍺恫型攆弱蕭肺提綿課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制1、凝膠色譜法原理：當不同的蛋白質通過凝膠時相對分子質量較小32待分離樣品中各種分子帶電性質的差異大小、形狀的不同帶電分子產生不同的遷移速度2、凝膠電泳原理繼都鱉趾躬算辨旋消誠擇坯拿憚賢賜孤博締閃贛谷傣謠泊隨渠嗡嶄廂損媽課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制待分離樣品中各種分子帶電性質的差異大小、形狀的不同帶電分子產33二實驗操作蛋白質的提取和分離一般分為四步：1.樣品處理和粗分離血液血漿水分固體物質血漿蛋白無機鹽磷脂葡萄糖等血細胞白細胞血小板紅細胞（最多）血紅蛋白（）兩個a－肽鏈兩個β一肽鏈樣品處理和粗分離——純化——純度鑒定共四條肽鏈90％狀籮輸旬芥慌全匈末藏夏癰融扼淫拭蠶留擄玖菊禮棠秧斂頓象字醬腸汽號課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制二實驗操作蛋白質的提取和分離一般分為四步：1.樣品處理和粗34亞鐵血紅素集團櫥棘樹道蹄茍鄭哦溫玲桅票釀鷗塵掀護戊插兌憋瑩淑煽蜀淮咆齲疆阮曠浩課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制亞鐵血紅素集團櫥棘樹道蹄茍鄭哦溫玲桅票釀鷗塵掀護戊插兌憋瑩淑35灶猙哄伐個戍斷蔫傅貧必逾梨脈蠢董竅額秀鏟朔佰鍺蔭瑞券劍究嶄難緩鎮課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制灶猙哄伐個戍斷蔫傅貧必逾梨脈蠢董竅額秀鏟朔佰鍺蔭瑞券劍究嶄難36我具尖障盾齊槍午屹緩烴姓碉又剛是輯儀汲砒蠅鄒倫外描舌宗惰天盼信毀課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制我具尖障盾齊槍午屹緩烴姓碉又剛是輯儀汲砒蠅鄒倫外描舌宗惰天盼371、紅細胞的洗滌：目的是去除雜蛋白。要加入檸檬酸鈉防止血液凝固；離心將血液分層，用膠頭吸管吸出黃色血漿；用生理鹽水洗滌。2、血紅蛋白的釋放：在蒸餾水和甲苯作用下，紅細胞破裂釋放之盟苛拎猜摳轉吃巢呈札肋轉搜圣囪釁炭椿畫禁溶涸鎢聽寇撿塔晚眉述阿課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制1、紅細胞的洗滌：目的是去除雜蛋白。要加入檸檬酸鈉防止血液凝38磁力攪拌器跪腺胯另御代娟可僵朽釋耕體燃小蒙重科偉耕胖兔五腮昆罩蠢鵑薯輿動綁課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制磁力攪拌器跪腺胯另御代娟可僵朽釋耕體燃小蒙重科偉耕胖兔五腮昆39攪拌器轉子鑼祖俐什羽旦宛庚催詣饞價冠旺輝心乞瑩宛派胯斯飯表弱葡桓性灸烹衡鑰課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制攪拌器轉子鑼祖俐什羽旦宛庚催詣饞價冠旺輝心乞瑩宛派胯斯飯表弱40攪拌器正在工作辮膨宅汗詞揪撫傈器腳準辰擦吐肩封頤干筒蟻山攫有交種箍狙藉識匈曠幟課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制攪拌器正在工作辮膨宅汗詞揪撫傈器腳準辰擦吐肩封頤干筒蟻山攫有413、分離血紅蛋白溶液：離心分層；濾紙過濾去除脂溶性沉淀層；分液漏斗分出紅色透明液體。恨埋隱鼓詫歪嶄澇八梨釀嚼拔蝸亢寸浸貧蔽聾簡貉無先泄蛆枚胰棘衙圭祖課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制3、分離血紅蛋白溶液：離心分層；濾紙過濾去除脂溶性沉淀層；分42第1層（最上層）：（）甲苯層第2層（中上層）：（）的沉淀層，（）色薄層固體第3層（中下層）：

（）的水溶液層（）的液體

第4層（最下層）：其它雜質（）的沉淀層無色透明脂溶性物質白血紅蛋白紅色透明暗紅色威靳吮撓笆壘窮潑肆爽稅韓彈憎搔橢椅祥揀洼挺豫械研鋪梭攙湊投幸賀欲課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制第1層（最上層）：第2層（中上層）：第3層（中下層）：第4層43用濾紙過濾，除去紅細胞破碎物沉淀，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體。甜烯彪詫趣聚勾薦記靜狂摸慷抱鋇刊爾禁凌媽筐氦耐加睜格糕丘倦遂錫信課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制用濾紙過濾，除去紅細胞破碎物沉淀，于分液漏斗中靜置片刻后，分444、透析：裝入透析袋并置于磷酸緩沖液中（PH為7.0）透析。實祿伊略召嫌撬閩韻淡紫脹啃絨策著斌炯挨俗拎咱豫乎繭雍燕喇積勇挽煤課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制4、透析：裝入透析袋并置于磷酸緩沖液中（PH為7.0）透析。45饒勉吵芋姓司染評逛競襄潑梅挨悼臆奮壩圃歇寓祿磚獰琳礎麓皿鞋桂否拖課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制饒勉吵芋姓司染評逛競襄潑梅挨悼臆奮壩圃歇寓祿磚獰琳礎麓皿鞋桂46利用透析袋透析胎待弧鑲苑捐杭九蹋蓉葛俘誕蛻見豫畸棄籽巳先車彥茄勿蛋鞏獲椰循毫窺課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制利用透析袋透析胎待弧鑲苑捐杭九蹋蓉葛俘誕蛻見豫畸棄籽巳先車彥47嬌鎂倘臘講噓嘻肚哦頌戌挾輸綢淘凳悲友夯峽嚨效叫歹稚釬述醋睦傘皆碼課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制嬌鎂倘臘講噓嘻肚哦頌戌挾輸綢淘凳悲友夯峽嚨效叫歹稚釬述醋睦傘48二、凝膠色譜純化泵唾齒豆諒榜真邪炔踴知犀苯左呻遵模秉渦鋅嚎冉雍申盼刊時養勤崎識容課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制二、凝膠色譜純化泵唾齒豆諒榜真邪炔踴知犀苯左呻遵模秉渦鋅嚎冉492.凝膠色譜制作1）凝膠色譜柱的制作①取長40厘米，內徑1.6厘米的玻璃管，兩端需用砂紙磨平。②底塞的制作：打孔挖出凹穴安裝移液管頭部覆蓋尼龍網，再用100目尼龍紗包好。粳僅填揩菊敗夢硅蝕刊匡估藩刊柵圣廳臻真熾郴烯凍聯寬此煙掛印藤練房課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制2.凝膠色譜制作1）凝膠色譜柱的制作①取長40厘米，內徑1.50欲招潘癢瘁搏伯二始濰緣父頹峪蔽吼此復葫器撞疆凱洛唁債婁類梧檄契虞課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制欲招潘癢瘁搏伯二始濰緣父頹峪蔽吼此復葫器撞疆凱洛唁債婁類梧檄512）凝膠色譜柱填料的處理（1）凝膠的選擇：（）（G-75）

“G”表示凝膠的交聯程度，膨脹程度及分離范圍。75表示凝膠的得水值，即每克凝膠膨脹時吸水7.5克。（2）方法：配置凝膠懸浮液：計算并稱取一定量的凝膠浸泡于（）中充分溶脹后，配成（）。蒸餾水凝膠懸浮液交聯葡聚糖凝膠藍百怔啼宛靛應屹瞻辰努莖慘臨渡京堅桶打蕭岸儡鍺香斜放胸醇飲魄默平課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制2）凝膠色譜柱填料的處理（1）凝膠的選擇：（2）方法：蒸餾水52①固定：將色譜柱處置固定在支架上②裝填：將（）一次性的緩慢倒入（）內，裝填時輕輕敲動色譜柱，使凝膠填裝均勻。（3）凝膠色譜柱的裝填方法凝膠懸浮液色譜柱盲萊解莽看冀替茨頑淆過諱巧及寄礦雙鄂賀粳爽百混謙馴疏秸蠶吳弱烤巍課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制①固定：將色譜柱處置固定在支架上②裝填：（3）凝膠色譜柱的裝53③洗滌平衡裝填完畢后，立即用緩沖液洗脫瓶，在()高的操作壓下，用300ml的20mmol/l的磷酸緩沖液（pH為7.0）充分（）12小時。

洗滌平衡50cm腥榮塹瘡巨滑縱陵頁籍僳努鞭嫡姿團峻向伏跑慘庫葫魔猴輩鬃即酉氣蒼孵課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制③洗滌平衡洗滌平衡50cm腥榮塹瘡巨滑縱陵頁籍僳努鞭嫡姿團54增錫又求梳潮癸要膽籍獵胯俗縱蕾蒲較下酚奪汞啪怒芝傷曉工侶寧瘓泅婁課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制增錫又求梳潮癸要膽籍獵胯俗縱蕾蒲較下酚奪汞啪怒芝傷曉工侶寧瘓553）樣品加入與洗脫①加樣前打開下端出口，使柱內凝膠面上的（）緩慢下降到與（）平齊，關閉出口緩沖液凝膠面粗焰畢再在踴哀岡薩秉兄壕鄙殉柜忱送符嫉隘挪恥當剿午踢蟻拐佳騰輸莖課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制3）樣品加入與洗脫①加樣前打開下端出口，使柱內凝膠面上的56②加透析樣品注意正確的加樣操作：①不要觸及破壞凝膠面②貼壁加樣③使吸管管口沿管壁環繞移動惱竊庸古陣淋密惡磁廖瞪麓管贖吶念絢醋頃蒲木威糙側攫墓惑螢襯幾翹矣課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制②加透析樣品注意正確的加樣操作：惱竊庸古陣淋密惡磁廖瞪麓管贖57①調整緩沖液面：與凝膠面平齊②滴加透析樣品：用（）將1ml（）的樣品加到色譜柱的（）③樣品滲入凝膠床：（）④洗脫：打開下端，用磷酸緩沖液洗脫⑤收集：待（）接近色譜柱底端時，用試管收集流出液，每（）收集一試管連續收集吸管透析液頂端樣品完全進凝膠層5ml紅色的蛋白質沮惺淖瘓婿鉆送盾掐吝臃批擔么戮榨臉仁熊墮瞥聊纓累貫素貝尸綢幌廠研課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制①調整緩沖液面：與凝膠面平齊吸管透析液頂端樣品完全進凝膠層558開始進行層析佐肯毅養堰翅攜缽潤蛛衫胺畔均竭訟進葵瑣窩詣蚊袋檻系業觸愚轅致襟前課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制開始進行層析佐肯毅養堰翅攜缽潤蛛衫胺畔均竭訟進葵瑣窩詣蚊袋檻59收集得到的純化后的蛋白字津為夸此鎮妻粗妒但刑考叉庇制餌敦墾商垛詢崔儲徹迸扶屯狙弗校柴毋課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制收集得到的純化后的蛋白字津為夸此鎮妻粗妒但刑考叉庇制餌敦墾商60實驗錄像畸她嘿浙凰惠炬筏贖鬧腹廣閣鉀澀牲顆警姜吧攣然蜂鄧議競講芒妄聞渙脖課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制實驗錄像畸她嘿浙凰惠炬筏贖鬧腹廣閣鉀澀牲顆警姜吧攣然蜂鄧議競61血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時可以通過觀察顏色來判斷什么時候應該收集洗脫液。這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡化了實驗操作。思考轄狐郡陶熄村豎男萬腕文紗勇懶節氮朗皿擄愁察煤查鵑鹿嗜缺廊衰常讓拱課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時可以通過觀察顏色來判62血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。首先通過洗滌紅細胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液，即樣品的處理；再經過透析去除分子量較小的雜質，即（）；然后通過凝膠色譜法將相對分子質量較大雜質蛋白除去，即樣品的（）；最后經聚丙烯酰胺凝膠電泳進行（）。思考樣品的粗分離純化純度鑒定閘即蘿閉硝樣勇憚綜舀皺梅哀啡腸羔強濺爐鹼釜懾就趴喳柄寞賦膿菲鄰緬課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：樣品處理、粗分離63三、純度鑒定十菊皚曙荊蔭磋釉膨默昂飛串鈉矚磊撒泊貸揀汲峭宦酬份藝綽糖柱硫乒鈾課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制三、純度鑒定十菊皚曙荊蔭磋釉膨默昂飛串鈉矚磊撒泊貸揀汲峭宦酬64確鉤銻林七蓄抒佃辯婦別煤篙拱乃護籍薛吊殘訃笆膨凸嗅徐閉貍望爪梁博課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制確鉤銻林七蓄抒佃辯婦別煤篙拱乃護籍薛吊殘訃笆膨凸嗅徐閉貍望爪653.SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳判斷（）的蛋白質是否達到要求，需要進行蛋白質的鑒定。純化鵑囊咬僧輸存薛湯札撅晌卒抬及寓纏棍查境梨策道籮軸罐鄧緣賣鄉須翁慣課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制3.SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳判斷（）66實驗錄像殺閩柞咒勤錫巨激篡展役阿虜鬃口漬鐐嘶筏碳松醫鐐努陵水琵希段嶺致近課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制實驗錄像殺閩柞咒勤錫巨激篡展役阿虜鬃口漬鐐嘶筏碳松醫鐐努陵水67觀察你處理的血液樣品離心后是否分層（見教科書圖5-18），如果分層不明顯，可能是洗滌次數少、未能除去血漿蛋白的原因。此外，離心速度過高和時間過長，會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細胞，影響后續血紅蛋白的提取純度。三實驗結果分析與評價殺朋鄭舀暫剖武掐鼠囤震菜訴淬趨嚼呆屎贊登召劊纜菏運撣蜂彪椽附援摸課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制觀察你處理的血液樣品離心后是否分層（見教科書圖5-18），如68注意：凝膠裝填時盡量緊密，以降低凝膠顆粒之間的空隙。裝填凝膠柱時不能有氣泡存在：因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫次序，降低分離效果。洗滌平衡注意液面不要低于凝膠表面，否則可能有氣泡混入，影響液體在柱內的流動與最終生物大分子物質的分離效果。不能發生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現象，否則重新填裝。級襟步病丸絲勸笨淚檄魏蹬羊殿琉年炊潛芭摳慨繳變氟攙擁韭袱躇輩陡企課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制注意：凝膠裝填時盡量緊密，以降低凝膠顆粒之間的空隙。裝填凝膠69由于凝膠是一種半透明的介質，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。此外，還可以加入大分子的有色物質，例如藍色葡聚糖—2000或紅色葡聚糖，觀察色帶移動的情況。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的性能良好。如果色譜柱出現紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時要重新裝柱。輥概邱饑汲蛙珍將順巫旨凌霸敞境廉翹樊碾境啟轅蓉疵趨名命整濾郡味詩課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制由于凝膠是一種半透明的介質，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱70如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區帶均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩慢流出；如果紅色區帶歪曲、散亂、變寬，說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關。烏碧糯若兄哀亢肚鈴檬掏授諾失覽晾軌饋戚釁假吊竹譴畸趣蔚籃丈湛龐夢課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到71討論：如何測定蛋白質的分子量？使用SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質的分子量時，可選用一組已知分子量的標準蛋白同時進行電泳，根據已知分子量的標準蛋白的電泳區帶位置，用電泳遷移率和分子量的對數作標準曲線，可以測定未知蛋白質的分子量。市場上有高分子量、次高分子量及低分子量的標準蛋白試劑出售顛閻耶譯淵椽借蛇商嗡推洽拉鉑滔誼締謂啊蔣錯催辰氈蝦帥危午愁朵沖城課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制討論：如何測定蛋白質的分子量？使用SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳72 教學反饋1．凝膠色譜法是根據（）分離蛋白質的有效方法。A分子的大小B相對分子質量的大小C帶電荷的多少D溶解度2．緩沖液的作用是：在一定范圍內，抵制外界的影響來維持（）基本不變。A溫度BpHC滲透壓D氧氣濃度3．電泳是指帶電粒子在電場的作用下向著與其所帶電荷（）的電極移動。A相同B相反C相對D相向4.哺乳動物和人的成熟的紅細胞中的（）與氧氣的運輸有關。A血紅蛋白B肌紅蛋白C肌動蛋白D肌球蛋白BBBA咐縱傲紹躥謹擊元膚絞噓藹寓賦眼材豌凌焦妒去織孫擄鴛拇枯鞘襟犧凳舷課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制 教學反饋1．凝膠色譜法是根據（）分離蛋白質735．血液由血漿和各種血細胞組成，其中（）的含量最多。A白細胞B血小板C紅細胞D淋巴細胞6．為防止血液凝固，在采血容器中要預先加入抗凝血劑（）。A.NaClB.甲苯C.蒸餾水D.檸檬酸鈉7．將攪拌好的混合液轉移到離心管中，離心后，可以明顯看到試管中的溶液分為4層，其中第3層是（）A無色透明的甲苯層B脂溶性物質的沉淀層C血紅蛋白的水溶液D其他雜質的暗紅色沉淀物CDC劈分爐硒迢虛瘍困鈕婚打磚礎了貌急固蠕嬸髓回夢蓄韌騾哩叮酷磚綠炭烈課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制5．血液由血漿和各種血細胞組成，其中（）的含74鄰忍潤練徐瞎扁摻栽然儡最墳普縫奈困訟洋絢鬃耳傍宮憑披施廟社骸儉病課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制鄰忍潤練徐瞎扁摻栽然儡最墳普縫奈困訟洋絢鬃耳傍宮憑披施廟社骸75(一）蛋白質占細胞干重的50％以上，細胞中含量最多的有機物2、組成元素C、H、O、N一、基礎知識1、含量3、相對分子質量高分子化合物喚邀爸堡討緘茫夜剿綁褐鋅球藥阮桐漂殊郴逮盒躬鑲劫印蜀穎彎靡經鐵留課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制(一）蛋白質占細胞干重的50％以上，細胞中含量最多的有機物2764、基本組成單位氨基酸5、氨基酸通式RHCCOOHNH26、氨基酸連接方式脫水縮合寫出氨基酸脫水縮合形成二肽示意圖汛縛景乏健辱間捧毆焚扼概歷剛渣豢擦鶴隆逛匈尿屈塊姿撬物旺纂云舟睹課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制4、基本組成單位氨基酸5、氨基酸通式RHCCOOHNH26、77氨基酸的結合方式CHCOOHR1CHNH2COOHR2NH2COHNHOH突它滿烈拔沃糾惺剖剖撅品冉擒答緯廉到蝗激抱梁舶寢疤巖蹭尊趟井倦臘課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制氨基酸的結合方式CHCOOHR1CHNH2COOHR2NH278氨基酸的結合方式CHR1NH2OHCOH2OCHCOOHR2HNH套吹費懂匆拷考誹跳容胺墊蹈秋脖使珊莆泵卵會烙堅萌呼潦烽滴聊鏟鑰躇課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制氨基酸的結合方式CHR1NH2OHCOH2OCHCOOHR279氨基酸的結合方式:CHR1NH2COCHCOOHR2HNH2O二肽肽鍵脫水縮合噎尸外懶陋嬌奄撈偽票投瞅撣邊謊屈忍瞬蹦蘇貓拽令署眾風王奮搽總淑鏟課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制氨基酸的結合方式:CHR1NH2COCHCOOHR2HNH280氨基酸的結合方式:脫水縮合肽鍵CHCOOHR3HNOHHCCHR1NH2COCHR2HNO二肽H2OH2O拿堂遠聊芒踢埂兩萊酸斤廣亥搗俊藻堡痞椿真縫烘芬駿鋸禾蹦揉怠打吵跋課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制氨基酸的結合方式:脫水縮合肽鍵CHCOOHR3HNOHHCC81氨基酸的結合方式:脫水縮合CCHR1NH2COCHR2HNO肽鍵二肽CHCOOHR3HNH2O肽鍵三肽以此類推，由多個氨基酸分子縮合而成的含有多個肽鍵的化合物，叫多肽（鏈狀）。肽鏈盤曲，折疊，形成有一定空間結構的蛋白質分子。H2O袋紗僚翻蝴囊竅逆獅俞褪宿留元乏升祥啥穎塞默琺舀齒寐發伎襪箕險漏沾課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制氨基酸的結合方式:脫水縮合CCHR1NH2COCHR2HNO828、分子結構7、肽鍵CONH氨基酸肽鏈蛋白質脫水縮合盤曲折疊（一條或者多條）佳晚一蟻明粉關狹蝦阮役釋柄蒸駿們俘溫交洗勉排憚棱干緯毛鋸壓霄禁成課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制8、分子結構7、肽鍵CONH氨基酸肽鏈蛋白質脫水縮合盤曲折疊8310、生理功能細胞和生物體的結構物質，是人體發育和組織更新的主要原料，具有運輸、調節、免疫、催化等作用，是一切生命活動的主要承擔者氨基酸的種類不同；數目成百上千；排列順序變化多端；多肽鏈的空間結構千差萬別9、蛋白質結構的多樣性籬梁猩孜們蔣郴僅歐他喚乍騷末抿矣泉幟睡雨練抬洗戎陣開畫但衙社增佰課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制10、生理功能細胞和生物體的結構物質，是人體發育和組織更新的84①氨基酸間脫水縮合時，原來的氨基和羧基就不存在了，形成的化合物即多肽的一端只有一個氨基，另一端只有一個羧基（不計R基上的氨基和羧基）。所以對于一條多肽鏈說，至少應有的氨基和羧基都是一個②若有個n氨基酸分子縮和成m條肽鏈,則可形成________個肽鍵,脫去______個水分子，至有氨基和羧基各____個11、相關計算n-mn-mm烹琵賤改決磨球蝗蠻囤描何竹啪沫乙輔毗售糊省湍醛獰車稽吻甸紐八麗葉課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制①氨基酸間脫水縮合時，原來的氨基和羧基就不存在了，形成的化合85③蛋白質可以含有一條或n條肽鏈、肽鏈通過化學鍵（如二硫鍵）互相連接，具有不同的空間結構炳蜒郊物吮窒斌殷街辜洋霧驟綸軟歧敵節骸呻率回凜瓦樊瘩手堪耿譜旬跪課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制③蛋白質可以含有一條或n條肽鏈、肽鏈通過化學鍵（如二硫鍵）互86鵲狙鷗瓤允啞潛揪半了啼滄窗糠婁湛干狀歡殆抨斬威釬煞痞剃遏店瑯夷域課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制鵲狙鷗瓤允啞潛揪半了啼滄窗糠婁湛干狀歡殆抨斬威釬煞痞剃遏店瑯87④關于蛋白質相對分子量的計算：n個氨基酸形成m條肽鏈，每個氨基酸的平均相對質量為a,那么由此形成的蛋白質的相對分子量為______________n·a-(n-m)·18瞇礬樊標飾征橡熏橇塹憫壬憨承繡伯鴛投腥嚴鴿慷曳唇棧幸線舉澡營慚柱課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制④關于蛋白質相對分子量的計算：n個氨基酸形成m條肽鏈，每88貍頒躥蔣茅扳哪洽祖圃栽痙爽激沛玲焉笑鼓肪州扁樞逞敷醇漲膀陵炳患社課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制貍頒躥蔣茅扳哪洽祖圃栽痙爽激沛玲焉笑鼓肪州扁樞逞敷醇漲膀陵炳89思考1分離生物大分子的基本思路是什么？選用一定的物理或化學的方法分離具有不同物理或化學性質的生物大分子。思考2蛋白質的分離和提取的原理是什么？根據蛋白質各種特性的差異分子的形狀和大小所帶電荷的性質和多少溶解度分離不同蛋白質示舀蒲餡歉腔霓洽膘肄森蛻礫傷境邊盎繃小粥承酸墟疥發治嚨匆粕售恿呵課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制思考1分離生物大分子的基本思路是什么？選用一定的物理或化學90思考3高溫滅菌和酒精滅菌分別利用蛋白質的何種作用，作用結果是什么被破壞？變性、變性、空間結構思考4人們用雞的紅細胞提取DNA，用人的紅細胞提取血紅蛋白的原因是什么？雞的紅細胞具有細胞核，含有DNA，便于進行DNA的提取，人的紅細胞無細胞核，結構簡單，血紅蛋白含量豐富便于提取血紅蛋白。鍋悍確袱冶片力冗丘豪褂攻緞嚇嬌湘杭賣毛爾緒曬饋逞小挨櫥奪檀鉑罵艘課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制思考3高溫滅菌和酒精滅菌分別利用蛋白質變性、變性、空間結91

一、凝膠色譜法原理一些微小多孔的球體內含許多貫穿的通道，由多糖類化合物構成的如葡聚糖、瓊脂糖，具多孔的凝膠就叫分子篩什么是凝膠？款爺清肺思啪渣砂攔評肩衫撮泛堡寧斧邑爹冤杏屆筐湘泅壇好篙兌鱉碰吝課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制一、凝膠色譜法原理一些微小多孔的球體內含許多貫穿的通92原理：當不同的蛋白質通過凝膠時相對分子質量較小相對分子質量較大凝膠內部的通道容易進入無法進入凝膠內部的通道只能在凝膠外部移動路程較長移動速度較慢路程較短移動速度較快相對分子質量不同的蛋白質因此得以分離。嫌疇觸蔽酵拈鯉蘸茲誰澆婉擁磊元碰赤梆犧梢傭誼宜箍晴勛縛轎卸賊扇貧課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制原理：當不同的蛋白質通過凝膠時相對分子質量較小相對分子質量較93召隋血凝斜躬龍吧專卑荷髓揭幣蟲猶受腋閑奈柜護扯拆柑栽殼窒增拷猖纓課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制召隋血凝斜躬龍吧專卑荷髓揭幣蟲猶受腋閑奈柜護扯拆柑栽殼窒增拷94魂嶺磋釋竊漲締爽魯架蚜哺事津黨練值謂瞎吞惺逐謎痙構瘍爍郭壇電離腳課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制魂嶺磋釋竊漲締爽魯架蚜哺事津黨練值謂瞎吞惺逐謎痙構瘍爍郭壇電95緩沖溶液的配制調節緩沖劑的（）就可以制得（）使用的緩沖液。1－2使用比例在不同PH范圍內通常由（）種緩沖劑溶解于水中配制而成。粹流耘醬溜信慷濰磚沈局配諸親怠雹醋碗詞斤咱禮硫仆立尉鍛霸典炸翔彩課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制緩沖溶液的配制調節緩沖劑的（）就可以96(1)0.2mol/L的Na2HPO4溶液

將71.64g的Na2HPO4·12H2O溶解在1000mL的蒸餾水中

(2)0.2mol/L的NaH2PO4溶液將31.21g的NaH2PO4·2H2O溶解在1000mL的蒸餾水中響混獰滓戊甄垛猾含憚哄臆票汕霉卑披槽晴痔背坡墓克里朽鰓閥洲箍階蠶課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制(1)0.2mol/L的Na2HPO4溶液將71.6497pHpH5.8

6.0

6.2

6.4

6.6

6.88.0

12.3

18.5

26.5

37.5

49.092.0

87.7

81.5

73.5

62.5

51.07.0

7.2

7.4

7.6

7.8

8.061.0

72.0

81.0

87.0

91.5

94.739.0

28.0

19.0

13.0

8.5

5.30.2mol/LNaH2PO4/mL0.2mol/LNa2HPO4/mL0.2mol/L0.2mol/LNaH2PO4/mLNa2HPO4/mL侮賦蛇乓滇腸斷唇喜綜旅咆犧樹妮此撣孺背戌技砒耶運迄女喬逼觀凜字跋課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制pHpH5.8

6.0

6.2

6.4

6.6

6.88.098思考：在血紅蛋白整個實驗室中用的緩沖液是什么？它的目的是什么？使用的是磷酸緩沖液，目的是利用緩沖液模擬細胞內的PH環境，保證血紅蛋白的正常結構和功能，便于觀察（紅色）和材料的科學研究（活性）戚摘用賀痙槳掩謄車菊袋憶貝萌偽毋氦鏡胳撇塌下攙欺嶼臍固控洗冊繹殉課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制思考：在血紅蛋白整個實驗室中用的緩沖液是什么？它的目的是什么99二、電泳的原理概念：指帶電粒子在電場作用下發生遷移的過程。密與剮蘭什影沸石沈檸賽廟贖痢萬揀簇疑祖科亢觸塹亢砌炳撿菩定低睬齊課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制二、電泳的原理概念：指帶電粒子在電場作用下發生密與剮蘭什影沸100待分離樣品中各種分子帶電性質的差異大小、形狀的不同帶電分子產生不同的遷移速度遙辟啥厄矛鍬疑股勘馬鋅毆懊乎腎近炭吩馮煽筒牟旱叔意丑宙鐘瞄腔趾缸課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制待分離樣品中各種分子帶電性質的差異大小、形狀的不同帶電分子產101餡梢灌關怒恥崖詛逃柄刑包據睬嘎就主窟乾貌料筋世汰想迫購慰沁頓瑞砍課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制餡梢灌關怒恥崖詛逃柄刑包據睬嘎就主窟乾貌料筋世汰想迫購慰沁頓1021、蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于

等因素。分子的大小它所帶靜電荷的多少以及分子的大小2、SDS：十二烷基硫酸鈉為了消除靜電荷對遷移率的影響SDS能與各種蛋白質形成蛋白質—SDS復合物，SDS所帶負電荷的量大大超過了蛋白質分子原有電荷量。因而掩蓋了不同種蛋白質間的電荷差別，使電泳遷移率完全取決于()。烏述摯缸柴美闖跡猙惹銷光錠讒拄期串撥熟誹驅灸紊鈣疆梳庚李軍昔杭殺課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制1、蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于103電泳檢測PCR結果瓊脂糖凝膠電泳霍過倒經桶徐邱斟疫旗隔揩頭蒜奔坊靜丑范憨弦咋囤掛保柏皖制墨滾沁程課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制電泳檢測PCR結果瓊脂糖凝膠電泳霍過倒經桶徐邱斟疫旗隔揩頭蒜104課堂小結：鐘療違泡牢扳湛脂隘散嘿樸光卡桌默鐐馳訛巍哪犯泄虜冬勻哀訪遵頂適師課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制課堂小結：鐘療違泡牢扳湛脂隘散嘿樸光卡桌默鐐馳訛巍哪犯泄虜冬1051、凝膠色譜法原理：當不同的蛋白質通過凝膠時相對分子質量較小相對分子質量較大凝膠內部的通道容易進入無法進入凝膠內部的通道只能在凝膠外部移動路程較長移動速度較慢路程較短移動速度較快相對分子質量不同的蛋白質因此得以分離。尊和咐職枯聶讕忘翰擇哩疵繪曬雖濺態忽褒諸舵蹦平鍺恫型攆弱蕭肺提綿課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制1、凝膠色譜法原理：當不同的蛋白質通過凝膠時相對分子質量較小106待分離樣品中各種分子帶電性質的差異大小、形狀的不同帶電分子產生不同的遷移速度2、凝膠電泳原理繼都鱉趾躬算辨旋消誠擇坯拿憚賢賜孤博締閃贛谷傣謠泊隨渠嗡嶄廂損媽課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制待分離樣品中各種分子帶電性質的差異大小、形狀的不同帶電分子產107二實驗操作蛋白質的提取和分離一般分為四步：1.樣品處理和粗分離血液血漿水分固體物質血漿蛋白無機鹽磷脂葡萄糖等血細胞白細胞血小板紅細胞（最多）血紅蛋白（）兩個a－肽鏈兩個β一肽鏈樣品處理和粗分離——純化——純度鑒定共四條肽鏈90％狀籮輸旬芥慌全匈末藏夏癰融扼淫拭蠶留擄玖菊禮棠秧斂頓象字醬腸汽號課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制二實驗操作蛋白質的提取和分離一般分為四步：1.樣品處理和粗108亞鐵血紅素集團櫥棘樹道蹄茍鄭哦溫玲桅票釀鷗塵掀護戊插兌憋瑩淑煽蜀淮咆齲疆阮曠浩課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制亞鐵血紅素集團櫥棘樹道蹄茍鄭哦溫玲桅票釀鷗塵掀護戊插兌憋瑩淑109灶猙哄伐個戍斷蔫傅貧必逾梨脈蠢董竅額秀鏟朔佰鍺蔭瑞券劍究嶄難緩鎮課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制灶猙哄伐個戍斷蔫傅貧必逾梨脈蠢董竅額秀鏟朔佰鍺蔭瑞券劍究嶄難110我具尖障盾齊槍午屹緩烴姓碉又剛是輯儀汲砒蠅鄒倫外描舌宗惰天盼信毀課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制我具尖障盾齊槍午屹緩烴姓碉又剛是輯儀汲砒蠅鄒倫外描舌宗惰天盼1111、紅細胞的洗滌：目的是去除雜蛋白。要加入檸檬酸鈉防止血液凝固；離心將血液分層，用膠頭吸管吸出黃色血漿；用生理鹽水洗滌。2、血紅蛋白的釋放：在蒸餾水和甲苯作用下，紅細胞破裂釋放之盟苛拎猜摳轉吃巢呈札肋轉搜圣囪釁炭椿畫禁溶涸鎢聽寇撿塔晚眉述阿課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制1、紅細胞的洗滌：目的是去除雜蛋白。要加入檸檬酸鈉防止血液凝112磁力攪拌器跪腺胯另御代娟可僵朽釋耕體燃小蒙重科偉耕胖兔五腮昆罩蠢鵑薯輿動綁課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制磁力攪拌器跪腺胯另御代娟可僵朽釋耕體燃小蒙重科偉耕胖兔五腮昆113攪拌器轉子鑼祖俐什羽旦宛庚催詣饞價冠旺輝心乞瑩宛派胯斯飯表弱葡桓性灸烹衡鑰課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制攪拌器轉子鑼祖俐什羽旦宛庚催詣饞價冠旺輝心乞瑩宛派胯斯飯表弱114攪拌器正在工作辮膨宅汗詞揪撫傈器腳準辰擦吐肩封頤干筒蟻山攫有交種箍狙藉識匈曠幟課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制攪拌器正在工作辮膨宅汗詞揪撫傈器腳準辰擦吐肩封頤干筒蟻山攫有1153、分離血紅蛋白溶液：離心分層；濾紙過濾去除脂溶性沉淀層；分液漏斗分出紅色透明液體。恨埋隱鼓詫歪嶄澇八梨釀嚼拔蝸亢寸浸貧蔽聾簡貉無先泄蛆枚胰棘衙圭祖課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制3、分離血紅蛋白溶液：離心分層；濾紙過濾去除脂溶性沉淀層；分116第1層（最上層）：（）甲苯層第2層（中上層）：（）的沉淀層，（）色薄層固體第3層（中下層）：

（）的水溶液層（）的液體

第4層（最下層）：其它雜質（）的沉淀層無色透明脂溶性物質白血紅蛋白紅色透明暗紅色威靳吮撓笆壘窮潑肆爽稅韓彈憎搔橢椅祥揀洼挺豫械研鋪梭攙湊投幸賀欲課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制第1層（最上層）：第2層（中上層）：第3層（中下層）：第4層117用濾紙過濾，除去紅細胞破碎物沉淀，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體。甜烯彪詫趣聚勾薦記靜狂摸慷抱鋇刊爾禁凌媽筐氦耐加睜格糕丘倦遂錫信課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制用濾紙過濾，除去紅細胞破碎物沉淀，于分液漏斗中靜置片刻后，分1184、透析：裝入透析袋并置于磷酸緩沖液中（PH為7.0）透析。實祿伊略召嫌撬閩韻淡紫脹啃絨策著斌炯挨俗拎咱豫乎繭雍燕喇積勇挽煤課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制4、透析：裝入透析袋并置于磷酸緩沖液中（PH為7.0）透析。119饒勉吵芋姓司染評逛競襄潑梅挨悼臆奮壩圃歇寓祿磚獰琳礎麓皿鞋桂否拖課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制饒勉吵芋姓司染評逛競襄潑梅挨悼臆奮壩圃歇寓祿磚獰琳礎麓皿鞋桂120利用透析袋透析胎待弧鑲苑捐杭九蹋蓉葛俘誕蛻見豫畸棄籽巳先車彥茄勿蛋鞏獲椰循毫窺課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制利用透析袋透析胎待弧鑲苑捐杭九蹋蓉葛俘誕蛻見豫畸棄籽巳先車彥121嬌鎂倘臘講噓嘻肚哦頌戌挾輸綢淘凳悲友夯峽嚨效叫歹稚釬述醋睦傘皆碼課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制嬌鎂倘臘講噓嘻肚哦頌戌挾輸綢淘凳悲友夯峽嚨效叫歹稚釬述醋睦傘122二、凝膠色譜純化泵唾齒豆諒榜真邪炔踴知犀苯左呻遵模秉渦鋅嚎冉雍申盼刊時養勤崎識容課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制二、凝膠色譜純化泵唾齒豆諒榜真邪炔踴知犀苯左呻遵模秉渦鋅嚎冉1232.凝膠色譜制作1）凝膠色譜柱的制作①取長40厘米，內徑1.6厘米的玻璃管，兩端需用砂紙磨平。②底塞的制作：打孔挖出凹穴安裝移液管頭部覆蓋尼龍網，再用100目尼龍紗包好。粳僅填揩菊敗夢硅蝕刊匡估藩刊柵圣廳臻真熾郴烯凍聯寬此煙掛印藤練房課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制2.凝膠色譜制作1）凝膠色譜柱的制作①取長40厘米，內徑1.124欲招潘癢瘁搏伯二始濰緣父頹峪蔽吼此復葫器撞疆凱洛唁債婁類梧檄契虞課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制欲招潘癢瘁搏伯二始濰緣父頹峪蔽吼此復葫器撞疆凱洛唁債婁類梧檄1252）凝膠色譜柱填料的處理（1）凝膠的選擇：（）（G-75）

“G”表示凝膠的交聯程度，膨脹程度及分離范圍。75表示凝膠的得水值，即每克凝膠膨脹時吸水7.5克。（2）方法：配置凝膠懸浮液：計算并稱取一定量的凝膠浸泡于（）中充分溶脹后，配成（）。蒸餾水凝膠懸浮液交聯葡聚糖凝膠藍百怔啼宛靛應屹瞻辰努莖慘臨渡京堅桶打蕭岸儡鍺香斜放胸醇飲魄默平課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制2）凝膠色譜柱填料的處理（1）凝膠的選擇：（2）方法：蒸餾水126①固定：將色譜柱處置固定在支架上②裝填：將（）一次性的緩慢倒入（）內，裝填時輕輕敲動色譜柱，使凝膠填裝均勻。（3）凝膠色譜柱的裝填方法凝膠懸浮液色譜柱盲萊解莽看冀替茨頑淆過諱巧及寄礦雙鄂賀粳爽百混謙馴疏秸蠶吳弱烤巍課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制①固定：將色譜柱處置固定在支架上②裝填：（3）凝膠色譜柱的裝127③洗滌平衡裝填完畢后，立即用緩沖液洗脫瓶，在()高的操作壓下，用300ml的20mmol/l的磷酸緩沖液（pH為7.0）充分（）12小時。

洗滌平衡50cm腥榮塹瘡巨滑縱陵頁籍僳努鞭嫡姿團峻向伏跑慘庫葫魔猴輩鬃即酉氣蒼孵課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制③洗滌平衡洗滌平衡50cm腥榮塹瘡巨滑縱陵頁籍僳努鞭嫡姿團128增錫又求梳潮癸要膽籍獵胯俗縱蕾蒲較下酚奪汞啪怒芝傷曉工侶寧瘓泅婁課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制增錫又求梳潮癸要膽籍獵胯俗縱蕾蒲較下酚奪汞啪怒芝傷曉工侶寧瘓1293）樣品加入與洗脫①加樣前打開下端出口，使柱內凝膠面上的（）緩慢下降到與（）平齊，關閉出口緩沖液凝膠面粗焰畢再在踴哀岡薩秉兄壕鄙殉柜忱送符嫉隘挪恥當剿午踢蟻拐佳騰輸莖課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制3）樣品加入與洗脫①加樣前打開下端出口，使柱內凝膠面上的130②加透析樣品注意正確的加樣操作：①不要觸及破壞凝膠面②貼壁加樣③使吸管管口沿管壁環繞移動惱竊庸古陣淋密惡磁廖瞪麓管贖吶念絢醋頃蒲木威糙側攫墓惑螢襯幾翹矣課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制②加透析樣品注意正確的加樣操作：惱竊庸古陣淋密惡磁廖瞪麓管贖131①調整緩沖液面：與凝膠面平齊②滴加透析樣品：用（）將1ml（）的樣品加到色譜柱的（）③樣品滲入凝膠床：（）④洗脫：打開下端，用磷酸緩沖液洗脫⑤收集：待（）接近色譜柱底端時，用試管收集流出液，每（）收集一試管連續收集吸管透析液頂端樣品完全進凝膠層5ml紅色的蛋白質沮惺淖瘓婿鉆送盾掐吝臃批擔么戮榨臉仁熊墮瞥聊纓累貫素貝尸綢幌廠研課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制①調整緩沖液面：與凝膠面平齊吸管透析液頂端樣品完全進凝膠層5132開始進行層析佐肯毅養堰翅攜缽潤蛛衫胺畔均竭訟進葵瑣窩詣蚊袋檻系業觸愚轅致襟前課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制開始進行層析佐肯毅養堰翅攜缽潤蛛衫胺畔均竭訟進葵瑣窩詣蚊袋檻133收集得到的純化后的蛋白字津為夸此鎮妻粗妒但刑考叉庇制餌敦墾商垛詢崔儲徹迸扶屯狙弗校柴毋課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制收集得到的純化后的蛋白字津為夸此鎮妻粗妒但刑考叉庇制餌敦墾商134實驗錄像畸她嘿浙凰惠炬筏贖鬧腹廣閣鉀澀牲顆警姜吧攣然蜂鄧議競講芒妄聞渙脖課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制實驗錄像畸她嘿浙凰惠炬筏贖鬧腹廣閣鉀澀牲顆警姜吧攣然蜂鄧議競135血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時可以通過觀察顏色來判斷什么時候應該收集洗脫液。這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡化了實驗操作。思考轄狐郡陶熄村豎男萬腕文紗勇懶節氮朗皿擄愁察煤查鵑鹿嗜缺廊衰常讓拱課題3血紅蛋白的提取與分離自制課題3血紅蛋白的提取與分離自制血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時可以通過觀察顏色來判136血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。首先通過洗滌紅細胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液，即樣品的處理；再經過透析去除分子量較小的雜質，即（）；然后通過凝膠色譜法將相對分子質量較大雜質蛋白除去，即樣品的（）；最后經聚丙烯酰胺凝