臨床常見病原體檢測周有利武漢科技大學(xué)臨床學(xué)院內(nèi)科教研室◆標(biāo)本采集運送、實驗室評價和

檢查方法

◆病原體耐藥性檢測講授內(nèi)容抗菌藥物治療前；無菌操作，防止污染；標(biāo)本收集后立刻送檢；防止?jié)B漏；詳細注明抗生素使用史、標(biāo)本來源、送檢目的；標(biāo)本收集運送原則在病人寒戰(zhàn)時、發(fā)熱初期或發(fā)熱高峰時采集。以無菌手法從病人靜脈采血，立即注入培養(yǎng)瓶中，迅速輕搖，充分混勻，并將瓶塑料外蓋重新蓋上。成人采血10～20ml，兒童1～5ml，骨髓1～2ml。血及骨髓標(biāo)本采集方法為提高檢出率，最好連續(xù)培養(yǎng)三次，間隔時間依病人臨床癥狀而定：1）持續(xù)發(fā)熱病人可每天一份；2）間歇發(fā)熱病人在體溫上升期采血；3）急性感染性心內(nèi)膜炎疑似病人，1～2小時內(nèi)從3個不同部位采血；4）亞急性感染性心內(nèi)膜炎疑似病人，3份血培養(yǎng)應(yīng)至少間隔15分鐘在一天內(nèi)完成，如果24小時培養(yǎng)后仍為陰性，可再留取3份。血及骨髓標(biāo)本采集方法標(biāo)本收集時應(yīng)注意無菌操作，清洗外陰，消毒；收集中段尿10～20ml盛于無菌容器，加蓋后立即送檢。尿培養(yǎng)標(biāo)本采集厭氧菌培養(yǎng)：釆用膀胱穿刺法收集于無菌厭氧小瓶內(nèi)運送。早期、新鮮，清潔容器；含膿、血和粘液的糞便；排便困難者或嬰兒用肛拭子釆集。糞便標(biāo)本釆集痰：一般以晨痰為好，先刷牙清潔口腔，并用鹽水反復(fù)漱口，然后咳深部痰于無菌平皿里，立即送檢。呼吸道標(biāo)本采集咽拭，將咽拭子越過舌根到咽后壁或懸雍垂的后側(cè)，反復(fù)涂抹數(shù)次，拭子要避免接觸口腔和舌粘膜。EP≤10/LP,WBC≥25/LP為合格。呼吸道標(biāo)本采集由臨床醫(yī)師以無菌手法收集腦脊液3～5ml，盛于無菌試管中立即送檢。注意：進行細菌培養(yǎng)腦脊液，應(yīng)注意保溫，切不可置于冰箱或低溫保存，以免病例原菌死亡。腦脊液標(biāo)本采集方法由臨床醫(yī)師行穿刺術(shù)抽取，標(biāo)本的采集在患者用藥之前，或停止用藥1～2日后進行。穿刺液（胸腹水、心包液、關(guān)節(jié)液、鞘膜液）標(biāo)本采集方法胸腹水可抽取5～10ml，心包液、關(guān)節(jié)液抽取2～5ml，盛于含抗凝劑的無菌試管或小瓶中，混勻后立即送檢。男性尿道：先用生理鹽水局部清洗，再用窄頭的無菌棉拭子插入尿道口1～2cm，停留十余秒鐘，輕輕旋轉(zhuǎn)采集標(biāo)本。女性生殖道：在窺陰器下操作，陰道分泌物培養(yǎng)應(yīng)收集陰道后穹窿分泌物；宮頸分泌物培養(yǎng)須先擦去宮頸外口多余的分泌物后，再用無菌棉拭插入宮頸管約1～2cm，輕輕旋轉(zhuǎn)收集標(biāo)本。生殖道標(biāo)本釆集前列腺：先用冷開水沖洗尿道口，再用0.1%新潔爾滅消毒尿道口，用滅菌紗布擦干后，用前列腺按摩法收集前列腺液置于無菌試管中立即送檢。生殖道標(biāo)本釆集創(chuàng)傷：多部位采集，應(yīng)先用無菌生理鹽水洗凈病灶表面的污染菌，以碘酒、酒精消毒皮膚，以防污染菌。封閉性膿腫：用無菌注射器穿刺抽取，疑為厭氧菌者應(yīng)隔絕空氣。開放性膿腫：用無菌棉拭子采集膿液及病灶深部分泌物。創(chuàng)傷、組織和膿腫標(biāo)本采集方法標(biāo)本的接收與拒收準(zhǔn)則檢驗申請單應(yīng)清楚填寫下列內(nèi)容：患者姓名、性別、年齡、科別、床號、住院號、標(biāo)本類型、臨床診斷、檢查項目、采集標(biāo)本日期和時間，否則拒收。標(biāo)本容器及標(biāo)識是否符合要求，標(biāo)記內(nèi)容與醫(yī)生所填寫申請單的內(nèi)容是否完全一致，否則拒收。容器有破損或滲漏應(yīng)拒收。標(biāo)本量不足則拒收。過時的標(biāo)本應(yīng)拒收。標(biāo)本儲存、運送方式不當(dāng)應(yīng)拒收。明顯被污染的標(biāo)本應(yīng)拒收。標(biāo)本的接收與拒收準(zhǔn)則檢測方法直接顯微鏡檢測：革蘭染色、抗酸染色、墨汁染色病原體特異性抗原檢測梅毒、衣原體等病原體核酸檢測結(jié)核、肝炎病毒等病原體的分離培養(yǎng)和鑒定血清學(xué)檢測結(jié)核、肝炎病毒等直接顯微鏡檢測大腸桿菌葡萄球菌結(jié)核桿菌隱球菌

病原體的分離培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗病原體耐藥性檢測多重耐藥病原體

（EmergenceofMultiresistantBacteria）耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBL)細菌氨基糖苷類抗生素高耐藥腸球菌耐青霉素肺炎鏈球菌(PRSP)耐萬古霉素腸球菌（VRE）耐萬古霉素金黃色葡萄球菌（VRSA）病原體耐藥性檢測耐藥機制1、細菌水平和垂直傳播耐藥基因2、產(chǎn)生滅活抗生素的水解酶、鈍化酶如：超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBL）3、抗生素作用靶位的改變4、細菌膜外排泵出系統(tǒng)5、細菌生物膜形成病原體耐藥性檢測NewResistantBacteriaMutations(突變）XX細菌水平和垂直傳播耐藥基因SusceptibleBacteriaResistantBacteriaResistanceGeneTransferResistantStrains

RarexxResistantStrainsDominantAntimicrobialExposure

xxxxxxxxxx抗生素壓力→選擇性耐藥株的出現(xiàn)產(chǎn)生滅活抗生素的水解酶亞胺培南和美羅培南由此進入美羅培南被泵出細胞外，但亞胺培南不受影響主動泵出系統(tǒng)流出通道(OprM)外膜胞漿周圍間隙連接脂蛋白(MexA)胞漿膜流出泵系統(tǒng)

(MexB)膜孔蛋白細菌膜外排泵出系統(tǒng)耐甲氧西林葡萄球菌(methecillinresistantstaphyloccus,MRS)MRS對所有β-內(nèi)酰胺類抗生素均耐藥。因此，對于葡萄球菌只需測試青霉素及甲氧西林的敏感性，即可推斷一系列β-內(nèi)酰胺類抗生素的敏感性。葡萄球菌用喹諾酮類抗生素治療3～4天后敏感株可變?yōu)槟退幹辏虼嗽?～4天后有必要重新送檢并進行藥敏試驗。病原體耐藥性檢測耐藥菌監(jiān)測試驗?zāi)颓嗝顾胤窝祖溓蚓?penicillinresistantstreptococcuspneumonia,PRSP)研究表明，PRSP除對氟喹諾酮類和萬古霉素仍高度敏感外，對多數(shù)測試藥物的耐藥率均較敏感株顯著為高，還出現(xiàn)了第三代頭孢菌素的耐藥株。病原體耐藥性檢測耐藥菌監(jiān)測試驗對頭孢菌素及氨曲南無論體外藥敏試驗結(jié)果如何,臨床治療都是無效的。該菌的治療首選泰能病原體耐藥性檢測耐藥菌監(jiān)測試驗產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶細菌(extended-spectrumβ-lactamase，ESBL)耐萬古霉素腸球菌（vacomycinresistantenterococcus,VRE）腸球菌屬對頭孢菌素、氨基甙類、克林霉素及復(fù)方