生化反應曲線

2022/10/291生化反應曲線2022/10/221生化分析基本原理

生化反應曲線內(nèi)容概況2022/10/292內(nèi)容概況2022/10/222羅氏生化分析系統(tǒng)產(chǎn)品線Cobas6000(c501)600T/HModularD2400T/HModularP800T/HCobasc311300T/HCobasc111180T/HCobas80002000T/H2022/10/293羅氏生化分析系統(tǒng)產(chǎn)品線Cobas6000(c501)Mcobas?8000模塊化組合分析系統(tǒng)

智能、高效、強勁

2022/10/294cobas?8000模塊化組合分析系統(tǒng)

物質(zhì)對光吸收的基本定律－Lambert-

Beer定律

Lambert－Beer定律表達為:

當一束平行的單色光通過含有均勻吸光物質(zhì)的溶液時,溶液的吸光度(A)與溶液的濃度(C)和光透過液層厚度(L)的乘積成正比。物質(zhì)對光吸收的吸光系數(shù)（e）為常數(shù)。☆其數(shù)學表達式：A=e*C*L

I入射光透射光I0==-------光吸收的基本定律=lightdetector2022/10/295物質(zhì)對光吸收的基本定律－Lambert-Beer定律

根據(jù)Lambert-Beer定律來計算待測物濃度如若吸光系數(shù)(ε)未知，我們就需要采用定標曲線來計算待測物的濃度。

濃度(amountofsubstance)吸光度(amountofcolor)401 2 3 4 5 6706050302010Calibrator/standard標準品(cfas)待測樣本Concx=ΔAbsxxConcs

AbssConcx =待測樣本濃度Concs =標準品濃度Δ

Absx =樣本吸光度Abss =標準品吸光度

此值為定值2022/10/296根據(jù)Lambert-Beer定律來計算待測物濃度濃度(aLambert-Beer定律適合于任何均勻非散射的介質(zhì)

生化比色分析特定蛋白透射比濁分析Lambert-Beer定律分光光度法定量分析的依據(jù)2022/10/297Lambert-Beer定律生化比色分析特定蛋白透射比濁RocheHitachiPhotometer2022/10/298RocheHitachiPhotometer2022/1當相應的比色杯每一次通過光路系統(tǒng)時，光路系統(tǒng)會測量并記錄下相應的吸光度光路系統(tǒng)可以測量后分光后12個波長的相應吸光度。12有效波長:340,376,415,450,480,505,546,570,600,660,700,800nm多數(shù)檢測項目都使用雙波長檢測方法。（可去除干擾物對檢測結果的影響）Reactionsequence2022/10/299當相應的比色杯每一次通過光路系統(tǒng)時，光2022/10/29102022/10/22102022/10/29112022/10/2211儀器讀數(shù)的原理不同儀器每個循環(huán)周期的時間間隔ModularP18秒Cobasc70216秒CobasC5018秒ModularD12秒C31112秒反應轉盤不停的周期旋轉當相應的比色杯通過光路系統(tǒng)時，光路系統(tǒng)會測量并記錄下相應的吸光度在不同的時間點加入相應的反應試劑2022/10/2912儀器讀數(shù)的原理不同儀器每個循環(huán)周期的時間間隔反應轉盤不停的周Reactionsequence2022/10/2913Reactionsequence2022/10/2213Instrumentcycle2022/10/2914Instrumentcycle2022/10/2214Endpointandrate(kinetic)assays自動生化分析常用的方法有:終點法（EndPointAssays）：一般在整個反應完成后再來檢測吸光度速率法（Rateassays）：一般在反應的過程中監(jiān)測吸光度的變化情況2022/10/2915Endpointandrate(kinetic)as終點分析法時間吸光度A1tS+R1基于被測物質(zhì)在反應過程中到達反應終點或平衡點，根據(jù)該點吸光度的大小求出被測物濃度，稱為終點法。

終點法的計算：從時間-吸光度曲線來看，到達反應終點時，吸光度將不再變化。在達到終點時任取一點進行測定，此時底物和產(chǎn)物的量都不再變化。吸光度A1S+R1吸光度2022/10/2916終點分析法時間吸光度A1tS+R1兩點終點法（2-pointend）一點終點法（1-pointend）一點終點單試劑（1-pointendpointassay–onereagent）一點終點雙試劑（1-pointendpointassay–tworeagents）三點終點法（3-pointend）

終點分析法（Endpointassays）2022/10/2917兩點終點法（2-pointend）終點分析法（Endpoi

兩點終點法

在被測物反應或指示反應尚未開始時，選擇第一個吸光度，在反應到達終點或平衡時選擇第二個吸光度，此兩點吸光度之差用于計算結果。2022/10/2918兩點終點法在被測物反應或指示反應尚未開始去除了樣本的本底采用兩個測量點

針對兩個或多個試劑的項目第一個讀數(shù)點一般選在添加最后一個試劑之前第二個讀數(shù)點一般選在加入最后一個試劑之后且已經(jīng)達到了反應終點

兩點終點法的特點C+D(顯色產(chǎn)物)+B1(試劑1)+B2(試劑2)A(樣本)Endpointassays2022/10/2919去除了樣本的本底兩點終點法的特點C+D(顯色產(chǎn)兩點終點法的反應曲線–Cobasc702EndpointassaysSample+R1Mp1absbeforeadditionofR3Mp2absatreactionend2022/10/2920兩點終點法的反應曲線–Cobasc702Endpoint兩點讀數(shù)的時間點:第19點測量包含了樣本和試劑1的本底

sample+reagent1第

38點在加入所有試劑后，反應達到終點

sample+reagent1+reagent2兩點終點法的應用參數(shù)–Cobasc702測量的兩個讀數(shù)點方法類型總反應時間（min）2PointEndpointassayapplicationsettings2022/10/2921兩點讀數(shù)的時間點:兩點終點法的應用參數(shù)–Cobasc7 RF-IIC4C3ASLCRPLIGGIGAIGM兩點終點法分析項目舉例Endpointassays2022/10/2922 RF-IIC4兩點終點法一點終點法A單試劑一點終點法例如:CHOL/TG….在反應到達終點，即在時間-吸光度曲線上吸光度不再改變時選擇一個終點吸光度值，用于計算結果。B雙試劑一點終點法Mg(雙試劑)…2022/10/2923一點終點法A單試劑一點終點法在反應到單試劑一點終點法的特點（1-pointendpointassay–onereagent）不包含樣本的本底僅進行一個點的測量檢測項目舉例：甘油三酯（TG）EndpointassaysA(樣本)

C+D(顯色產(chǎn)物)+B(試劑)2022/10/2924單試劑一點終點法的特點（1-pointendpointa單試劑一點終點法的反應曲線1-pointendpointassay–onereagentsEndpointassays2022/10/2925單試劑一點終點法的反應曲線1-pointendpoint不包含樣本的本底僅進行一點測量應用項目舉例：Magnesium不采用兩點終點法主要是樣本和R1體積相加仍<180uL(最小反應體積，無法測量）雙試劑一點終點法的特點（1-pointendpointassay–tworeagents）C+D(product)+B1(reagent1)+B2(reagent2)A(sample)2022/10/2926不包含樣本的本底雙試劑一點終點法的特點（1-pointen1stentry: 方法類型2ndentry: 總分析時間3rd-6thentry: 測量點

一點終點法應用參數(shù)（1PointEndpointassay）Utility-Application-Analyze2022/10/2927一點終點法應用參數(shù)（1PointEndpointassTRIGL

CHO

一點終點法分析項目舉例Endpointassays2022/10/2928TRIGLCHO一點例如,多項同測組合試劑盒,CHO與TG同一測定

即雙終點法,在一個通道內(nèi)一次進行兩項反應相關的終點法測定.三點終點法2022/10/2929例如,多項同測組合試劑盒,CHO與TG同一測定上升increasing或下降decreasing終點法反應的方向（ReactionDirection）2022/10/2930上升increasing或下降decreasing終點速率法

吸光度tt2t1t3t4△A1△A2△A3S+R時間A1

利用線性反應期，計算出單位時間的吸光度變化△A/min，來計算酶的活性。單位時間的吸光度變化量是一致的在酶促反應過程中,在反應速度恒定期(線性反應期)來連續(xù)觀察和記錄一定反應時間內(nèi)底物或代謝產(chǎn)物變化速度的化學方法.2022/10/2931速率法

吸光度tt2t1t3t4△速率A法（RateA）兩點速率法（2-pointRate）

速率法（Endpointassays）2022/10/2932速率A法（RateA）速率法（Endpointassa速率A法

A單試劑速率法例如:ACP\AFU

B雙試劑速率法例如:ALT\AST\CK…在較長的反應時間區(qū)段內(nèi),每隔一定時間讀取一次吸光度值,至少讀取4點,得到3個△A,求出單位時間的反應速率△A/min

.通過最小二乘法（leastsquaresmethod）2022/10/2933速率A法

A單試劑速率法B雙試劑速率法RateAassay–ModularPReag.atR3timingLastmp1st.mpSampleReag.atR1timingRateassays2022/10/2934RateAassay–ModularPReag.GOT/AST GGTGPT/ALT LipaseALP GLDHAmylase LDHCHE CKMB 速率A法-分析項目舉例EnzymesRateassays2022/10/2935GOT/AST GGT速率A法-分析項目舉例Enzymes2點速率法

2點速率法尿素氮指在時間-吸光度曲線上選擇兩個測光點，此兩點既非反應初始吸光度亦非終點吸光度，這兩點的單位時間吸光度差值用于結果計算。2022/10/29362點速率法

2點速率法尿素氮2-pointRateassayRateassaysC+D(product)+B1(reagent1)+B2(reagent2)A(sample)Enzyme2022/10/29372-pointRateassayRateassaysC采用一種或多種試劑檢測兩個測量點檢測固定的間隔時間內(nèi)兩點的吸光度變化。

換算成

Abs/min參與計算在加入最后最后一個試劑之后進行吸光度檢測。兩點速率法的特點2-pointRateassayRateassays2022/10/2938采用一種或多種試劑兩點速率法的特點2-pointRate2-pointRateassay–ModularPRateassays2022/10/29392-pointRateassay–ModularPAmmonia Acidphosphatase Non-prostaticphosphataseUrinary/CSFprotein BicarbonateUreaRateassays2點速率

法-分析項目舉例2022/10/2940Ammonia Rateassays2點速率法-分析項目ReactionDirection上升decreasing或下降increasing2022/10/2941ReactionDirection上升decreasing生化反應曲線

2022/10/2942生化反應曲線2022/10/22422022/10/29432022/10/22432022/10/29442022/10/22442022/10/29452022/10/22452022/10/29462022/10/22462022/10/29472022/10/22472022/10/29482022/10/22482022/10/29492022/10/22492022/10/29502022/10/22502022/10/29512022/10/22512022/10/29522022/10/22522022/10/29532022/10/22532022/10/29542022/10/22542022/10/29552022/10/22552022/10/29562022/10/2256ThankyouforyourattentionRocheDiagnostics(Shanghai)LimitedShanghai200031ChinaThispresentationisourintellectualproperty.Withoutourwrittenconsent,itshallneitherbecopiedinanymanner,norusedformanufacturing,norcommunicatedtothirdparties.COBASandLIFENEEDSANSWERSaretrademarksofRoche2022/10/2957ThankyouforyourattentionRo生化反應曲線

2022/10/2958生化反應曲線2022/10/221生化分析基本原理

生化反應曲線內(nèi)容概況2022/10/2959內(nèi)容概況2022/10/222羅氏生化分析系統(tǒng)產(chǎn)品線Cobas6000(c501)600T/HModularD2400T/HModularP800T/HCobasc311300T/HCobasc111180T/HCobas80002000T/H2022/10/2960羅氏生化分析系統(tǒng)產(chǎn)品線Cobas6000(c501)Mcobas?8000模塊化組合分析系統(tǒng)

智能、高效、強勁

2022/10/2961cobas?8000模塊化組合分析系統(tǒng)

物質(zhì)對光吸收的基本定律－Lambert-

Beer定律

Lambert－Beer定律表達為:

當一束平行的單色光通過含有均勻吸光物質(zhì)的溶液時,溶液的吸光度(A)與溶液的濃度(C)和光透過液層厚度(L)的乘積成正比。物質(zhì)對光吸收的吸光系數(shù)（e）為常數(shù)。☆其數(shù)學表達式：A=e*C*L

I入射光透射光I0==-------光吸收的基本定律=lightdetector2022/10/2962物質(zhì)對光吸收的基本定律－Lambert-Beer定律

根據(jù)Lambert-Beer定律來計算待測物濃度如若吸光系數(shù)(ε)未知，我們就需要采用定標曲線來計算待測物的濃度。

濃度(amountofsubstance)吸光度(amountofcolor)401 2 3 4 5 6706050302010Calibrator/standard標準品(cfas)待測樣本Concx=ΔAbsxxConcs

AbssConcx =待測樣本濃度Concs =標準品濃度Δ

Absx =樣本吸光度Abss =標準品吸光度

此值為定值2022/10/2963根據(jù)Lambert-Beer定律來計算待測物濃度濃度(aLambert-Beer定律適合于任何均勻非散射的介質(zhì)

生化比色分析特定蛋白透射比濁分析Lambert-Beer定律分光光度法定量分析的依據(jù)2022/10/2964Lambert-Beer定律生化比色分析特定蛋白透射比濁RocheHitachiPhotometer2022/10/2965RocheHitachiPhotometer2022/1當相應的比色杯每一次通過光路系統(tǒng)時，光路系統(tǒng)會測量并記錄下相應的吸光度光路系統(tǒng)可以測量后分光后12個波長的相應吸光度。12有效波長:340,376,415,450,480,505,546,570,600,660,700,800nm多數(shù)檢測項目都使用雙波長檢測方法。（可去除干擾物對檢測結果的影響）Reactionsequence2022/10/2966當相應的比色杯每一次通過光路系統(tǒng)時，光2022/10/29672022/10/22102022/10/29682022/10/2211儀器讀數(shù)的原理不同儀器每個循環(huán)周期的時間間隔ModularP18秒Cobasc70216秒CobasC5018秒ModularD12秒C31112秒反應轉盤不停的周期旋轉當相應的比色杯通過光路系統(tǒng)時，光路系統(tǒng)會測量并記錄下相應的吸光度在不同的時間點加入相應的反應試劑2022/10/2969儀器讀數(shù)的原理不同儀器每個循環(huán)周期的時間間隔反應轉盤不停的周Reactionsequence2022/10/2970Reactionsequence2022/10/2213Instrumentcycle2022/10/2971Instrumentcycle2022/10/2214Endpointandrate(kinetic)assays自動生化分析常用的方法有:終點法（EndPointAssays）：一般在整個反應完成后再來檢測吸光度速率法（Rateassays）：一般在反應的過程中監(jiān)測吸光度的變化情況2022/10/2972Endpointandrate(kinetic)as終點分析法時間吸光度A1tS+R1基于被測物質(zhì)在反應過程中到達反應終點或平衡點，根據(jù)該點吸光度的大小求出被測物濃度，稱為終點法。

終點法的計算：從時間-吸光度曲線來看，到達反應終點時，吸光度將不再變化。在達到終點時任取一點進行測定，此時底物和產(chǎn)物的量都不再變化。吸光度A1S+R1吸光度2022/10/2973終點分析法時間吸光度A1tS+R1兩點終點法（2-pointend）一點終點法（1-pointend）一點終點單試劑（1-pointendpointassay–onereagent）一點終點雙試劑（1-pointendpointassay–tworeagents）三點終點法（3-pointend）

終點分析法（Endpointassays）2022/10/2974兩點終點法（2-pointend）終點分析法（Endpoi

兩點終點法

在被測物反應或指示反應尚未開始時，選擇第一個吸光度，在反應到達終點或平衡時選擇第二個吸光度，此兩點吸光度之差用于計算結果。2022/10/2975兩點終點法在被測物反應或指示反應尚未開始去除了樣本的本底采用兩個測量點

針對兩個或多個試劑的項目第一個讀數(shù)點一般選在添加最后一個試劑之前第二個讀數(shù)點一般選在加入最后一個試劑之后且已經(jīng)達到了反應終點

兩點終點法的特點C+D(顯色產(chǎn)物)+B1(試劑1)+B2(試劑2)A(樣本)Endpointassays2022/10/2976去除了樣本的本底兩點終點法的特點C+D(顯色產(chǎn)兩點終點法的反應曲線–Cobasc702EndpointassaysSample+R1Mp1absbeforeadditionofR3Mp2absatreactionend2022/10/2977兩點終點法的反應曲線–Cobasc702Endpoint兩點讀數(shù)的時間點:第19點測量包含了樣本和試劑1的本底

sample+reagent1第

38點在加入所有試劑后，反應達到終點

sample+reagent1+reagent2兩點終點法的應用參數(shù)–Cobasc702測量的兩個讀數(shù)點方法類型總反應時間（min）2PointEndpointassayapplicationsettings2022/10/2978兩點讀數(shù)的時間點:兩點終點法的應用參數(shù)–Cobasc7 RF-IIC4C3ASLCRPLIGGIGAIGM兩點終點法分析項目舉例Endpointassays2022/10/2979 RF-IIC4兩點終點法一點終點法A單試劑一點終點法例如:CHOL/TG….在反應到達終點，即在時間-吸光度曲線上吸光度不再改變時選擇一個終點吸光度值，用于計算結果。B雙試劑一點終點法Mg(雙試劑)…2022/10/2980一點終點法A單試劑一點終點法在反應到單試劑一點終點法的特點（1-pointendpointassay–onereagent）不包含樣本的本底僅進行一個點的測量檢測項目舉例：甘油三酯（TG）EndpointassaysA(樣本)

C+D(顯色產(chǎn)物)+B(試劑)2022/10/2981單試劑一點終點法的特點（1-pointendpointa單試劑一點終點法的反應曲線1-pointendpointassay–onereagentsEndpointassays2022/10/2982單試劑一點終點法的反應曲線1-pointendpoint不包含樣本的本底僅進行一點測量應用項目舉例：Magnesium不采用兩點終點法主要是樣本和R1體積相加仍<180uL(最小反應體積，無法測量）雙試劑一點終點法的特點（1-pointendpointassay–tworeagents）C+D(product)+B1(reagent1)+B2(reagent2)A(sample)2022/10/2983不包含樣本的本底雙試劑一點終點法的特點（1-pointen1stentry: 方法類型2ndentry: 總分析時間3rd-6thentry: 測量點

一點終點法應用參數(shù)（1PointEndpointassay）Utility-Application-Analyze2022/10/2984一點終點法應用參數(shù)（1PointEndpointassTRIGL

CHO

一點終點法分析項目舉例Endpointassays2022/10/2985TRIGLCHO一點例如,多項同測組合試劑盒,CHO與TG同一測定

即雙終點法,在一個通道內(nèi)一次進行兩項反應相關的終點法測定.三點終點法2022/10/2986例如,多項同測組合試劑盒,CHO與TG同一測定上升increasing或下降decreasing終點法反應的方向（ReactionDirection）2022/10/2987上升increasing或下降decreasing終點速率法

吸光度tt2t1t3t4△A1△A2△A3S+R時間A1

利用線性反應期，計算出單位時間的吸光度變化△A/min，來計算酶的活性。單位時間的吸光度變化量是一致的在酶促反應過程中,在反應速度恒定期(線性反應期)來連續(xù)觀察和記錄一定反應時間內(nèi)底物或代謝產(chǎn)物變化速度的化學方法.2022/10/2988速率法

吸光度tt2t1t3t4△速率A法（RateA）兩點速率法（2-pointRate）

速率法（Endpointassays）2022/10/2989速率A法（RateA）速率法（Endpointassa速率A法

A單試劑速率法例如:ACP\AFU

B雙試劑速率法例如:ALT\AST\CK…在較長的反應時間區(qū)段內(nèi),每隔一定時間讀取一次吸光度值,至少讀取4點,得到3個△A,求出單位時間的反應速率△A/min

.通過最小二乘法（leastsquaresmethod）2022/10/2990速率A法

A單試劑速率法B雙試劑速率法RateAassay–ModularPReag.atR3timingLastmp1st.mpSampleReag.atR1timingRateassays2022/10/2991RateAassay–ModularPReag.GOT/AST GGTGPT/ALT LipaseALP GLDHAmylase LDHCHE CKMB 速率A法-分析項目舉例EnzymesRateassays2022/10/2992GOT/AST GGT速率A法-分析項目舉例Enzymes2點速率法

2點速率法尿素氮指在時間-吸光度曲線上選擇兩個測光點，此兩點既非反應初始吸光度亦非終點吸光度，這兩點的單位時間吸光度差值用于結果計算。2022/10/29932點速率法