1、第八章 臨床自動(dòng)生化分析儀器 automatic biochemistry analyzer2022/9/281第八章 臨床自動(dòng)生化分析儀器 automatic HITACHI 7080 全自動(dòng)生化分析儀2022/9/282HITACHI 7080 全自動(dòng)生化分析儀2022/9/26BS-200全自動(dòng)生化分析儀 2003年，我國第一臺擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的BS-300全自動(dòng)生化分析儀在深圳研制成功并投入臨床應(yīng)用。2022/9/283BS-200全自動(dòng)生化分析儀 2003年，我國第一臺擁有自日立7180型全自動(dòng)生化分析儀2022/9/284日立7180型全自動(dòng)生化分析儀2022/9/264 自動(dòng)生化

2、分析儀由電腦控制，將生化分析中的取樣、加試劑、混勻、保溫反應(yīng)、檢測、結(jié)果計(jì)算、可靠性判斷、顯示和打印、以及清洗等步驟組合在一起自動(dòng)進(jìn)行操作的分析儀器。 自動(dòng)生化分析儀的定義2022/9/285 自動(dòng)生化分析儀由電腦控制，將生化分析中的取樣、加試劑 自動(dòng)生化分析技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)提高了臨床生化檢驗(yàn)質(zhì)量和速度；減輕檢驗(yàn)人員的勞動(dòng)強(qiáng)度；節(jié)約樣品和試劑；增加檢驗(yàn)項(xiàng)目；提高檢測精密度，減少實(shí)驗(yàn)誤差；并且有利于臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)現(xiàn)。 2022/9/286 自動(dòng)生化分析技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)提高了臨床生化檢驗(yàn)質(zhì)量和速度；202第一節(jié) 自動(dòng)生化分析儀的類型按其工作方式不同分為：連續(xù)流動(dòng)式(continuous streaming

3、 movementstyle)或管道式：已很少用離心式(centrifugation style) ：已很少用分立式(discretestyle)：應(yīng)用最廣泛干片式(drying style) ：急診多用2022/9/287第一節(jié) 自動(dòng)生化分析儀的類型按其工作方式不同分為：2022一、連續(xù)流動(dòng)式自動(dòng)生化分析儀1957年，美國的Technicon公司根據(jù)Skeggs的設(shè)計(jì)方案制造了世界上第一臺自動(dòng)生化儀AutoAnalyzer。它就是單通道連續(xù)流動(dòng)式。連續(xù)流動(dòng)式的自動(dòng)生化分析儀從早期的單通道，只測定2個(gè)生化指標(biāo)，到1977年發(fā)展成內(nèi)置計(jì)算機(jī)控制的連續(xù)多通道生化自動(dòng)分析儀，每小時(shí)可測定150個(gè)樣本

4、，每個(gè)樣本可測 20個(gè)生化指標(biāo)。2022/9/288一、連續(xù)流動(dòng)式自動(dòng)生化分析儀1957年，美國的Techni（一）儀器結(jié)構(gòu)1.概念：在測定過程中各待測樣品與試劑混合后的化學(xué)反應(yīng)均在同一管道內(nèi)流動(dòng)的過程中完成的。2.儀器主要構(gòu)成部件：A.樣品盤:置放聚乙烯塑料杯(或試管)，用以置放待測樣品和標(biāo)準(zhǔn)液。B.比例泵:樣品和各種試劑的用量以及管道氣泡的多少均由比例泵決定。C.混合器:一種由玻璃制成的螺旋管，將比重不同的液體充分混合。D.透析器:作用是去除反應(yīng)管道中大、小分子干擾物。2022/9/289（一）儀器結(jié)構(gòu)2022/9/269（二）工作原理在微機(jī)控制下，通過比例泵將標(biāo)本和試劑注入到連續(xù)的管道系

5、統(tǒng)中，在一定的溫度下，在管道內(nèi)完成混合、去除干擾物，保溫，比色測定，信號放大，運(yùn)算處理，最后將結(jié)果顯示并打印出來。2022/9/2810（二）工作原理在微機(jī)控制下，通過比例泵將標(biāo)本和試劑注入到連續(xù)（三）儀器特點(diǎn)在檢測過程中，樣品和樣品之間需用空氣進(jìn)行隔離，或用空白試劑或者是緩沖液來隔離。1.空氣分段系統(tǒng):該系統(tǒng)是在樣品輸送的同時(shí)，由空氣管吸入氣泡，氣泡將由同樣原理吸入并在試劑管道中連續(xù)流動(dòng)的試劑分成均勻的節(jié)段，防止交叉污染。2.試劑分段系統(tǒng):用試劑空白或緩沖液來間隔每個(gè)樣品的反應(yīng)液。又可分為流動(dòng)注射系統(tǒng)和間隙式系統(tǒng)。流動(dòng)注射系統(tǒng)的樣品用轉(zhuǎn)動(dòng)閥加注，試劑流動(dòng)仍用比例泵驅(qū)動(dòng)，不再加入空氣。按此規(guī)律

6、，樣品依次連續(xù)地被檢測。間隙式的特點(diǎn)是每一次進(jìn)樣都必須在前一樣品的分析過程結(jié)束后(包括清洗)才能開始，不能連續(xù)依次進(jìn)樣 2022/9/2811（三）儀器特點(diǎn)在檢測過程中，樣品和樣品之間需用空氣進(jìn)行隔離，由于所需試劑量大，易產(chǎn)生交叉污染，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，故障不易排除，到20世紀(jì)80年代初，連續(xù)流動(dòng)式儀器已開始被20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的分立式和離心式儀器所代替。2022/9/2812由于所需試劑量大，易產(chǎn)生交叉污染，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，故障不易排除，到二、離心式自動(dòng)生物化學(xué)分析儀（一）儀器結(jié)構(gòu)離心式生物化學(xué)分析儀是1969年發(fā)展起來的一種機(jī)型，它的全部檢驗(yàn)過程是在一個(gè)類似離心機(jī)轉(zhuǎn)頭樣的圓盤上完成的。離心式分析儀

7、由加樣和分析兩個(gè)部分組成。加樣部分：包括樣品盤、試劑盤、吸樣臂、試劑臂和電子控制部分等。分析部分：除安裝有特殊的離心轉(zhuǎn)盤外，還有溫控和光學(xué)檢測系統(tǒng)，以及微機(jī)信息處理和顯示系統(tǒng)。2022/9/2813二、離心式自動(dòng)生物化學(xué)分析儀（一）儀器結(jié)構(gòu)離心式生物化學(xué)分（二）工作原理特點(diǎn)：在整個(gè)分析過程中的每一個(gè)步驟幾乎是同時(shí)完成的同步分析。樣品量和試劑量均為微量級（樣品1-50l，試劑120 -130l），分析速度快（可達(dá)600 tests/h）。此類儀器按照設(shè)計(jì)不同可用光度法、濁度法和散射法及終點(diǎn)法和動(dòng)態(tài)法進(jìn)行分析。2022/9/2814（二）工作原理特點(diǎn)：在整個(gè)分析過程中的每一個(gè)步驟幾乎是同時(shí)完三、干

8、化學(xué)式自動(dòng)生物化學(xué)分析儀（一）工作原理 干化學(xué)式分析儀是采用干化學(xué)（dry chemistry）方法，將發(fā)生在液相反應(yīng)物中的反應(yīng)，轉(zhuǎn)移到一個(gè)固相載體上，利用分光檢測系統(tǒng)進(jìn)行檢測的一類新型儀器。多采用多層薄膜(multiple layer film)的固相試劑技術(shù)，僅需將樣品加在固相試劑上進(jìn)行測定。當(dāng)編有條形碼的特定試驗(yàn)的試條、試片或袋式試劑包放進(jìn)測定裝置后，其貯存的信息就變成測定功能，直至最后報(bào)出結(jié)果。干化學(xué)分析儀大都采用反射光度法(reflectance spectroscopy)和基于離子選擇電極(ion selective electrode，ISE)的差示電位法(differentia

9、l potentiometry)。2022/9/2815三、干化學(xué)式自動(dòng)生物化學(xué)分析儀（一）工作原理 干化學(xué)式分析（二）儀器的類型及特點(diǎn)1.反射光度法系統(tǒng):使用的是試紙條，每一個(gè)檢測項(xiàng)目都有各自專用的試劑條，由3個(gè)主要部分組成：密碼磁帶：位于劑試條背面,是該項(xiàng)目的全部檢測程序。血漿分離區(qū)：位于正面下部并標(biāo)以紅色,由玻璃纖維和紙層構(gòu)成。反應(yīng)區(qū)：位于試劑條的正面上部。2.膠片涂層技術(shù)的化學(xué)分析系統(tǒng):使用試劑片（塊），采用的是膠片涂層技術(shù),各種反應(yīng)都在干片(多層膜片)內(nèi)進(jìn)行。其工作原理為：應(yīng)用涂層技術(shù)制作膠片基礎(chǔ)的感光乳劑，將其均勻呈層狀地涂布在支持層或下層上。3.袋式分析儀:采用袋式的干試劑包進(jìn)行

10、臨床化學(xué)分析。袋式試劑包由透明的雙層塑料薄膜制成，每袋均有不同的測定項(xiàng)目英文縮寫標(biāo)記。測定操作開始時(shí)將試劑包放進(jìn)儀器，樣品及其稀釋液由探針刺孔注入包內(nèi)，在反應(yīng)過程中的不同階段，試劑小袋經(jīng)破裂器擊碎，混合及保溫，然后透明小袋經(jīng)機(jī)械碾壓形成比色杯用于測定，最后通過計(jì)算機(jī)系統(tǒng)換算結(jié)果并發(fā)出報(bào)告。 2022/9/2816（二）儀器的類型及特點(diǎn)1.反射光度法系統(tǒng):使用的是試紙條，每四、分立式自動(dòng)生化分析儀（一）工作原理 分立式自動(dòng)生化分析儀是按人工操作的方式編排程序，并以有序的機(jī)械動(dòng)作代替人工，按程序依次完成各項(xiàng)操作的自動(dòng)分析儀器。儀器操作過程中的各環(huán)節(jié)用傳送帶連接，按程序依次操作。2022/9/281

11、7四、分立式自動(dòng)生化分析儀（一）工作原理 分立式自動(dòng)生化分析 （二）基本結(jié)構(gòu) 1. 樣品盤或樣品架 樣品盤（specimen disc）：放置待測樣品的轉(zhuǎn)盤，可放置一定數(shù)量的樣品杯（specimen cup）或不同規(guī)格的采血試管，通過樣品盤的轉(zhuǎn)動(dòng)來控制不同樣品的進(jìn)樣。2022/9/2818 （二）基本結(jié)構(gòu) 1. 樣品盤或樣品架 樣品盤（sp 樣品架（specimen stock）：每個(gè)樣品架可放數(shù)只樣品杯或采血試管（多為5只或10只）。樣品架的移動(dòng)通過樣品傳送帶來進(jìn)行。樣品架上的條形碼（barcode）或編碼孔可識別樣品架號及樣品位置號。 2022/9/2819 樣品架（specimen st

12、ock）：每個(gè)樣品架可樣品架的優(yōu)點(diǎn)隨著樣品架移動(dòng)及樣品的被檢測，可不斷追加已放置樣品杯或采血試管的樣品架；通過樣品架的移動(dòng)能將樣品傳送到另一個(gè)分析模塊（analysisdie-block）甚至另一臺分析儀上再進(jìn)行分析。 2022/9/2820樣品架的優(yōu)點(diǎn)隨著樣品架移動(dòng)及樣品的被檢測，可不斷追加已放置2.試劑室和試劑瓶 轉(zhuǎn)盤式試劑室（reagent chamber）：內(nèi)裝放置試劑瓶的轉(zhuǎn)盤，一般可放置20種以上具有一定形狀的塑料試劑瓶，大型分析儀可放置3045種試劑瓶。 試劑瓶容量一般為10100ml。通過試劑轉(zhuǎn)盤的轉(zhuǎn)動(dòng)來選用不同試劑。 2022/9/28212.試劑室和試劑瓶 轉(zhuǎn)盤式試劑室（re

13、agent c 試劑架式試劑室：可放置容量為250ml500ml的任意形狀的試劑瓶，試劑瓶不能轉(zhuǎn)動(dòng)，但每個(gè)試劑瓶內(nèi)引出一條試劑管路及其噴嘴，即每種試劑均有專用的加試劑裝置，因而不同試劑間無交叉污染。 但試劑管路較長使試劑存在一定的死體積，因而適宜用于使用頻率高、消耗試劑量大的檢測項(xiàng)目。 2022/9/2822 試劑架式試劑室：可放置容量為250ml500ml的 大型分析儀同時(shí)備有第一試劑室和第二試劑室，即具備對同一檢測項(xiàng)目添加兩次試劑的功能，個(gè)別分析儀還具有加入第三試劑的功能。 對有條形碼裝置的儀器可將帶條形碼的試劑瓶放在試劑室轉(zhuǎn)盤上的任意位置，儀器能自動(dòng)識別試劑的種類、批號和有效期。試劑室均

14、具有冷藏裝置，可將試劑保存在410。 2022/9/2823 大型分析儀同時(shí)備有第一試劑室和第二試劑室，即具備對同3.反應(yīng)杯和反應(yīng)盤 反應(yīng)杯（reaction cup）是樣品與試劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)的場所，同時(shí)用作比色杯。由透光特性好的硬塑料或石英玻璃制成。比色杯光徑不同分析儀有0.50.7厘米不等，大多數(shù)分析儀在計(jì)算時(shí)將其折算為1厘米光徑。 2022/9/28243.反應(yīng)杯和反應(yīng)盤 反應(yīng)杯（reaction cup 反應(yīng)盤（reaction disc）：100只或更多的反應(yīng)杯圍成一圈組成。在測定過程中反應(yīng)盤作恒速的圓周運(yùn)動(dòng)，在靜止時(shí)向反應(yīng)杯中加入樣品、試劑或進(jìn)行攪拌混勻，當(dāng)反應(yīng)盤恒速圓周運(yùn)動(dòng)經(jīng)過檢

15、測窗口的比色杯可進(jìn)行吸光度檢測。2022/9/2825 反應(yīng)盤（reaction disc）：100只或更多4.取樣和加試劑裝置 (1)取樣裝置（sampling assembly）： 由取樣針、取樣臂、取樣管路、取樣注射器和閥門組成，能定量吸取樣品并加入到反應(yīng)杯。 不同分析儀的取樣容量有不同的范圍，一般為235l，步進(jìn)0.1微升不等。2022/9/28264.取樣和加試劑裝置 (1)取樣裝置（sampling 取樣針設(shè)有電子液面感應(yīng)器，取樣針于樣品上方下降，一旦接觸到樣品液面即停止下降而開始吸樣。適用于不同的采血試管上機(jī)測定2022/9/2827 取樣針設(shè)有電子液面感應(yīng)器，取樣針于樣品上方下

16、降，一旦 多數(shù)加樣裝置設(shè)有防撞功能，遇到阻礙時(shí)取樣針立即停止運(yùn)動(dòng)并報(bào)警。某些取樣針還設(shè)有阻塞報(bào)警功能，當(dāng)取樣針被樣品中的凝塊、纖維蛋白等物質(zhì)阻塞時(shí)，機(jī)器會(huì)自動(dòng)報(bào)警、沖洗取樣針，并跳過當(dāng)前樣品，進(jìn)行下一個(gè)樣品的取樣檢測。 2022/9/2828 多數(shù)加樣裝置設(shè)有防撞功能，遇到阻礙時(shí)取樣針立即停取樣針防交叉污染（crossing contamination）措施 絕大多數(shù)采用水洗方式（又有瀑布式和涌泉式之分），在吸取另一個(gè)樣品前對接觸樣品的樣品針內(nèi)外壁進(jìn)行沖洗； 也有采用化學(xué)惰性液（chemical inertiafluid）膜的方式來隔絕樣品與取樣針內(nèi)外壁之間的接觸。 2022/9/2829取樣

17、針防交叉污染（crossing contaminati(2)加試劑裝置 加試劑裝置用于定量吸取試劑加入反應(yīng)杯，可加入試劑容量一般為20350l。步進(jìn)15微升不等，取樣精度在1微升左右。 注射器方式：組成部件與取樣裝置類似，其液面感應(yīng)系統(tǒng)能檢測并提示試劑剩余量。 灌注式：具有許多條試劑管路及其噴嘴，每種試劑單獨(dú)使用一條試劑管路和噴嘴，不存在各試劑間的交叉污染。 2022/9/2830(2)加試劑裝置 加試劑裝置用于定量吸取試劑加入反應(yīng)杯， 大型自動(dòng)生化儀多具有兩組加試劑裝置，可分別從兩個(gè)試劑室吸取同一個(gè)檢測項(xiàng)目的第一試劑和第二試劑，大多數(shù)分析儀所有檢測項(xiàng)目加入第二試劑的時(shí)間點(diǎn)統(tǒng)一固定為1個(gè)或2個(gè)

18、點(diǎn)，也有分析儀有3個(gè)加入時(shí)間點(diǎn)可供選擇。 2022/9/2831 大型自動(dòng)生化儀多具有兩組加試劑裝置，可分別從兩個(gè)試劑5.混勻與攪拌裝置 反應(yīng)杯里的樣品與試劑通過攪拌棒攪拌而充分混勻，攪拌棒的形狀為扁平棒狀或扁平螺旋狀，表面的疏水材料能防止反應(yīng)液被攪拌棒所攜帶。其工作方式大多為旋轉(zhuǎn)式攪拌，也有震動(dòng)式攪拌方式。也設(shè)置了防止攪拌棒在不同反應(yīng)液之間攜帶交叉污染的清洗措施。 2022/9/28325.混勻與攪拌裝置 反應(yīng)杯里的樣品與試劑通過攪拌棒攪拌6.溫控和定時(shí)系統(tǒng)(1)溫控系統(tǒng) 溫控系統(tǒng)使反應(yīng)杯浸浴在恒溫環(huán)境： 恒溫循環(huán)水浴方式：溫度傳遞速度快，保養(yǎng)要求較高。 恒溫空氣浴方式：溫度傳遞速度不如恒溫

19、水浴循環(huán)方式，保養(yǎng)簡單。 溫度控制器能使循環(huán)水或循環(huán)空氣的溫度控制在規(guī)定溫度0.1。規(guī)定溫度可有37和30兩種選擇，一般固定在37。2022/9/28336.溫控和定時(shí)系統(tǒng)(1)溫控系統(tǒng) 溫控系統(tǒng)使反應(yīng)杯浸 不同分析儀對檢測吸光度的間隔時(shí)間有不同的規(guī)定，反應(yīng)時(shí)間應(yīng)該設(shè)定為此間隔時(shí)間的倍數(shù)。總反應(yīng)時(shí)間一般限制在8.5-10min內(nèi)，個(gè)別分析儀可以設(shè)定為15或22min等。 (2)定時(shí)系統(tǒng)：2022/9/2834 不同分析儀對檢測吸光度的間隔時(shí)間有不同的規(guī)定，反7.光路和檢測系統(tǒng) 自動(dòng)生化分析儀以紫外可見分光光度法為其中心和主要的檢測手段，與一般分光光度計(jì)一樣，其光路和檢測系統(tǒng)由光源、單色器和檢測

20、器組成。 2022/9/28357.光路和檢測系統(tǒng) 自動(dòng)生化分析儀以紫外可見分光光度(1)光源（light source） 一般為鹵素鎢絲燈（halogentungsten filamentlamp），也有采用長壽命的氙燈（xe lamp），要求在340800nm波長范圍內(nèi)能發(fā)射出穩(wěn)定且較平坦的光能。 2022/9/2836(1)光源（light source） 一般為鹵素鎢(2)單色器（monochromato）干涉濾光片（interference filter）分光系統(tǒng)：常帶有340、380、405、500、550、600、660nm等幾種濾光片，各濾光片固定在轉(zhuǎn)盤上，以轉(zhuǎn)盤旋轉(zhuǎn)的方式來選

21、擇波長。這種分光系統(tǒng)在半自動(dòng)和小型自動(dòng)分析儀中常用，且不能同一時(shí)刻進(jìn)行多波長檢測。 光柵（raster）分光系統(tǒng)：常在340（或293）800nm范圍內(nèi)選擇1013種固定的單色光。 2022/9/2837(2)單色器（monochromato）干涉濾光片（in前分光和后分光方式 光柵分光有前分光和后分光兩種方式，光源首先經(jīng)過單色器分光，然后透射到比色溶液的方式為前分光。目前以后分光方式為多見，其優(yōu)點(diǎn)是單色器中沒有轉(zhuǎn)動(dòng)部分，雙波長在同一時(shí)刻檢測，因而提高了檢測的精度和速度。2022/9/2838前分光和后分光方式 光柵分光有前分光和后分光兩種方式， 光源先透過比色杯中的反應(yīng)液再照射到光柵上，經(jīng)色

22、散后所有固定單色光同時(shí)通過各自的光纖傳輸?shù)綄?yīng)的檢測器，微處理器按該分析項(xiàng)目的分析參數(shù)，后分光方式 選擇其中一個(gè)或兩個(gè)波長（雙波長方式）的吸光度值，用于分析結(jié)果的計(jì)算。2022/9/2839 光源先透過比色杯中的反應(yīng)液再照射到光柵上，經(jīng)色散后所光路無可移動(dòng)部分，不需要移動(dòng)儀器的任何部件。可同時(shí)選擇雙波長或多波長進(jìn)行測定，大大降低noise,有效抑制標(biāo)本混濁、溶血等因素對結(jié)果的影響。與前分光系統(tǒng)相比較，后分光光路系統(tǒng)的優(yōu)越性？2022/9/2840光路無可移動(dòng)部分，不需要移動(dòng)儀器的任何部件。與前分光系統(tǒng)相比(3)檢測器（detector） 由光敏二極管及放大電路組成，可按設(shè)定的間隔時(shí)間連續(xù)測定各

23、反應(yīng)杯的吸光度值。 2022/9/2841(3)檢測器（detector） 由光敏二極管及放大電8.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 具有多種數(shù)據(jù)處理功能。 計(jì)算測定結(jié)果 判斷結(jié)果準(zhǔn)確性 保存各種數(shù)據(jù) 自我診斷功能 2022/9/28428.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 具有多種數(shù)據(jù)處理功能。 2022/99.清洗系統(tǒng) 反應(yīng)杯清洗裝置：一個(gè)反應(yīng)杯內(nèi)反應(yīng)和檢測結(jié)束后，該反應(yīng)杯就被沖洗系統(tǒng)及時(shí)沖洗。 清洗過程：由廢液針吸取反應(yīng)杯內(nèi)廢液，加入清洗劑（detergent）沖洗并抽干后，再經(jīng)數(shù)次去離子水沖洗及抽干，然后做杯空白的吸光度檢查，若通過檢查則此反應(yīng)杯可繼續(xù)循環(huán)使用；更高級儀器帶有風(fēng)干技術(shù)。如果不能通過，分析儀將提示該反應(yīng)杯異常，

24、并跳過此反應(yīng)杯使用下一個(gè)反應(yīng)杯，或提示更換反應(yīng)杯。 2022/9/28439.清洗系統(tǒng) 反應(yīng)杯清洗裝置：一個(gè)反應(yīng)杯內(nèi)反應(yīng)和檢測樣品針、試劑針和攪拌棒清洗 一般在用于下一個(gè)樣品、試劑或反應(yīng)杯前即清洗一次，此時(shí)多數(shù)為去離子水沖洗，在一批檢測完成后，則自動(dòng)進(jìn)行清洗劑清洗。 清洗劑可配有1至3種可供選擇，除一種常規(guī)清洗劑外，其它1至2種可按設(shè)定對試劑針、樣品針或反應(yīng)杯進(jìn)行補(bǔ)充清洗。 2022/9/2844樣品針、試劑針和攪拌棒清洗 一般在用于下一個(gè)樣品、試劑第二節(jié) 組合式自動(dòng)分析儀 一、組合式自動(dòng)生化分析儀 將相同或不同的兩臺或兩臺以上的分析部分，即分析模塊進(jìn)行組合連接，采用樣品架方式使樣品通過傳輸線

25、在不同分析模塊間進(jìn)行傳遞并檢測。各分析模塊所分析項(xiàng)目的組合提高了分析效率，這些分析模塊除了基于紫外-可見光譜分析原理的分析模塊外，還有基于離子選擇電極(ISE)的電解質(zhì)分析模塊，甚至還可組合建立在免疫發(fā)光分析原理的免疫分析模塊。 2022/9/2845第二節(jié) 組合式自動(dòng)分析儀 一、組合式自動(dòng)生化分析儀202組合式分析儀2022/9/2846組合式分析儀2022/9/2646二、實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化系統(tǒng) （laboratory automation system，LAS） 包括樣品前處理系統(tǒng)、樣品輸送系統(tǒng)和各樣品分析系統(tǒng)。不同功能的各模塊以同一標(biāo)準(zhǔn)來連接，通過計(jì)算機(jī)控制運(yùn)行。隨著檢測樣品量的增加，只需添

26、加需要的新模塊，將其安裝連接，即可擴(kuò)大處理能力。這樣可避免同類硬件和功能的重復(fù)投資，節(jié)省占地面積所需的基礎(chǔ)投入。當(dāng)一模塊發(fā)生故障時(shí)，其余模塊仍在運(yùn)行，在24小時(shí)內(nèi)任意時(shí)間對模塊進(jìn)行交替保養(yǎng)維護(hù)，不影響日常工作。 2022/9/2847二、實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化系統(tǒng) （laboratory automa樣品前處理系統(tǒng) 能獨(dú)立工作，由樣品投入部、離心分離部、開栓部、在線分注部、非在線分注部、貼條碼部、蓋栓部、樣品分注收存部、樣品接收部等模塊構(gòu)成前處理系統(tǒng)，每一模塊既是系統(tǒng)的部分，又是獨(dú)立的單元，可根據(jù)不同需要選擇使用，具有靈活性和擴(kuò)展性。 也可通過樣品輸送部分與樣品分析系統(tǒng)連接，組成類似工業(yè)領(lǐng)域的生產(chǎn)流水線

27、，從而實(shí)現(xiàn)了從采血到報(bào)告的實(shí)驗(yàn)室的全自動(dòng)化。 檢驗(yàn)周轉(zhuǎn)期的時(shí)間分配中，分析前:65%、樣品運(yùn)送2%、分析中15% 、分析后18%，實(shí)驗(yàn)分析前自動(dòng)化是全實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化的重點(diǎn)2022/9/2848樣品前處理系統(tǒng) 能獨(dú)立工作，由樣品投入部、離心分離部、第三節(jié) 生化自動(dòng)化分析方法概要一、分析方法分類（一）終點(diǎn)法（end assay)（最常用的方法） 被測物質(zhì)在反應(yīng)過程中完全被轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物，到達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)，根據(jù)終點(diǎn)吸光度的大小求出被測物濃度，稱為終點(diǎn)法。 該法稱為平衡法更為恰當(dāng)。從時(shí)間-吸光度曲線來看，到達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)或平衡點(diǎn)時(shí)，吸光度將不再變化。終點(diǎn)法參數(shù)設(shè)置簡單，反應(yīng)時(shí)間一般較長，精密度較好。 2022/9/

28、2849第三節(jié) 生化自動(dòng)化分析方法概要一、分析方法分類（一）終點(diǎn)法終點(diǎn)時(shí)間的確定根據(jù)時(shí)間-吸光度曲線來確定，根據(jù)被測物反應(yīng)終點(diǎn)，結(jié)合干擾物的反應(yīng)情況來確定。2022/9/2850終點(diǎn)時(shí)間的確定根據(jù)時(shí)間-吸光度曲線來確定，2022/9/21一點(diǎn)終點(diǎn)法（one point end assay） 在反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)，即在時(shí)間-吸光度曲線上吸光度不再改變時(shí)選擇一個(gè)終點(diǎn)吸光度值，用于計(jì)算結(jié)果。結(jié)果計(jì)算公式：待測物濃度CU=（待測吸光度AU試劑空白吸光度AB）KK為校準(zhǔn)系數(shù) 2022/9/28511一點(diǎn)終點(diǎn)法（one point end assay） 一點(diǎn)終點(diǎn)法反應(yīng)曲線 A單試劑一點(diǎn)終點(diǎn)法 B雙試劑一點(diǎn)終點(diǎn)法

29、 R:reagent(試劑)本方法：用來測定總蛋白、清蛋白、葡萄糖氧化酶2022/9/2852一點(diǎn)終點(diǎn)法反應(yīng)曲線 A單試劑一點(diǎn)終點(diǎn)法 B雙試2兩點(diǎn)終點(diǎn)法（two point end assay） 在被測物反應(yīng)或指示反應(yīng)尚未開始時(shí)，選擇第一個(gè)吸光度，在反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)或平衡時(shí)選擇第二個(gè)吸光度，此兩點(diǎn)吸光度之差用于計(jì)算結(jié)果。 計(jì)算公式為： CU=（待測吸光度A2待測吸光度A1）K。 2022/9/28532兩點(diǎn)終點(diǎn)法（two point end assay） 兩點(diǎn)終點(diǎn)法反應(yīng)曲線 A單試劑兩點(diǎn)終點(diǎn)法 B雙試劑兩點(diǎn)終點(diǎn)法 2022/9/2854兩點(diǎn)終點(diǎn)法反應(yīng)曲線 A單試劑兩點(diǎn)終點(diǎn)法 B 該法能有效地消除溶

30、血(hemolysis)、黃疸（icterus）和脂濁（lipo-turbid）等樣品本身光吸收造成的干擾。 血紅蛋白、膽紅素和脂濁的光吸收曲線 2022/9/2855 該法能有效地消除溶血(hemolysis)、黃疸（i（二）固定時(shí)間法（fixed-time assay） 指在時(shí)間-吸光度曲線上選擇兩個(gè)測光點(diǎn)，此兩點(diǎn)既非反應(yīng)初始吸光度亦非終點(diǎn)吸光度，這兩點(diǎn)的吸光度差值用于結(jié)果計(jì)算。有時(shí)也稱此法為兩點(diǎn)法 。 計(jì)算公式與兩點(diǎn)終點(diǎn)法相同， CU=(A2-A1)K。2022/9/2856（二）固定時(shí)間法（fixed-time assay） 固定時(shí)間法反應(yīng)曲線 A單試劑固定時(shí)間法 B雙試劑固定時(shí)間法該

31、分析方法有助于解決某些反應(yīng)的非特異性問題。 2022/9/2857固定時(shí)間法反應(yīng)曲線 A單試劑固定時(shí)間法 （三）連續(xù)監(jiān)測法（continuous monitoring assay） 又稱速率法（rate assay），是在測定酶活性或用酶法測定代謝產(chǎn)物時(shí)，連續(xù)選取時(shí)間-吸光度曲線中線性期（各兩點(diǎn)間吸光度差值相等）的吸光度值，并以此線性期的單位吸光度變化值（A/min）計(jì)算結(jié)果。2022/9/2858（三）連續(xù)監(jiān)測法（continuous monitorin連續(xù)監(jiān)測法反應(yīng)曲線 A單試劑連續(xù)監(jiān)測法 B雙試劑連續(xù)監(jiān)測法 2022/9/2859連續(xù)監(jiān)測法反應(yīng)曲線 A單試劑連續(xù)監(jiān)測法 B雙試酶促反應(yīng)的線

32、性段 1及5值偏小，而234，故A1點(diǎn)至A4點(diǎn)屬線性段 2022/9/2860酶促反應(yīng)的線性段 1及5值偏小，而234，故A連續(xù)監(jiān)測法的優(yōu)點(diǎn) 可以確定線性期并計(jì)算A/min，根據(jù)此值再準(zhǔn)確地計(jì)算酶活性，因而使自動(dòng)生化分析儀在酶活性測定方面顯著地優(yōu)于手工法。連續(xù)監(jiān)測法也可用于測定呈線性反應(yīng)的代謝物濃度，一般是某些基于酶法測定的代謝物。 酶活性（U/L） A/min理論（或校準(zhǔn)）K值。 代謝物濃度CU=A/min校準(zhǔn)K值。 2022/9/2861連續(xù)監(jiān)測法的優(yōu)點(diǎn) 可以確定線性期并計(jì)算A/min1理論K值 多用于酶活性測定中，因酶活性尚無公認(rèn)的校準(zhǔn)品可用。根據(jù)酶活性的國際單位定義得出酶活性的計(jì)算公式

33、為：酶活性 (U/L)=A/min將此式中 以K來表示，即為理論K值 可作為分析參數(shù)輸入到分析儀中。 2022/9/28621理論K值 多用于酶活性測定中，因酶活性尚無公認(rèn)的校準(zhǔn)采用理論K值的前提 應(yīng)當(dāng)是樣品和試劑的加量準(zhǔn)確、比色杯光徑準(zhǔn)確、溫度控制精確以及波長準(zhǔn)確等。但事實(shí)上由于各型分析儀在注射器容積步進(jìn)電機(jī)精度、濾光片帶寬等方面的差異，可造成樣品和試劑加量以及吸光度檢測的偏差，溫度的影響有時(shí)也非常大。 2022/9/2863采用理論K值的前提 應(yīng)當(dāng)是樣品和試劑的加量準(zhǔn)確、比色2.實(shí)際摩爾吸光系數(shù)和K值測定 由于摩爾吸光系數(shù)受比色杯光徑、波長等的影響，書本上或試劑廠家提供的理論摩爾吸光系數(shù)可

34、能與實(shí)際所用分析儀所測的不同，因而有必要獲得實(shí)際的摩爾吸光系數(shù)，然后來計(jì)算理論K值。 2022/9/28642.實(shí)際摩爾吸光系數(shù)和K值測定 由于摩爾吸光系數(shù)受比色（1）NADH（NADPH）摩爾吸光系數(shù)的測定 NADH(還原型輔酶I)（NADPH）(還原型輔酶)沒有標(biāo)準(zhǔn)純制品，而且配成溶液后穩(wěn)定性又較差，不能直接用NADH 或NADPH標(biāo)準(zhǔn)液來校正儀器，須通過有NAD+(NADP+)參與的反應(yīng)途徑。 2022/9/2865（1）NADH（NADPH）摩爾吸光系數(shù)的測定 用已糖激酶 (HK)或葡萄糖脫氫酶(GD)方法測定葡萄糖時(shí)，葡萄糖的消耗與NADH的生成呈等摩爾關(guān)系。葡萄糖有標(biāo)準(zhǔn)純制品。根據(jù)

35、公式A=bC，已知比色杯光徑b和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度，測得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度A后便可計(jì)算出NADH（NADPH）的摩爾吸光系數(shù)為 A/bC。 2022/9/2866用已糖激酶 (HK)或葡萄糖脫氫酶(GD)方法測定葡萄糖時(shí)，測定方法 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度為1Ommo1/L(0.01mol/L)，標(biāo)準(zhǔn)液加入量為3.5L，酶試劑加入量為335L，比色杯光徑為0.7cm，在340nm測得吸光度為0.465，則實(shí)測NADH摩爾吸光系數(shù) = 6424，即在此臺分析儀上340nm波長處測得NADH（NADPH）的摩爾吸光系數(shù)為6424，而理論上NADH（NADPH）的為6220。 2022/9/2867測定方法

36、 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度為1Ommo1/L(0.（2）“色素原”酶促產(chǎn)物在405nm波長摩爾吸光系數(shù)的測定 有許多酶底物為人工合成的“色素原”底物，其本身無色，經(jīng)酶作用后釋放出有色的反應(yīng)產(chǎn)物，在405nm波長具有吸收峰。ALP底物：磷酸對硝基苯酚 (4-Nitrophenyl phosphate，4-NPP) 經(jīng)酶作用后釋放出黃色的對硝基苯酚(4-Nitrophenol，4-NP)GGT底物：-L-谷氨酰對硝基苯胺(-L-Glutamyl-p-nitroanilide)或-L-谷氨酰-3-羥基-對硝基苯胺(-L-Glutamyl-3-carboxyl-p-nitroan)經(jīng)酶作用后釋放出黃色的對硝基

37、苯胺(p-Nitroaniline，4-NA)或?qū)ο趸?5-氨基苯甲酸(2-amino-nitrobenzoicacid， ANBA)。 2022/9/2868（2）“色素原”酶促產(chǎn)物在405nm波長摩爾吸光系數(shù)的測定以對硝基苯酚的摩爾吸光系數(shù)測定為例試劑： 4-NP標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存液(1Ommo1/L) 4-NP標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(2.5mmo1/L，以0.84mol/L AMP緩沖液稀釋而成) 底物緩沖液(l5mmol/L 4-NPP配于0.84mol/L AMP-HCL緩沖液中，37,pH l0.09土0.02)。2022/9/2869以對硝基苯酚的摩爾吸光系數(shù)測定為例試劑：2022/9/266測定方法

38、 4-NP標(biāo)準(zhǔn)液加入量為5L，底物緩沖液加入量為350L，波長405nm，光徑0.7cm，溫度37，測定得吸光度為A1；另用蒸餾水代替4-NP標(biāo)準(zhǔn)液，按上述方法測定其吸光度為A2，4-NP標(biāo)準(zhǔn)液吸光度A= A1- A2，若測得A為0.460，則實(shí)測4-NP摩爾吸光系數(shù)18662 2022/9/2870測定方法 4-NP標(biāo)準(zhǔn)液加入量為5L，底3校準(zhǔn)K值 酶活性校準(zhǔn)品經(jīng)校準(zhǔn)操作后由分析儀自動(dòng)計(jì)算得出。在進(jìn)行酶學(xué)測定時(shí)，如果分析條件的變化如溫度、樣品試劑加量和吸光度檢測偏差可同等程度地影響校準(zhǔn)物和待測樣品，則使用校準(zhǔn)品能進(jìn)行補(bǔ)償。一般來說以使用校準(zhǔn)K值為好，但必須有兩個(gè)先決條件：必須使用配套的試劑；

39、必須使用配套的高質(zhì)量的校準(zhǔn)品，該校準(zhǔn)品應(yīng)具有溯源性。 2022/9/28713校準(zhǔn)K值 酶活性校準(zhǔn)品經(jīng)校準(zhǔn)操作后由分析儀自動(dòng)計(jì)（四）透射比濁法 抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合形成的免疫復(fù)合物，在反應(yīng)液中具有一定的濁度，可由一般分光光度法進(jìn)行透射比濁（transmission turbidimetry）測定，可用于某些蛋白質(zhì)和藥物濃度等的測定。該法須做多點(diǎn)校準(zhǔn)，再經(jīng)非線性回歸，求出抗原或抗體的含量。 2022/9/2872（四）透射比濁法 抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合形成的免疫復(fù)二、常用生化檢測項(xiàng)目分析方法舉例 1終點(diǎn)法檢測 常用的有總膽紅素（氧化法或重氮法）、結(jié)合膽紅素（氧化法或重氮法）、血清總蛋白（雙縮脲法）

40、、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、總膽汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、總膽固醇（膽固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白膽固醇（直接測定法）、鈣（偶氮砷法）、磷（紫外法）、鎂（二甲苯胺藍(lán)法）等。 2022/9/2873二、常用生化檢測項(xiàng)目分析方法舉例 1終點(diǎn)法檢測 常2固定時(shí)間法苦味酸法測定肌酐采用此法。 2022/9/28742固定時(shí)間法苦味酸法測定肌酐采用此法。 2022/9/23連續(xù)監(jiān)測法 對于酶活性測定一般應(yīng)選用連續(xù)監(jiān)測法，如：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、谷氨氨酰基轉(zhuǎn)移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代謝物酶法測定

41、的項(xiàng)目如：脲酶偶聯(lián)法測定尿素等，也可用連續(xù)監(jiān)測法。 2022/9/28753連續(xù)監(jiān)測法 對于酶活性測定一般應(yīng)選用連續(xù)監(jiān)測法4透射比濁法 透射比濁法可用于測定產(chǎn)生濁度反應(yīng)的項(xiàng)目，多數(shù)屬免疫比濁法，載脂蛋白、免疫球蛋白、補(bǔ)體、抗“O”、類風(fēng)濕因子，以及血清中的其他蛋白質(zhì)如前白蛋白、結(jié)合珠蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等均可用此法。 2022/9/28764透射比濁法 透射比濁法可用于測定產(chǎn)生濁度反應(yīng)的第四節(jié) 分析參數(shù)設(shè)置 各種測定項(xiàng)目的分析參數(shù)（analysisparamete）大部分已設(shè)計(jì)好，存于磁盤中，供用戶使用；目前大多數(shù)生化分析儀為開放式，用戶可以更改這些參數(shù)。 生化分析儀一般另外留一些檢測項(xiàng)目的空白通道

42、，由用戶自己設(shè)定分析參數(shù)。因此必須理解各參數(shù)的確切意義。 2022/9/2877第四節(jié) 分析參數(shù)設(shè)置 各種測定項(xiàng)目的分析參數(shù)（一、分析參數(shù)介紹（一）必選分析參數(shù) 1試驗(yàn)名稱（test code）2方法類型（也稱反應(yīng)模式）(assay mode)3反應(yīng)溫度(temperature)4主波長（primary wavelength） 5次波長（secondary wavelength）6. 反應(yīng)方向（response direction）7樣品量（sampling volume）8第一試劑量 （first reagent volume）9第二試劑量（second reagent volume）202

43、2/9/2878一、分析參數(shù)介紹（一）必選分析參數(shù) 1試驗(yàn)名稱（test10總反應(yīng)容量（total reacting volume） 一般180-350l。11孵育時(shí)間（incubate time）12延遲時(shí)間（delay time）13連續(xù)監(jiān)測時(shí)間 （continuous monitoring time）一般為60120s，不少于4個(gè)吸光度檢測點(diǎn)（3個(gè)吸光度變化值） 14校準(zhǔn)液（calibrator）個(gè)數(shù)及濃度 15校準(zhǔn)K值（calibrate coefficient）或理 論K值16線性范圍（linearity range）17小數(shù)點(diǎn)位數(shù)（decimal point digit） 2022

44、/9/287910總反應(yīng)容量（total reacting volume（二）備選分析參數(shù) 這類分析參數(shù)與檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性有關(guān)，一般來說不設(shè)置這類分析參數(shù)，分析儀也能檢測出結(jié)果，但若樣品中待測物濃度太高等，檢測結(jié)果可能不準(zhǔn)確。 2022/9/2880（二）備選分析參數(shù) 這類分析參數(shù)與檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性有1樣品預(yù)稀釋 設(shè)置樣品量、稀釋劑量和稀釋后樣品量三個(gè)數(shù)值，便可在分析前自動(dòng)對樣品進(jìn)行高倍稀釋。 2底物耗盡值（substrate exhaust limit） 在負(fù)反應(yīng)的酶活性測定中，可設(shè)置此參數(shù)，以規(guī)定一個(gè)吸光度下降限。若低于此限時(shí)底物已太少，不足以維持零級反應(yīng)而導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。 3前區(qū)檢查

45、免疫比濁法中應(yīng)用，以判斷是否有抗原過剩。將終點(diǎn)法最后兩個(gè)吸光度值的差別（A）設(shè)置一個(gè)限值，如果后一點(diǎn)的吸光度比前一點(diǎn)低，表示已有抗原過剩，應(yīng)稀釋樣品后重測。2022/9/28811樣品預(yù)稀釋 設(shè)置樣品量、稀釋劑量和稀釋后樣品量三個(gè)數(shù)值4試劑空白吸光度范圍超過此設(shè)定范圍表示試劑已變質(zhì)，應(yīng)更換合格試劑。5試劑空白速率連續(xù)監(jiān)測法中使用，是試劑本身在監(jiān)測過程中沒有化學(xué)反應(yīng)時(shí)的變化速率。 6方法學(xué)補(bǔ)償系數(shù)用于校準(zhǔn)不同分析方法間測定結(jié)果的一致性，有斜率和截距兩個(gè)參數(shù)。7參考值范圍對超過此范圍的測定結(jié)果，儀器會(huì)打印出提示。 2022/9/28824試劑空白吸光度范圍超過此設(shè)定范圍表示試劑已變質(zhì)，應(yīng)更換（三）

46、某些參數(shù)的特殊意義 1最小樣品量一般分析儀的最小樣品量是2l，目前也有小至1.6l的。2最大試劑量 對方法靈敏度很高而線性上限低的檢測項(xiàng)目，很重要。3彈性速率（flexrate） 在酶活性測定中，當(dāng)酶活性太高，在連續(xù)監(jiān)測期中已不呈線性反應(yīng)時(shí)，有些儀器具有彈性速率功能，能自動(dòng)選擇反應(yīng)曲線上連續(xù)監(jiān)測期中仍呈線性的吸光度數(shù)據(jù)計(jì)算結(jié)果，使酶活性測定的線性范圍得以擴(kuò)大。如AST可從1000U/L擴(kuò)展至2000U/L，從而減少稀釋及重測次數(shù)、降低成本。 2022/9/2883（三）某些參數(shù)的特殊意義 1最小樣品量一般分析儀的最小樣4標(biāo)本空白速率 以膽紅素干擾堿性苦味酸法測定肌酐為例：樣品中存在膽紅素時(shí)，膽

47、紅素對堿性苦味酸速率法或兩點(diǎn)法測定肌酐有負(fù)干擾。因?yàn)槟懠t素在肌酐檢測的波長505nm有較高光吸收，而且膽紅素在堿性環(huán)境中可被氧化轉(zhuǎn)變，因而在肌酐反應(yīng)過程中膽紅素的光吸收呈下降趨勢。2022/9/28844標(biāo)本空白速率 以膽紅素干擾堿性苦味酸法測定肌酐為設(shè)置空白速率以消除膽紅素干擾 若在加入第一試劑后一段時(shí)間內(nèi)設(shè)置試劑空白速率，因?yàn)榇硕沃锌辔端嵘形磁c肌酐反應(yīng)，而膽紅素在第一試劑的堿性環(huán)境中已同樣被氧化轉(zhuǎn)變，因而以第二試劑加入后的速率變化，減去試劑空白速率變化，便可消除膽紅素的負(fù)干擾，見圖。 2022/9/2885設(shè)置空白速率以消除膽紅素干擾 若在加入第一試劑后一段空白速率法消除膽紅素對肌酐測定的

48、干擾 2022/9/2886空白速率法消除膽紅素對肌酐測定的干擾 2022/9/268二、單波長和雙波長方式 （一）概念 采用一個(gè)波長檢測物質(zhì)的光吸收強(qiáng)度的方式稱為單波長方式。當(dāng)反應(yīng)液中含有一種組分，或在混合反應(yīng)液中待測組分的吸收峰與其它共存物質(zhì)的吸收波長無重疊時(shí)，可以選用。 使用一個(gè)主波長和一個(gè)次波長的稱雙波長方式。當(dāng)反應(yīng)液中存在干擾物的較大吸收、從而影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性時(shí)，采用雙波長方式更好。 2022/9/2887二、單波長和雙波長方式 （一）概念 采用一個(gè)波長（二）雙波長的作用消除噪音干擾;減少雜散光影響;減少樣品本身光吸收的干擾：當(dāng)樣品中存在非化學(xué)反應(yīng)的干擾物如甘油三酯、血紅蛋白、膽

49、紅素等時(shí)，會(huì)產(chǎn)生非特異性的光吸收，雙波長方式可以部分消除這類光吸收干擾。 2022/9/2888（二）雙波長的作用消除噪音干擾;2022/9/2688（三）次波長的確定方法 當(dāng)被測物的主波長確定之后，根據(jù)干擾物吸收光譜特征選擇次波長，使干擾物在主、次波長處有盡可能相同的光吸收值，而被測物在主、次波長處的光吸收值應(yīng)有較大的差異。 一般來說，次波長應(yīng)大于主波長100nm。以主波長與次波長吸光度差來計(jì)算結(jié)果。 2022/9/2889（三）次波長的確定方法 當(dāng)被測物的主波長確定之后，根三、單試劑和雙試劑方式 反應(yīng)過程中只加一次試劑稱單試劑方式，加兩次試劑便為雙試劑方式。 雙試劑方式分析的優(yōu)點(diǎn)是： 可提

50、高試劑的保存穩(wěn)定性； 能設(shè)置兩點(diǎn)終點(diǎn)法； 在某些項(xiàng)目檢測時(shí)能消除非特異性化學(xué)反應(yīng) 干擾。 2022/9/2890三、單試劑和雙試劑方式 反應(yīng)過程中只加一次試劑雙試劑方式消除非特異性化學(xué)反應(yīng)干擾舉例 血清ALT測定時(shí)，血清中原有酮酸也可與試劑LDH起反應(yīng)，使結(jié)果偏高。若先加入缺乏-酮戊二酸的第一試劑，使原有酮酸與LDH反應(yīng)，之后加入含有-酮戊二酸的第二試劑，啟動(dòng)ALT酶促反應(yīng)生成丙酮酸，這些丙酮酸與LDH反應(yīng)消耗的NAD能真正反映ALT活性，從而消除以上副反應(yīng)的影響。 2022/9/2891雙試劑方式消除非特異性化學(xué)反應(yīng)干擾舉例 血清AL四、測定過程的自動(dòng)監(jiān)測 1試劑空白監(jiān)測 每瓶試劑在使用前先

51、自動(dòng)檢測試劑空白吸光度；每個(gè)樣品測定前均檢測試劑空白吸光度。為某些先加試劑后取樣品的分析儀所采用。 2022/9/2892四、測定過程的自動(dòng)監(jiān)測 1試劑空白監(jiān)測 每瓶試劑在使用2試劑空白變化速率監(jiān)測 設(shè)置此項(xiàng)監(jiān)測后，分析儀在結(jié)果計(jì)算時(shí)會(huì)自動(dòng)減去試劑空白變化速率。在以監(jiān)測NAD（P）H減少為指示反應(yīng)的酶活性測定中，空白速率速率可監(jiān)測并消除由NADH自身氧化所造成的吸光度下降；在色素原為底物的酶活性測定中，空白速率可監(jiān)測并消除底物自身分解造成的吸光度升高。有關(guān)空白速率監(jiān)測在膽紅素對堿性苦味酸速率法測定肌酐負(fù)干擾消除中的作用，已如前述。 2022/9/28932試劑空白變化速率監(jiān)測 設(shè)置此項(xiàng)監(jiān)測后，

52、分析儀在3樣品信息監(jiān)測 由于樣品的溶血、脂濁、黃疸會(huì)對測定結(jié)果產(chǎn)生非化學(xué)反應(yīng)的干擾。根據(jù)溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性，用雙波長或多波長檢測其性質(zhì)和程度，一般是測定樣品在600nm570nm、700nm/660nm和505nm/480nm吸光度比值的大小來分別判斷樣品溶血、脂濁和黃疸程度。然后在結(jié)果計(jì)算時(shí)自動(dòng)減去這部分干擾，這將有利于提高分析結(jié)果的可靠性。 2022/9/28943樣品信息監(jiān)測 由于樣品的溶血、脂濁、黃疸會(huì)對測定結(jié)4結(jié)果可靠性監(jiān)測（1）終點(diǎn)監(jiān)測（2）線性期監(jiān)測 將連續(xù)監(jiān)測到的各吸光度值進(jìn)行線性回歸，計(jì)算出各點(diǎn)的方差，根據(jù)方差值的大小來判斷是否呈線性； 取連續(xù)監(jiān)測期開始若干點(diǎn)的變

53、化速率與連續(xù)監(jiān)測期最后若干點(diǎn)的變化速率進(jìn)行比較，來判斷是否為線性期。 2022/9/28954結(jié)果可靠性監(jiān)測（1）終點(diǎn)監(jiān)測2022/9/26955底物消耗的監(jiān)測 在連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性時(shí)，如果在監(jiān)測期內(nèi)吸光度上升或下降超過其底物耗盡值，則說明該樣品酶活性非常高，底物將被耗盡，監(jiān)測期的吸光度將偏離線性，使測定結(jié)果不可靠。此監(jiān)測對于采用負(fù)反應(yīng)分析酶活性的方法甚為重要。 2022/9/28965底物消耗的監(jiān)測 在連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性時(shí)，如果在監(jiān)底物消耗監(jiān)測 2022/9/2897底物消耗監(jiān)測 2022/9/26976方法線性范圍監(jiān)測 每種待測物分析都有一個(gè)可測定的濃度或活性范圍，樣品結(jié)果若超過此范圍

54、，分析儀將顯示測定結(jié)果超過線性范圍的提示，多數(shù)分析儀會(huì)自動(dòng)將樣品減量或增量重新測定。 2022/9/28986方法線性范圍監(jiān)測 每種待測物分析都有一個(gè)可測定的濃四、分析參數(shù)設(shè)置舉例 以肌酸激酶測定為例。 1. 肌酸激酶試劑盒通用參數(shù) 樣品量50l，第一試劑1000l，37保溫5min，加第二試劑500l，延時(shí)2min在340nm讀第一點(diǎn)吸光度，連續(xù)監(jiān)測2min。 2022/9/2899四、分析參數(shù)設(shè)置舉例 以肌酸激酶測定為例。2022/2.某生化分析儀有關(guān)參數(shù)的設(shè)置范圍 樣品量235l，第一試劑量20270l，第二試劑量20270l，總反應(yīng)容量180350，吸光度監(jiān)測周期18s，總反應(yīng)時(shí)間10

55、min，各試劑可加入時(shí)間：1.5min，4.5min，9.5min。 2022/9/281002.某生化分析儀有關(guān)參數(shù)的設(shè)置范圍 樣品量2353. 參數(shù)設(shè)置如下（1）按比例減少樣品量和各試劑量，使反應(yīng)液總?cè)萘吭诜治鰞x180350l范圍內(nèi)。選擇樣品量為10l，第一試劑200l，第二試劑100l，這時(shí)反應(yīng)液總?cè)萘渴?10l。或者選擇樣品量為8l，第一試劑160l，第二試劑80l，這時(shí)反應(yīng)液總?cè)萘渴?48l。 2022/9/281013. 參數(shù)設(shè)置如下（1）按比例減少樣品量和各試劑量，使反（2）確定第二試劑加入時(shí)間，根據(jù)通用參數(shù)，應(yīng)選擇4.5min為第二試劑加入點(diǎn)。（3）確定各個(gè)吸光度選擇點(diǎn)，由于第

56、二試劑加入時(shí)間4.5min，換算成監(jiān)測時(shí)間為第16，17點(diǎn)之間，加上2min延時(shí)，則在第24監(jiān)測點(diǎn)為第一點(diǎn)吸光度，并連續(xù)選擇24-31監(jiān)測點(diǎn)。 2022/9/28102（2）確定第二試劑加入時(shí)間，根據(jù)通用參數(shù)，應(yīng)選擇4.5min（4）計(jì)算K值：根據(jù)樣品量10l，第一試劑200l，第二試劑100l，代入計(jì)算公式 則K = = = 4984 也可以采用肌酸激酶的校準(zhǔn)品，執(zhí)行校準(zhǔn)程序來得到校準(zhǔn)K值。 2022/9/28103（4）計(jì)算K值：根據(jù)樣品量10l，第一試劑200l，第二4對新設(shè)置的反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行試運(yùn)行 在開始運(yùn)行時(shí)，分析儀會(huì)對各反應(yīng)參數(shù)之間的邏輯合法性進(jìn)行檢測，如果反應(yīng)參數(shù)中出現(xiàn)邏輯性錯(cuò)誤，

57、則分析儀會(huì)顯示錯(cuò)誤信息并停機(jī)，這時(shí)可以根據(jù)提示信息對反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行修改。 2022/9/281044對新設(shè)置的反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行試運(yùn)行 在開始運(yùn)行時(shí)，分析第四節(jié)自動(dòng)生化分析儀 工作過程和操作方法 一、工作過程 在測定過程中所有機(jī)械步驟均由微處理器根據(jù)已設(shè)定的程序（procedure）進(jìn)行工作。2022/9/28105第四節(jié)自動(dòng)生化分析儀 工作過程和操作方法1取樣加試劑和混勻樣品盤轉(zhuǎn)動(dòng)使樣品進(jìn)入待測位置 樣品針定量吸取樣品加入一反應(yīng)杯 反應(yīng)盤旋轉(zhuǎn) 試劑轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)動(dòng)使所需試劑瓶進(jìn)入試劑吸取位置 試劑針定量吸取試劑加入反應(yīng)杯 攪拌機(jī)構(gòu)將反應(yīng)杯內(nèi)液體進(jìn)行攪拌混勻2022/9/281061取樣加試劑和混勻樣品盤轉(zhuǎn)動(dòng)

58、使樣品進(jìn)入待測位置 202保溫反應(yīng)和吸光度檢測反應(yīng)盤旋轉(zhuǎn) 反應(yīng)杯內(nèi)液體在恒溫條件下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)當(dāng)該反應(yīng)杯通過檢測窗口時(shí)被檢測得到一個(gè)吸光度值按規(guī)定的間隔時(shí)間檢測吸光度值直至總反應(yīng)結(jié)束 總反應(yīng)時(shí)間一般為10min，如果18s為檢測吸光度的間隔時(shí)間（interval time），則10min得到34個(gè)吸光度值，若15s為間隔時(shí)間，則得到40個(gè)吸光度值。 2022/9/281072保溫反應(yīng)和吸光度檢測反應(yīng)盤旋轉(zhuǎn) 2022/9/261073計(jì)算并顯示或打印結(jié)果 分析儀根據(jù)各測光點(diǎn)讀數(shù)對某一檢測項(xiàng)目進(jìn)行結(jié)果計(jì)算，并顯示或打印出每個(gè)項(xiàng)目的報(bào)告，也可按標(biāo)本顯示或打印出全部項(xiàng)目的累積。即待某樣品指定的項(xiàng)目測試

59、完畢，便顯示或打印檢測結(jié)果。 2022/9/281083計(jì)算并顯示或打印結(jié)果 分析儀根據(jù)各測光點(diǎn)讀數(shù)對某一二、操作方法 （一）操作前的各項(xiàng)檢查（1）正常開機(jī)以后，檢查沖洗用水裝置是否正常、各項(xiàng)分析試劑是否充足、各種清洗劑是否足夠，以及樣品針、試劑針和攪拌棒是否清潔。（2）確認(rèn)要進(jìn)行校準(zhǔn)的項(xiàng)目，確認(rèn)要做的質(zhì)控批號及項(xiàng)目，以及校準(zhǔn)品、質(zhì)控品是否足夠。（3）進(jìn)行光度計(jì)自檢來確認(rèn)光路與檢測系統(tǒng)是否處于正常工作狀態(tài)。 2022/9/28109二、操作方法 （一）操作前的各項(xiàng)檢查2022/9/2610（二）校準(zhǔn) 分析儀在樣品分析之前都要對該分析項(xiàng)目進(jìn)行校準(zhǔn)（也稱定標(biāo)），得出一個(gè)該項(xiàng)目的校準(zhǔn)系數(shù)（K）。校準(zhǔn)

60、前首先必須在反應(yīng)程序里設(shè)定有關(guān)校準(zhǔn)的參數(shù)，如校準(zhǔn)液的代碼、位置及濃度值等。執(zhí)行校準(zhǔn)程序，檢測得到該校準(zhǔn)品的吸光度值，再根據(jù)校準(zhǔn)濃度計(jì)算校準(zhǔn)系數(shù)（K=校準(zhǔn)品濃度/校準(zhǔn)品吸光度）。 2022/9/28110（二）校準(zhǔn) 分析儀在樣品分析之前都要對該分析項(xiàng)目1校準(zhǔn)方式 有單點(diǎn)校準(zhǔn)、兩點(diǎn)校準(zhǔn)和多點(diǎn)校準(zhǔn)單點(diǎn)校準(zhǔn)：校準(zhǔn)曲線呈直線且通過原點(diǎn)，用單個(gè)濃度的校準(zhǔn)液即可，兩點(diǎn)校準(zhǔn)：若校準(zhǔn)曲線呈直線但不通過原點(diǎn)，則需用兩個(gè)濃度的校準(zhǔn)液做兩點(diǎn)校準(zhǔn)；多點(diǎn)校準(zhǔn)：當(dāng)校準(zhǔn)曲線不呈直線而為真正的曲線時(shí)，應(yīng)做多點(diǎn)校準(zhǔn)，并按其線形選擇不同的曲線方程進(jìn)行擬和，如雙曲線、拋物線、冪函數(shù)、指數(shù)函數(shù)、對數(shù)函數(shù)等方程等。 2022/9/281