1、 l8l8集，說明每50ul病毒含有16個血凝單位，該抗原必須等量稀釋。如只有前3孔凝集，表明每50ul病毒僅含4個血凝單位，病毒量需加倍。此外，4個血凝單位抗原必須每次用前新配置。紅細胞凝集抑制試驗(HI)鑒定未知病毒在血凝板的每孔加入25ulPBS。然后在AlA5、A7All各列分別加入：抗季節(jié)性A(H1N1)流感病毒標準參考血清、抗季節(jié)性A(H3N2)流感病毒標準參考血清、抗B-Yamagata系流感病毒標準參考血清、抗B-Victoria系流感病毒標準參考血清、抗新甲型H1N1流感病毒標準參考血清25ul,A6、A12加入25ulPBS，作為陰性對照。用多道移液器從A行每個孔分別取25

2、ul，由A至H行做2倍稀釋血清,最后一行棄去25ul。A1至A5各列每孔加入25ul待檢抗原(4個血凝單位)陽性對照：A7至A11各列分別加入4個血凝單位的季節(jié)性A(H1N1)流感病毒標準參考抗原、季節(jié)性A(H3N2)流感病毒標準參考抗原、B-Yamagata系流感病毒標準參考抗原、B-Victoria系流感病毒標準參考抗原、新甲型H1N1流感病毒標準參考抗原各25ul/孔。對照孔A6、A12各列加入25ulPBS/孔。輕拍，混勻，室溫孵育30min。每孔加入50ul配置好的紅細胞懸液，輕拍混勻，室溫孵育30-60min，觀察血凝抑制實驗結果。(具體孵育時間根據(jù)使用的不同種血球來定，詳見表l。

3、)血凝抑制效價是完全抑制血凝出現(xiàn)時血清的最高稀釋度的倒數(shù)。鑒定結果判定標準參照血清對待檢抗原的抑制效價2(才可以算為陽性。一種待檢抗原不能同時被兩種或兩種以上的標準血清抑制。待檢抗原標準參照血清有交叉抑制，但與一種亞型(B型流感稱為系)的標準參照血清抑制效價大于其他亞型參照血清4倍以上時，便可以判定為此種亞型的流感病毒。注意事項血紅細胞凝集抑制試驗必須用4個血凝單位/25ul的抗原，抗原必須新鮮配制。紅細胞懸液的配制必須標準化。正確存放試劑，避免反復凍融及污染。凍干的試劑應按照說明溶解，保存。任何待檢病毒與一種以上的推薦抗血清反應，滴度明顯大于20，可能的原因為：使用了不足4個血凝單位的抗原。

4、細菌污染。非流感病毒來源的凝集素可以非特異的與所有的抗血清反應，也可以不發(fā)生反應。讀取結果的時間不正確，只有當病毒的血凝活性恰好被完全抑制時，血抑結果才最可信。未充分去除非特異性抑制素。人和動物來源的血清存在非特異抑制素，許多敏感病毒在滴定時很容易與血清中殘留的非特異性抑制素反應而引起曲解，為避免假陽性結果，要求在HI試驗前預先處理血清。非特異性抑制素實質(zhì)上是游離在血清中類似流感病毒受體的唾液酸殘基。這些類似受體的多糖類物質(zhì)能與病毒血凝素分子上的受體結合部位結合，因此用于血凝抑制或其它試驗的血清必須徹底清除其中所含的非特異性血凝抑制素。人和動物血清中的非特異性血凝抑制素分為a、卩、y三種，這三

5、種抑制素對不同的病毒的抑制能力不同。常用的清除非特異性血凝抑制素的方法有霍亂濾液（RDE,受體破壞酶的一種）清除法，過碘酸鉀清除法等。抗原鑒定（HI法）試劑盒的標準參考血清不可與其他同類試劑盒的參考血清搭配使用。血凝抑制試驗包括以下對照：（1）紅細胞對照；（2）陰性對照血清，以防其它非特異性抗體的影響；（3）標準血清對照，防止非特異性凝集素及抑制素的干擾；（4）標準抗原對照。六、流感病毒的保存及管理（一）流感病毒的保存要求各個流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室寄送國家流感中心的毒株，均應備份保存，以備復核用。對分離陽性的臨床采集的標本，于-70C冰箱保存6個月，以備復核用，收到流感中心的鑒定報告后，可以按照有

6、關規(guī)定處理。有條件的實驗室對HA滴度大于1:32，并且無細菌污染的毒株，應保存2支干燥管毒種。所有陽性的流感病毒株均保存2管液體毒種，每管ImL。存放于-70C冰箱。保存管上應注明病毒名稱、代數(shù)、保存日期。并填寫“流感毒株保存記錄表”做詳細記錄。干燥毒株應注明病毒名稱、代數(shù)、保存日期，并填寫“流感毒株保存記錄表”做詳細記錄。毒株的保存專人負責。（二）毒株的管理液體毒株于-70C或以下溫度可保存3年甚至更長時間。干燥毒株可以長期保存，具體方法：等體積的病毒液與無菌脫脂奶混勻，冷凍干燥，置4C或以下溫度長期保存。任何人未經(jīng)允許不得私自將毒株帶出實驗室。未經(jīng)衛(wèi)生部允許任何個人和單位不得向其他國家的實驗室提供流感毒株。有明確的保存記錄，包括毒