1、手工抗人球蛋白試驗試管法標準操作規程 (一)檢驗目的 建立手工抗人球蛋白試驗的標準操作規程，確保手工抗人球蛋白試驗的規范性和準確性。 (二)檢驗原理 血液中一些IgG類抗體或補體C。(主要是免疫性抗體)與紅細胞表面相應抗原結合后，在鹽水介質中不出現肉眼可見的凝集反應，但在加入抗IgG或抗C，抗體后，以其搭橋則出現凝集反應，該試驗稱之為抗人球蛋白試驗，也稱Coombs Test。包括直接抗人球蛋白試驗(DAT)和間接抗人球蛋白試驗(1AT)。(三)適用范圍1.DAT用于檢測紅細胞體內致敏情況(1)新生兒溶血病的診斷。(2)免疫性溶血性貧血的診斷。(3)研究藥物致敏的紅細胞。(4)溶血性輸血反應的

2、研究。2.IAT用于檢測體外致敏紅細胞的抗體(1)IgG類不規則抗體篩查與鑒定。(2)交叉配血試驗。(3)檢查用其他方法不能查明的紅細胞抗原。 (4)用于一些特殊研究，如混合凝集反應、白細胞抗體及血小板抗體檢測試驗。 (四)設備性能參數 參見血清學專用離心機使用說明書。 (五)器材與試劑 1.器材 離心機、塑料軟試管、塑料硬質試管(75mm12mm)、試管架、一次性塑料滴管、記號筆。 2.試劑 生理鹽水、抗球蛋白試劑(市售單克隆抗IgG、單克隆抗C3d、抗IgG+C3d)、致敏的陽性對照細胞(自制)。 (六)樣本要求 1.患者標本 EDTA-K3或EDTA-K2抗凝全血3m1，經B600-A型

3、離心機在1 760g條件下，離心5分鐘，離心后無溶血及明顯乳糜。緊急情況下可以使用抗凝動脈血。 2.供者標本 枸櫞酸鹽抗凝，全血量3-5ml，經B600-A型離心機在1 760g條件下，離心5分鐘，離心后無溶血、無凝塊及明顯乳糜。 (七)校準步驟 參照血清學專用離心機使用說明書中的校準要求執行。 (八)操作程序 1.直接抗人球蛋白試驗 (1)取2支潔凈試管分別加入抗IgG+C3d(可根據需要使用多特異性抗球蛋白)1滴，其中1支試管加1滴受檢者3次洗滌后的35紅細胞鹽水懸液，另1支試管加2滴正常人AB型血清和1滴35正常人O型紅細胞懸液作為陰性對照，分別混勻。 (2)使用血型血清學專用離心機在1

4、 000g條件下，離心15秒，觀察、記錄結果。若離心后受檢管出現紅細胞凝集，同時陰性對照管無凝集，可確定為陽性結果。對于陽性結果可以根據實際需要分別使用抗IgG、抗C3d區分其特異性。若受檢標本管中無紅細胞凝集(陰性)，則室溫孵育5分鐘，在離心觀察結果，如為陽性則為抗補體反應結果。2次離心均為陰性結果的，在受檢管中再加1滴35IgG致敏細胞的標準O型紅細胞懸液，2次離心后觀察結果，若出現凝集表明為陰性結果可靠。 2.間接抗人球蛋白試驗 (1)按表14-1加入試劑。 (2)混勻，使用血型血清學專用離心機在1 000g條件下，離心15秒，觀察、記錄結果，陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集則受檢管出現

5、凝集為陽性，不凝集為陰性。 3.IgG致敏對照試劑紅細胞的制備 (1)取3人份混合的O型RhD陽性紅細胞，生理鹽水洗滌3次后制成壓積紅細胞。 (2)在壓積紅細胞中按每毫升46滴的比例添加IgG抗D血清，混勻后37孵育15分鐘。 (3)生理鹽水洗滌4-6次后制成5紅細胞懸液，24小時內使用。 4.檢驗結果的輸入與確認 (1)啟動“檢驗程序”，輸入用戶名及口令后，進入檢驗程序。 (2)單擊“檢驗”菜單，選擇“檢驗結果錄入修改”，通過申請序號進行檢驗結果的錄入及修改。 (3)檢驗結果的確認：檢驗結果應由實驗室負責人或授權人員進行確認，方法為單擊“結果處理”菜單，選擇“報告確認”進入結果確認，通過選擇

6、“工作單元”“報告日期”“單張”或“批量”后，按“提取”鍵提取已經傳輸或錄入的檢驗結果，經兩人核對無誤后按“確認”鍵進行確認。 (九)質量控制 1.室內質量控制 抗人球蛋白試劑：每日(或使用時)進行試劑質控，具體操作參照輸血相容性檢測室內質量控制管理制度進行。 2.室間質量評價 參加衛生部臨檢中心組織的全國輸血相容性檢測室間質量評價活動，可以使用手工抗人球蛋白試驗進行交叉配血。 (十)干擾因素 1.過度離心會出現假陽性結果。 2.冷凝集素或異常球蛋白增高會使紅細胞出現異常凝集，造成假陽性結果。 3.間接抗人球蛋白試驗中洗滌不充分可能造成假陰性。 (十一)結果計算及測量不確定度 不適用。 (十二

7、)生物參考區間 不適用。 (十三)檢驗結果可報告區間 陰性或陽性。 (十四)警告危急值 直接抗人球蛋白試驗結果陽性可能提示紅細胞被致敏，可以為自身免疫性疾病、溶血性疾病以及溶血性輸血反應的診斷提供依據，必要時應及時提示臨床醫生。間接抗人球蛋白試驗陽性，可能提示不規則抗體的存在或配血不合，需要提醒臨床醫生，調整或重新制定輸血或備血方案。 (十五)實驗室解釋 直接抗人球蛋白試驗結果可以為自身免疫性疾病、溶血性疾病以及溶血性輸血反應的診斷提供依據。間接抗人球蛋白試驗陽性，可能提示不規則抗體的存在或配血不合。 (十六)安全性預警措施 1.實驗室及工作人員一般安全防護措施參見實驗室安全與衛生管理制度。

8、2.發生血液標本溢出時，應參照實驗室消毒與清潔管理制度對污染的環境進行消毒處理。 3.操作人員發生職業暴露時，應參照實驗室職業暴露預防與處置管理制度及時進行相應處理。 4.在儀器運轉過程中，勿觸及樣品針、移動的傳輸裝置等，避免造成人身傷害。禁止觸摸儀器密封面板內的電路，防止造成電擊損傷。 5.對突發傳染性疾病的血液標本應啟動特殊的安全防護程序。(十七)變異潛在來源不適用。(十八)手工抗人球蛋白試驗特別注意事項1.抗球蛋白試驗使用的血液標本一定要用含EDTA抗凝管采集，以避免紅細胞在體外被補體致敏，出現假陽性。 2.使用EDTA抗凝管采集的標本，在做間接抗人球蛋白試驗的時候，用的是血漿代替血清，可能使一些少見的抗體漏檢。 (十九)報告時間 手工抗人球蛋白方法可以應用在不同試驗中，一般于檢測當日下午17時前出結果并上傳HIS，住院患者的檢驗報告單由衛生員于次日上午發回申請單所在的臨床科室，門診