1、誘變物質的微核檢測技摘要：本實驗以大蒜為實驗材料，研究咖啡和咖啡伴侶能否誘發細胞產生微核，以及咖啡和咖啡伴侶的毒性是否有疊加效應。實驗中將咖啡和咖啡伴侶配置為不同濃度梯度的溶液，對大蒜進行誘發培養24小時，并觀察檢測微核的誘發率。前言：由于大量新的化合物的合成，原子能應用，各種各樣工業廢物的排出，使人們很需要有一套高度靈敏，技術簡單的測試系統來監視環境的變化。只有真核的測試系統更能直接推測誘變物質對人類或其它高等生物的遺傳危害，在這方面，微核測試是一種比較理想的方法。微核是真核生物細胞中的一種異常結構，往往是細胞經輻射或化學藥物的作用而產生。在細胞間期微核呈圓形或橢圓形，游離于主核之外、大小應

2、在主核13以下。微核的折光率及細胞化學反應性質和主核一樣。一般認為微核是由有絲分裂后期喪失著絲粒的斷片產生的，但有些實驗也證明整條的染色體或多條染色體也能形成微核。這些斷片或染色體在細胞分裂末期被兩個子細胞核所排斥便形成了第三個核塊。已經證實微核率的大小是和用藥的劑量或輻射累積效應呈正相關，這一點和染色體畸變的情況一樣。所以可用簡易的間期微核計數來代替繁雜的中期畸變染色體計數。咖啡和咖啡伴侶為現代人們經常選用的飲用品。而咖啡中的咖啡因之類的物質和咖啡伴侶中植物末（奶精）對人體的健康有沒有危害呢？為此我們用大蒜作為材料研究咖啡和咖啡伴侶對細胞染色體畸變的影響，實驗主要通過檢測細胞微核誘發率，得到

3、咖啡或咖啡因對細胞的影響程度。1、材料與方法1.1材料1.1.1材料：大蒜雀巢速溶咖啡雀巢速溶咖啡伴侶1.1.2試劑：NaN3HCL卡諾固定液70%乙醇改良苯酚品紅1.1.3儀器：培養皿量筒燒杯玻璃棒電子天平手套離心管單面刀片蓋玻片載玻片顯微鏡1.2方法1.2.1取材：將大蒜置于24C水中浸泡24h,選擇根長整齊一致，不定根長約0.51cm左右的大蒜隨機分組。1.2.2處理各實驗組：配置50mmol/L的NaN3溶液作為陽性對照組的培養液，用自來水作為陰性對照組的培養液，將咖啡和咖啡因配置成不同濃度梯度的溶液作為樣品組的培養液，將大蒜置于各組培養液中培養24小時。樣品濃度梯度如下表表一、樣品濃

4、度梯度溶液咖啡咖啡咖啡咖啡咖啡伴侶咖啡伴侶咖啡+伴侶咖啡+伴侶濃度g/L7530151.515375+1515+31.2.3恢復培養：將以上實驗組誘發培養24后的大蒜轉移到自來水中恢復培養24小時，注意做好標志。1.2.4固定：將恢復培養好的大蒜用卡諾固定液固定24小時。1.2.5保存：將固定好的大蒜移至70%乙醇中4弋下保存，備用。1.2.6制片：將根尖用1MHCI處理的10min,水洗3次。切取近根尖分生區的伸長區組織，用改良苯酚品紅染色10-15min。壓片：吸取染液，加上蓋玻片后，用鉛筆輕敲使細胞分散，最后垂直壓下去1.2.7觀察：將制好的片子放到顯微鏡下觀察。每個根尖計數1000個細

5、胞（也可取5個視野計數），統計含微核的細胞數，然后取平均值，即為該處理的微核千分率。2、實驗結果1.計算各測試樣品（包括對照組）微核千分率（MCN%。）.某測試樣品（或對照）觀察到的微垓數_“一某測試樣品（或對照）觀察到的細胞數如果對照本底MCN%。為10%。以下，可采用如下標準進行分析以確定樣品的污染程度：MCN%在10%以下，表示基本沒有污染；MCN%在10%o18%o區間，則表示有輕度污染;MCN%在18%o30%o區間，則表示有中度污染;MCN%。在30%。以上，則表示有重度污染;2、實驗圖片ABE圖1圖中A為75gL的咖啡培養誘導的大蒜的根尖細胞；B為15gL咖啡伴侶培養誘導的大蒜的

6、根尖細胞；C為75g/L的咖啡和15g/L咖啡伴侶混合培養誘導的大蒜的根尖細胞；D為清水培養的大蒜的根尖細胞；E為50mmol/L的NaN3培養誘導的大蒜的根尖細胞。3、分析、討論由圖1中的圖片可知，咖啡、咖啡伴侶、咖啡和咖啡伴侶混合培養誘導的大蒜生長都沒有成功的誘發大蒜在分裂過程中產生微核，所以微核千分率為0根據相關文獻可知，用蠶豆作為材料研究咖啡的微核誘發，實驗結果能得到成功誘發微核細胞，而我們的實驗選擇了大蒜作為材料則得不到成功誘發微核的細胞，且為了避免大蒜和蠶豆對咖啡的培養濃度的要求不同，我們配置能誘發蠶豆的咖啡溶液濃度及幾組高于誘發蠶豆的咖啡溶液濃度的培養液。但是依舊沒有得到預期的結果，說明大蒜對于咖啡的敏感度不高或者我們設計的濃度不適合。這也提醒我們在實驗的選材上要加倍注意。雖然在細胞中沒有發現微核，但是從實際大蒜的根的長勢中可以看出隨著溶液濃度的增長對大蒜的生長影響越大，大蒜的跟長的越短。而咖啡和咖啡伴侶共同作用情況下的大蒜的根的長勢和單獨的咖啡溶液中的長勢差不多，但是比單獨的咖啡伴侶的長勢要短