1、2.3動物細胞工程的應用（）動物細胞工程常用的技術手段：動物細胞培養技術、 動物細胞核移植技術、動物細胞融合技術、 生產單克隆抗體技術復習：植物細胞工程常用的技術手段有哪些？植物組織培養技術、 植物體細胞雜交技術動物細胞培養技術是其他動物細胞工程技術的基礎。一、動物細胞培養過程閱讀“動物細胞培養過程”并思考：1.動物細胞培養的概念是什么？該技術實施的原理是什么？ 特點是什么？2.為什么要對取出的動物組織進行處理，使細胞分散？3.用胰蛋白酶對動物組織進行處理是因為細胞間的物質主要是什么？用胃蛋白酶可以嗎？4.胰蛋白酶真的不會把細胞消化掉嗎？為什么？5.為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動

2、物細胞培養材料？6.簡述動物細胞培養的操作過程動物細胞培養過程：原代培養傳代培養1.動物細胞培養的概念是什么？該技術實施的原理是什么？ 從動物機體中取出相關組織，將它分散成單個細胞，然后在適宜的培養基中，讓這些細胞生長和繁殖。 原理是細胞增殖 （有絲分裂） 。細胞貼壁過程那么什么是接觸抑制？接觸抑制：細胞在貼壁生長過程中，隨著細胞分裂，數量不斷增加，最后形成一個單層，此時細胞間相互接觸，細胞分裂和生長停止，數量不再增加。50代以后失去接觸抑制接觸抑制動物細胞生長特性部分細胞突變，獲得不死性，向癌細胞方向發展，糖蛋白減少。2.為什么要對取出的動物組織進行處理，使細胞分散？分散的單個細胞容易攝取所

3、需的營養，排出代謝廢物；而用大塊組織培養時，內部細胞的營養供應和代謝廢物的排出都較困難。 3.用胰蛋白酶對動物組織進行處理是因為細胞間的物質主要是什么？用胃蛋白酶可以嗎？細胞間的物質主要是蛋白質（膠原纖維）。 胃蛋白酶作用的適宜pH約為2，當pH大于6時，胃蛋白酶就會失去活性。胰蛋白酶作用的適宜環境pH為7.28.4。多數動物細胞培養的適宜pH為7.27.4。 4.胰蛋白酶真的不會把細胞消化掉嗎？為什么？胰蛋白酶除了可以消化細胞間的蛋白外，長時間的作用也會消化細胞膜蛋白，對細胞有損傷作用，因此必須控制好胰蛋白酶的消化時間。 5.為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養材料？動物胚

4、胎或幼齡動物的組織、器官，它們的細胞分化程度低，增殖能力強，分裂旺盛，容易培養。6.動物細胞培養過程：動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細胞懸浮液胰蛋白酶10代細胞原代培養50代細胞傳代培養細胞株無限傳代細胞系單個細胞加培養液遺傳物質未改變遺傳物質已改變動物細胞培養不能最終培養成生物體傳代培養一般傳至10代直至50代就不能再分裂了，這時細胞核內遺傳物質未發生變化，形成的細胞群傳代培養過程中有個別細胞傳至50代以后，由于遺傳物質改變，失去控制，成為無限增殖的不死的癌癥細胞，形成的細胞群7.什么是原代培養、傳代培養？為什么要進行傳代培養？原代培養： 取材（動物組織） 細胞分散初次培養傳代培養： 培養的

5、細胞細胞分散繼續培養進行傳代培養的原因： 接觸抑制8.傳代培養中，第10代細胞與第50代以后細胞的主要區別是什么？細胞癌變,失去接觸抑制特性。9.動物細胞培養能否象植物組織培養那樣獲得克隆個體？需要誘導其脫分化的過程嗎？ 不可以，因為高度分化的動物細胞的全能性受到抑制。 不需要誘導其脫分化。原代培養定義：把第1代細胞的培養與10代以內的細胞培養統稱為原代培養。過程：從動物機體中取出組織 剪碎 加胰蛋白酶 細胞游離 加培養液 將細胞接種到培養瓶內 培養（12天換一次培養液） 細胞貼壁生長 長成單層細胞取材（動物組織） 細胞分散初次培養傳代培養定義：當原代培養的細胞生長停止，這時如果要使細胞繼續生

6、長，就要及時用胰蛋白酶等，使細胞從瓶壁上解離下來，然后加入新的培養液，將細胞分離稀釋，并從原培養瓶內轉接到新的培養瓶內，這個過程稱傳代培養培養的細胞細胞分散繼續培養 細胞株：從原代培養細胞群中篩選出進行傳代培養的細胞，能傳到40-50代，其遺傳物質沒有發生變化。 細胞系：傳到40-50代后有部分細胞遺傳物質發生了變化，帶有癌變的特點，可能在培養條件下無限制的傳代下去，這種傳代細胞稱為細胞系。二、動物細胞培養條件1.無菌、無毒的環境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養液）2.營養（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。）3.溫度和pH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.44.氣體環境

7、： O2和CO2（95%空氣和5% CO2 ）保證細胞順利的生長增殖思考：動物血清的作用？主要是：提供有利于細胞生長增殖所需的激素、生長因子或提供合成培養基所缺乏的營養物質等。 動物細胞培養液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。與植物培養基相比其特點是：（1）液體培養基（2）含有動物血清動物體細胞大都生活在液體的環境植物組織培養呢？無機鹽、蔗糖 、維生素、生長調節物質、植物激素成分比較：植物組織培養和動物細胞培養的比較比較項目植物組織培養動物細胞培養原理細胞的全能性細胞增殖培養基狀態固體培養基液體培養基培養基特有成分蔗糖 植物激素葡萄糖 動物血清培養結果植物體細胞株、細胞系

8、培養目的快速繁殖、培育無病毒植株獲得細胞或細胞分泌蛋白三、動物細胞培養的應用1.獲得細胞產物，如蛋白質生物制品病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等2.獲得燒傷病人植皮所需的細胞3.獲得細胞用于檢測有毒物質4.為治療及預防疾病提供理論依據。1.說出動物細胞培養的過程？2.簡述動物細胞培養的條件？3.說出動物細胞培養的應用？4.對比說出動物細胞培養與植物組織培養原理、條件、結果、培養目的你達到學習目標了嗎？1.用動、植物成體的體細胞進行離體培養，下列敘述正確的是( )A都需用培養箱 B都須用液體培養基C都要在無菌條件下進行 D都可體現細胞的全能性C鞏固練習：外界條件適宜，植物細胞不需要。動物細胞培養一般

9、需要培養箱。2.下列屬于動物細胞培養與植物組織培養主要區別的是( )A.培養基成分不同B.動物細胞培養不需要在無菌條件下進行C.動物細胞可以傳代培養，而植物細胞不能D.動物細胞能夠大量培養，而植物細胞只能培養成植株A3.動物細胞工程技術的基礎是( )A.動物細胞融合 B.單克隆抗體C.胚胎移植 D.動物細胞培養D愈傷組織條件適宜可以傳代培養不分化。4.細胞株的特點是( )A遺傳物質沒有改變，可以無限傳代B遺傳物質發生改變，不可無限傳代C遺傳物質沒有改變，不可無限傳代D遺傳物質發生改變，且有癌變特點，可以無限傳代 5.在動物細胞培養中有部分細胞可能在培養條件下無限制地傳代下去，這種傳代細胞稱之為

10、( )A原代培養 B傳代培養 C細胞株 D細胞系CD6.用于動物細胞培養的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞( ) A.容易產生各種變異 B.具有更強的全能性C.取材十分方便 D.分裂增殖的能力強D7.（09江蘇）下圖是一個新生小鼠的肝臟小塊培養裝置示意圖。請回答下列問題。（1）肝臟切成小薄片，這有利于肝臟細胞 。（2）氣室中充入5C02：氣體的主要作用是 。（3）培養液中添加抗生素是為了抑制細菌生長，但要注意選擇抗生素的 ，以保證抗生素對肝臟無害。吸收氧氣和營養物質、排出代謝廢物維持培養液適宜的pH種類和劑量08年寧夏卷回答下列有關動物細胞培養的問題：在動物細胞培養的過程中，當貼壁細胞分裂生長到細胞表面 時，細胞會停止分裂增殖，這種現象稱為細胞的 。此時，瓶壁上形成的細胞層數是 ，要使貼壁的細胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶是 。 隨著細胞傳代次數的增多，絕大部分細胞分裂停止，進而出現 的現象；但極少數細胞可以連續增殖，其中有些細胞會因遺傳物質發生改變而變成 細胞，該種細胞的黏著性 ，細胞膜表面蛋白質（糖蛋白）的量 。相互接觸單層胰蛋白酶