蛋白純化策略和工藝_第1頁
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文檔簡介

1、蛋白純化策略和工藝呂虎.8.18第1頁五大層析原理第2頁內容:介紹蛋白純化策略怎樣建立純化方案純化工具總結第3頁介紹第4頁早期蛋白純化1789-1940s層析純化1950s-1980s今天蛋白純化第5頁決定原因第6頁層析技術第7頁蛋白純化策略第8頁蛋白純化策略CIPPKEEP SIMPLE第9頁關鍵因子分辨率速度載量回收率Phase 1：CapturePhase 2：Intermediate PurificationPhase 3：Polishing第10頁層析技術推薦第11頁交替利用互補技術，合理銜接降低樣品處理，盡可能簡單化第12頁綜合考慮起始和結束條件銜接第13頁設計合理純化路線相互銜接

2、，降低中間處理第14頁建立純化方案明確純化目了解純化產物特征CIPP純化策略建立有效分析方法確立最終純化方案第15頁明確純化目MassspectrometryAntigen forimmunizationFunctionalstudiesStructuralstudiesTherapeuticproteinHomogeneityActivityPurityAmount pg ng ug mg g kgOften not necessary rigid requirements Moderate 80% High 95% -99% Very high 99%Often not necessary

3、 rigid requirements第16頁了解目標產物特征目標產物特征:分子量 等電點可溶性穩定性 起始條件:樣品量 pH離子強度成份關鍵雜質 第17頁CIPP純化策略篩選層析技術篩選填料優化條件第18頁篩選層析技術：標簽蛋白第19頁篩選層析技術:非標簽蛋白第20頁篩選填料第21頁篩選填料第22頁篩選填料不一樣HIC填料分離同種蛋白質分離結果第23頁優化條件不一樣pH條件下，目標蛋白與DEAE柱結合情況第24頁優化條件不一樣洗脫方式對蛋白純化結果影響第25頁有效分析方法第26頁純化追蹤表Purification stepProteinConc.（mg/ml）Volume（ml）AmounttotalProtein（mg）Totalactivity（U）Specificactivity（U/mg）recovery（%）Purification factor回收率&純化因子第27頁純化工具手動純化:重力純化磁珠純化離心純化優點:簡單易掌握經濟自動純化:預裝柱配合層析設備優點:自動化解放人力更高效洗脫伎倆多樣化結果更優高重復性，結果可追溯第28頁總結純化目&目產物特性CIPP純化策略Capture、Intermediate Purification and Polishing綜合運用多種層析技術互相銜接保持簡單純化工具第29頁思索： 假如要得到一個去GST標簽蛋白，該怎樣設計純

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