1、 編號共4頁制訂人制訂日期審核人審核日期批準人批準日期頒發部門質量管理部實施日期一、目的：制訂發酵液溶磷含量測定標準操作規程，確保發酵液中溶磷含量檢測的準確。二、適用范圍：適用于公司發酵液溶磷含量的檢驗。三、責任者：質量檢驗部QC操作人員四、內容：1、原理：正磷酸鹽在酸性溶液中與鉬酸銨反應生成磷鉬酸銨，再用抗壞血酸使之還原成低價的鉬藍，此藍色溶液符合比爾定律。2、儀器：電子分析天平分光光度計3、磷標準溶液配置取一定量KHPO(A.R)置于稱量瓶內，在24解，加入ImL硫酸，于期10天。準確吸取上述磷標準溶液磷標準溶液。此標準溶液現配現用。4、定磷試劑配制：將下述溶液3mol/L硫酸、水、勻即得

2、。現配現用。5、繪制磷標準曲線取7支試管，分別按下表加入各試劑，充分搖勻，照分光光度計校準使用SOP在恒溫水浴堝容量瓶105口干燥至恒重，精密稱取100mL容量瓶中，用水定容至刻度，2.5%鉬酸銨、10%抗壞血酸按體積比45口水浴660nm波長下測量其100mL容量瓶中定容至刻度，搖勻，即得1mL于刻度吸管0.439克，加水溶1mg/mL磷標準溶液。有效搖勻，即得10ug/mL1:2:1:1的比例混20分鐘，冷卻至室溫，按OD值。以溶液磷含量為縱坐標，OD值為橫坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程。管號012345610ug/mL磷標準溶液(mL)00.51.01.52.02.53.0溶液磷含皿u

3、g)051015202530水(mL)3.02.52.01.51.00.50定磷試皿mL)3.03.03.03.03.03.03.0線性回歸系皿0.9996、樣品磷含量檢測取發酵液離心后上清液0.1mL，至試管中，加2.9mL水，再加入定磷試劑3mL,振搖，于45DOO20分鐘，冷卻至室溫，以空白做對照，按照分光光度計校準使用SOP于660波長測OD值。5計算：根據磷標準曲線以及稀釋倍數計算磷含量(ug/mL)。五、文件發放范圍公司生物產業部質量管理部1份，質量檢驗部2份，產業部相關領導每人1份，存檔2份。六、變更記錄：上版文件編號上版文件實施日期本次變更原因、依據及詳細變更內容SL-QAD-

4、248-002003.02.10采用新版格式和編號，增加文件修訂內容SLB-QC-010-012006.08.19增加了定磷試劑的配制、標定方法、標定記錄，規定了定磷試劑的有效期 磷標準曲線繪制記錄批號：編號：SLB-QC-010-02R1磷標準溶液配制：（天平編號：）精密稱取0.439克于105叮燥至恒重的磷酸二氫鉀，加水溶解，加入于100mL容量瓶中定容至刻度，搖勻，即得1mg/mL磷標準溶液。有效期ImL硫酸，10天。準確吸取上述磷標準溶液10ug/mL磷標準溶液。現配現用。配制人：0000：1mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，即得00人：定磷試劑00：將下述溶液3mol/

5、L硫酸、水、1：2：1：1的比例混勻即得。現配現用。0000：2.5%鉬酸銨、10%抗壞血酸按體積比試劑取用數量3mol/L硫酸水2.5%鉬酸銨10%抗壞血酸00人：0000：年月0磷標準曲線的繪0：（分光光度計編號：）取7支試管，分別按下表加入各試劑，充分搖勻，45D0020分鐘，冷卻至室溫，于660nm波長處分別測溶液OD值。以溶液磷含量為縱坐標，OD值為橫坐標，管號012345610ug/mL磷標準溶液（mL）00.51.01.52.02.53.0水（mLD3.02.52.01.51.00.50定磷試皿mLD3.03.03.03.03.03.03.0繪制標準曲線，得到回歸方程。測得溶液OD值為：管號0123456溶液磷含皿ug）051015202530ODD線性回歸方程（磷標準曲線）為：線性回歸系數應口0.999線性回歸系數為：符合規定口標定人：不符合規定標定00：年月0復核人：00：年月0 發酵液溶磷檢驗記錄編號：SLB-QC-010-02R2品名：批號：操作步驟：取發酵液離心上清液0.1mL至試管中，加2.9mL水，加定磷試劑3mL,振搖，于45口水浴20分鐘，冷卻至室溫，以空白做對照，按照分光光度計校準使用SOP于