三糖鐵試驗標準操作規程_第1頁
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三糖鐵試驗標準操作規程_第3頁
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文檔簡介

1、三糖鐵試驗標準操作規程1目的規范三糖鐵試驗標準操作規程。2原理能發酵葡萄糖和乳糖的細菌產酸產氣，使三糖鐵的斜面和底層均呈黃色，并有氣泡產生；只能發酵葡萄糖，不發酵乳糖的細菌，使斜面呈紅色，而底層呈黃色；有些細菌能分解培養基中的含硫氨基酸，生成硫化氫,硫化氫遇鉛或鐵離子形成黑色的硫化鉛或硫化鐵沉淀；分解尿素，呈紅色。3試劑3.1 三糖鐵瓊脂成分 上層：乳糖 10g 蔗糖 10g 葡萄糖 1g 硫酸亞鐵 0.2g 蛋白胨 20g 瓊脂 20g 硫代硫酸鈉 0.2g 氯化鈉 5g 0.2%酚紅 12.5ml 蒸餾水 1000ml 下層：牛肉膏 1.8g 酸性磷酸鉀 1.2g 0.2%酚紅 1.8ml

2、 蛋白胨 6g 瓊脂 3g 氯化鈉 3g 尿素 12g 蒸餾水 600ml3.2 制備 上層制備：成分混合后，加熱溶解，校正pH至7.6，分裝三角燒瓶內，115滅菌15分鐘。 下層制備：下層成分（除尿素外）混合后，加熱溶解，校正pH至7.2，然后加入尿素分裝每管約1.5ml，115滅菌1520分鐘。再取葡萄糖0.5g、0.1%酚紅溶液10ml混入已溶解的瓊脂中。充分搖勻，使其溶解，分裝于試管中，每管約1.5ml，置高壓滅菌器內，經115滅菌10分鐘。取出后，待其直立凝固。下層凝固后，用無菌手續，將上層培養基成熱裝于下層培養基上面。凝固后將其置于37培養箱中，培養1824小時，如無雜菌污染，可存于冰箱中備用。4質控大腸埃希菌ATCC25922，三糖鐵瓊脂上、下層均為黃色，福氏志賀菌CMCC51573，三糖鐵瓊脂上層不變，下層為黃色。5.操作步驟挑取純菌落接種于三糖鐵瓊脂上，35孵育1824小時。6.結果判斷出現黑色沉淀物為硫化氫陰性。7.注意事項三糖鐵瓊脂上下層配制時，高壓滅菌時掌握好溫度和時間，以免培養基中的糖被分解。8.臨床意義

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