酶聯免疫吸附試驗ELISA夾心法測定抗原ELISA間接法測定_第1頁
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文檔簡介

1、酶聯免疫吸附試驗ELISA夾心法測定抗原ELISA間接法測定原理及意義 酶聯免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay ，ELISA)是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用結合起來的一種敏感性很高的新型免疫檢測技術。 將已知抗原或抗體吸附在固相載體微孔聚苯乙烯塑料板上，通過抗原抗體特異性結合吸附待測樣品中的抗體或抗原后，加酶標抗體（酶與抗體或抗原結合后，既不改變抗體或抗原免疫反應的特異性，又不影響酶本身的活性）和底物后，在相應酶底物的作用下生成有色物質，其顏色深淺與標記物中相應的抗體或抗原的含量呈正比，由此可測定抗原或抗體的

2、含量。 常用的ELISA法有雙抗體夾心法測定抗原和間接法測定抗體。ELISA法雙抗體夾心法測定抗原1.原理一步法二步法常用試劑盒分一步法和二步法，二者原理完全相同。一步法 將圖中的第2步和第3步同時進行，允許混合加入，其形成的免疫復合物，基本不影響目測的結果，適用于目測結果。二步法 如圖中第2步和第3步由于分步進行，其結果較準確，主要用于需要定量檢測時。2.材料（以測HBsAg為例）試劑：HBsAg診斷試劑盒器材：酶聯儀，微量加樣器，吸頭等3.方法加樣：每組7微孔，待檢4孔，空白對照1孔，陰、陽性對照各1孔。分別加陰、陽性對照1滴和50ul待測樣本于相應孔內，置37水浴箱溫育30分鐘。加酶：除

3、空白對照孔外，每孔加1滴酶標溶液，混勻后封板，置37水浴箱溫育30分鐘。洗滌：用洗滌液（按說明配制）注滿各孔，靜置20秒，甩去洗滌液，重復4次，最后一次在吸水紙上拍干。顯色：每孔加底物液A 、B 各1滴（50ul），輕拍混勻，置37水浴15分鐘，肉眼觀察。終止：每孔加終止液1滴（50ul），輕拍混勻。4.結果測定 用酶標儀（450nm）測定各孔吸光度OD值（先用空白孔校零），P/N值者判為HBsAg陽性，者判為陰性。ELISA法間接法測定抗體1.原理2.材料（以測結核抗體為例）試劑：結核抗體診斷試劑盒器材：酶聯儀，微量加樣器，吸頭等3.方法包被抗原：在聚苯乙烯微量反應板孔中加抗原100l，4 1218小時。用1BSA或正常兔血清4、1218小時阻斷，4冰箱備用。洗滌：用前應進行漂洗去除雜蛋白，用洗滌液洗3次，每次3分鐘。加待測樣本：將血清稀釋成1：50，每份標本加復孔，每孔100l，37保溫30分鐘。設已知的陽性和陰性血清對照。洗滌3次后，加兔抗IgG酶結合物，37保溫30分鐘，以相同的方法洗滌3次。加新鮮配制的鄰苯二胺底物溶液和雙氧水溶液各100l。靜止20分鐘，再加入3mol/L硫酸每孔50l終止反應。4.結果測定肉眼觀察：白色背景上觀察四孔呈現的顏色反應，與已知陽性和陰性孔比較。酶聯儀比色：酶聯儀用492nm測OD值。正常人血清OD

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