1、植物組織培養技術【摘要】植物的組織培養是根據植物細胞具有全能性這個理論，近幾十年來發 展起來的一項無性繁殖的新技術。我分別從植物組織的培養方法、 植物組織培養步驟、植物組織培養的優點來學習植物組織培養技 術。【關鍵詞】植物組織培養、離體培養、試管苗、培養基植物的組織培養是根據植物細胞具有全能性這個理論，近幾十年來發展起來 的一項無性繁殖的新技術。植物的組織培養廣義又叫離體培養，指從植物體分離 出符合需要的組織.器官或細胞，原生質體等，通過無菌操作，在人工控制條件 下進行培養以獲得再生的完整植株或生產具有經濟價值的其他產品的技術。一、植物組織的培養方法1、非試管微組織快繁非試管微組織快繁技術是將

2、外植體（一般要求帶一葉一芽）放置在室 內外普通沙子培養基上進行培養，利用植物腋芽自然倍增達到快速繁殖的 目的。一般植物715天可以生長出根系。此技術投資低，操作環節少。2、試管組織培養試管組織培養是將外植體（即離體組織、器官或細胞）放置在試管等 器皿中在無菌的條件下進行組織培養獲得試管苗。二、植物組織培養步驟1、培養材料的采集要根據培養目的適當選取材料，選擇原則：易于誘導、帶菌少。要選 取植物組織內部無菌的材料。這一方面要從健壯的植株上取材料，不要取 有傷口的或有病蟲的材料。另一方面要在晴天，最好是中午或下午取材料， 決不要在雨天、陰天或露水未十時取材料。因為健壯的植株和晴天光合呼 吸旺盛的組

3、織，有自身消毒作用，這種組織一般是無菌的。培養材料的消 毒從外界或室內選取的植物材料，都不同程度地帶有各種微生物。這些 污染源一旦帶人培養基，便會造成培養基污染。因此，植物材料必須經嚴 格的表面滅菌處理，再經無菌操作手續接到培養基上。（一）試劑：乙醇、吲哚乙酸（IAA）或2 , 4 - D （生長素類 似物）、氯化汞（升汞）或次氯酸鈉、6-芐基氨基腺嘌吟（6-BA ） MS培 養基、0.1 mol/L NaOH 與 0.1 mol/L HCl（二）配制培養基（1 ）愈傷組織誘導培養基：MS培養基（蔗糖含量為10 g/L , 2,4 -D含量為2 mg/L，瓊脂10 g/L ）。（2 ）試驗培養

4、基：在 MS培養基中加入IAA和6 - BA。吲哚乙酸（IAA）先用少量0.1 mol/L NaOH 溶解，6-芐基氨基腺嘌 吟先用少量0.1 mol/L HCl溶解，然后用蒸餾水稀釋，再加入培養基中。（三）儀器設備培養室，高壓滅菌鍋，水浴鍋，解剖刀，三角燒瓶（100mL ），燒杯， 量筒，培養皿，棉線，接種箱或超凈工作臺，分析天平，長鑷子，剪刀， 容量瓶，移液管，牛皮紙。（四）培養基滅菌將配好的培養基加入瓊脂加熱溶解，調至pH 5.8，趁熱分裝于100 mL 三角燒瓶中，每瓶約20 mL。待培養基冷卻凝固后，用一層稱量紙和一層 牛皮紙包扎瓶（管）口，并用棉線扎牢，然后在高壓滅菌鍋中121 C

5、（ 1kg/cm 2 ）下滅菌20 min。取出三角燒瓶放在臺子上，冷卻后備用。接 種操作所需的一切用具（如長鑷子、解剖刀、剪刀等）及滅菌水，需同時 滅菌。2、培養材料的消毒（一）先將材料用流水沖洗干凈，最后一遍用蒸餾水沖洗，再用無菌紗布或 吸水紙將材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小塊。（二）在無菌壞境中將材料放入70%酒精中浸泡30-60秒。（三）再將材料移入漂白粉的飽和液或0.01%升汞水中消毒10分鐘。（四）取出后用無菌水沖洗三、四次。3、制備外植體將已消毒的材料，用無菌刀、剪、鑷等，在無菌的環境下，剝去芽的鱗片、 嫩枝的外皮和種皮胚乳等，葉片則不需剝皮。然后切成0.2-0.5厘米厚的

6、小片， 這就是外植體。在操作中嚴禁用于觸動材料。4、接種和培養（一）接種在無菌壞境下，將切好的外植體立即接在培養基上，每瓶接種4-10個。（二）封口接種后，瓶、管用無菌藥棉或蓋封口，培養皿用無菌膠帶封口。（三）溫度培養基大多應保持在25C左右，但要因花卉種類及材料部位的不同而區別 對待。（四）增殖外植體的增殖是組培的關鍵階段，在新梢等形成后為了擴大繁殖系數，需 要繼代培養。把材料分株或切段轉入增殖培養基中，增殖培養基一般在分化培養 基上加以改良，以利于增殖率的提高。增殖1個月左右后，可視情況進行再增殖。（五）根的誘導繼代培養形成的不定芽和側芽等一般沒有根，必須轉到生根培養基上進行 生根培養。1

7、個月后即可獲得鍵壯根系。5、組培苗的練苗移栽試管苗從無菌到光、溫、濕穩定的環境進入自然環境，必須進行煉苗。一 般移植前，先將培養容器打開，于室內自然光照下放3天，然后取出小苗，用自 來水把根系上的營養基沖洗干凈，再栽入已準備好的基質中，基質使用前最好消 毒。移栽前要適當遮蔭，加強水分管理，保持較高的空氣濕度（相對濕度98% 左右），但基質不宜過濕，以防爛苗。三、植物組織培養的優點1、占用空間小，不受地區、季節限制。2、培養脫毒作物。3、培養周期短。4、可用組培中的愈傷組織制取特殊的生化制品。5、可短時間大量繁殖，用于拯救瀕危植物。6、可誘導之分化成需要的器官，如根和芽。7、解決有些植物產種子少或無的難題。8、不存在變異，可保持原母本的一切遺傳特征。9、投資少，經濟效益高。10、繁殖方式多，試用品種多。近50年來，植物組織培養已滲透到生物學的各個領域，廣泛應用于農業、 醫藥業、林業和工業，并產生了巨大的經濟效益和社會效益，成為生物學的重要 研究技術和當代生物科學