1、學生：平陽駿馳凱康乃馨的離體快繁開題報告班級： 14生本 2專業：生物技術學部：生物醫藥指導教師：嚴錚輝二0一七年三月、實驗目的 掌握植物離體快速繁育原理、方法和完整過程。二、實驗原理康乃馨又名香石竹,花色艷麗,開花時間長,裝飾效果好,是世界上最暢 TOC o 1-5 h z 銷的切花之一,具有較高經濟價值。由于病毒病侵害,常使植株矮化,花朵變小,花色產生斑點,退色甚至不開花,影響切花產量和質量。通過莖尖分生組織培養,能夠獲得“無病毒的安康植株,對于引進的少而新的脫毒種苗,再進展一次莖尖培養,進一步降低根底苗中的病毒含量,并通過組織培養的方法快速繁殖,在短期,就可以獲得大量的脫毒試管苗,使引入

2、材料迅速在生產上推廣應用,取得明顯的經濟效益。三、實驗儀器與材料：.材料康乃馨枝條.儀器設備超凈工作臺，帶有吸水紙的成套的培養皿，無菌水培養基 MS+1mg/L 6-BA剪刀，鑷子量筒，酒精燈，濾紙，蒸餾水，小刷子紗布，棉塞，牛皮紙，標簽紙，肥皂，酒精噴壺.試劑95%乙醇，70%酒精，70%酒精棉球四、培養基的配方 1香石竹的生芽培養基MS+ IAA (0.1mg/L) + BA( 2.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)+ 蔗糖 30g/L +瓊月旨(8g/L), pH5.8-6.0配制0.3L,用小培養瓶分裝1015瓶。另外，需要制備無菌水20瓶大培養瓶，每人 34 瓶， ，紗布、碟子假

3、設干，后二者分別用報紙包好一同滅菌。 2香石竹的繼代培養基MS+ BA( 0.3mg/L)+NAA(0.2mg/L)+ 蔗糖30g/L +瓊脂 (8g/L),pH5.8-6.0jSE制0.3L,用小培養瓶分裝10-15瓶。另外，需要制備無菌水20瓶大培養瓶，每人 3-4瓶， ，紗布、碟子假設干，后二者分別用報紙包好一同滅菌。 3香石竹的生根培養基MS+生根培養基為 1/2MS+NAA(0.075mg/L)+ 蔗糖(30g/L)+瓊脂 (8g/L), pH5.8-6.0配制0.3L,用小培養瓶分裝10-15瓶。另外，需要制備無菌水20瓶大培養瓶，每人 3-4瓶，紗布、碟子假設干，后二者分別用報紙

4、包好一同滅菌。五、實驗步驟.滅菌 1實驗室及超凈臺消毒先進展無菌室消毒，用紫外線照射30-45分鐘，地面消毒，紫外燈關閉約 20min 前方可進去工作。對超凈工作臺進展消毒，開啟無菌風開關，開啟紫外，讓無菌風吹上15-20min前方可工作。并用70%的酒精棉臺擦凈工作臺 2外植體滅菌取從市場上購置的康乃馨枝條，去掉大的葉片，剪取帶腋芽的節結，用肥皂洗潔精清洗外表，再用自來水沖洗30-60S然后在無菌室超凈工作臺用70%酒精浸沒20-40秒根據材料的木質化程度掌握具體的浸沒時間。用0.2%勺次氯酸鈉溶液浸泡10-15min再用無菌水沖洗3-4次，放入已滅菌的培養皿中的濾紙上待用。.接種接種時先點

5、燃酒精燈，鑷子和剪刀都要先浸泡在70%的酒精溶液中。用酒精燈上灼燒好的鑷子、剪刀取出一個側芽或小段莖，迅速翻開三角瓶口，將材料插入瓶，注意材料上下端的極性，不能倒插。在酒精燈邊塞回錫箔紙，用記號筆在標簽紙上寫明材料、日期、實驗人，并將標簽貼在相應試劑瓶上。.培養條件25c光照13h/天，光照10001%4.繼代培養： 1無菌操作準備將培養基及各種接種用具放入超凈工作臺，開紫外燈，照射消毒20-30min開送風開關，關紫外燈，通風10min后，翻開照明日光燈。洗手， 用紗布吸取75%酒精擦手，擦拭超凈臺，擦拭培養基和無菌水瓶，點燃酒精燈，鑷子、解剖刀、剪刀等接種工具灼燒滅菌，待冷卻后使用。2無菌

6、操作接種酒精燈火焰旁翻開香石竹芽苗培養基，用鑷子取出香石竹芽苗，置于無菌培養皿，用解剖刀將芽苗簇切割成含23 芽苗， 然后切去芽 苗的上端。 3培養將培養瓶外表用酒精擦拭消毒，置于培養室進展光照培養。整理、清潔超凈工作臺。 4觀察記錄定期觀察培養情況，包括觀察日期、生長情況、以及污染情況等，并做好記錄。.誘導生根：用低濃度的吲哚乙酸或者萘乙酸或無激素的N6 培養基誘導 1無菌操作準備將培養基、無菌水、及各種接種用具放入超凈工作臺，開紫外燈，照射消毒20-30min開送風開關，關紫外燈，通風10min后，翻開照明日光燈。洗手，用紗布吸取75%酒精擦手，擦拭超凈臺，擦拭培養基和無菌水瓶，點燃酒精燈

7、，鑷子、解剖刀、剪刀等接種工具灼燒滅菌，待冷卻后使用。2無菌操作接種酒精燈火焰旁翻開香石竹培養瓶，用鑷子取出香石竹芽苗，置于無菌不銹鋼碟子，用解剖刀將芽苗的每個小芽分開。用鑷子將單個小芽插入生根培養基，每瓶接3 個。蓋上瓶蓋，貼上標簽，注明材料名稱、接種日期和。 3培養將培養瓶外表用酒精擦拭消毒，置于培養室進展黑暗培養。整理、清潔超凈工作臺。 4觀察記錄定期觀察培養情況，包括觀察日期、生長情況、以及污染情況等，并做好記錄。.試管苗移栽1緩苗移栽試管苗在移栽前幾天一般都需要進展煉苗，讓它有個逐步適應環境的過渡階段，一般方法是先將培養瓶從培養室拿到常溫下放置，然后將試管苗容器口上包扎的塞子或紙去掉

8、放置幾天，此時需注意保持空氣濕度，并防止雜菌污染，尤其是在炎熱的夏季，由于氣溫較高，當封口翻開后，該容器就由原來的無菌狀態轉為有菌狀態，雜菌容易很快生長而污染試管苗。在去掉封口時采用培養基上加薄層水的處理效果較好， 即可提高濕度又可減少雜菌生長，但假設放置時間較長那么需換水。待試管苗逐步適應外界的光照、溫度和濕度后再進展移栽，即可提高移栽成活率。（二 ）移栽技術移栽時， 首先將試管苗從所培養的瓶中取出，取時要用鑷子小心地操作， 切勿把根系損壞，然后把根部粘附的瓊脂漂洗掉，要求全部除去，而且動作要輕，以減少傷根傷苗。瓊脂中含有多種營養成份，假設不去掉，一旦條件適宜，微生物就會很快滋生，從而影響植株的生長，甚至導致爛根死亡。移栽前，先將基質澆透水，并用一個筷子粗的竹簽在基質中開一穴，然后再將植株種植下去，最好讓根舒展開，并防止弄傷幼苗。種植時幼苗深度應適中，不能過深或過淺，覆土后需把苗周圍基質壓實，也可只將容器搖幾下待基質緊實即可，以防損傷試管苗的細弱根系和根毛。移栽時最好用鑷子或細竹筷夾住苗后再種植在小盆，移栽后需輕澆薄水，再將苗移入高濕的環境中，保證空間濕度達90%以上。六、實驗結果與分析七、參考文獻1王蓮英，朱秀珍， 虞佩