1、主要內容 培養基簡介1 培養基質量保證2 培養基的質量要求3 培養基性能測試方法4 測試結果的記錄5 培養基常見問題61、培養基簡介 培養基 液體、半固體或固體形式的、含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖（含或不含某類微生物的抑菌劑）、鑒定或保持其活力的物質。1.1 定義1、培養基簡介1.2.1 按組成成分分類1.2.2 按狀態分類1.2.3 按用途分類1.2.4 按制備方法分類1.2 分類1、培養基簡介1.2.1 按組成成分分類純化學培養基：僅含有已知分子結構和純度的化學成分的培養基。未定義和部分定義的化學培養基：全部或部分由天然物質，加工過的物質或其他不純的化學物質構成的培養基。1、培養基

2、簡介1.2.2 按狀態分類液體培養基：一種或多種成分組成的水溶液。如：腦心浸出液肉湯、營養肉湯；半固體培養基和固體培養基：含一定量固化物（瓊脂、明膠等）的液體培養基。 半固體培養基：含0.2%-0.8%瓊脂粉，多用于細菌的動力觀察、菌種傳代保存及貯運細菌標本材料等。 固體培養基：含1.5%-2%瓊脂，多用于細菌的分離、鑒定、菌種保存分類定義舉例增菌培養基為微生物繁殖提供特定的生長環境，通常為液體細分選擇性增菌允許特定微生物繁殖，部分或全部抑制其他微生物生長TTB、SC非選擇性增菌能使多種微生物生長的培養基BHI、NB分離培養基支持微生物生長的固體或半固態培養基細分選擇性分離支持特定微生物生長而

3、抑制其它微生物生長的分離培養基XLD、BS非選擇性分離對微生物沒有選擇性抑制的分離培養基NA計數培養基能對微生物定量的選擇性或非選擇的培養基（注：可包含復蘇、增菌等特性）MYP、PCA鑒別培養基（特異性培養基）能進行一項或多項生理或生化特性鑒定的培養基麥康凱瓊脂鑒定培養基能產生一個特定的鑒定反應而不需要進一步確證實驗的培養基蛋白胨水確證培養基經復蘇、分離和增菌后，對微生物部分或完全鑒定或鑒別的培養基BGLB肉湯運輸培養基取樣后處理前保持微生物活性且不允許明顯增殖的培養基緩沖甘油-氯化鈉溶液保藏培養基一定時期內保護和維持微生物活性，防止長期保存造成不利影響，或使微生物在長期保存后容易復蘇的培養基

4、營養瓊脂斜面復蘇培養基能使受損或應激的微生物修復，使其恢復生長能力，但不一定促進微生物繁殖的培養基懸浮培養基將測試樣本的微生物分散到液相中，不產生增值或抑制作用的培養基磷酸鹽緩沖液PBS1.2.3 按用途分類1.2.4 按制備方法分類即用型培養基：以即用形式或融化后即用形式置于容器內供應的液體、半固體和固體培養基脫水合成培養基：使用前需加水和進行處理的干燥培養基自制培養基：依據完整配方的具體成份配制的培養基1、培養基簡介2、培養基質量保證質量保證培養基生產企業提供文件標明培養基各種成分、添加成分名稱及產品編號；批號培養基最終pH值儲藏信息和有效期質控證書和測試菌株性能測定結果及驗收標準必要的安

5、全和/或危害數據質量保證培養基使用者每批培養基，應驗收：產品合格證明包裝的完整性產品的有效期生產企業文件的提供記錄接受日期2、培養基質量保證2.1 脫水合成培養基制備流程2.2脫水合成培養基制備注意事項概述：嚴格按照廠商提供的使用說明配置。 水：實驗用水的電導率在25時不應超過25S/cm，相當于電阻率0.4Mcm。微生物污染103/mL，最好在102/mL以下；定期檢查實驗用水是否受到微生物污染。2、培養基質量保證2、培養基質量保證2.2脫水合成培養基制備注意事項 pH值測定和調整： 使用pH計測定； 滅菌后冷卻至25時測定pH值； pH值應在標準pH0.2范圍內； 使用1mol/L的氫氧化

6、鈉或鹽酸溶液調整培養基的pH值。 （如需滅菌后調整pH值，則使用滅菌溶液） 2、培養基質量保證滅菌方式：濕熱滅菌；煮沸滅菌；過濾除菌：注意避免過度加熱：1.大容積（1000mL)時容易過度加熱；2. 放置物品太多或滅菌后未及時冷卻。2.2脫水合成培養基制備注意事項SC正常加熱 SC過度加熱2.3脫水合成培養基使用注意事項 滅菌或復溶后培養基放入47-50的恒溫水浴鍋中，冷卻保溫，直至使用； 培養基只可復融一次，融化后的培養基應盡快使用，放置時間不應超過4小時，未使用完的培養基不能重新凝固留待下次使用。 個別培養基使用前需要脫氧：松開容器蓋子，沸水浴或蒸氣浴中加熱15min，蓋緊蓋子，迅速冷卻，

7、如 FT培養基。2、培養基質量保證2、培養基質量保證2.4菌株定義標準菌株：至少定義到屬或種水平的菌株，按菌株特性進行分類和描述，官方菌種保藏機構獲得，最好來源于食品或水；標準儲備菌株：將實驗室獲得或供應商提供的標準菌株轉接一代后得到的一套完全相同的獨立菌株；儲備菌株：從標準儲備菌株轉接第一代的培養物；工作菌株：由標準儲備菌株或儲備菌株，或由經證明或未證明的標準物質轉接一代獲得的菌株指在均一固定的濃度中含有具活性的定量化菌種，經證明的標準物是指其濃度已經證明。2、培養基質量保證 標準/質控菌株主要來源美國菌種保藏中心American Type Culture Collection Center

8、,ATCC（英國）國家菌種保藏中心(UK) National Center for Typical Culture Collection,NCTC中國工業微生物菌種保藏管理中心China Center for Industrial Culture Collection ,CICC中國醫學微生物菌種保藏中心China Center for Medical Culture Collection ,CMCC注：陸橋均可代購以上菌株ATCC菌株（進口）CMCC菌株（國產）注：ATCC菌株提供證書，可以自行到其網站下載。2、培養基質量保證2、培養基質量保證標準菌株(凍干菌種） 轉種活化標準儲備菌株（-8

9、0冰箱保存的培養物） 轉種活化儲備菌株（4冰箱保存的培養物） 轉種活化工作菌株（用于培養基微生物質控的新鮮培養物）詳細請參考附錄C獲得標準菌株驗證和文件歸檔依據生產商指引進行復蘇在5%的血瓊脂、TSA或其它適合的固體培養基上進行分離驗證菌株的純度和特性符合用適合的培養基制備菌懸液分裝進行凍存或凍干NO獲得儲存菌株YES通常懸浮于營養肉湯中適宜時間進行復蘇驗證菌落形態和革蘭氏染色或用生化試驗進行鑒定例如：TSB添加10%-15%甘油作為冷凍保護培養基在不高于-70低溫冷凍保存可延長保存的時間。禁止采用較高的溫度保存。標準儲備菌株迅速解凍在適合的固體培養基上培養=工作菌株驗證菌株的純度和形態NO制

10、備用于測試的工作菌株符合YES在適合的固體培養基上培養驗證菌株的純度和形態符合YES接種到合適的培養基或凍存菌懸液=工作菌株貯存物或貯存培養物在適合的培養基上分離=工作菌株驗證純度制備用于測試的工作菌株YESNONO符合此流程更合適3、培養基質量要求基本(感官和理化)要求：分裝的量和/或厚度外觀、色澤和均一性瓊脂凝膠的硬度水分含量20 -25 的pH值緩沖能力微生物要求：微生物污染測試（只適用于即用型培養基）生長特性 1、生長率 2、選擇性 3、特異性 4、抗菌試驗特性注：詳細參照GB 4789.28附錄F培養基質量控制標準性能評價和結果解釋：1、所有測試菌株的性能測試達到標準，則該批培養基的

11、性能測試結果符合規定；2、基本要求和微生物要求均符合規定，則該批培養基可被接受。質構儀水分測定儀電極式pH計3、培養基質量要求3、培養基質量要求 生長特性概述 a）定量方法； b）半定量方法； c）定性方法。注：使用以上方法時，應使用參考培養基進行對照，有助于結果的解釋。選擇近期批次中質量良好的，或具有長期穩定性的批次培養基或即用型培養基通常可滿足實驗室的培養基性能檢測要求培養基生產商自制培養基新培養基或新供應商產品其他特殊要求培養基性能測試第一法4、培養基性能測試方法4.1定量方法懸浮培養基和運輸培養基非選擇性固體分離和計數培養基選擇性固體分離和計數培養基選擇性固體分離和計數培養基4.2半定

12、量方法選擇性液體增菌培養基非選擇性液體增菌培養基選擇性液體計數培養基非選擇性固體分離和計數培養基4、培養基性能測試方法選擇性固體分離和計數培養基4.3定性方法Mueller Hinton血瓊脂鑒定培養基和實驗試劑懸浮培養基和運輸培養基非選擇性固體分離和計數培養基非選擇性液體增菌培養基選擇性液體計數培養基選擇性液體增菌培養基將適當稀釋度的目標菌0.1mL分別涂布于待測培養基平板和參考培養基平板（可用螺旋平板法或傾注法），經培養后，計算PR。 PR = NS/NO PR：生長率； NS ：待測培養基平板上得到的菌落總數； NO ：參考培養基平板上獲得的菌落總數，應100CFU。 結果解釋：非選擇性

13、培養基和選擇性計數培養基上目標菌的生長率應不小于0.7； 選擇性分離培養基上目標菌的生長一般不小于0.5，最低應為0.1。接種水平為20CFU200CFU4.1 定量方法 非選擇性、選擇性固體計數和分離培養基4、培養基性能測試方法例：木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂（XLD）測試菌株：鼠傷寒沙門氏菌，福氏志賀氏菌； 10倍稀釋，選取適宜稀釋度0.1mL涂布XLD平板和TSA參比平板，361培養 18h24h； 計數：PR = NS/NO=(132+139)/2(172+175)/2=0.78XLDTSA鼠傷寒沙門氏菌132,139172,175福氏志賀氏菌130,135182,187PR = NS/NO

14、=(130+135)/2(182+187)/2=0.72鼠傷寒沙門氏菌：福氏志賀氏菌：4.1 定量方法 非選擇性、選擇性固體計數和分離培養基4、培養基性能測試方法 待測培養基分裝試管，10mL/支（或5mL/支）； 目標菌濃度選擇：100CFU1000CFU； 接種后，混勻： 立即吸取1mL，用相應培養基傾注平板； 剩余已接菌的待測培養基置2025放置45min，再吸取1mL用相應培養基傾注平板； 分別按標準方法中規定的培養條件培養后，計數；結果觀察與解釋： 待測培養基中的菌落數變化應在50%內。 4、培養基性能測試方法4.1 定量方法 懸浮培養基和運輸培養基制備106108CFU/mL 的工

15、作菌懸液；用1L接種環劃線平板，A區用按0.5cm的間隔劃四條平行線，按同樣方法在B、C區劃線，最后在D區劃一條連續曲線；培養后，評價菌落的形狀、大小和生長密度，計算生長指數G；每條有菌生長的劃線記為1分，如果僅一半的線有菌生長，記為0.5分，沒有生長或生長量少于劃線一半的，記為0分；結果解釋： 目標菌在培養基上應呈典型的生長，目標菌生長指數G大于6，培養基可接受；非選擇培養基的G值通常較高。4、培養基性能測試方法4.2 半定量方法 非選擇性、選擇性固體計數和分離培養基非目標菌半定量測試方法用1L接種環劃線平板，劃六條平行直線；每條有菌生長的劃線記為1分，如果僅一半的線有菌生長，記為0.5分，

16、沒有生長或生長量少于劃線一半的，記為0分；結果解釋 非目標菌的生長應部分或完全被抑制。注：操作時用接種環而不用接種針，接種環完全浸入培養基中，取一滿環接種物，接觸容器邊緣3次，去除多余液體。劃線時，接種環與瓊脂表面的角度應為20-30，接種環壓在瓊脂表面的壓力和劃線速度前后一致，整個劃線應快速連續，移取液體培養物時應將接種環伸入培養液下部分以防止環上產生氣泡或泡沫。4、培養基性能測試方法4.2 半定量方法 選擇性固體計數和分離培養基培養基分裝，10mL/支；新鮮菌液10倍稀釋后，選取10CFU100CFU稀釋度工作菌懸液； 取1mL工作菌懸液接入待測培養基； 同時取1mL傾注平板，做接種量計數

17、用； 按標準方法中的培養時間和溫度進行培養（如增菌時間為8h以下，取10L增菌液傾注平板，再按適合的時間和溫度培養，結果按附錄F判定）； 結果解釋： 0 表示無混濁； 1 表示很輕微的混濁； 2 表示嚴重的混濁目標菌的濁度值應為2. 4、培養基性能測試方法4.2 半定量方法 非選擇性液體增菌培養基4、培養基性能測試方法4.2 半定量方法 非選擇性液體增菌培養基混合菌接種：同時分別將目標菌菌懸液（與待測培養基接種同一稀釋度）和非目標菌菌懸液（比待測培養基接種小10100倍稀釋度）1mL傾注平板，用作接種量計數 非目標菌接種：在待測培養基中接種等量混合菌試管中的非目標菌。培養液接種： 混合菌培養液

18、接種：用10L接種環取1環培養后的混合菌培養液，劃線接種到特定的選擇性平板上； 非目標菌培養液接種：吸取10L培養后的非目標菌培養液，涂布到非選擇性平板上；計算和結果解釋 目標菌在選擇性平板上的菌落應10CFU 非目標菌在非選擇性平板上的菌落數應100CFU目標菌10CFU100CFU非目標菌1000CFU5000CFU接菌量1mL則表示待測液體培養基的生長率良好4.2 半定量方法 選擇性液體增菌培養基4、培養基性能測試方法例：亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）目標菌株：鼠傷寒沙門氏菌(10CFU100CFU)；非目標菌：大腸埃希氏菌(1000CFU5000CFU) 銅綠假單胞菌(1000CFU50

19、00CFU);混合接種：混合菌1mL接種待測培養基；分別將鼠傷寒沙門氏菌（10CFU100CFU）和大腸埃希氏菌，銅綠假單胞菌（小10100倍稀釋度）1mL傾注平板，用于計數；非目標菌接種：在待測培養基中接種等量混合菌試管中的非目標菌。4、培養基性能測試方法4.2 半定量方法 選擇性液體增菌培養基4.2 半定量方法 選擇性液體增菌培養基4、培養基性能測試方法例：亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）混合菌培養液的接種：用10L接種環取1環培養后的混合菌培養液，劃線接種到特定的選擇性平板上； 非目標菌培養液接種：吸取10L培養后的非目標菌培養液，涂布到非選擇性平板上；計算和結果解釋 鼠傷寒沙門氏菌的菌落應

20、10CFU 大腸埃希氏菌和銅綠假單胞菌在非選擇性平板上的菌落數應100CFU目標菌接種：取1mL目標菌（10CFU100CFU稀釋度）接種待測培養基，同時取1mL傾注平板，用作接種量計數；非目標菌接種：取1mL非目標菌（1000CFU5000CFU稀釋度）接種待測培養基，同時取1mL（比待測培養基接種小10100倍稀釋度）傾注平板，用作接種量計數； 結果解釋： 0 表示無混濁； 1 表示很輕微的混濁； 2 表示嚴重的混濁。如需觀察產氣，記錄小導管收集氣體的體積比。目標菌的濁度值應為2，產氣應為1/3或以上；非目標菌的濁度值應為0或1，無產氣現象。4、培養基性能測試方法4.2 半定量方法 選擇性

21、液體計數培養基4、培養基性能測試方法4.2 半定量方法 選擇性液體計數培養基 用1L接種環取測試菌培養物在測試培養基表面劃平行直線（細菌），或用接種針直接挑取斜面培養物點種接種（霉菌），按標準規定的培養條件培養。 結果解釋 0 表示無生長； 1 表示微弱生長； 2 表示生長良好。目標菌：得分為2，有典型的菌落外觀、大小和形態；非目標菌（選擇性）：得分為0或1；非目標菌（特異性）：有典型的菌落外觀、大小和形態。 4.3 定性方法 非選擇性、選擇性固體計數和分離培養基4、培養基性能測試方法 用1L接種環取工作菌懸液，接種到待測液體培養基中，培養。結果解釋： 0 表示無混濁； 1 表示很輕微混濁；

22、2 表示嚴重混濁。目標菌：濁度值為2；非目標菌：濁度值為0或1；注：有時可以觀察到微生物生長后聚集成細胞團，沉積在試管或瓶子底部，發生這種情況時，小心振蕩試管后再進行觀察。4、培養基性能測試方法4.3 定性方法 非選擇性、選擇性液體增菌和計數培養基 用1L接種環取一環工作菌懸液直接接種到待測培養基中，混勻，立即用10L接種環取一環劃平行線接種平板； 剩余已接種菌液的待測培養基置2025放置45min，再用10L接種環取一環劃平行線接種平板； 按標準方法中規定的培養條件培養。 結果觀察與解釋 前后平板上目標菌的生長情況應均為良好。4.3 定性方法 懸浮培養基和運輸培養基4、培養基性能測試方法 紙

23、片擴散法（定性測試） 平板制備： 傾注平板，厚度為4mm5mm，使用前適當干燥； 質控菌：接種在血平板上復蘇，純度滿意后，用于工作菌懸液制備； 工作菌懸液：指控菌株懸浮與TSB肉湯中，濁度為0.5麥氏標準（約1108CFU/mL2108CFU/mL）； 接種：將工作菌懸液涂布與待測的MH平板上，貼上相應的抗生素紙片（每皿最多6片），平板翻轉后培養。注：調整菌懸液濁度與接種所有平板的時間不要超過15min。 結果觀察與解釋 在無反射黑色背景下，觀察有無抑菌環。 結果解釋參照附錄F培養基質量控制標準。 4.3 定性方法Mueller-Hinton血瓊脂4、培養基性能測試方法4.3.1 液體培養基

24、制備5McFrand濁度（約為109CFU/mL）的菌懸液； 接種：吸取0.05mL0.08mL（約12滴）至待測培養基內； 按標準方法中規定的培養條件培養。 結果觀察與解釋 需加指示劑的實驗在微生物生長良好的情況下，按順序加入指示劑，在觀察結果。例：尿素培養基 +：陽性，奇異變形桿菌，培養基變玫紅色； ：陰性，大腸埃希氏菌，培養基變黃色或不變色 blank + 4.3 定性方法鑒定培養基4、培養基性能測試方法4.3.2 半固體培養基用接種針條取新鮮質控菌株，穿刺接種待測培養基內；按標準方法中規定的培養條件進行培養；結果觀察與解釋 需加指示劑的實驗在微生物生長良好的情況下，按順序加入指示劑，

25、在觀察結果。例：半固體培養基 +：陽性，單增李斯特氏菌 ，呈傘狀或月牙狀生長； ：陰性，蠟樣芽孢桿菌，沿穿刺線生長。 + 4、培養基性能測試方法4.3 定性方法鑒定培養基4.3.3 高層斜面培養基和斜面培養基高層斜面（斜面與底層高約為：2:3）；普通斜面（斜面與底層高約為：3:2）；接種：高層斜面：用接種針挑取新鮮質控菌株穿刺接種值瓊脂高層，再在斜面上劃“之”字形；普通斜面：用接種針挑取新鮮質控菌株在斜面上劃“之”字形；結果觀察與解釋 需加指示劑的實驗在微生物生長良好的情況下，按順序加入指示劑， 在觀察結果。4、培養基性能測試方法4.3 定性方法鑒定培養基質控菌株名稱斜面/底部腸炎沙門氏菌（右

26、一）產堿（紅）/產酸（黃）福氏志賀氏菌產堿（紅）/產酸（黃）弗氏檸檬酸桿菌（右二）產酸（黃）/產酸（黃）大腸埃希氏菌（左二）產酸（黃）/產酸（黃）產氣產H2S+-+-例：三糖鐵瓊脂滅菌后制成高層斜面備用空白對照（左一）：橘紅色4、培養基性能測試方法4.3 定性方法鑒定培養基 實驗室試劑 1、按照試劑說明書進行實驗； 2、參照標準進行結果觀察與解釋。4、培養基性能測試方法5、測試結果的記錄 制造商信息： 培養基制造商或供應商應按客戶的要求提供培養基常規信息和相關測試菌株生長特性信息。溯源性: 按照質量體系的要求，對所有培養基性能測試的數據歸檔，并在有效期內進行適當的保存。建議使用內部質量控制單進

27、行文件記錄并評價測試結果。產品質量檢驗報告產品 MSDS5、測試結果的記錄5、測試結果的記錄用于產品內部質量控制的評價測試結果和產品信息。1、培養基不能凝固 制備過程中過度加熱； 低pH值造成培養基酸解； 稱量不正確； 瓊脂未完全溶解； 培養基成分未充分混勻。培養基常見問題2、pH值不正確 制備過程中過度加熱； 水質不佳； 外部化學物質污染； 測定pH值時溫度不正確； pH計未正確校準；脫水培養基質量差.培養基常見問題3、顏色異常 制備過程中過度加熱； 水質不佳；pH不正確；外來污染；脫水培養基質量差。培養基常見問題4、產生沉淀 制備過程中過度加熱； 水質不佳；脫水培養基 質量差；pH值未正確控制；原料中的雜質。培養基常見問題5、培養基出現抑制/低的生長率制備過程中過度加熱；脫水培養基質量差；水質不佳；使用成分不正確，如：成分稱量不準，添加劑濃度不正確；制備容器或水中的有毒殘留物。培養基常見問題6、選擇性差制備過程中過度加熱；脫水培養基質量差；配方使用不對；添加成分的加入不正確；例：加入添加成分時培養基過熱或添加