1、維生素的測定方法和要求第一節(jié) 概 述 維生素是維持人體正常生命活動(dòng)所必需的一類天然有機(jī)化合物。其種類很多，目前已確認(rèn)的有30余種，其中被認(rèn)為對維持人體健康和促進(jìn)發(fā)育至關(guān)重要的有20余種。這些維生素結(jié)構(gòu)復(fù)雜，理化性質(zhì)及生理功能各異，有的屬于醇類，有的屬于胺類，有的屬于酯類，還有的屬于酚或醌類化臺物。 在評價(jià)食品的營養(yǎng)價(jià)值，開發(fā)利用高含量維生素的食品資源，指導(dǎo)人們合理調(diào)整膳食結(jié)構(gòu)，指導(dǎo)制定加工工藝或貯存條件，最大限量地保留各種維生素，還要控制強(qiáng)化食品中加入量，防中毒，都離不開分析檢測工作。 維生素分類：脂溶性（A、D、E、K） 水溶性兩類（B族、VC）第二節(jié) 脂溶性維生素的測定 VA、VD、VE、

2、與類脂物一起存于食物中，攝食時(shí)可吸收，可在體內(nèi)積貯。脂溶性維生素具有以下理化性質(zhì)： 1溶解性：脂溶性維生素不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、乙醚、苯等有機(jī)溶劑。 2耐酸堿性：維生素A、D對酸不穩(wěn)定， 對堿穩(wěn)定，維生素E對堿不穩(wěn)定，但在抗氧化劑存在下或惰性氣體保護(hù)下，也能經(jīng)受堿的煮沸。 3、耐熱、耐氧化性 耐熱性 氧化性VA 好，能經(jīng)受煮沸 易被氧化 （光、熱促進(jìn)其氧化）VD 好，能經(jīng)受煮沸 不易被氧化V E 好，能經(jīng)受煮沸 在空氣中能慢慢被氧化 （光、熱、堿促進(jìn)其氧化） 根據(jù)上述性質(zhì)，測定脂溶性維生素時(shí)，通常：皂化樣品 水洗去除類脂物 有機(jī)溶劑提取脂溶性維生素(不皂化物) 濃縮 溶于適當(dāng)

3、的溶劑 測定。 在皂化和濃縮時(shí)，為防止維生素的氧化分解，常加入抗氧化劑(如焦性沒食子酸、維生素C等)。 一、維生素A的測定 維生素A存在于動(dòng)物性脂肪中，主要來源于肝臟、魚干油、蛋類、乳類等動(dòng)物性食品中。植物性食品中不含VA，但在深色果蔬中含有胡蘿卜素，它在人體內(nèi)可轉(zhuǎn)變?yōu)閂A，故稱為VA原。GB/T 5009.822003中第一法 高效液相色譜法測定維生素A是近幾年發(fā)展起來的方法，此法能快速分離、同時(shí)測定維生素A和維生素E最小檢出量分別為VA：；-E：；-E：；-E：。一、 高效液相色譜法測定食物中VA、VE1.原理 食物中的維生素A及維生素E經(jīng)皂化提取以后，將其從不可皂化的部分提取到有機(jī)溶劑中

4、。用HPLC法測定維生素A及維生素E的含量。 分析步驟 皂化提取洗滌萃取濃縮 溶解離心測定結(jié)果計(jì)算樣品前處理1） 皂化 稱取110g樣品（含維生素A約3g)于皂化瓶中，加30mL無水乙醇，進(jìn)行攪拌，直到顆粒物分散均勻?yàn)橹埂＜?0mL 10抗壞血酸，苯并e芘標(biāo)準(zhǔn)液，混勻。加10mL(1+1)氫氧化鉀，混勻。于沸水浴上回餾30min使皂化完全。皂化后立即于水中冷卻。 2）提取 將皂化后的樣品移入分液漏斗中，用50mL水分23次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。用約100mL乙醚分兩次洗皂化瓶及其殘?jiān)颐岩翰⑷敕忠郝┒分小Ｈ缬袣堅(jiān)蓪⒋艘和ㄟ^有少許脫脂棉的漏斗濾入分液漏斗。輕輕振搖分液漏斗2min，

5、靜置分層，棄去水層。 3）洗滌 用約50mL水洗分液漏斗中的乙醚層，水洗至水層不顯堿性，（最初水洗輕搖，逐次振搖強(qiáng)度可增加）。 4）濃縮 將乙醚提取液經(jīng)過無水硫酸鈉（約5g）濾入與球形蒸發(fā)瓶內(nèi)，用約10mL乙醚沖洗分液漏斗及無水硫酸鈉3次，入蒸發(fā)瓶內(nèi)，并將其接至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，于55C水浴中減壓蒸餾并回收乙醚，待瓶中剩下約2mL乙醚時(shí)，取下蒸發(fā)瓶，立即用氮?dú)獯档粢颐选＜尤胍掖迹浞只旌希芙馓崛∥铩⒁掖家阂迫胍恍∷芰想x心管中，離心5min（5000rpm)。上清液供色譜分析。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 將維生素A和維生素E標(biāo)準(zhǔn)品配置成標(biāo)準(zhǔn)溶液（約1mg/mL），制備標(biāo)準(zhǔn)曲線前用紫外分光光度法標(biāo)定其準(zhǔn)確濃

6、度。標(biāo)準(zhǔn)濃度的標(biāo)定方法 取維生素A和維生素E標(biāo)準(zhǔn)液若干微升，分別稀釋至乙醇中，并分別按給定波長測定各維生素的吸光值。用比吸光系數(shù)計(jì)算該維生素的濃度。 測定條件 標(biāo)準(zhǔn)物 比吸光系數(shù) E1%cm 波長，nm 視 黃 醇 1835 325 生育酚 71 294 生育酚 92.8 298 生育酚 91.2 298 標(biāo)準(zhǔn)濃度計(jì)算： X1 = A/E1/10010.00/(S10-3)式中：X1維生素A濃度，g/mL； A 維生素A的平均紫外吸收值； S 加入標(biāo)準(zhǔn)的量，L； E 維生素A 1%比吸光值； 10.00/(S10-3)標(biāo)準(zhǔn)液稀釋倍數(shù)2）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 標(biāo)準(zhǔn)和內(nèi)標(biāo)物進(jìn)行色譜分析，以維生素A峰面積與

7、內(nèi)標(biāo)物峰面積之比為縱坐標(biāo)，維生素A濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。高效液相色譜分析預(yù)柱: ultrasphere ODS 10分析柱:ultrasphere ODS 5m, 4.6mm25cm流動(dòng)相:甲醇:水98:2 混勻,于臨用前脫氣紫外檢測器波長：300nm進(jìn)樣量：20L流速：注意事項(xiàng)（1）維生素A極易被破壞，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在微弱光線下進(jìn)行，或用棕色玻璃儀器。 （2）在皂化過程中，應(yīng)每5分鐘搖一下皂化瓶，使樣品皂化完全。 （3）提取過程中，振搖不應(yīng)太劇烈，避免溶液乳化而不易分層。 （4）洗滌時(shí)，最初水洗輕搖，逐次振搖強(qiáng)度可增加。 （5）無水硫酸鈉如有結(jié)塊，應(yīng)烘干后使用。 （6）在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)時(shí)乙醚溶液不

8、應(yīng)蒸干，以免被測樣品含量損失。 （7）用高純氮吹干時(shí)，氮?dú)獠荒荛_的太大，避免樣品吹出瓶外結(jié)果偏低。二、比色法測定VA的含量GB/T 5009.822003中第二法原理 在氯仿溶液中，VA與三氯化銻可生成藍(lán)色可溶性絡(luò)合物，在 620 nm 波長處有最大吸收峰，其吸光度與VA的含量在一定的范圍內(nèi)成正比，故可比色測定。三、胡蘿卜素的測定 （GB/T 5009.832003 ）第一方法是HPLC； 第二方法為紙層析法。 胡蘿卜素是一種廣泛存在于有色蔬菜和水果中的天然色素，有多種異構(gòu)體和衍生物，總稱為類胡蘿卜素，其中在分子結(jié)構(gòu)中含有 一紫羅寧殘基的類胡蘿卜素，在人體內(nèi)可轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素A，故稱為維生素A原。

9、如、胡蘿卜素，其中以胡蘿卜素效價(jià)最高。 胡蘿卜素原只存在于植物性食品中，但以胡蘿卜為食物的家禽、獸類、水產(chǎn)動(dòng)物及其加工產(chǎn)品，以及為著色而添加胡蘿卜素的食品也含有胡蘿卜素。胡蘿卜素的結(jié)構(gòu)如下： 胡蘿卜素對熱及酸、堿比較穩(wěn)定，但紫外線和空氣中的氧可促進(jìn)其氧化破壞。因系脂镕性維生素，故可用有機(jī)溶劑從食物中提取。 胡蘿卜素本身是一種色素，在450 nm 波長處有最大吸收，故只要能完全分離，便可定性和定量。但在植物體內(nèi)，胡蘿卜素經(jīng)常與葉綠素、葉黃素等共存，在提取 一胡蘿卜素時(shí)，這些色素也能被有機(jī)溶劑提取，因此在測定前，必須將胡蘿卜素與其它色素分開。常用的方法有紙層析、柱層析和薄層層析法。凈化用層析介質(zhì)采

10、用氧化鎂、氧化鋁避光洗脫液樣品填充物分部收集玻璃柱 四、維生素D的測定 維生素D為固醇類衍生物，具抗佝僂病作用，其中最重要的是D2和D3。植物不含維生素D，但維生素D原在動(dòng)、植物體內(nèi)都存在。植物中的麥角醇為維生素D2原，經(jīng)紫外照射后可轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素D2，又名麥角鈣化醇；人和動(dòng)物皮下含的7-脫氫膽固醇為維生素D3原，在紫外照射后轉(zhuǎn)變成維生素D3，又名膽鈣化醇。以D3為最重要。 分析方法中較好的是比色法和高效液相色譜法。是AOAC選定的正式方法。維生素D的結(jié)構(gòu) (一)三氯化銻比色法 原理 在三氯甲烷溶液中，維生素D與三氯化銻結(jié)合生成一種黃色化合物，呈色強(qiáng)度與維生素D含量呈正比。食品中維生素D含量較低

11、，其他維生素嚴(yán)重干擾其測定，因此測定前必須經(jīng)柱層析除去干擾成分。層析介質(zhì)為硅藻土、中性氧化鋁此法測定的是維生素D2和維生素D3的總量(二) 液相色譜法 它的靈敏度較比色法高30倍以上，且操作簡便，精度高，分析速度快。是目前分析維生素D的最好方法。 試樣經(jīng)皂化后，用苯提取不皂化物，蒸餾除苯，先采用反相C18柱分取維生素D，除去大部分雜質(zhì)。進(jìn)一步采用正相色譜分離，紫外檢測定量。反相色譜條件 色譜柱：Nucleosil C18,7.5mm*300mm 流動(dòng)相：乙腈-甲醇（1:1,v/v） 流速：2.0 mL/min 紫外檢測波長：254nm正相色譜條件 色譜柱：正相柱Zorbax SIL,4.5mm

12、*250mm 流動(dòng)相：0.4%異丙酮的己烷溶液 流速：1.6 mL/min 紫外檢測波長：254nm注意事項(xiàng)1、VD2 與VD3分不開2、皂化時(shí)加入焦性沒食子酸作為抗氧化劑2、標(biāo)樣與試樣在同樣條件下皂化，消除了VD的熱 異化性損失。3、也可用硅藻土及皂土柱層析，除去甾醇、VA、胡蘿卜素的干擾。第三節(jié) 水溶性維生素的測定 水溶性維生素B1、B2和C，廣泛存在于動(dòng)植物組織中，飲食來源充足。但是由于它們本身的水溶性質(zhì)，除滿足人體生理、生化作用外，任何多余量都會從小便中排出。為避免耗盡，需要經(jīng)常由飲食來提供。水溶性維生素都易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多數(shù)有機(jī)溶劑。在酸性介質(zhì)中很穩(wěn)定，既使加熱也

13、不破壞；但在堿性介質(zhì)中不穩(wěn)定，易于分解，特別在堿性條件下加熱，可大部分或全部破壞。它們易受空氣、光、熱、酶、金屬離子等的影響； 維生素B2對光，特別是紫外線敏感，易被光 線破壞；維生素C對氧、銅離子敏感，易被氧化。三、維生素C的測定 維生素C是一種己糖醛基酸，有抗壞血病的作用，所以又稱作抗壞血酸。維生素C廣泛存在于植物組織中，新鮮的水果、蔬菜，特別是棗、辣椒、苦瓜、柿子葉、獼猴桃、柑桔等食品中含量尤豐富。 維生素C具有較強(qiáng)的還原性，對光敏感，氧化后的產(chǎn)物稱為脫氫抗壞血酸，仍然具有生理活性。進(jìn)一步水解則生成2，3 -二酮古樂糖酸，失去生理作用。根據(jù)它具有的還原性質(zhì)可以測定維生素C的含量。常用的測

14、定方法有（1）2，6-二氯靛酚法 （還原型VC）（2）2，4-二硝基苯肼法 （總VC）（3）碘酸法（4）碘量法（5）熒光分光光度法(一) 2，6二氯靛酚滴定法 1原理 還原型抗壞血酸可以還原染料2，6-二氯靛酚。該染料在酸性溶液中呈粉紅色(在中性或堿性溶液中呈藍(lán)色)，被還原后顏色消失。 還原型抗壞血酸還原染料后，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒有雜質(zhì)干擾時(shí)，一定量的樣品提取液還原標(biāo)準(zhǔn)染料液的量，與樣品中抗壞血酸含量成正比。 2、試劑 1%草酸溶液：稱取10g草酸，加水至1000mL； 2%草酸溶液：稱20g草酸，加水至1000mL； 維生素C標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱20mgVC溶于1%草酸中，并稀釋至10

15、0mL，吸5mL于50mL容量瓶中，加入1%草酸至刻度，此溶液每毫升含有； 0.02% 2，6-二氯靛酚溶液：稱取2，6-二氯靛酚50mg，溶于200mL含有52mg碳酸氫鈉的熱水中，冷卻后，稀釋至250mL，過濾于棕色瓶中，貯存于冰箱內(nèi)，應(yīng)用過程中每星期標(biāo)定一次。標(biāo)定一吸標(biāo)液（VC）5mL于三角瓶加6%KI溶液0.5mL加1%淀粉3滴用0.001N KIO3標(biāo)液滴定到淡蘭色。計(jì)算： 抗壞血酸濃度（mg/mL）=（）/V2V1 - 滴定時(shí)消耗0.001N KIO3標(biāo)液的體積（mL）V2 - 維生素C重量（g）0.088 -1mL 0.001N KIO3標(biāo)液維生素C的量（mg/mL）標(biāo)定二吸5m

16、L已知濃度VC標(biāo)液 加5mL1%草酸 用染料2，6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉紅色，15秒不褪色為終點(diǎn)計(jì)算：每毫升2，6-二氯靛酚相當(dāng)于維生素C的毫克數(shù)等于滴定度（T）T= （C V1）/V2C - 維生素C的濃度（mg/mL）V1 -維生素C的體積（mL）V2 -消耗2，6-二氯靛酚的體積（mL）樣品測定提取：稱樣50g加2%草酸100mL入搗碎機(jī)中處理過濾顏色若深可加白陶土滴定：吸5mL樣液于三角瓶用染料滴定至粉紅色15秒內(nèi)不褪色計(jì)算： VC（mg/100g）=（V T）/ W 100 V -消耗染料體積（mL）T -1mL染料所能氧化維生素C的毫克數(shù)W- 滴定時(shí)所有濾液中含有樣品的克數(shù)4、注

17、意事項(xiàng) 所有試劑的配制最好都用重蒸餾水； 滴定時(shí)，可同時(shí)吸二個(gè)樣品。一個(gè)滴定，另一個(gè)作為觀察顏色變化的參考； 樣品進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后，應(yīng)浸泡在已知量的2%草酸液中，以防氧化，損失維生素C； 貯存過久的罐頭食品，可能含有大量的亞鐵離子（Fe2+），要用8%的醋酸代替2%草酸。這時(shí)如用草酸，亞鐵離子可以還原2，6-二氯靛酚，使測定數(shù)字增高，使用醋酸可以避免這種情況的發(fā)生； 整個(gè)操作過程中要迅速，避免還原型抗壞血酸被氧化； 在處理各種樣品時(shí)，如遇有泡沫產(chǎn)生，可加入數(shù)滴辛醇消除； 測定樣液時(shí)，需做空白對照，樣液滴定體積扣除空白體積。(二)2，4二硝基苯肼比色法GB/T 5009.862003 蔬菜、水果及其

18、制品中總抗壞血酸含量測定方法第二法 可測總抗壞血酸，總抗壞血酸包括還原型、脫氫型和二酮古樂糖酸型。此法是將樣品的還原型抗壞血酸氧化為脫氫型抗壞血酸，然后與2，4-二硝基苯肼作用，生成紅色的脎。脎的量與總抗壞血酸含量成正比，將紅色脎溶于硫酸后進(jìn)行比色，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中總VC。（三）碘量法當(dāng)用碘滴定維生素C時(shí)，所滴定的碘被維生素C還原為碘離子。隨著滴定過程中維生素C全被氧化，所滴入的碘將以碘分子形式出現(xiàn)。碘分子可以使含指示劑（淀粉）的溶液產(chǎn)生藍(lán)色，即為滴定終點(diǎn)。(1) 樣品處理 水果（獼猴桃）稱量135g去皮加入一倍體積2草酸勻漿1min 紗布過濾 濾液定容至270mL（2）滴定 a 標(biāo)準(zhǔn)維生

19、素C溶液（5mg/mL）的測定 取2mLVc溶液于錐形瓶中加入1mL淀粉液 用碘液滴定至藍(lán)色出現(xiàn)（30秒中內(nèi)不褪色）記下碘液體積V標(biāo)準(zhǔn)。 b 樣品維生素C的測定 取上述獼猴桃液10mL于錐形瓶中加入1mL淀粉液用碘液滴定至藍(lán)色出現(xiàn)（30秒內(nèi)不褪色）記下碘液體積V樣品。(3)計(jì)算 10mg/V標(biāo)準(zhǔn)=M樣品（mg）/V樣品 根據(jù)獼猴桃重量及濾液體積計(jì)算每100g獼猴桃中的Vc含量。一、維生素Bl的測定 維生素Bl又名硫胺素、抗神經(jīng)炎素，通常以游離態(tài)，或以焦磷酸酯形式存在于自然界。在酵母、米糠、麥胚、花生、黃豆以及綠色蔬菜和牛乳、蛋黃中含量較為豐富。 分析方法：GB/T 5009.842003中唯一

20、的方法是熒光計(jì)法 此法檢出限 原理 硫胺素在堿性鐵氰化鉀溶液中被氧化成硫色素（噻嘧色素），在紫外線下，硫色素發(fā)出熒光。在給定的條件下，以及沒有其他物質(zhì)干擾時(shí)，此熒光強(qiáng)度與硫色素量成正比，即與溶液中硫胺素量成正比。從而測定其含量。分析步驟 制樣水解凈化氧化 干燥 測定結(jié)果計(jì)算 提取1）精確稱取一定量試樣520g（硫胺素含量約為1030ug）,置于100mL三角瓶中，加入50或鹽酸使其溶解，瓶口加蓋小燒杯后放入高壓鍋中加熱水解10.3 104Pa 30min,涼后取出。2）用2mol/L乙酸鈉調(diào)其pH值為（以0.04%溴甲酚綠為指示劑）提取3） 按每克試樣加入20mg淀粉酶的比例加入淀粉酶。于45

21、50溫箱過夜保溫（約16h）。4） 冷至室溫，定容至100mL，然后混勻過濾，即為提取液。凈化1）用少許脫脂棉鋪于層析柱的底部，加水將棉纖維中氣泡排出，再加約1g活性人造沸石使之達(dá)到交換柱的三分之一高度。保持層析柱中液面始終高于活性人造沸石。2）用移液管加入提取液2080mL（使通過 活性人造沸石的硫胺素總量約為25g） 3）加入約10 mL熱水沖洗交換柱，棄去洗液。如此 重復(fù)三次。4）加入25酸性氯化鉀（溫度為90左右）20mL，收集此液于25mL刻度試管內(nèi)，冷至室溫，用25酸性氯化鉀定容至25mL,即為試樣凈化液。5）將20mL硫胺素標(biāo)準(zhǔn)使用液加入交換柱以代替樣品提取液，即得到標(biāo)準(zhǔn)凈化液。

22、 氧化1) 將5mL試樣凈化液分別加入A、B兩個(gè)反應(yīng)瓶。2) 在避光暗環(huán)境中將3mL 15% 氫氧化鈉加入反應(yīng)瓶A，振搖約15s，然后加入10mL正丁醇；將3mL堿性鐵氰化鉀溶液加入反應(yīng)瓶B, 振搖約15s，然后加入10mL正丁醇；將A、B兩個(gè)反應(yīng)瓶同時(shí)用力振搖，準(zhǔn)確計(jì)時(shí)。3) 重復(fù)12，用標(biāo)準(zhǔn)凈化液代替試樣凈化液。4) 用黑布遮蓋A、B反應(yīng)瓶，靜置分層后下層堿性溶液，加入23g無水硫酸鈉使溶液脫水。 熒光強(qiáng)度的測定 1) 熒光測定條件： 激發(fā)波長 365nm；狹縫 5nm. 發(fā)射波長 435nm；狹縫 5nm. 2) 依次測定下列熒光強(qiáng)度： 試樣空白熒光強(qiáng)度（試樣反應(yīng)瓶A）； 標(biāo)準(zhǔn)空白熒光強(qiáng)

23、度（標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)瓶A）； 試樣熒光強(qiáng)度（試樣反應(yīng)瓶B）； 標(biāo)準(zhǔn)熒光強(qiáng)度（標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)瓶B）。二、維生素B 2的測定 維生素B2即核黃素，在食品中以游離形式或磷酸酯等結(jié)合形式存在。膳食中的主要來源是各種動(dòng)物性食品，其中以肝、腎、心、蛋、奶含量最多，其次是植物性食品的豆類和新鮮綠葉蔬菜。分析方法：GB/T 5009.852003中第一法為熒光法。 第二法為微生物法。原理 核黃素在440-500nm波長光照射下發(fā)生黃綠色熒光，在稀溶液中，熒光強(qiáng)度與核黃素濃度成正比。在波長525nm下測定其熒光強(qiáng)度。試液再加入低亞硫酸鈉(Na2S2O4),將核黃素還原成無熒光的物質(zhì)，然后再測定試液中殘余熒光雜質(zhì)的熒光強(qiáng)度，兩

24、者之差即為食品中核黃素所產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度。 操作步驟 樣品均制水解過濾定容氧化去雜質(zhì)凈化測定結(jié)果計(jì)算 樣品提取 水解: 稱取2-10g樣品（約含10-200ug核黃素）于100mL三角瓶中，加入鹽酸，攪拌直至顆粒分散均勻。用40mL瓷坩堝為蓋扣住瓶口, 置于高壓鍋內(nèi)高壓水解，4Pa(15lb/in2)30min。水解液冷卻后，滴加1mol/L氫氧化鈉，取少許水解液，用0.04%溴甲酚綠檢驗(yàn)呈草綠（pH為） 酶解: 含有淀粉的水解液：加入3ml 10%淀粉酶溶液,于37-40保溫16h。含高蛋白的水解液：加入3ml 10%木瓜蛋白酶溶液,于37-40保溫16h。過濾上述酶解液定容至100mL,用干

25、濾紙過濾。此提取液在4C冰箱中保存一周。 氧化去雜質(zhì) 視樣品中核黃素的含量取一定體積的樣品提取液及核黃素標(biāo)準(zhǔn)使用液（約含1-10ug核黃素）分別于20mL的帶刻度試管中，加水至15mL。各管加冰乙酸，混勻。加3%高錳酸鉀溶液5mL，混勻，放置2min，使氧化去雜質(zhì)。滴加3%雙氧水溶液數(shù)滴，直到高錳酸鉀顏色褪掉。劇烈震搖此管，使多余的氧氣逸出。 核黃素的吸附與洗脫 核黃素吸附柱： 硅鎂吸附劑約1g用濕法裝入柱，占柱長1/2-2/3（約5cm）為宜（吸附柱下端用一團(tuán)脫脂棉墊上），勿使柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡，調(diào)節(jié)流速為60滴/min。 過柱與洗脫：將全部氧化后的樣液及標(biāo)準(zhǔn)液通過吸附柱后，用約20mL的熱水洗去樣液中的雜質(zhì)，然后用洗脫液（丙酮：冰乙酸：水5：2：9）將樣品中核黃素洗脫并收集于一帶蓋10mL刻度試管