1、實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 MS培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制1. 了解植物外植體離體培養(yǎng)所需各種營養(yǎng)了解植物外植體離體培養(yǎng)所需各種營養(yǎng)成分及激素種類。成分及激素種類。2. 初步掌握培養(yǎng)基母液配制方法。初步掌握培養(yǎng)基母液配制方法。u 植物材料培養(yǎng)要獲得成功，并正常生長，植物材料培養(yǎng)要獲得成功，并正常生長，培養(yǎng)基的成分是一個(gè)決定性因素，不同植培養(yǎng)基的成分是一個(gè)決定性因素，不同植物要求不同的培養(yǎng)基。物要求不同的培養(yǎng)基。u大多數(shù)植物組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基由無機(jī)大多數(shù)植物組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基由無機(jī)營養(yǎng)物、碳源、維生素、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和營養(yǎng)物、碳源、維生素、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和有機(jī)附加物等五類物質(zhì)組成。有機(jī)附加物等五類物質(zhì)組成。u

2、在配制培養(yǎng)基之前，為了使用方便、簡化操作、在配制培養(yǎng)基之前，為了使用方便、簡化操作、用量準(zhǔn)確，減少每次配藥稱量各種化學(xué)成分所花用量準(zhǔn)確，減少每次配藥稱量各種化學(xué)成分所花費(fèi)的時(shí)間和誤差，常常將配制培養(yǎng)基所需無機(jī)大費(fèi)的時(shí)間和誤差，常常將配制培養(yǎng)基所需無機(jī)大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物、激素成分分量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物、激素成分分別配制成比需要量大若干倍的濃縮母液，置于冰別配制成比需要量大若干倍的濃縮母液，置于冰箱內(nèi)保存。箱內(nèi)保存。u當(dāng)配制培養(yǎng)基時(shí)，按預(yù)先計(jì)算好的量分別吸取各當(dāng)配制培養(yǎng)基時(shí)，按預(yù)先計(jì)算好的量分別吸取各種母液稀釋即可。種母液稀釋即可。1、用具器材、用具器材 滅菌鍋、普通及精密

3、天平、燒杯、醫(yī)用瓷缸、量滅菌鍋、普通及精密天平、燒杯、醫(yī)用瓷缸、量桶、移液管、試劑瓶、藥勺、玻璃棒、桶、移液管、試劑瓶、藥勺、玻璃棒、pH試紙。試紙。 2、藥品試劑、藥品試劑 蒸餾水、蒸餾水、1N HCl、1N NaOH、95%酒精、蔗糖、酒精、蔗糖、瓊脂、各種所需化學(xué)藥品（分析純）。瓊脂、各種所需化學(xué)藥品（分析純）。1、母液配制、母液配制（1）配制）配制10倍倍1 L MS大量元素母液大量元素母液NH4NO3 16.5 g KH2PO4 1.7 gKNO3 19 g CaCl22H2O 4.4 gMgSO47H2O 3.7 g配制成配制成200倍倍1 L母液，依次稱取母液，依次稱取:KI 0

4、.166 g Na2MoO42H2O 0.05 gH3BO3 1.24 g CuSO45H2O 0.005 gMnSO44H2O 4.46 g CoCl26H2O 0.005 gZnSO47H2O 1.72 g（2）配制）配制MS微量元素母液微量元素母液配制成配制成200倍倍l L鐵鹽母液，依次稱取鐵鹽母液，依次稱取:EDTAEDTA二鈉二鈉（Na2EDTA7H2O） 7.46 g FeSO47H2O 5.56 g（3）配制）配制MS鐵鹽母液鐵鹽母液 配制成配制成200倍倍1 L有機(jī)母液，依次稱取：有機(jī)母液，依次稱取：鹽酸硫胺素鹽酸硫胺素（VB1） 0.02 g煙酸煙酸 0.1 g 鹽酸吡哆醇

5、鹽酸吡哆醇（VB6） 0.1 g（4）配制）配制MS有機(jī)母液有機(jī)母液（5）配制）配制MS有機(jī)母液有機(jī)母液配制成配制成200倍倍1 L有機(jī)母液：有機(jī)母液：肌醇肌醇 20.0 g（6）配制）配制MS有機(jī)母液有機(jī)母液配制成配制成200倍倍1 L有機(jī)母液：有機(jī)母液：甘氨酸甘氨酸 0.4 g0.1mg/mL 的的6-BA溶液：取溶液：取25mg的的6-BA，用少，用少量量1N的鹽酸溶解，再加蒸餾水定容至的鹽酸溶解，再加蒸餾水定容至250mL。0.1mg/mL NAA：取：取25mg的的NAA可溶于熱水中可溶于熱水中或用少量或用少量95%乙醇或少量乙醇或少量1N的的NaOH溶解后，再溶解后，再加水定容至加

6、水定容至250mL。0.1mg/mL 2，4-D：取：取20mg的的2，4-D溶于少量溶于少量95%乙醇中，再加水定容至乙醇中，再加水定容至200mL。（7）植物激素的配制）植物激素的配制 2、培養(yǎng)基的配制、培養(yǎng)基的配制（以（以1L培養(yǎng)基為例）培養(yǎng)基為例）1、計(jì)量、計(jì)量 根據(jù)配制培養(yǎng)基的量根據(jù)配制培養(yǎng)基的量（1L）和母液的濃度計(jì)算需和母液的濃度計(jì)算需要吸取母液的量，計(jì)算公式：吸取量要吸取母液的量，計(jì)算公式：吸取量 mL=培養(yǎng)基培養(yǎng)基中物質(zhì)濃度（中物質(zhì)濃度（mg/L）1000mL/母液濃度母液濃度（mg/L）。）。 母液濃度母液濃度/培養(yǎng)基中物質(zhì)濃度培養(yǎng)基中物質(zhì)濃度=稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)2、移液、移

7、液 取大燒杯（取大燒杯（1L）一只，按照計(jì)算吸取母液的量）一只，按照計(jì)算吸取母液的量依依次吸取次吸取各母液置于燒杯中備用。各母液置于燒杯中備用。3、稱取、稱取 稱取稱取10g瓊脂，瓊脂，30g蔗糖備用。蔗糖備用。4、融化、融化 用搪瓷量杯量取用搪瓷量杯量取600700mL 的蒸餾水放在電爐上，的蒸餾水放在電爐上，加入瓊脂，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半加入瓊脂，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀將其取下，加入蔗糖，攪拌使之溶解。透明狀將其取下，加入蔗糖，攪拌使之溶解。5、混合、混合 將融化的瓊脂和蔗糖倒入裝有母液的大燒杯中，充將融化的瓊脂和蔗糖倒入裝有母液的大燒杯中，充分混合，用蒸餾

8、水定容到分混合，用蒸餾水定容到1000mL。6、調(diào)、調(diào)pH 用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1 mol/L的的NaOH 或或HCl溶液調(diào)溶液調(diào)pH 為為6.0。編號(hào)編號(hào)6-BA（mg/l） NAA（mg/l） 2,4-D（mg/l）第一組第一組0.50.11.0第二組第二組0.50.52.0第三組第三組0.50.050第四組第四組1.00.10共分共分4組，每組配組，每組配750mL培養(yǎng)基，每瓶倒培養(yǎng)基，每瓶倒25-30mL，共接種，共接種28瓶左右瓶左右每瓶編號(hào)每瓶編號(hào)1（1/2/3/4）n號(hào)號(hào)分組情況分組情況3、培養(yǎng)基的分裝和滅菌、培養(yǎng)基的分裝和滅菌l溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝。溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝。l分裝時(shí)，將燒杯