1、實驗室檢測常用方法及特點實驗室檢測常用方法及特點一、稱量法一、稱量法二、色譜法二、色譜法三、光譜法三、光譜法四、樣品預處理四、樣品預處理五、校準曲線的要求五、校準曲線的要求稱量法實驗室一般的分析稱量方法有以下幾種：實驗室一般的分析稱量方法有以下幾種：1、直接稱量法、直接稱量法2、增量法、增量法3、減量法、減量法4、指定法、指定法1、直接稱量法稱量稱量物體，如燒杯、表面皿、坩堝等，物體，如燒杯、表面皿、坩堝等，一般采用直接稱量法。即用砝碼直接與被一般采用直接稱量法。即用砝碼直接與被稱物平衡，此時砝碼的重量就是被稱物的稱物平衡，此時砝碼的重量就是被稱物的重量。所稱固體試樣如果沒有吸濕性并在重量。所

2、稱固體試樣如果沒有吸濕性并在空氣中是穩定的，可用直接稱量法。空氣中是穩定的，可用直接稱量法。方法如下：用一條干凈的紙條拿取被方法如下：用一條干凈的紙條拿取被稱物放入天平的稱量盤，然后去掉紙條，稱物放入天平的稱量盤，然后去掉紙條，在砝碼盤上加砝碼。此時，砝碼所標示的在砝碼盤上加砝碼。此時，砝碼所標示的重量就等于被稱物的重量。重量就等于被稱物的重量。2、增量法此法一般用來稱量規定重量的試樣。方法此法一般用來稱量規定重量的試樣。方法如下：如下：將盛物容器放于天平的稱量盤，在砝將盛物容器放于天平的稱量盤，在砝碼盤上加適當的砝碼使之平衡，得到盛物碼盤上加適當的砝碼使之平衡，得到盛物容器重容器重0，然后在

3、砝碼盤上添加與所稱試，然后在砝碼盤上添加與所稱試樣同重的砝碼，用牛角勺取試樣加于盛物樣同重的砝碼，用牛角勺取試樣加于盛物容器中，直至達到平衡。此時，砝碼總重容器中，直至達到平衡。此時，砝碼總重，則稱取的樣品重為，則稱取的樣品重為 。3、減量法此此法一般用來連續稱取幾個試樣，其量允許在一定范法一般用來連續稱取幾個試樣，其量允許在一定范圍內波動，也用于稱取易吸濕、易氧化或易與二氧化碳反圍內波動，也用于稱取易吸濕、易氧化或易與二氧化碳反應的試樣。此法稱取固體試樣的方法為：應的試樣。此法稱取固體試樣的方法為： 將適量試樣裝將適量試樣裝入稱量瓶中，稱得稱量瓶及試樣重量為入稱量瓶中，稱得稱量瓶及試樣重量為

4、1，然后將稱量，然后將稱量瓶，從天平盤上取出，舉放于容器上方，瓶口向下稍傾，瓶，從天平盤上取出，舉放于容器上方，瓶口向下稍傾，捏住稱量瓶蓋，輕敲瓶口上部，使試樣慢慢落入容器中，捏住稱量瓶蓋，輕敲瓶口上部，使試樣慢慢落入容器中，當傾出的試樣已接近所需要的重量時，慢慢地將稱量瓶豎當傾出的試樣已接近所需要的重量時，慢慢地將稱量瓶豎起，再用稱量瓶蓋輕敲瓶口下部，使瓶口的試樣集中到一起，再用稱量瓶蓋輕敲瓶口下部，使瓶口的試樣集中到一起，蓋好瓶蓋，放回到天平盤上稱量，得起，蓋好瓶蓋，放回到天平盤上稱量，得2，兩次稱，兩次稱量之差就是試樣的重量。如此繼續進行，可稱取多份試樣。量之差就是試樣的重量。如此繼續進

5、行，可稱取多份試樣。如果一次倒入容器的藥品太多，必須棄去重稱，切勿放回如果一次倒入容器的藥品太多，必須棄去重稱，切勿放回稱量瓶。如果倒入的試樣不夠可再加一次，但次數宜少。稱量瓶。如果倒入的試樣不夠可再加一次，但次數宜少。第一份：第一份： 試樣重試樣重12（）（） 第二份：第二份： 試樣重試樣重23（）（）4、指定法對于性質比較穩定的試樣，有時為了便于計對于性質比較穩定的試樣，有時為了便于計算，則可稱取指定質量的樣品。用指定法稱算，則可稱取指定質量的樣品。用指定法稱量時，在天平盤的兩邊各放一塊表面皿量時，在天平盤的兩邊各放一塊表面皿(它們它們的質量盡量接近的質量盡量接近)，調節天平的平衡點在中間

6、，調節天平的平衡點在中間刻度左右，然后在左邊天平盤內加上固定質刻度左右，然后在左邊天平盤內加上固定質量的砝碼，在右邊天平盤內加上試樣量的砝碼，在右邊天平盤內加上試樣(這樣取這樣取放試樣比較方便放試樣比較方便)，直至天平的平衡點達到原，直至天平的平衡點達到原來的數值，這時，試樣的質量即為指定的質來的數值，這時，試樣的質量即為指定的質量。量。電子天平使用電子天平使用方法方法1檢查并調整天平至水平位置。檢查并調整天平至水平位置。2事先檢查電源電壓是否匹配事先檢查電源電壓是否匹配(必要時配置穩壓器必要時配置穩壓器)，按，按儀器要求通電預熱至所需時間。儀器要求通電預熱至所需時間。3預熱足夠時間后打開天平

7、開關，天平則自動進行靈敏預熱足夠時間后打開天平開關，天平則自動進行靈敏度及零點調節。待穩定標志顯示后，可進行正式稱量。度及零點調節。待穩定標志顯示后，可進行正式稱量。4稱量時將潔凈稱量瓶或稱量紙置于稱盤上，關上側門，稱量時將潔凈稱量瓶或稱量紙置于稱盤上，關上側門，輕按一下去皮鍵，天平將自動校對零點，然后逐漸加入待輕按一下去皮鍵，天平將自動校對零點，然后逐漸加入待稱物質，直到所需重量為止。稱物質，直到所需重量為止。5被稱物質的重量是顯示屏左下角出現被稱物質的重量是顯示屏左下角出現“”標志時，標志時，顯示屏所顯示的實際數值。顯示屏所顯示的實際數值。6稱量結束應及時除去稱量瓶稱量結束應及時除去稱量瓶

8、(紙紙)，關上側門，切斷電，關上側門，切斷電源，并做好使用情況登記。源，并做好使用情況登記。色譜法（色譜法（GC1690氣相色譜儀）氣相色譜儀）一、氣相色譜法的特點一、氣相色譜法的特點二、二、氣相色譜法的氣相色譜法的原理原理三、相關操作的注意事項三、相關操作的注意事項一、氣相色譜法的特點氣相氣相色譜屬于吸附色譜，它是利用吸附劑表色譜屬于吸附色譜，它是利用吸附劑表面對不同組分吸附性能差異進行分離。面對不同組分吸附性能差異進行分離。氣相色譜具有如下特點氣相色譜具有如下特點：分離效能高、選擇性高、：分離效能高、選擇性高、樣品用量小、靈敏度高、應用范圍廣、分析操作樣品用量小、靈敏度高、應用范圍廣、分析

9、操作簡便快速。簡便快速。不足之處：沒有待測物的純品或相應的色譜定性不足之處：沒有待測物的純品或相應的色譜定性數據作對照時，不能從分離峰給出定性結果，需數據作對照時，不能從分離峰給出定性結果，需要與質譜連用才能達到定性目的。此外，不適用要與質譜連用才能達到定性目的。此外，不適用于沸點高于于沸點高于450的難揮發物質和熱穩定性差的的難揮發物質和熱穩定性差的物質分析。物質分析。二、氣相色譜法的原理色色譜定量分析的依據是被測物的量與它在色譜定量分析的依據是被測物的量與它在色譜圖上的峰面積（或峰高）成正比。譜圖上的峰面積（或峰高）成正比。職業病危害因素檢測檢驗定量分析一般采用標準職業病危害因素檢測檢驗定

10、量分析一般采用標準曲線法。標準曲線法，亦稱外標法。首先用純物曲線法。標準曲線法，亦稱外標法。首先用純物質配置一系列不同濃度的標準試樣，在一定的色質配置一系列不同濃度的標準試樣，在一定的色譜條件下準確定量進樣，測量峰面積（或峰高），譜條件下準確定量進樣，測量峰面積（或峰高），繪制標準曲線。外標法不使用校正因子，準確性繪制標準曲線。外標法不使用校正因子，準確性較高，操作條件變化對結果準確性影響較大，對較高，操作條件變化對結果準確性影響較大，對進樣量的準確性控制要求較高，適用于大批量試進樣量的準確性控制要求較高，適用于大批量試樣的快速分析。樣的快速分析。三、相關操作的注意事項、開機到檢測（約、開機到

11、檢測（約45分鐘）分鐘）先打氮氫空一體機發生器電源，大約先打氮氫空一體機發生器電源，大約15分分鐘后，待各壓力表壓力穩定在鐘后，待各壓力表壓力穩定在0.4MP左右，左右，同時查看毛細氣路控制器同時查看毛細氣路控制器“柱前壓柱前壓”，如，如果壓力表有果壓力表有0.1MP壓力，可打開儀器開關電壓力，可打開儀器開關電源。并且按源。并且按“起始起始” 鍵。鍵。、設置溫度、設置溫度柱柱箱箱溫度溫度COL：按柱箱鍵：按柱箱鍵+初溫鍵初溫鍵+數字數字（50）+置入鍵；置入鍵；進樣器進樣器INJ：按進樣鍵：按進樣鍵+數字（數字（250）+置入鍵；置入鍵；氫火焰檢測器氫火焰檢測器DET：按換擋鍵：按換擋鍵+熱導

12、鍵熱導鍵+數字數字(250)+置入鍵置入鍵 熱解吸儀溫度熱解吸儀溫度AOLII：按換擋鍵：按換擋鍵+進樣鍵進樣鍵+數字數字(300)+置入鍵置入鍵 初溫初溫50度度-初時間初時間5分鐘分鐘-升速升速5度度/分鐘分鐘終溫終溫250度度終時終時15分鐘分鐘、查看設置溫度、查看設置溫度柱柱箱溫度；按柱溫鍵箱溫度；按柱溫鍵+初溫鍵初溫鍵+置入鍵置入鍵進樣器溫度：按進樣鍵進樣器溫度：按進樣鍵+置入鍵置入鍵FID檢測器溫度；按換擋鍵檢測器溫度；按換擋鍵+熱導鍵熱導鍵+置入鍵置入鍵 熱解吸儀溫度熱解吸儀溫度AOLII：按換擋鍵：按換擋鍵+進樣鍵進樣鍵+置入置入鍵鍵。、查查看實際看實際溫度溫度柱箱溫度柱箱溫度

13、：按顯示鍵和柱箱鍵；按顯示鍵和柱箱鍵；進樣器進樣器溫度：按顯示鍵溫度：按顯示鍵+進樣鍵；進樣鍵；FID（氫火焰檢測器）溫度：按顯示鍵（氫火焰檢測器）溫度：按顯示鍵+換換擋鍵擋鍵+熱導鍵（檢測熱導鍵（檢測DET）熱熱解吸儀溫度解吸儀溫度AOLII：按顯示鍵：按顯示鍵+按換擋鍵按換擋鍵+進樣進樣鍵鍵。、點火點火當氫火焰檢測器（當氫火焰檢測器（DET）溫度達到）溫度達到150度度以上時點火。以上時點火。點火點火：把空氣壓力從：把空氣壓力從0.1MP調到調到0.04MP，用火槍點火，如點著火后（看是否有水蒸汽用火槍點火，如點著火后（看是否有水蒸汽有的話說明點著了）再把空氣調到有的話說明點著了）再把空氣

14、調到0.1MP。、色譜數據工作站、色譜數據工作站打開電腦及數據工作站（在線工作站打開電腦及數據工作站（在線工作站, 通通道道1）。）。點擊點擊“查看基線查看基線”確保能順利采集基線并保確保能順利采集基線并保持平穩持平穩編輯實驗數據參數和實驗圖譜存放置等編輯實驗數據參數和實驗圖譜存放置等信息信息。、進樣、進樣待待基線走平穩后將基線走平穩后將HD-DHD-D熱解吸儀氣流控熱解吸儀氣流控制開關關閉，用微量注射器吸取樣品，進樣制開關關閉，用微量注射器吸取樣品，進樣。吸取樣品時應確保注射器內無多余的氣泡；吸取樣品時應確保注射器內無多余的氣泡；待樣品熱解吸待樣品熱解吸1060S1060S，將切換閥切換至，

15、將切換閥切換至“解解吸吸”處。按處。按GC-1690GC-1690主機主機“起始起始”按鈕。同時按鈕。同時按鍵盤按鍵盤“F5F5”或鼠標點擊或鼠標點擊“采集數據采集數據”。觀。觀察察GC-1690GC-1690主機顯示屏上的信息，待解吸完畢主機顯示屏上的信息，待解吸完畢后將切換閥切換至后將切換閥切換至“反吹反吹”狀態，并將熱解狀態，并將熱解吸儀氣流控制開關打開。進樣完畢，等待出吸儀氣流控制開關打開。進樣完畢，等待出峰。峰。、保存圖譜、保存圖譜保存保存圖譜：待所有峰都檢測出來后，按圖譜：待所有峰都檢測出來后，按GC-1690氣相色譜儀氣相色譜儀“停止停止”按鈕；按鈕；N2000工作站繼續采集數據

16、工作站繼續采集數據110min，在電腦上用，在電腦上用鼠標點擊鼠標點擊“停止采集停止采集”。實驗圖譜會自動保。實驗圖譜會自動保存于設定的文件夾內。到此，一個進樣實驗存于設定的文件夾內。到此，一個進樣實驗完成。完成。若再次進樣，若再次進樣，等待柱箱溫度下降至柱箱初溫等待柱箱溫度下降至柱箱初溫510min510min后，再次按后，再次按上述上述流程進樣。流程進樣。、關機、關機關機前先關閉關機前先關閉N2000N2000色譜數據工作站和電色譜數據工作站和電腦；將腦；將GC-1690GC-1690氣相色譜儀的柱箱、檢測器、氣相色譜儀的柱箱、檢測器、熱解吸儀、輔助熱解吸儀、輔助2 2的溫度參數設定為的溫

17、度參數設定為9999，等待溫度全部降低至等待溫度全部降低至9999以下。關閉燃氣控以下。關閉燃氣控制器的空氣流量，使氫氣火焰檢測器火焰熄制器的空氣流量，使氫氣火焰檢測器火焰熄滅，滅，火焰熄滅后講空氣流量調回正常，火焰熄滅后講空氣流量調回正常，最后最后關閉氣相色譜儀；關閉氣相色譜儀；繼續通氣繼續通氣1515分鐘，最后關閉氮氫空一體機分鐘，最后關閉氮氫空一體機。10、氣相色譜柱溫的氣相色譜柱溫的選擇選擇考慮考慮到每種固定液都有一定的溫度范圍。到每種固定液都有一定的溫度范圍。柱溫不能高于固定液的最高使用溫度，否則柱溫不能高于固定液的最高使用溫度，否則固定液因揮發而流失固定液因揮發而流失。應從。應從分

18、離的角度出發，分離的角度出發，權衡利弊，柱溫的選擇原則為：在對最難分權衡利弊，柱溫的選擇原則為：在對最難分離的物質對保持較好分離度的前提下，盡可離的物質對保持較好分離度的前提下，盡可能采用較高柱溫，但以保留時間適宜、峰形能采用較高柱溫，但以保留時間適宜、峰形不拖尾為度。不拖尾為度。11、維護保養維護保養第一次使用的氣相色譜柱需經過第一次使用的氣相色譜柱需經過“老化老化”方可投入樣品方可投入樣品檢測。檢測。“老化老化”參數按以下設置參數按以下設置( (柱箱初溫：柱箱初溫：5050；柱箱升速：；柱箱升速：0.50.5/min/min；柱箱終溫：；柱箱終溫：270270；保持時間：；保持時間：300

19、min300min。“老化老化”完后查看基線情況，基線走穩即可，基線若不穩，繼續完后查看基線情況，基線走穩即可，基線若不穩，繼續“老老化化”。氣相色譜柱使用一段時間會出現基線不穩情況，直接。氣相色譜柱使用一段時間會出現基線不穩情況，直接影響實驗準確度。此時只需重復影響實驗準確度。此時只需重復“老化老化”程序即可。程序即可。BRT-300GBRT-300G氮氫一體機使用一段時間后，需更換氫氧化鉀氮氫一體機使用一段時間后，需更換氫氧化鉀溶液。更換方法：稱取溶液。更換方法：稱取130g130g氫氧化鉀，溶于氫氧化鉀，溶于500mL500mL冷卻蒸餾水。冷卻蒸餾水。注入液罐并補充蒸餾水至液位刻度。注入

20、液罐并補充蒸餾水至液位刻度。定期檢查定期檢查BRT-300GBRT-300G氮氫一體機內部空氣過濾系統，檢查硅膠氮氫一體機內部空氣過濾系統，檢查硅膠狀況。若硅膠變色，則取出置于烘箱狀況。若硅膠變色，則取出置于烘箱120120恒溫干燥恒溫干燥3 3小時，小時，可重新使用。定期維護電腦硬盤數據，將實驗所得數據圖譜可重新使用。定期維護電腦硬盤數據，將實驗所得數據圖譜分類保存。長期保存。分類保存。長期保存。光譜法光譜法根據我們實驗室常用的光譜法有以下三種：根據我們實驗室常用的光譜法有以下三種：紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法原子熒光分光光度法原子熒光分光光度法

21、紫外紫外-可見可見分光光度法分光光度法一、基本原理一、基本原理二、分析條件的選擇二、分析條件的選擇三、分析方法及注意事項三、分析方法及注意事項一、一、基本原理基本原理紫紫外外-可見分光光度法可見分光光度法根據被測物質根據被測物質在紫外在紫外-可見光的特定波長處或一定波長范圍可見光的特定波長處或一定波長范圍內對光的吸收特性而對該物質進行定性、定量內對光的吸收特性而對該物質進行定性、定量分析的方法稱紫外分析的方法稱紫外-可見分光光度法。可見分光光度法。將不同波長的單色光依次通過一定濃度的同一將不同波長的單色光依次通過一定濃度的同一溶液，分別測定吸收度，然后以吸收度為縱坐溶液，分別測定吸收度，然后以

22、吸收度為縱坐標，波長為橫坐標畫圖可得到一條吸收曲線即標，波長為橫坐標畫圖可得到一條吸收曲線即吸收光譜。曲線顯示了物質對不同波長光的吸吸收光譜。曲線顯示了物質對不同波長光的吸收情況，曲線上吸收值最大處所對應的波長稱收情況，曲線上吸收值最大處所對應的波長稱最在吸收波長，用最在吸收波長，用表示，最大吸收波長在定表示，最大吸收波長在定量分析中常用來作測定波長。量分析中常用來作測定波長。紫紫外外-可見分光光度法是工作場所職業病化學危害因素檢可見分光光度法是工作場所職業病化學危害因素檢測中的常用方法。具有靈敏度高，測量精度好，操作簡便等優測中的常用方法。具有靈敏度高，測量精度好，操作簡便等優點。通常，待測

23、物質含量為點。通常，待測物質含量為1%0.00001%時，能夠用分光光時，能夠用分光光度法準確測定，所以它主要用于測定微量組分，幾乎所有的無度法準確測定，所以它主要用于測定微量組分，幾乎所有的無機離子和許多有機化合物均可以用分光光度法進行測定。若采機離子和許多有機化合物均可以用分光光度法進行測定。若采用靈敏度高、選擇性好的有機顯色劑，并加入適當掩蔽劑，一用靈敏度高、選擇性好的有機顯色劑，并加入適當掩蔽劑，一般不經過分離即可直接進行分光光度法測定，其方法的相對誤般不經過分離即可直接進行分光光度法測定，其方法的相對誤差為差為5%10%。紫外紫外-可見分光光度法的定量依據是朗伯可見分光光度法的定量依

24、據是朗伯-比爾定律，即在一定比爾定律，即在一定條件下溶液對單色吸收的強弱與吸光物質的濃度和厚度成正比條件下溶液對單色吸收的強弱與吸光物質的濃度和厚度成正比關系。其數學表達式為：關系。其數學表達式為：A=KCL式中式中 A溶液吸光度；溶液吸光度；K吸光常數（摩爾吸光常數），吸光常數（摩爾吸光常數），L/(molcm)；C溶液濃度，溶液濃度，mol/L；L液層厚度（比色皿厚度），液層厚度（比色皿厚度），cm。吸光系數吸光系數K在給定條件下（單色光波長、溶劑、溫度等）是物在給定條件下（單色光波長、溶劑、溫度等）是物質的特征常數，可作為定性依據。在吸收度與濃度之間的直線質的特征常數，可作為定性依據。在

25、吸收度與濃度之間的直線關系中，吸光系數關系中，吸光系數K是斜率，是定量的依據，其數值越大則測是斜率，是定量的依據，其數值越大則測定的靈敏度越高。定的靈敏度越高。二、分析條件的二、分析條件的選擇選擇我們我們實驗室的實驗室的722 S 可見分光光度計其可見分光光度計其工作波長范圍為工作波長范圍為3251020nm。該儀器的。該儀器的主要由光源、單色器、吸收池、檢測器和主要由光源、單色器、吸收池、檢測器和信號顯示系統五個部分構成。信號顯示系統五個部分構成。1、儀器測量條件的選擇、儀器測量條件的選擇適宜的吸光度范圍適宜的吸光度范圍入射入射光波長的選擇光波長的選擇狹縫狹縫寬度的選擇寬度的選擇2、顯色反應

26、條件的選擇、顯色反應條件的選擇對多種物質進行測定，常利用顯色反應將對多種物質進行測定，常利用顯色反應將被測組分轉變為在一定波長范圍有吸收的物質。被測組分轉變為在一定波長范圍有吸收的物質。常見的顯色反應有配位反應、氧化還原反應等。常見的顯色反應有配位反應、氧化還原反應等。顯色反應必須滿足的反應條件有：顯色反應必須滿足的反應條件有：(1)反應反應生成物須在紫外生成物須在紫外-可見光區有較強吸光可見光區有較強吸光能力，即摩爾吸光系數較大。能力，即摩爾吸光系數較大。(2)反應反應有較高的選擇性，即被測組分生成化有較高的選擇性，即被測組分生成化合特吸收曲線應與共存物質的吸收光譜有明顯合特吸收曲線應與共存

27、物質的吸收光譜有明顯的差別。的差別。(3)反應反應產物應足夠穩定，以保證測量過程中產物應足夠穩定，以保證測量過程中溶液的吸光度不變。溶液的吸光度不變。(4)反應反應產物組成產物組成恒定恒定。3、參比溶液的選擇、參比溶液的選擇測定測定樣品溶液的吸光度，需先用參比樣品溶液的吸光度，需先用參比溶液調節透光度（吸光度為溶液調節透光度（吸光度為0）為）為100%， 消除其他成分及吸光池和溶劑等對光的反消除其他成分及吸光池和溶劑等對光的反射和吸收帶來測定誤差。射和吸收帶來測定誤差。三、分析方法及注意事項三、分析方法及注意事項目視比色法目視比色法用眼睛觀察、比較溶液顏色深度以確定物用眼睛觀察、比較溶液顏色深

28、度以確定物質含量的方法稱為目視比色法。質含量的方法稱為目視比色法。標準曲線法標準曲線法根據朗伯根據朗伯-比爾定律，保持液層厚度，入射比爾定律，保持液層厚度，入射光波長和其他測量條件也不變，則在一定光波長和其他測量條件也不變，則在一定濃度范圍內，所測得吸光度與溶液中待測濃度范圍內，所測得吸光度與溶液中待測物質濃度成正比。物質濃度成正比。樣品檢測注意事項樣品檢測注意事項在在進行樣品檢測與分析過程中，不能不考慮試進行樣品檢測與分析過程中，不能不考慮試劑和顯色條件對檢測的影響，需要注意以下幾點：劑和顯色條件對檢測的影響，需要注意以下幾點：（1）顯色劑顯色劑質量，注意其使用期限、保存方式質量，注意其使用

29、期限、保存方式（低溫、避光、干燥）、顯色劑純度的區別和要求，（低溫、避光、干燥）、顯色劑純度的區別和要求，盡量使用有效期限和方法要求的試劑純度。盡量使用有效期限和方法要求的試劑純度。（2）遵照遵照實驗要求，注意反應溫度和時間等控制實驗要求，注意反應溫度和時間等控制條件。條件。（3）注意注意顯色的穩定時間，并在其穩定時間內進顯色的穩定時間，并在其穩定時間內進行檢測。行檢測。（4）使用使用試劑分級和質量，按檢測要求使用。試劑分級和質量，按檢測要求使用。（5）對對被檢樣品的干擾物質和干擾因素進行排除，被檢樣品的干擾物質和干擾因素進行排除，必要時進行復檢。必要時進行復檢。原子吸收分光光度法原子吸收分光

30、光度法一一、基本原理、基本原理二二、原子吸收光譜法的特點、原子吸收光譜法的特點三、儀器的組成三、儀器的組成四、儀器條件的選擇四、儀器條件的選擇一、一、基本原理基本原理1、原子吸收光譜法利用原子對、原子吸收光譜法利用原子對固有波長固有波長光的吸收進行光的吸收進行測定。（被測元素基態原子在測定。（被測元素基態原子在蒸氣狀態蒸氣狀態對其原子共振輻對其原子共振輻射的射的吸收吸收進行元素定量分析）進行元素定量分析）基態原子吸收其共振輻射，基態原子吸收其共振輻射，外層電子外層電子由基態躍遷至激發由基態躍遷至激發態而產生原子吸收光譜。態而產生原子吸收光譜。2、在實際工作中，對于原子吸收值的測量，是以一定、在

31、實際工作中，對于原子吸收值的測量，是以一定光強的單色光光強的單色光I0通過原子蒸氣，然后測出被吸收后的光通過原子蒸氣，然后測出被吸收后的光強強I，此一吸收過程符合朗伯，此一吸收過程符合朗伯-比耳定律，即比耳定律，即 I = I0e-K N L式中式中K為吸收系數，為吸收系數，N為自由原子總數（基態原子數），為自由原子總數（基態原子數），L為吸收層厚度。為吸收層厚度。 吸光度吸光度A可用下式表示可用下式表示 A = lgI0 / I = 2.303 K N L 在實際分析過程中，當實驗條件一定時，在實際分析過程中，當實驗條件一定時，N正比于待正比于待測元素的測元素的濃度濃度。二、原子吸收光譜法的

32、二、原子吸收光譜法的特點特點1、檢出限低，靈敏度高。、檢出限低，靈敏度高。2、分析精度好。、分析精度好。3、選擇性好。、選擇性好。4、應用范圍廣，可測定、應用范圍廣，可測定70多個元素。多個元素。5、分析速度快，操作方便。、分析速度快，操作方便。6、儀器比較簡單，一般實驗室可配備、儀器比較簡單，一般實驗室可配備。三、儀器的三、儀器的組成組成原子原子吸收光譜儀由光源、原子化器、分光器、吸收光譜儀由光源、原子化器、分光器、檢測系統等部分組成。而原子化器又細分為火焰原檢測系統等部分組成。而原子化器又細分為火焰原子化器與非火焰原子化器。子化器與非火焰原子化器。根據根據我們實驗室的我們實驗室的WFX-3

33、10原子吸收光譜儀其原子吸收光譜儀其采用原子化器是火焰原子化器，火焰原子化器由噴采用原子化器是火焰原子化器，火焰原子化器由噴霧器、霧化器和燃燒器三個部分組成。霧器、霧化器和燃燒器三個部分組成。1、噴霧器噴霧器，它的作用是將樣品溶液霧化，使之成，它的作用是將樣品溶液霧化，使之成為微米級的細霧。霧滴愈小生成的基太原子就愈多。為微米級的細霧。霧滴愈小生成的基太原子就愈多。2、霧化霧化室，它的作用是使燃氣、助燃氣與試液的室，它的作用是使燃氣、助燃氣與試液的細霧在霧化室內充分混合均勻，以保證得到穩定的細霧在霧化室內充分混合均勻，以保證得到穩定的火焰；同時也使未被細化的較大霧滴在霧化室內凝火焰；同時也使未

34、被細化的較大霧滴在霧化室內凝結為液珠，沿室壁流入泄漏管內排走。結為液珠，沿室壁流入泄漏管內排走。3、燃燒器，它的作用是形成火焰，使進入火焰的、燃燒器，它的作用是形成火焰，使進入火焰的待測元素的化合物經過干燥、熔化、蒸發、解離及待測元素的化合物經過干燥、熔化、蒸發、解離及原子化過程轉變成基態原子蒸氣，要求燃燒器的原原子化過程轉變成基態原子蒸氣，要求燃燒器的原子化程度高，火焰穩定，吸收光程長及噪聲子化程度高，火焰穩定，吸收光程長及噪聲小小。四、儀器條件的四、儀器條件的選擇選擇1、分析線、分析線2、空心陰極燈的工作電流、空心陰極燈的工作電流3、火焰類型和特性、火焰類型和特性4、燃燒器的高度選擇、燃燒

35、器的高度選擇5、程序升溫的條件選擇、程序升溫的條件選擇6、狹縫寬度選擇、狹縫寬度選擇7、進樣量的選擇、進樣量的選擇原子熒光原子熒光分光光度法分光光度法一、基本原理與特點一、基本原理與特點二、儀器的組成二、儀器的組成三、分析方法及干擾消除三、分析方法及干擾消除一、基本原理與一、基本原理與特點特點基本原理基本原理氣態氣態自由原子吸收光源的特征輻射后，自由原子吸收光源的特征輻射后，原子的外層電子躍遷到較高能級，然后又原子的外層電子躍遷到較高能級，然后又躍遷返回基態或較低能級，同時發射出與躍遷返回基態或較低能級，同時發射出與原激發輻射波長相同或不同的輻射即為原原激發輻射波長相同或不同的輻射即為原子熒光

36、。原子熒光屬光致發光，也是二次子熒光。原子熒光屬光致發光，也是二次發光。原子熒光光譜法是以原子在輻射能發光。原子熒光光譜法是以原子在輻射能激發下發射的熒光強度進行定量分析的發激發下發射的熒光強度進行定量分析的發射光譜分析射光譜分析法法。原子熒光光譜法的原子熒光光譜法的優點優點1、檢出限低，靈敏度高；、檢出限低，靈敏度高；2、干擾較少，譜線比較簡單；、干擾較少，譜線比較簡單；3、分析校準曲線線性范圍寬，可達、分析校準曲線線性范圍寬，可達35個個數量級；數量級；4、由于原子熒光是向空間各個方向發射的，、由于原子熒光是向空間各個方向發射的，較易制作多道儀器而實現多元素同時測定。較易制作多道儀器而實現

37、多元素同時測定。二、儀器的二、儀器的組成組成原子熒光原子熒光光譜儀與原子吸收分光光度光譜儀與原子吸收分光光度計的構造大致相同，其主要區別于原子吸計的構造大致相同，其主要區別于原子吸收分光光度計的銳線光源、原子化器、單收分光光度計的銳線光源、原子化器、單色器和檢測系統位于同一條直線上，而原色器和檢測系統位于同一條直線上，而原子熒光光譜儀的銳線光源、原子化器、單子熒光光譜儀的銳線光源、原子化器、單色器和檢測系統處于直角狀態。因為只有色器和檢測系統處于直角狀態。因為只有這樣，才能避免光源的輻射進入單色器和這樣，才能避免光源的輻射進入單色器和檢測系統，影響熒光信號的檢測。原子熒檢測系統，影響熒光信號的

38、檢測。原子熒光光譜儀分為色散型和非色散型兩類。光光譜儀分為色散型和非色散型兩類。光源光源透鏡透鏡原子化器原子化器單色器單色器檢測器檢測器三、分析方法及干擾三、分析方法及干擾消除消除定量分析方法為標準曲線定量分析方法為標準曲線法法原子熒光原子熒光光譜儀的主要干擾是猝滅效應。這種光譜儀的主要干擾是猝滅效應。這種干擾可采用減少溶液中其他干擾離子的濃度避免。干擾可采用減少溶液中其他干擾離子的濃度避免。其他干擾因素如光譜干擾、化學干擾、物理干擾等其他干擾因素如光譜干擾、化學干擾、物理干擾等與原子吸收光譜法相似。與原子吸收光譜法相似。在在原子熒光法中由于光源的強度比熒光強度高原子熒光法中由于光源的強度比熒

39、光強度高幾個數量級，因此散射光可產生較大的正干擾。減幾個數量級，因此散射光可產生較大的正干擾。減少散射干擾，主要是減少散射微粒，采用預混火焰、少散射干擾，主要是減少散射微粒，采用預混火焰、增高火焰觀測高度和火焰溫度，或使用高揮發性的增高火焰觀測高度和火焰溫度，或使用高揮發性的溶劑等，均可以減少散射微粒，也可采用扣除散射溶劑等，均可以減少散射微粒，也可采用扣除散射光背景的方法消除其光背景的方法消除其干擾干擾。樣品預處理方法一、概述：1、樣品處理的目的樣品處理的目的 色譜分析技術 氣相色譜 高效液相色譜 高效毛細管電泳 平面色譜 氣相色譜質譜 聯用技術 液相色譜質譜 液相色譜核磁 氣相色譜紅外 石

40、化過程分析石化過程分析 工業衛生調查和評價工業衛生調查和評價 藥物動力學和毒理學研究藥物動力學和毒理學研究 食品分析食品分析 職業病危害因素分析職業病危害因素分析色譜法應用色譜法應用 醫療診斷醫療診斷 核能和燃料分析核能和燃料分析 制藥過程監測制藥過程監測 化妝品和香料組成分析化妝品和香料組成分析 商品質量檢驗商品質量檢驗樣品預處理的目的除去微粒除去微粒減少干擾雜質減少干擾雜質濃縮微量的組份濃縮微量的組份提高檢測的靈敏度及選擇性提高檢測的靈敏度及選擇性改善分離的效果改善分離的效果有利于色譜柱及儀器的保護有利于色譜柱及儀器的保護2、樣品處理的必要性和重要性、樣品處理的必要性和重要性色譜分析的全過

41、程包括：色譜分析的全過程包括：樣品采集樣品采集、樣品制備樣品制備、色譜分析、數據處理與結色譜分析、數據處理與結果表述果表述 樣品種類繁多，其組成、濃度、物理樣品種類繁多，其組成、濃度、物理形態等均是色譜分析測定的影響因素。形態等均是色譜分析測定的影響因素。樣品處理技術就成為提高分析測定效樣品處理技術就成為提高分析測定效率、改善和優化色譜分析的重要環節。率、改善和優化色譜分析的重要環節。占樣品分析時間的比例（占樣品分析時間的比例（ 60%）樣品預處理所用時間遠大于色譜分離的時間樣品預處理所用時間遠大于色譜分離的時間占分析的消耗總成本最大占分析的消耗總成本最大消耗大量的溶劑及其他化學品消耗大量的溶

42、劑及其他化學品實驗的重復性及準確性最差的環節實驗的重復性及準確性最差的環節影響實驗結果好壞的最重要因素影響實驗結果好壞的最重要因素 是決定性的步驟是決定性的步驟 3、樣品處理的原則（1 1）樣品中可能存在的物質組成？濃度水平？）樣品中可能存在的物質組成？濃度水平？（2 2）樣品中的主要組分？）樣品中的主要組分？（3 3）采樣方法是非破壞性的還是破壞性的？）采樣方法是非破壞性的還是破壞性的？（4 4）收集的樣品必須有代表性。）收集的樣品必須有代表性。（5 5）采用方法必須和分析目的保持一致。）采用方法必須和分析目的保持一致。（6 6）樣品制備過程中盡可能防止和避免待測定）樣品制備過程中盡可能防止

43、和避免待測定組分發生化學變化或丟失組分發生化學變化或丟失3、樣品處理的原則（續）（7 7）樣品處理中，若進行待測定組分的化學反）樣品處理中，若進行待測定組分的化學反應，則反應應是已知的和定量完成的。應，則反應應是已知的和定量完成的。（8 8）樣品制備過程中，要防止和避免待測定組）樣品制備過程中，要防止和避免待測定組分受到污染，減少無關化合物引入制備過程。分受到污染，減少無關化合物引入制備過程。（9 9）處理過程應簡單易行，所用樣品處理裝置）處理過程應簡單易行，所用樣品處理裝置的尺寸應與處理樣品的量相適應。的尺寸應與處理樣品的量相適應。（1010）采用后應盡可能快的進行分析樣品的制備）采用后應盡

44、可能快的進行分析樣品的制備和分析，或使用適當的方法消除可能產生的干和分析，或使用適當的方法消除可能產生的干擾，做好樣品的保存。擾，做好樣品的保存。二、樣品的采集 氣體（包括蒸汽）氣體（包括蒸汽）涉及的樣品形式涉及的樣品形式 氣溶膠（霧、煙、粉塵）氣溶膠（霧、煙、粉塵） 直接采樣法直接采樣法主要采集方法主要采集方法 有泵型采樣法有泵型采樣法 無泵型采樣法無泵型采樣法 直接采樣法：只需將樣品直接引進容器中，只需將樣品直接引進容器中，所用容器最好是新的或洗凈后干燥的，以所用容器最好是新的或洗凈后干燥的，以防止其他樣品的殘留影響。防止其他樣品的殘留影響。有泵型采樣法：又稱動力采樣法，是用空又稱動力采樣

45、法，是用空氣采樣器（有電動抽氣泵和流量計組成）氣采樣器（有電動抽氣泵和流量計組成）作為抽氣動力，將樣品空氣抽過樣品收集作為抽氣動力，將樣品空氣抽過樣品收集器，空氣中的待測物被樣品收集器采集下器，空氣中的待測物被樣品收集器采集下來，供測定用。來，供測定用。無泵型采樣法：無泵型采樣法也叫擴散采無泵型采樣法也叫擴散采樣法，采集空氣中化學物質時，不需要抽樣法，采集空氣中化學物質時，不需要抽氣動力和流量裝置，而是根據費克氣動力和流量裝置，而是根據費克(Fick)(Fick)擴擴散定律，利用化學物質分子在空氣中的擴散定律，利用化學物質分子在空氣中的擴散作用完成采樣的。散作用完成采樣的。使用采集方法的注意事

46、項（1 1）采集的樣品應具有代表性，要注意采）采集的樣品應具有代表性，要注意采樣的時間、地點及采樣位置的選擇。樣的時間、地點及采樣位置的選擇。（2 2）所有樣品都要采集雙份，一份分析樣）所有樣品都要采集雙份，一份分析樣品，一份保存樣品，備復查時使用。品，一份保存樣品，備復查時使用。（3 3）樣品的采集和儲存過程要作記錄，詳）樣品的采集和儲存過程要作記錄，詳列采樣時間、地點、準確位置等。列采樣時間、地點、準確位置等。（4 4）采集儲存中待測組分不應有）采集儲存中待測組分不應有損失損失或發生或發生化學變化學變化化。 損失損失包括揮發、在儲存容器上的吸附等物理原包括揮發、在儲存容器上的吸附等物理原因

47、因 化學變化化學變化包括被氧化、微生物引起的分解、包括被氧化、微生物引起的分解、各組分間的化學反應等各組分間的化學反應等（5 5）避免樣品受到外界污染。）避免樣品受到外界污染。（6 6）采集后要盡快進行分析樣品的制備和分析。）采集后要盡快進行分析樣品的制備和分析。三、樣品預處理常用的方法高速離心高速離心過濾、超濾過濾、超濾選擇性沉淀選擇性沉淀萃取萃取索氏抽提索氏抽提衍生反應衍生反應新樣品處理技術新樣品處理技術加速溶劑萃取（加速溶劑萃取（ASEASE）濃縮樣品濃縮樣品 液液- -固萃取固萃取 / / 液液- -液萃取液萃取固相萃取樣品小柱固相萃取樣品小柱樣品預處理的過程去除微粒過濾過濾過濾膜過濾

48、膜/過濾裝置過濾裝置有機有機(0.5m)/無機無機(0.45m)膜片可更換膜片可更換一次性使用的膜一次性使用的膜使用方便簡單，交叉污染小使用方便簡單，交叉污染小有更小內徑，可用于微量樣品的處理有更小內徑，可用于微量樣品的處理高速離心高速離心大于：大于：10,000g超超 濾濾機理機理超濾是一種基于分子量分離的技術超濾是一種基于分子量分離的技術目的目的根據分子量的不同把分子、細胞及病毒等分為根據分子量的不同把分子、細胞及病毒等分為不同的餾份不同的餾份除去小分子樣品中的大分子蛋白除去小分子樣品中的大分子蛋白脫鹽脫鹽選擇性沉淀選擇性沉淀常用于生化樣品中除蛋白常用于生化樣品中除蛋白有機溶劑有機溶劑乙腈

49、，甲醇乙腈，甲醇強酸強酸三氯乙酸，過氯酸三氯乙酸，過氯酸鹽鹽50% 硫酸銨硫酸銨10% TCA樣品衍生樣品衍生提高檢測的靈敏度提高檢測的靈敏度增加紫外基團以增強紫外檢測的靈敏度增加紫外基團以增強紫外檢測的靈敏度增加熒光基團使樣品用高靈敏度熒光檢測器增加熒光基團使樣品用高靈敏度熒光檢測器改變分離的選擇性改變分離的選擇性改變組份的基團，如：改變組份的基團，如：變離子型化合物為非離子型，用反相方法分變離子型化合物為非離子型，用反相方法分離離典型的例子典型的例子氨基酸分析氨基酸分析加速溶劑萃取（加速溶劑萃取（ASE）tASE ASE 是用溶劑對固體、半固體的樣品進行萃取的是用溶劑對固體、半固體的樣品進

50、行萃取的技術技術. .tASE ASE 的的原理原理是選擇合適的溶劑、通過增加溫度和是選擇合適的溶劑、通過增加溫度和壓力來提高萃取過程的效率壓力來提高萃取過程的效率. .tASE ASE 可用來替代索氏提取、超聲萃取、手工振搖、可用來替代索氏提取、超聲萃取、手工振搖、煮沸法和其他萃取方法煮沸法和其他萃取方法三種不同型號的三種不同型號的ASEASE100ASE200 ASE300 ASE的突出優點的突出優點快速，快速，1515分鐘分鐘溶劑用量少溶劑用量少萃取效率高萃取效率高樣品基體影響小樣品基體影響小可同時選用四種溶劑萃取可同時選用四種溶劑萃取安全，全自動安全，全自動ASEASE建立了環境建立了

51、環境, , 藥物藥物, , 聚合物聚合物, , 食品食品, , 和化妝品和化妝品工業的大量應用工業的大量應用ASE工作流程工作流程加溶劑加溶劑 時間時間 (min) 0.51加樣品加樣品靜態萃取靜態萃取 5氮氣吹掃氮氣吹掃12溶劑溶劑泵泵吹掃閥吹掃閥爐體爐體氮氣瓶氮氣瓶靜態閥靜態閥收集瓶收集瓶萃取池萃取池循環循環加熱加熱 5加壓加壓萃取結束萃取結束 Total (min)準備分析準備分析1218新溶劑沖洗新溶劑沖洗0.5ASE 的應用領域的應用領域環環 境境農業、食品農業、食品聚合物聚合物制制 藥藥濃縮樣品濃縮樣品的方法濃縮樣品的方法 萃取萃取/吹干吹干 沉淀沉淀/再溶解再溶解 色譜法色譜法

52、液固抽提液固抽提/固相萃取小柱固相萃取小柱四、導致待測物損失的因素導致待測物損失的因素 吸附：吸附： 原因：原因：玻璃表面或橡膠塞會吸附待測物，特別玻璃表面或橡膠塞會吸附待測物，特別是脂肪胺類及含硫化合物。是脂肪胺類及含硫化合物。 解決方法：解決方法： 可采用硅烷化減少玻璃表面的吸附性可采用硅烷化減少玻璃表面的吸附性 非極性提取溶劑中加入少量極性溶劑可減少非極性提取溶劑中加入少量極性溶劑可減少器皿對藥物的吸附。器皿對藥物的吸附。 化學降解：化學降解：原因：原因： 樣品的化學和生物學不穩定性常引起化學分解樣品的化學和生物學不穩定性常引起化學分解 光化學及熱穩定性（尤其在凈化步驟中強酸、強光化學及

53、熱穩定性（尤其在凈化步驟中強酸、強堿的中和所產生的熱）引起的損失，也應加注意。堿的中和所產生的熱）引起的損失，也應加注意。解決方法：解決方法：盡量采用溫和條件制備樣品，經免引起盡量采用溫和條件制備樣品，經免引起待測物的部分分解、開環等情況發生，有的樣品尚待測物的部分分解、開環等情況發生，有的樣品尚需避光操作需避光操作 衍生化反應：衍生化反應：由于不完全反應，待測樣品僅部分轉化為所由于不完全反應，待測樣品僅部分轉化為所需的產物或形成副產物需的產物或形成副產物有時在蒸發除去過量衍生化試劑時，使得衍有時在蒸發除去過量衍生化試劑時，使得衍生物與溶劑形成共沸混合物而導致損失生物與溶劑形成共沸混合物而導致損失絡合：絡合： 某些樣品會與重金屬離子絡合，這種情某些樣品會與重金屬離子絡合，這種情況雖較少遇到，但往往是某些樣品制備中況雖較少遇到，但往往是某些樣品制備中損失的一個因素。損失的一個因素。蒸發：蒸發：有的是待測物本身的揮