1、淋病實驗室診斷主要內容淋球菌及致病性淋病實驗室診斷淋病實驗室診斷策略小結一、病原菌與致病性奈瑟氏淋球菌是淋病的病原菌，主要引起泌尿生殖系統化膿性炎癥。淋病的潛伏期平均3-53-5天, ,淋球菌主要侵犯上皮細胞, ,尤其是柱狀上皮細胞。男性：引起尿道炎，可合并前列腺炎、精囊炎、 附睪炎。女性：引起宮頸炎、尿道炎，可合并子宮內膜炎、輸卵管炎或輸卵管卵巢膿腫、盆腔炎、肝周炎、前庭大腺炎等。男女：都可引起淋菌性肛門直腸炎、淋菌性咽炎、淋菌性結膜炎，都可合并播散性淋球菌感染。有5%-20%的男性和60%的女性病人呈無癥狀經過。一. 病原菌（萘瑟氏淋球菌）1.形態 (1).形態呈腎形或蠶豆形，常成對排列，

2、鄰近面扁平或略凹陷。無芽孢、無鞭毛。 (2).大小為0.6-0.8m。 (3).革蘭氏染色陰性，呈粉紅色。美藍染色呈藍色。 急性炎癥期病人，細菌多在患者分泌物的白細胞胞漿中。慢性炎癥期病人，細菌多在白細胞外。2 2、生物學特性 (1).淋球菌適宜在潮濕、溫度為35-36、含5-7%二氧化碳的條件下生長。生長最適PH為7.2。 (2).淋球菌對外界理化因素抵抗力均差，在完全干燥環境中只存活1-2小時，室溫存活1-2天，50時存活5分鐘。附著于衣褲能存活18-24小時。 (3).淋球菌為需氧菌，對培養的要求較高，普通培養基不易生長， 在含有動物蛋白的培養基上生長良好。 (4).能分解葡萄糖、產酸不

3、產氣。 (5).生長過程中產生氧化酶。還產生自溶酶。淋病的傳播途徑有以下二種：1)直接性接觸感染：成人淋病幾乎全部通過性接觸感染。2)間接接觸感染：新生兒可通過母親產道分泌物間接感染。二、淋病的實驗室診斷方法分泌物涂片鏡檢；分離培養淋球菌；檢測淋球菌核酸：PCR1、標本的采集取材部位依據年齡性別性接觸方式臨床表現取材拭子種類藻酸鈣拭子普通棉拭子滌綸拭子標本的采集-取材部位(1)男性異性戀者:采集尿道標本，有口淫史者加取咽部標本；同性戀者: 采集尿道、直腸及咽部標本.女性采集宮頸標本，必要時從尿道、直腸、咽部、前庭大腺和尿道旁腺取材.標本的采集-取材部位(2)幼女幼女和/或處女膜未破的感染者標本

4、：采集陰道分泌物新生兒眼炎患者采集眼結膜分泌物標本的運送 淋球菌的抵抗力弱，對熱敏感，不耐干燥。取材后標本若不能立即接種于選擇培養基上，需采用運送系統。置于非營養性運送培養基中的標本應在12小時內送到實驗室，接種于選擇培養基，分離陽性率可達90%以上。超過12小時則分離陽性率下降。2、顯微鏡檢查1.染色涂片的制備：涂片方法 在干凈玻片上預加一小滴生理鹽水。 * 用白金耳蘸取樣時，應將白金耳半懸狀態使分泌物洗脫于鹽水； * 用棉拭子取樣時，應將棉拭子在鹽水處輕輕“滾動”，而不是涂抹。 * 自然干燥后, 涂漠面朝上快速通過火焰三次固定。顯微鏡檢查注意事項： * 涂片手法要輕，避免細胞破裂。薄厚得當

5、，以基本無細胞重疊為宜； * 火焰固定以涂片在腕背皮膚接觸時僅感微熱為宜； * 避免用加熱法使濕片干燥，避免固定時過度加熱,以免扭曲細胞形態。顯微鏡檢查染色方法:革蘭染液美蘭染液姬姆薩染液熒光抗體革蘭染色為一傳統方法，因簡便、快捷及價廉、仍然為最廣泛采用的方法。革蘭染色將菌分為二大類，即染成紫色的革蘭陽性菌及染成紅色的革蘭陰性菌。直接顯微鏡檢查革蘭染色:涂片：將拭子在載玻片上輕輕滾動涂片。固定：待涂片在室溫中空氣自然干燥， 涂片經火焰固定 革蘭染色： 第一液（結晶紫）染3060秒，流水沖洗數秒； 第二液（碘液）染60秒，水洗； 第三液（95%乙醇）脫色3060秒，水洗； 第四液（復紅）復染30

6、秒，水洗。 革蘭染色：細胞內革蘭陰性雙球菌直接顯微鏡檢查的臨床意義男性淋菌性尿道炎的尿道標本敏感性及特異性可高達95%99%，具診斷價值。宮頸標本、無癥狀男性尿拭子及取自直腸的涂片時敏感性僅4070%。不推薦直接顯微鏡檢查診斷直腸和咽部，以及女性宮頸淋球菌感染。 亦不能用于療后判愈。如果在多形核細胞外見到形態典型的革蘭陰性雙球菌，需做培養進行確證。3、淋球菌培養鑒定培養法為診斷淋病的金標準.對女性淋病、直腸、咽部的確診應做淋球菌培養培養的敏感性81100%。培養的優點有：特異性極高（100%）；可發現無癥狀淋球菌感染患者；可用于進一步作藥敏試驗；可用于治療后的判愈試驗。3、淋球菌培養鑒定1、培

7、養基 淋球菌對營養要求較復雜,培養基中應含有動物蛋白及細菌生長所需的各種因子。目前常用的選擇培養基有Thayer-Martin(T-M)培養基、血液瓊脂或巧克力瓊脂培養基。為抑制雜菌，在培養基中可加入少量抗菌物質如多粘菌素(25g/ml)和萬古霉素(3.3g/ml)等。 目前淋球菌的成品培養基均有商品出售。淋球菌培養接種標本取材后標本應盡可能及早接種。培養基應先置于室溫或孵箱中預溫。將取材的拭子轉動涂布于平皿的上1/4范圍，然后用接種環分區劃線，以保證獲得較純的單個菌落。接種標本-四區劃分接種接種標本-四區劃分接種淋球菌培養培養條件 ： 35 36，含5%10% CO2，濕潤（70%濕度）的環

8、境。CO2環境可由CO2培養箱、CO2產氣袋及燭缸提供。使用燭缸時，應使用白色、無芳香味的無毒性蠟燭。在燭缸底部放些浸水棉球以保持一定的濕度。培養時間：2448小時淋球菌培養-培養條件淋球菌培養-觀察結果培養24小時后檢查平皿，此時沒有菌生長的平皿應繼續培養至48小時，仍無菌生長才可丟棄，作出淋球菌培養陰性的報告。對選擇性培養基上分離的直徑在0.51mm，無色、灰白色的半透明菌落應作進一步鑒定。淋球菌培養-觀察結果培養 24 小時后的淋球菌菌落 淋球菌培養-觀察結果淋球菌培養-淋球菌的初步鑒定初步鑒定淋球菌的主要依據菌落特征氧化酶試驗革蘭染色淋球菌氧化酶陽性淋球菌培養-淋球菌的確證試驗來自泌尿

9、生殖道符合初步鑒定標準的分離株，一般可診斷為淋球菌，準確性達98%。對于菌落形態不典型的分離株，來自咽部、眼睛、或其他泌尿生殖道外部位的分離株，來自低危人群（如兒童）的分離株，以及涉及醫療法律案例的分離株，應作確證試驗。淋球菌培養-淋球菌的確證試驗糖發酵試驗DNA檢測全自動細菌檢定儀糖發酵試驗糖發酵試驗檢測奈瑟球菌分解特定糖類(葡萄糖、麥芽糖、乳糖及蔗糖)產酸的能力。根據淋球菌僅分解葡萄糖，腦膜炎球菌分解葡萄糖和麥芽糖，乳屑奈瑟球菌分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖或不分解這些糖類，可將淋球菌與可能在淋球菌選擇性培養基上分離出的其他奈瑟球菌加以鑒別。細菌葡萄糖麥芽糖乳糖蔗糖淋球菌+-腦膜炎球菌+-乳酰胺

10、奈瑟菌+-灰色奈瑟球菌-布蘭漢卡他球菌 -糖發酵試驗-奈瑟球菌屬的糖發酵特征菌落形態淋球菌樣革蘭染色革蘭陰性雙球菌氧化酶試驗陽性快速糖發酵試驗G+L-M-S-淋球菌的鑒定特征淋球菌種保存脫脂牛奶 -25 2個月 -70 1年液氮 長期凍干 長期革蘭氏陰性細胞內雙球菌男性確診 女性（其它樣本）未見革蘭氏陰性細胞內雙球菌分泌物培養初步診斷：菌落形態、陰性雙球菌氧化酶陽性，確證診斷：糖發酵三、淋病實驗室診斷策略分泌物分泌物涂片革蘭氏染色淋球菌培養小結適合所有臨床標本淋球菌的檢測推薦用于對女性病人的診斷推薦用于判愈試驗敏感性和特異性高可獲得活菌用于藥敏試驗缺點：耗時長，需一定的實驗室條件，標本中 要求為活菌一、病原菌與致病性奈瑟氏淋球菌是淋病的病原菌，主要引起泌尿生殖系統化膿性炎癥。淋病的潛伏期平均3-53-5天, ,淋球菌主要侵犯上皮細胞, ,尤其是柱狀上皮細胞。1、標本的采集取材部位依據年齡性別性接觸方式臨床表現取材拭子種類藻酸鈣拭子普通棉拭子滌綸拭子標本的采集-取材部位(2)幼女幼女和/或處女膜未破的感染者標本：采集陰道分泌物新生兒眼炎患者采集眼結膜分泌物2、顯微鏡檢查1.染色涂片的制備：涂片方法 在干凈玻片上預加一小滴生理鹽水。 * 用白金耳蘸取樣時，應將白金耳半懸狀態使分泌物洗脫于鹽水；