1、全自動生化分析儀試劑存在的問題及解決方法1優質的儀器用水優質的儀器用水是使用好檢驗試劑的一個十分重要環節之一。因為測定離子類的項目：比如銅、鐵、鋅、鈣、Mg、磷。這些項目在使用過程中，儀器用水的質量相當重要，雖然現在一般醫院的生化儀都帶有制水系統，但制水系統基本都是制備去離子水，離子交換樹脂在使用一段時間后交換能力明顯下降，需要定期進行更換，否則制備的水離子含量多，電導率偏高。使用含離子超標的水沖洗儀器，直接影響檢驗結果。再如血氨、二氧化碳項目，如果水質不好，儀器用水中本身含氨和二氧化碳就很高，則檢測該項目的結果也會受到嚴重的影響。還有如果血清中含有GLDH，而儀器用水存在氨時，可消耗NADH

2、，使利用NADH的酶聯連續監測法結果偏高。解決辦法：定期監測水質，當儀器用水的電阻小于1.0MQ時要更換離子交換樹脂或活性炭。2標本的及時分離及測定標本的及時分離及測定是用好檢驗試劑的首要環節因為凡是利用NADH轉化為NAD變化率來檢測其物質含量的試驗都或多或少受到血液存放時間的影響。原因是全血存放時間越長，紅細胞利用血清中的糖進行無氧酵解產生丙酮酸，丙酮酸使NADH轉化為NAD，這樣使測定結果假性升高。解決辦法：作好與臨床的溝通，對抽血人員和標本運送人員(傳遞人員)進行培訓；及時分離血清并及時檢測；也可將全自動生化分析儀上的延遲時間設置大于60秒，這樣試劑在延遲期內消除丙酮酸的干擾，可完全避

3、免假陽性結果的出現。3交叉污染3.1生化分析儀本身的清洗問題造成的交叉污染在使用全自動生化分析儀時，儀器的交叉污染現象是引起實驗結果偏離的一個原因。由于全自動生化分析儀試劑針需要接觸各種試劑，一般難以徹底清洗干凈，所以容易造成分析項目的攜帶污染.而生化項目的測定往往僅需要幾微升樣本，試劑往往需要幾百微升，尤其在沒有自動沖洗程序的流動池式生化分析儀上，由于前帶現象的存在，如果前一個樣本為高值樣本，則接后的第一個低值標本結果應慎重報告。不僅沒有沖洗程序的生化分析儀器上有這種現象，就是具有自動沖洗程序的全自動生化分析儀也有交叉污染，例如Beckman全自動生化分析儀CX4，它的試劑吸針(Probe)

4、、樣品吸針及反應攪拌棒是利用高壓沖洗液沖洗，然后用高壓壓縮空氣吹于，有時由于洗液壓力和壓縮空氣的壓力偏低，使試劑吸針、樣品吸針及反應混勻棒沖不干凈、吹不干，從而導致反應池之問相互污染、試劑問交又污染，使檢驗結果偏離。另一個值得注意的問題是許多生化儀器由于長期頻繁的利用，使加樣針和試劑針的注射器磨損加重或注射器的特氟龍”吸頭不及時更換，使吸樣針或試劑針密封層增大，產生泄漏現象也是造成樣本間及試劑間相互污染的一個重要原因。試劑吸樣或樣品吸樣不準確，通常導致利用速率法測試的標本系統偏低或偏高。眾所周知，速率法計算因子是由加樣體積和試劑體積參與確定的，如果加樣體積或加試劑體積不準，導致真正速率計算因子

5、和理論計算因子偏離，從而使檢測結果不準確。解決辦法：定期進行儀器維護保養；按要求及時更換零部件；定期對儀器進行校準；全自動生化分析標本和試劑用量少，殘存少量即會影響測試結果，每天應用無水乙醇擦洗并定期更換干燥棒，保證比色杯清洗后不留殘液，避免比色杯的交叉污染。3.2檢驗項目間的交叉污染在全自動生化分析儀的使用中，我們發現一個項目會影響緊隨其后項目的測試結果，造成這種影響的原因之一是一種試劑中含有另一試驗的測定物質而直接干擾其測試結果。原因之二是一種試劑中含有改變另一試驗反應條件或影響其反應進程的物質而間接干擾其測試結果。比如：在TP試劑中含有大量的CuS04,如果將Cu放在TP項目的后面檢測，

6、會使檢測結果偏高或重復性差。再如P放在含有磷酸鹽的項目后面，TBA放在含有膽酸鹽的項目后面都會使檢測結果偏高或重復性差。GLU放在CK和CKMB的項目后面可能會使檢測結果偏高或重復性差。LDH放在AIJT和AST的項目后面可能會使檢測結果偏高或重復性差。Mg放在ALP等含有鎂離子項目后面可能會使檢測結果偏高或重復性差。ca放在aAmy項目后面可能會使檢測結果偏高或重復性差。Mg試劑（CALMAGITE法）中含有EGTA，會干擾Ca的測定結果。另外我們發現相鄰兩個項目的PH值相差太大或反應對PH要求嚴格的項目，也會對測定的結果產生影響，比如TP和Alb之間PH相差較大，會互相干擾，TBA放在Al

7、b后面測定，會使測定結果偏低等等。解決辦法：調整實驗的前后順序來消除這種影響；在造成污染的項目和受污染的項目之間設置清洗劑并設定進行清洗的次數。4正確的參數設置也是用好檢驗試劑的一個關鍵因素現代化分析儀上通常有分析程序供用戶設定，包括樣品量、試劑量、波長、分析方式和延遲時間、測試時間的設定等。下面我們就延遲時間和加樣程序的設定來說明正確使用分析參數對于正確運用試劑的作用。比如肌酐苦味酸測定法，我們在設定延遲時間時應注意到苦味酸在堿性條件下50秒前首先快速與如乙酰乙酸等快反應物質產生紅色化合物，而在120秒后堿性苦味酸又能與慢反應物質產生陽性干擾，解決辦法：最好設定延遲時間為506O秒之間，測定

8、時間小于6O秒，這樣就充分消除了快反應和慢反應干擾，從而檢測到真正肌酐含量。5校準液的正確使用由于目前生產廠家提供的校準液并非通用的，只適用于某一特定的分析系統。同一項目不同方法學之間有很大差異，同一項目不同方法學的校準液更不能混用，但是在臨床檢驗中經常會發生膽紅素釩酸鹽法用重氮法的校準液校準，乳酸脫氫酶LP法用PL法校準液校準。TBA循環酶法用比色法校準液校準等都會造成測定結果不準確。另外同一方法學，不同廠家的校準品和試劑都會有所差異。解決辦法：建議結合各實驗室條件選擇適合自已實驗室的校準品，如有條件可進行系統溯源；建立滿足在同一方法學、同一測定條件、與理論計算的factor值差異不大，沒有

9、發現有明顯影響因素，方可進行校正測定；建立一個可靠的參考系統作為準確性基礎，然后將準確性轉移到使用方法”測定中去，使使用方法”測定結果可溯源到參考系統所提供的準確性基礎上來。在實現溯源性目標過程中，永遠以患者新鮮標本為實驗對象，以方法學對比試驗方法為驗證手段。采用回歸方程進行統計分析，斜率接近1,截距較小，說明使用方法”對標本測定結果和溯源目標參考系統對標本檢測結果非常接近，檢測結果可靠。6抗凝劑的使用目前臨床上常用的抗凝劑有EDTA-2K、肝素、草氨酸鈉等，TBA和AFU不能用肝素抗凝劑，因為肝素會使TBA和AFU試劑發生混濁，導致吸光度假性偏高，從而使檢測結果偏高。解決辦法：認真參閱試劑說

10、明書；作好與抽血人員之間的溝通和培訓，使抽血人員知道什么項目用何種標本。7混成單一試劑的問題比如酶法肌酐試劑，第一步R.中的酶要消除樣品中內源性肌酸的干擾，如果混成單一試劑，則會使檢測結果偏高，消除法HDL、LDL也不能混成單一試劑，因為它們都要分別清除HDL和LDL以外的脂蛋白，從而達到檢測的目的，如果混成單一試劑，則會使測定的HDL和LDL不準確。另外，有的試劑混成單一試劑后，穩定性和抗干擾能力也會明顯下降。解決辦法：在儀器通道或試劑位允許的情況下盡量使用雙試劑；如一定要使用單一試劑，最好選擇試劑廠家針對部份項目專門生產好的單一試劑。8試劑開瓶的問題隨著全自動生化分析儀的普及，開瓶穩定性”

11、也隨之受到了大家的重視，但是就目前有的試劑方法學來講，還達不到人們所要求的試劑開瓶后在儀器內放很長時間不需要定標，比如ALP、TP、GSP等PH為堿性的試劑，開瓶后試劑會吸收空氣中的二氧化碳，使試劑本身的PH值下降，如果長時間開瓶不定標或校準，會使檢測結果發生偏離，在國外有的項目有明文規定，必須72小時之內定標，比如BUN。但是在國內的某些實驗室為了方便，很長時間都不作校準，導致測定結果的不準確。解決辦法：了解試劑的特性，及時對部份項目進行校準，2對于每天標本量不多的醫院，可按12天的用量取用試劑放入儀器。9不同批號試劑相混的問題目前將不同批號的試劑混合在一起使用的現象在檢驗中經常發生，當然這

12、一方面是為了節省成本，另一方面為了方便。但是不管是什么品牌、什么試劑，由于不同批號的試劑生產時間不同，試劑中工具酶的活性會有差異，會發生水解的底物濃度隨時間長短也會不同。因此混在一起使用而又不定標，可能會導致檢測結果的不準確。還有如果有的試劑開瓶時間太長，空氣中的灰塵或細菌會進入瓶中，由于有的試劑含有大量的蛋白質和鹽，是細菌生長的最好條件，雖然有的試劑添加了防腐劑，但防腐劑的防腐也是有一定限度的，而且絕大多數廠家的試劑中是沒有加防霉劑的。解決辦法：不同批號試劑建議不要混用，如果混用最好重新定標；試劑瓶在儀器內使用時間不要過長，及時更換。一般每個試劑瓶內由于試劑針不能吸完，或多或少都會留有幾毫升

13、的試劑，如果是同一批號可以將未開瓶的同一批號試劑往里倒。但如果不是同一批號的試劑時倒人后最好定標，最好的做法是將每個批號的剩余試劑留起來待一定數量后混在一起，然后重新定標后檢測。通過我們這幾年使用伊得利康試劑，參加衛生部的室間質評都取得很好的成績，確實認為該公司試劑質量好。純水質量對全自動生化分析儀檢測的影響水是實驗室內一個常常被忽視但又至關重要的試劑。在全自動生化分析儀檢測過程中，純水作為生化反應的載體或介質、樣品或試劑的稀釋液和溶劑、儀器的清洗液甚至反應的參與者等貫穿檢測的全過程，其純度的高低直接關系水是實驗室內一個常常被忽視但又至關重要的試劑。在全自動生化分析儀檢測過程中，純水作為生化反

14、應的載體或介質、樣品或試劑的稀釋液和溶劑、儀器的清洗液甚至反應的參與者等貫穿檢測的全過程，其純度的高低直接關系到檢測結果的可信度。目前全國大部分實驗室都使用反滲透的中央純水系統，通過對該系統工作流程的分析以及遇到的實際情況，發現并總結了導致水純度不夠的幾種因素及其對全自動生化分析儀檢測的影響。1純水系統工作流程及影響因素1.1原水預處理原水是指進入實驗室的自來水，預處理就是除去自來水中絕大部分的雜質。方法：預處理一般使用機械過濾法，分三步進行： 精密濾芯（又稱過濾濾芯、分線繞濾芯和熔噴濾芯）過濾原水中的泥沙等大的顆粒物；活性炭濾芯通過吸附作用去除水中的絕大部分有機物和重金屬離子等（特別是自來水

15、中的余氯，其對反滲透膜有很大的氧化作用，所以必須經由活性炭去除）；反滲透膜（R0）進一步去除水中的微觀粒子和鹽分。影響因素： 自來水水質：自來水中雜質含量高時會導致預處理部件使用壽命縮短和處理后水質不達標，甚至會堵塞管道，導致需要更高的進水壓才能工作，一般要求自來水中固體溶解物含量（TDS）小于200mg/L。 預處理部件使用壽命：精密濾芯、活性炭濾芯、反滲透膜等都是具有相對壽命的材料，其中精密濾芯和活性炭濾芯又對反滲透膜具有保護作用，如果它們失效，R0膜負荷就會加重，壽命就會縮短。由于各廠家產品質量各異，R0膜又價格昂貴，因此在實際使用中應根據各地自來水水質合理搭配使用。 進水壓：一般純水系

16、統預處理都需要用高壓泵維持一定的進水壓力（0.IMpa才能維持正常工作，當高壓泵壓力不足時會導致產水量下降。 純水系統的維護：純水系統一般都具有自動反沖洗功能，當其設置不合理或故障以及人工維護不當時也會影響純水機的正常工作，導致純化效率及水質下降。1.2去離子水的制備一般的純水系統由于受到成本限制，RO膜質量一般，經其處理過的水只能達到三級純水（電阻率0.2MO.cm）的標準。三級純水雖然經過預處理已經去除了大部分離子，但其中的離子濃度還較高，還會影響生化分析儀的微量檢測，因此必須將三級純水進一步去離子以達到一級純水（電阻率IOMQ.cm）的標準才能用于生化檢測。方法：離子交換樹脂法是去離子水

17、制備的常用方法，所用的部件就是離子交換柱即純化柱（罐），包括陰離子交換柱、陽離子交換柱和混合柱等，試劑為陰陽離子交換樹脂。陰陽離子交換樹脂一般是由苯乙烯聚合成后再通過二乙烯苯交聯得到多孔網狀骨架結構，然后在骨架上連接活性基團而形成的高分子聚合物。離子交換樹脂所連接的活性基團可分為酸性基團和堿性基團兩大類型。連接酸性基團的離子交換樹脂稱為陽離子交換樹脂，連接堿性基團的樹脂稱為陰離子交換樹脂。原理： 陽離子交換柱原理即硬水軟化原理：陽離子交換樹脂中的酸性基團有磺酸基（-S03H）、羧基（一COOH）和苯酚基（-C6H40H）等酸性基團，其中的氫離子能與溶液中的金屬離子或其他陽離子進行交換。例如苯乙

18、烯和二乙烯苯的高聚物經磺化處理得到強酸性陽離子交換樹脂，其結構式可表示為R-SO3H，式中R代表樹脂母體，以Ca2+為例其表達式為2R-S03H+Ca2+-（R-SO3）2Ca+2H+。 陰離子交換柱的原理：陰離子交換樹脂中的堿性基團有季胺基-N（CH3）30H、胺基（-NHz）和亞胺基（-NHz）等。它們在水中能生成OH-離子，可與各種陰離子起交換作用，以Cl-為例其表達式為R-N（CH3）30H+CI-RN（CH3）3CI+OH-。 混合柱：當兩者串聯使用或混合使用時，產物就只有水，總表達式為：2R-S03H+Ca2+2（CH3）30H+2CI-（R-S03）2Ca+2RN（CH3）3C1

19、+2H20.影響因素： 離子交換樹脂的質與量：離子交換樹脂是有壽命限制的，當離子交換達到一定量時就達到飽和，需要進行再生處理，因此質量越好總量越大其使用期限越長。陰陽離子交換樹脂的連接方式：復床式：若干個陽離子交換柱和若干個陰離子交換柱串聯而成，陽在前陰在后，其優點是再生方便，缺點是出水質量不高（單級復床式出水電阻率只有0.5MQ.cm,雙級復床式出水電阻率為2MO-cm）。混床式：將陽離子樹脂和陰離子樹脂以1:2容積比均勻混合裝入同一個交換柱內而成，優點是出水純度高（電阻率>10血.cm）,缺點是再生困難。聯合式：將復床式和混床式串聯起來即成，多采用三柱式，出水質量高（電阻率最高可達1

20、8.3MQ.cm,即超純水），使用壽命長。三級純水的純度：當三級純水質量不合格，其中一些非離子雜質通過離子交換柱時就會影響離子交換柱的使用壽命并造成出水水質的降低。該情況主要受預處理過程的影響，同時有些開放性的純水系統將生成的三級純水儲存于水箱中以備其它用途使用時儲存時間過長或其它原因導致的二次污染也會使水純度下降。2純水質量對生化分析儀及檢測結果的影響2.1不合格純水中的雜質成分純水質量不合格也就意味著純水系統水純化的失敗，可能出現在原水預處理過程、三級純水的儲存和離子交換過程中的任何一步。無論哪一步失敗，其雜質來源無外乎自來水和純水機水通道的污染物，主要有： 電解質，常見的有H+,Na+,

21、K+,NH4+,Mg2+,Ca2+,Fe3+,Cu2+,Mn2+,Zn2+,Al3+等陽離子和F-,CI-,N03-,HC03-,S042-,P043-,H2P04-,HSi03-等陰離子；有機物質，女口有機酸、農藥、烴類、醇類和酯類等；顆粒物； 微生物；溶解氣體（Nz,02,C1z,HzS,CO,COz,CH4等）； 其它。2.2不同雜質成分對生化分析儀及檢測結果的影響電解質含量高的影響： 最直接的影響就是對血清（漿）中同種離子測定結果的升高，如對Mg2+,Ca2+,Fe3+,Cu2+,Zn2+等的測定，同時也對這些項目的定標產生影響。 由于很多金屬離子都是酶的輔因子，因此當金屬離子含量高時

22、往往影響酶活性的檢測（如Mg2+是多種磷酸化激酶的激活劑，水中含量超標時會導致這些酶活性測定值的升高；而許多重金屬離子則對酶有抑制作用，導致酶活性下降）。 很多陰離子也作為酶的輔因子存在，對酶活性測定產生影響（如CI-對a-淀粉酶就有激活作用）。 電解質含量高的水更容易形成結晶和導致蛋白等有機物變性附著于管道系統，從而使得生化分析儀管道系統更易堵塞，最終造成測定失真或失敗；同時，在使用其對反應杯進行清洗時也很難清洗干凈，會加速反應杯的老化和損壞，使杯空白升高。有機物質的影響：有機物質的影響主要在于對類似物質測定時導致類似物質測定結果的升高。同時，有機物含量升高也會加速管道系統和反應杯的清洗困難

23、及老化。顆粒物的影響：顆粒物一般很難通過純水系統進入生化分析儀管道和反應系統，其來源一般都是三級純水或一級純水的儲水箱發生二次污染，但是一旦進入除了會導致吸光度升高外，還很容易堵塞管道和損壞反應杯。224微生物的影響：微生物的去除主要依賴原水的預處理，有些純水系統還在一級純水或超純水處加裝紫外殺菌或者微濾、超濾等裝置，進一步除去水中殘余的細菌、微粒、熱源等。但一旦預處理失敗或純水儲存箱被二次污染，微生物及其產物就能進入生化分析儀管道系統和反應系統，可能出現的情況有兩種：微生物在管道及反應系統孳生，導致管道堵塞，同時令吸光度和杯空白升高；微生物產生特定的酶對生化分析儀酶測定產生影響，具體產生什么影響取決于污染菌的類型。溶解氣體：溶解氣體增多產生的影響有： 對同種氣體的測定的影響；對水的pH值也產生影響，如C02,CI2，H2S等溶解增多導致水pH值的下降，也對pH值依賴性較強的生化項目測定產生影響； 某些氣體如C12增多，因其自身氧化性較強，會對與氧化還原反應相關的生化測定項目產生影響，如對基于340nm處NADH和NADPH有吸收峰而建立的ALT，AST,BUN等的測定方法，會導致測定值的升高。其它雜質的影響：有些純水系統也將最終生成的超純水或一級純水儲存于水箱中，當水箱有生銹情況時導致鐵測定不正常；還有當機械裝置密封不