1、. .高效液相色譜百科名片高效液相色譜儀高效液相色譜法High Performance Liquid Chromatography HPLC又稱“高壓液相色譜、“高速液相色譜、“高別離度液相色譜、“近代柱色譜等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被別離后，進入檢測器進展檢測，從而實現對試樣的分析。該方法已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的別離分析技術。目錄化學信息根本信息性狀描述物理說明藥理作用危險說明歷史特點主要類型構造組成綜述高壓輸液泵色

2、譜柱進樣器檢測器餾分收集器數據獲取和處理系統別離原理液固色譜法離子交換色譜法離子對色譜法離子色譜法空間排阻色譜法流程使用方法綜述色譜柱的理論板數別離度拖尾因子測定方法綜述面積歸一化法主成分自身對照法內標法外標法設備選型綜述相對分子質量溶解度化學構造儀器設備綜述高壓泵梯度洗提進樣裝置色譜柱檢測器應用實例化學信息根本信息性狀描述物理說明藥理作用危險說明歷史特點主要類型構造組成綜述高壓輸液泵色譜柱進樣器檢測器餾分收集器數據獲取和處理系統別離原理液固色譜法離子交換色譜法離子對色譜法離子色譜法空間排阻色譜法流程使用方法綜述色譜柱的理論板數別離度拖尾因子測定方法綜述面積歸一化法主成分自身對照法內標法外標法

3、設備選型綜述相對分子質量溶解度化學構造儀器設備綜述高壓泵梯度洗提進樣裝置色譜柱檢測器應用實例展開化學信息根本信息中文名稱：葛根素(HPLC),98% 中文別名：葛根黃酮，8-beta-D-葡萄吡喃糖-4',7-二羥基異黃酮 英文名稱：Puerarin 英文別名：8-(-D-Glucopyranosyl-7-hydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one 純度：98%CAS號：3681-99-0 分子式：C21H20O9 分子量：416.38 HPLC1性狀描述高含量為白色針狀結晶粉末，屬于黃酮類。 物理說明熔點187-189°

4、;C 藥理作用具有提高免疫，增強心肌收縮力，保護心肌細胞，降低血壓，抗血小板聚集等作用。 危險說明危險品標志:F,C 危險類別碼:11-34 平安說明:22-24/25-45-36/37/39-26-16 歷史1906年俄國植物化學家茨維特Tswett首次提出“色譜法Chromotography和“ 實驗室最常用的P230高效液相色譜儀色譜圖Chromatogram的概念。他在論文中寫到： “原文一植物色素的石油醚溶液從一根主要裝有碳酸鈣吸附劑的玻璃管上端參加，沿管濾下，后用純石油醚淋洗，結果按照不同色素的吸附順序在管內觀察到它們相應的色帶，就象光譜一樣，稱之為色譜圖。 1930年以后，相繼出

5、現了紙色譜、離子交換色譜和薄層色譜等液相色譜技術。 1952年，英國學者Martin和Synge 基于他們在分配色譜方面的研究工作，提出了關于氣液分配色譜的比較完整的理論和方法，把色譜技術向前推進了一大步，這是氣相色譜在此后的十多年間開展十分迅速的原因。 1958年，基于Moore和Stein的工作，離子交換色譜的儀器化導致了氨基酸分析儀的出現，這是近代液相色譜的一個重要嘗試，但別離效率尚不理想。 1960年中后期，氣相色譜理論和實踐的開展，以及機械、光學、電子等技術上的進步，液相色譜又開場活潑。到60年代末期把高壓泵和化學鍵合固定相用于液相色譜就出現了HPLC。 1970年中期以后，微處理機

6、技術用于液相色譜，進一步提高了儀器的自動化水平和分析精度。 1990年以后，生物工程和生命科學在國際和國內的迅速開展，為高效液相色譜技術提出了更多、更新的別離、純化、制備的課題，如人類基因組方案，蛋白質組學有HPLC作預別離等。 特點高效液相色譜法有“三高一廣一快的特點： 高效液相色譜HPLC流程示意高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。 高效：別離效能高。可選擇固定相和流動相以到達最正確別離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的別離效能高出許多倍。 高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在uL數量級。 應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可

7、用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的別離分析，顯示出優勢。 分析速度快、載液流速快：較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在1530分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內即可完成，一般小于1小時。 此外高效液相色譜還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優點，但也有缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。高效液相色譜的缺點是有“柱外效應。在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間進樣器、柱接頭、連接收和檢測池等中，如果流動相的流型有變化，被別離物質的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。 主要類型1吸附

8、色譜Adsorption Chromatography 2分配色譜Partition Chromatography 3離子色譜Ion Chromatography 4體積排阻色譜Size Exclusion Chromatography 5親和色譜Affinity Chromatography 構造組成綜述高效液相色譜儀可分為“高壓輸液泵、“色譜柱、“進樣器、“檢測器、“餾分收集器以及“數據獲取與處理系統等局部。 高壓輸液泵功能 驅動流動相和樣品通過色譜別離柱和檢測系統； 性能要求 流量穩定±1，耐高壓3060Mpa，耐各種流動相：例如：有機溶劑、水和緩沖液； 種類 往復泵和隔膜泵。

9、 色譜柱功能 別離樣品中的各個物質； 尺寸 1030cm長，25mm內徑的內壁拋光的不銹鋼管柱； 填料粒度 5 10m ，高效微粒固定相； 進樣器功能 將待分析樣品引入色譜系統； 種類 注射器，10Mpa以下，110m微量注射器進樣 停流進樣 閥進樣，常用、較 理想、體積可變，可固定 自動進樣器，有利于重復操作，實現自動化 檢測器功能 將被分析組在柱流出液中濃度的變化轉化為光學或電學信號； 分類 示差折光化學檢測器 紫外吸收檢測器紫外一可同分光光度檢測器 二極管陣列紫外檢測器 熒光檢測器 電化學檢測器餾分收集器功能 如果所進展的色譜別離不是為了純粹的色譜分析，而是為了做其它波譜鑒定，或獲取少量

10、試驗樣品的小型制備，餾分收集是必要的； 方法 手工，少數幾個餾分，手續麻煩，易出過失。 餾分收集器收集，比較理想，微機控制操作準確。 數據獲取和處理系統功能 把檢測器檢測到的信號顯示出來。 別離原理液液分配色譜法(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography)流動相和固定相都是液體。流動相與固定相之間應互不相溶極性不同，防止固定液流失，有一個明顯的分界面。當試樣進入色譜柱，溶質在兩相間進展分配。到達平衡時，服從于高效液相色譜計算公式： 高效液相色譜計算公式式中，cs溶

11、質在固定相中濃度；cm-溶質在流動相中的濃度； Vs固定相的體積；Vm流動相的體積。LLPC與GPC有相似之處，即別離的順序取決于K，K大的組分保存值大；但也有不同之處，GPC中，流動相對K影響不大，LLPC流動相對K影響較大。 a. 正相液 液分配色譜法(Normal Phase liquid Chromatography): 流動相的極性小于固定液的極性。 b. 反相液 液分配色譜法(Reverse Phase liquid Chromatography): 流動相的極性大于固定液的極性。 c. 液 液分配色譜法的缺點：盡管流動相與固定相的極性要求完全不同，但固定液在流動相中仍有微量溶解；

12、流動相通過色譜柱時的機械沖擊力，會造成固定液流失。上世紀70年代末開展的化學鍵合固定相見后，可抑制上述缺點。現在應用很廣泛7080%。 液固色譜法流動相為液體，固定相為吸附劑如硅膠、氧化鋁等。這是根據物質吸附作用的不同來進展別離的。其作用機制是：當試樣進入色譜柱時，溶質分子 (X) 和溶劑分子(S)對吸附劑外表活性中心發生競爭吸附未進樣時，所有的吸附劑活性中心吸附的是S，可表示如下：Xm nSa = Xa nSm 式中：Xm-流動相中的溶質分子；Sa-固定相中的溶劑分子；Xa-固定相中的溶質分子；Sm-流動相中的溶劑分子。 當吸附競爭反響達平衡時： K=XaSm/XmSa 式中：K為吸附平衡常

13、數。討論：K越大，保存值越大。 離子交換色譜法(Ion-exchange Chromatography) IEC是以離子交換劑作為固定相。IEC是基于離子交換樹脂上可電離的離子與流 離子交換色譜柱動相中具有一樣電荷的溶質離子進展可逆交換，依據這些離子以交換劑具有不同的親和力而將它們別離。以陰離子交換劑為例，其交換過程可表示如下： X-(溶劑中) (樹脂-R4N Cl-)= (樹脂-R4N X-) Cl- (溶劑中) 當交換達平衡時： KX=-R4N X- Cl-/-R4N Cl- X- 分配系數為： DX=-R4N X-/X-= KX -R4N Cl-/Cl- 討論：DX與保存值的關系 但凡在

14、溶劑中能夠電離的物質通常都可以用離子交換色譜法來進展別離。 離子對色譜法(Ion Pair Chromatography) 離子對色譜法是將一種 ( 或多種 ) 與溶質分子電荷相反的離子 ( 稱為對離子或反離子 ) 加到流動相或固定相中，使其與溶質離子結合形成疏水型離子對化合物，從而控制溶質離子的保存行為。其原 離子色譜儀流程示意理可用下式表示：X 水相 Y-水相 = X Y-有機相式中：X 水相-流動相中待別離的有機離子也可是陽離子；Y-水相-流動相中帶相反電荷的離子對如氫氧化四丁基銨、氫氧化十六烷基三甲銨等；X Y-形成的離子對化合物。 當達平衡時： KXY = X Y-有機相/ X 水相

15、Y-水相 根據定義，分配系數為： DX= X Y-有機相/ X 水相= KXY Y-水相 討論：DX與保存值的關系 離子對色譜法(特別是反相)發解決了以往難以別離的混合物的別離問題，諸如酸、堿和離子、非離子混合物，特別是一些生化試樣如核酸、核苷、生物堿以及藥物等別離。 離子色譜法(Ion Chromatography) 用離子交換樹脂為固定相，電解質溶液為流動相。以電導檢測器為通用檢測器，為消除流動相中強電解質背景離子對電導檢測器的干擾，設置了抑制柱。試樣組分在別離柱和抑制柱上的反響原理與離子交換色譜法一樣。 以陰離子交換樹脂R-OH作固定相，別離陰離子如Br-為例。當待測陰離子Br-隨流動相

16、NaOH進入色譜柱時，發生如下交換反響洗脫反響為交換反響的逆過程： 擔體圖示抑制柱上發生的反響： R-H NaOH- = R-Na H2O R-H Na Br- = R-Na H Br- 可見，通過抑制柱將洗脫液轉變成了電導值很小的水，消除了本底電導的影響；試樣陰離子Br-那么被轉化成了相應的酸H Br-，可用電導法靈敏的檢測。 離子色譜法是溶液中陰離子分析的最正確方法。也可用于陽離子分析。 空間排阻色譜法(Steric Exclusion Chromatography) 空間排阻色譜法以凝膠 (gel) 為固定相。它類似于分子篩的作用，但凝膠的孔徑比分子篩要大得多，一般為數納米到數百納米。溶

17、質在兩相之間不是靠其相互作用力的不同來進展別離，而是按分子大小進展別離。別離只與凝膠的孔徑分布和溶質的流動力學體積或分子大小有關。試樣進入色譜柱后，隨流動相在凝膠外部間隙以及孔穴旁流過。在試樣中一些太大的分子不能進入膠孔而受到排阻，因此就直接通過柱子，首先在色譜圖上出現，一些很小的分子可以進入所有膠孔并滲透到顆粒中，這些組分在柱上的保存值最大，在色譜圖上最后出現。 流程流程流程：如右圖所示，溶劑貯器1中的流動相被泵2吸入，經3梯度控制器按一寫的梯度進展混后然后輸出，經4測其壓力和流量，導入5進樣閥器經6保護柱、7別離柱后到8檢測器檢測，由10數據處理設備處理數據或11記錄儀記錄色譜圖，12餾分

18、收集器收集餾分，13為廢液。 使用方法綜述色譜柱的填料和流動相的組分應按各品種項下的規定.常用的色譜柱填料有硅膠和化學鍵合硅膠。后者以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用辛基鍵合硅膠次之,氰基或氨基鍵合硅膠也有使用；離子交換填料用于離子交換色譜；凝膠或玻璃微球等，用于分子排阻色譜等。注樣量一般為數微升。除另有規定外，柱溫為室溫，檢測器為紫外吸收檢測器。 在用紫外吸收檢測器時,所用流動相應符合紫外分光光度法項下對溶劑的要求。 正文中各品種項下規定的條件除固定相種類、流動相組分、檢測器類型不得任意改變外，其余如色譜柱內徑、長度、固定相牌號、載體粒度、流動相流速、混合流動相各組分的比例、柱溫、進 化學鍵合固

19、定相反響樣量、檢測器的靈敏度等，均可適當改變 以適應具體品種并到達系統適用性試驗的要求。一般色譜圖約于20分鐘內記錄完畢。 2.系統適用性試驗 按各品種項下要求對儀器進展適用性試驗，即用規定的對照品對儀器進展試驗和調整,應到達規定的要求；或規定分析狀態下色譜柱的最小理論板數、別離度和拖尾因子. 色譜柱的理論板數在選定的條件下，注入供試品溶液或各品種項下規定的內標物質溶液，記錄色譜圖 化學鍵合固定相應用，量出供試品主成分或內標物質峰的保存時間t(R)和半頂峰寬W(h/2)，按n=5.54t(R)W(h/2)2計算色譜柱的理論板數，如果測得理論板數低于各品種項下規定的最小理論板數，應改變色譜柱的某

20、些條件如柱長、載體性能、色譜柱充填的優劣等，使理論板數到達要求。 別離度定量分析時，為便于準確測量，要求定量峰與其他峰或內標峰之間有較好的別離度。別離度R的計算公式為：2t(R2)-t(R1) ，R= -W1+W2 式中 t(R2)為相鄰兩峰中后一峰的保存時間； t(R1)為相鄰兩峰中前一峰的保存時間； W1及W2為此相鄰兩峰的峰寬。 除另外有規定外，別離度應大于1.5。 拖尾因子為保證測量精度，特別當采用峰高法測量時，應檢查待測峰的拖尾因子(T)是否符合各品種項下的規定或不同濃度進樣的校正因子誤差是否符合要求。拖尾因子計算公式為： W(0.05h) T=-2d1 式中 W(0.05h)為0.

21、05峰高處的峰寬； d1為峰極大至峰前沿之間的距離。 除另有規定外，T應在0.951.05間。 也可按各品種校正因子測定項下，配制相當于80%、100%和120%的對照品溶液，參加規定量的內標溶液，配成三種不同濃度的溶液，分別注樣3次,計算平均校正因子，其相對標準偏差應不大于2.0%。 測定方法綜述定量測定時，可根據樣品的具體情況采用峰面積法或峰高法。但用歸一法或內標法測定雜質總量時，須采用峰面積法。 面積歸一化法測定供試品或經衍生化處理的供試品中各雜質及雜質的總量限度采用不加校正因子的峰面積歸一法。計算各雜質峰面積及其總和，并求出占總峰面積的百分率。但溶劑峰不計算在內。色譜 硅膠圖的記錄時間

22、應根據各品種所含雜質的保存時間決定，除另有規定外可為該品種項下主成分保存時間的倍數。 主成分自身對照法當雜質峰面積與成分峰面積相差懸殊時，采用主成分自身對照法。在測定前，先按各品種項下規定的雜質限度，將供試品稀釋成一定濃度的溶液作為對照溶液，進樣，調節檢測器的靈敏度或進樣量，使對照溶液中的主成分色譜峰面積滿足準確測量要求。然后取供試品溶液，進樣，記錄時間，除另有規定外，應為主成分保存時間的倍數。根據測得的供試品溶液的各雜質峰面積及其總和并和對照溶液主成分的峰面積比較，計算雜質限度。 內標法測定供試品中雜質的總量限度 采用不加校正因子的峰面積法。取供試品，按各品種項下規定的方法配制不含內標物質的

23、供試品溶液，注入儀器，記錄色譜圖I；再配制含有內標物質的供試品溶液，在同樣的條件下注樣，記錄色譜圖。記錄的時間除另有規定外，應為該品種項下規定的內標峰保存時間的倍數，色譜圖上內標峰高應為記錄儀滿標度的30%以上，否那么應調整注樣量或檢測器靈敏度。 如果色譜圖中沒有與色譜圖上內標峰保存時間一樣的雜質峰，那么色譜圖中各雜質峰面積之和應小于內標物質峰面積溶劑峰不計在內。如果色譜圖中有與色譜圖上內標物質峰保存時間一樣的雜質峰，應將色譜圖上的內標物質峰面積減去色譜圖中此雜質峰面積，即為內標物質峰的校正面積；色譜圖中各雜質峰總面積加色譜圖中此雜峰面積，即為各雜質峰的校正總面積，各雜質峰的校正總面積應小于內

24、標物質峰的校正面積。 加校正因子測定供試品中某個雜質或主成分含量 按各品種項下的規定,精細稱量取對照品和內標物質，分別配成溶液，精細量取各溶液，配成校正因子測定用的對照溶液，取一定量注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品和內標物質的峰面積或峰高，按下式計算校正因子： As/ms校正因子f=- Ar/mr 式中 As為內標物質的峰面積或峰高，Ar為對照品的峰面積或峰高； ms為參加內標物質的量mr為參加對照品的量。 再取各品種項下含有內標物質的供試品溶液，注入儀器，記錄色譜圖，測量供試品或其雜質峰和內標物質的峰面積或峰高，按下式計算含量：Ax 含量mx=f×-As/ms 式中 Ax為供試品或

25、其雜質峰面積或峰高； mx為供試品或其雜質的量。 f、As和ms的意義同上。 當配制校正因子測定用的對照溶液和含有內標物質的供試品溶液使用同一份內標物質溶液時，那么配制內標物質溶液不必精細稱量取。 外標法測定供試品中某個雜質或主成分含量 按各品種項下的規定,精細稱(量)取對照品和供試品，配制成溶液，分別精細取一定量，注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品和供試品待測成分的峰面積或峰高，按下式計算含量： A<x> 含量mx=mr×-Ar式中各符號意義同上 由于微量注射器不易準確控制進樣量，當采用外標法測定供試品中某雜質或主成分含量時，以定量環進樣為好。 設備選型綜述要正確地選擇色

26、譜別離方法，首先必須盡可能多的 了解樣品的有關性質，其 選型常用參照表次必須熟悉各種色譜方法的主要特點及其應用范圍。選擇色譜別離方法的主要根據是樣品的相對分子質量的大小，在水中和有機溶劑中的溶解度，極性和穩定程度以及化學構造等物理、化學性質。 相對分子質量對于相對分子質量較低一般在200以下，揮發性比較好，加熱又不易分解的樣品，可以選擇氣相色譜法進展分析。相對分子質量在200 2000的化合物，可用液固吸附、液-液分配和離子交換色譜法。相對分子質量高于2000，那么可用空間排阻色譜法。 溶解度水溶性樣品最好用離子交換色譜法和液液分配色譜法；微溶于水，但在酸或堿存在下能很好電離的化合物，也可用離

27、子交換色譜法；油溶性樣品或相對非極性的混合物，可用液-固色譜法。 化學構造假設樣品中包含離子型或可離子化的化合物，或者能與離子型化合物相互作用的化合物例如配位體及有機螯合劑，可首先考慮用離子交換色譜，但空間排阻和液液分配色譜也都能順利地應用于離子化合物；異構體的別離可用液固色譜法；具有不同官能團的化合物、同系物可用液液分配色譜法；對于高分子聚合物，可用空間排阻色譜法。 儀器設備實例綜述HPLC的出現不過三十多年的時間，但這種別離分析技術的開展十分迅猛，目前應用也十分廣泛。其儀器構造和流程也多種多樣。典型的高效液相色譜儀構造和流程可用以下方框圖表示See Fig.3-4。高效液相色譜儀一般都具備

28、貯液器、高壓泵、梯度洗提裝置用雙泵、進樣器、色譜柱、檢測器、恒溫器、記錄儀等主要部件。 高效液相色譜更適宜于別離、分析高沸點、熱穩定性差、有生理活性及相對分子量比較大的物質，因而廣泛應用于核酸、肽類、內酯、稠環芳烴、高聚物、藥物、人體代謝產物、外表活性劑，抗氧化劑、殺蟲劑、除莠劑的分析等物質的分析。 高壓泵HPLC使用的色譜柱是很細的16 mm，所用固定相的粒度也非常小幾m到幾十m，所以流動相在柱中流動受到的阻力很大，在常壓下，流動相流速十分緩慢，柱效低且費時。為了到達快速、高效別離，必須給流動相施加很大的壓力，以加快其在柱中的流動速度。為此，須用高壓泵進展高壓輸液。高壓、高速是高效液相色譜的

29、特點之一。 儀器主要組成HPLC使用的高壓泵應滿足以下條件： a. 流量恒定，無脈動，并有較大的調節范圍一般為110 mL/min； b. 能抗溶劑腐蝕； c. 有較高的輸液壓力；對一般別離，60×105Pa的壓力就滿足了，對高效別離，要求到達150300×105Pa。 (1). 往復式柱塞泵 當柱塞推入缸體時，泵頭出口上部的單向閥翻開，同時，流動相進入的單向閥下部關閉，這時就輸出少量的流體。反之，當柱塞向外拉時，流動相入口的單向閥翻開，出口的單向閥同時關閉，一定量的流動相就由其儲液器吸入缸體中。這種泵的特點是不受整個色譜體系中其余局部阻力稍有變化的影響，連續供給恒定體積的

30、流動相。 2氣動放大泵其工作原理是：壓力為 p1 的低壓氣體推動大面積 SA 活塞 A ，那么在小面積 SB 活塞 B 輸出壓力增大至 p2 的液體。壓力增大的倍數取決于 A 和 B 兩活塞的面積比，如果 A 與 B 的面積之比為 50 : 1 ，那么壓力為 5 × Pa 的氣體就可得到壓力為 250×Pa 的輸出液體。這是一種恒壓泵。 梯度洗提類似于GC中的程序升溫。已成為現代高效液相色譜中部缺少的局部。 氣動放大泵梯度洗提，就是載液中含有兩種或更多不同極性的溶劑，在別離過程中按一定的程序連續改變載液中溶劑的配比和極性，通過載液中極性的變化來改變被別離組分的別離因素，以提

31、高別離效果。梯度洗提可以分為兩種： a. 低壓梯度也叫外梯度：在常壓下，預先按一定程序將兩種或多種不同極性的溶劑混合后，再用一臺高壓泵輸入色譜柱。 b.高壓梯度 ( 或稱內梯度系統 ) ：利用兩臺高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按設定的比例送入梯度混合室，混合后，進入色譜柱。 進樣裝置(1).注射器進樣裝置：進樣所用微量注射器及進樣方式與 GC法一樣。進樣壓力150×105Pa時，必須采用停流進樣。(2).高壓定量進樣閥：與GC法用的流通法相似，能在高壓下進樣。 色譜柱色譜柱是色譜儀最重要的部件心臟。通常用厚壁玻璃管或內壁拋光的不銹鋼管制作的，對于一些有腐蝕性的樣品且要求耐高壓時，可

32、用銅管、鋁管或聚四氟乙烯管。柱子內徑一般為16 mm。常用的標準柱型是內徑為 4.6 或 3.9mm ，長度為 15 30cm 的直形不銹鋼柱。填料顆粒度 5 10m ，柱效以理論塔板數計大約 7000 10000 。 開展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。 檢測器(1).紫外光度檢測器 它的作用原理是基于被分析試樣組分對特定波長紫外光的選擇性吸收，組分濃度與吸光度的關系遵守比爾定律。最常用的檢測器，應用最廣，對大局部有機化合物有響應。 特點： a.靈敏度高：其最小檢測量10-9g·mL-1，故即使對紫外光吸收很弱的物質，也可以檢測； b. 線性范圍寬；(比爾定律) c. 流通池可做的很小1mm × 10mm ，容積 8L； d. 對流動相的流速和溫度變化不敏感可用于梯度洗脫； e. 波長可選，易于操作:如，使用裝有流通池的可見紫外分光