1、巖黃連生物總堿對四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的保護作用(一)作者：梁永紅， 賈杰， Peter S. Spencer， 毛宇昂， 覃崇舉【摘要】 目的研究巖黃連生物總堿對四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的保護作用，探討其療效機制。方法巖黃連生物總堿予小鼠連續灌胃給藥10 d，用CCl4造成小鼠急性肝損傷，測定小鼠血清中谷丙轉氨酶（ALT）和谷草轉氨酶（AST）的含量，以及肝組織中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量，觀察光鏡下小鼠肝組織的病理變化。結果巖黃連生物總堿高、中、低各劑量組均能抑制小鼠腹腔注射CCl4引起的急性肝損傷所致的ALT和AST的升高，同時能升高肝組織中SOD的含量，并能

2、降低MDA的含量；減輕肝組織壞死程度。結論巖黃連生物總堿對四氯化碳所致的小鼠急性肝損傷具有保護作用，其保護機制可能與其抗脂質過氧化有關。 【關鍵詞】 巖黃連生物總堿； 急性肝損傷； 四氯化碳Abstract：ObjectiveTo investigate the protective effect of Corydalis saxicola alkaloids (CSA) on CCl4-induced acute liver injury in mice.MethodsAfter intragastric administration of CSA for 10 days, the rats

3、 were given CCl4 to induce acute liver injury. The serum levels of ALT，AST, SOD, and MDA in liver were detected. Pathological changes were detected by HE.ResultsCSA could significantly decrease the acitivities of ALT, AST and MDA. The level of SOD was increased. CSA could also protect the liver from

4、 pathological injury induced by CCl4.ConclusionCSA can protect liver from acute hepatic toxicity inducecd by CCl4.Key words：CSA; Acute liver injury; CCl4巖黃連Corydalis saxicola Bunting系罌粟科紫堇屬植物石生黃堇的全草，分布于全國各地，西南部盛產，主要分布于貴州、云南、四川、西藏、廣西等地1。成分分析表明，該植物所含的化合物主要為生物堿，尚未有其他類化合物的報道2。據記載，該植物具有抗腫瘤、增強免疫功能、止痛鎮靜、抗菌

5、、抗肝炎病毒等作用3。本研究采用CCl4小鼠急性肝損傷模型，運用酶活力測定，抗脂質過氧化物測定以及形態學觀察等方法，研究巖黃連生物總堿（Corydalis saxicola alkaloids, CSA）對小鼠急性肝損傷的保護作用并探討其保護機制。1 材料1.1 藥物廣西藥材巖黃連全草95 %乙醇提取，采用旋轉蒸發濃縮得根浸膏，酸水轉溶，堿化，氯仿提取后濃縮最后得到總生物堿，配制成所需各濃度。1.2 試劑聯苯雙酯滴丸（北京協和藥廠）；四氯化碳（重慶川江化學試劑廠）；長生純正花生油；ALT，AST，MDA，SOD試劑盒（南京建成生物工程研究所）。1.3 動物昆明種小鼠，體重(202) g，雌雄兼

6、用，廣西醫科大學醫學動物實驗中心提供。2 方法2.1 模型建立4,5取昆明種小鼠60只，隨機分為6組，即空白對照組、聯苯雙酯組、CCl4模型組及CSA高、中、低劑量組。聯苯雙酯組灌胃給予聯苯雙酯混懸液150 mgkg-1；CSA三個劑量組分別灌胃給予CSA 100,75,50 mgkg-1。空白對照組和CCl4模型組給予同等量的蒸餾水。連續10 d后除空白對照組外其余各組均腹腔注射0.5% CCl4油溶劑0.1 ml10 g-1（此即CCl4的給藥方式，為一次性給藥造成急性肝損）。禁食24 h后摘眼球取血，靜置30 min，3 000 rmin-1 離心10 min后分離血清，待測血清中AST

7、及ALT含量。取肝組織，用生理鹽水洗去殘血并用濾紙濾干，剪成小塊。稱取100 mg，加預冷生理鹽水0.9 ml，制成10勻漿，待測肝組織SOD和MDA的含量。取肝大葉相同部位的一小塊肝組織固定于10福爾馬林，做病理切片檢查。2.2 生化檢測分離得到的各組小鼠血清，按照試劑盒說明測定ALT和AST的活力。10%肝組織勻漿4 3 500 rmin-1 離心10 min后取上清液，按照試劑盒說明測定SOD和MDA的含量。2.3 形態學觀察所取小鼠肝組織用10%福爾馬林固定，制備肝組織切片，HE染色，普通光鏡下觀察肝組織病理結構改變。2.4 統計方法數據處理采用s表示，各組樣本均數間的比較采用單因素方

8、差分析（one way ANOVA）。3 結果3.1 對血清中ALT和AST含量的影響CCl4模型組與空白對照組比較，血清 ALT及AST均明顯增高(P0.01)。與CCl4模型組比較，CSA高、中、低劑量組均可明顯降低肝損傷小鼠血清ALT及AST活力。表1 巖黃連生物總堿對小鼠急性肝損傷血清中ALT，AST含量的影響（略）與空白對照組比較，P0.01；與模型組比較，*P0.01,*P0.05；n=103.2 對肝組織中MDA和SOD含量的影響CCl4模型組與空白對照組比較，肝組織中MDA含量明顯增高，SOD含量明顯降低（P0.01）。與CCl4模型組比較，CSA高、中、低劑量組均能明顯降低肝

9、損傷小鼠肝組織中MDA含量并能增高SOD的含量。表2 巖黃連生物總堿對小鼠急性肝損傷肝組織中MDA、SOD含量的影響（略）與空白對照組比較，P0.01；與模型組比較，*P0.01,*P0.05；n=103.3 對四氯化碳肝損傷小鼠肝臟病理組織的影響空白對照組小鼠肝臟外觀呈紅褐色,質地軟而富有彈性;在光鏡下可以觀察到肝小葉結構完整,細胞排列整齊,大小均勻,分界清楚，肝細胞索以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝竇清晰。模型組小鼠肝臟外觀體積增大,質脆,邊緣鈍而厚,表面呈黃褐色;鏡下可見肝小葉結構破壞,肝細胞普遍濁腫,出現以中央靜脈為中心的局灶性肝細胞變性、壞死和炎細胞浸潤。CSA高、中、低劑量組及聯苯

10、雙酯組小鼠較模型組肝損傷程度明顯減輕，鏡下可見CSA高劑量組和聯苯雙酯組肝小葉結構基本完整,細胞排列較整齊,只有少量的炎細胞浸潤,較模型組有明顯改善。CSA中、低劑量組較模型組也有所改善,但是不如高劑量組效果好。4 討論CCl4是一種毒性很強的化學物質,進入機體后,在肝臟內經肝細胞色素P450激活,生成三氯甲基自由基(CCl3 )和氯自由基(Cl),導致肝微粒體的脂質過氧化。由于脂質過氧化反應增強而抗氧化能力降低導致自由基增多,進而攻擊脂質細胞膜,引起肝細胞脂質過氧化性損傷,使肝細胞變性壞死,細胞內ALT,AST大量釋放6，7。自由基可引發多價不飽和脂肪酸過氧化而生成過氧化脂質（LPO），其最

11、終產物MDA可使蛋白質、核酸及脂類發生交聯，致生物膜發生變性，細胞突變、衰老或死亡。MDA不僅是反映脂質過氧化的敏感指標，還可間接反映出細胞損傷的程度。SOD是超氧陰離子自由基的清除劑，可抑制由自由基啟動的脂質過氧化反應。實驗結果表明，CSA能降低急性肝損傷小鼠肝組織中的MDA含量，升高SOD含量。提示CSA可能通過抗脂質過氧化，保護酶活性而提高肝細胞膜的穩定性，使肝細胞變性和壞死減輕，減少炎癥細胞浸潤。本實驗結果證明,CSA能顯著降低CCl4引起的急性肝損傷后血清中ALT和AST的水平,明顯減輕肝細胞的變性壞死和炎性浸潤等病理改變,同時還明顯降低肝組織MDA的含量,并且有效提高了SOD的活力。這些結果提示,CSA對CCl4所致小鼠急性肝損傷的保護作用,可能與其提高肝細胞抗氧化能力,對抗CCl4引起的膜脂質過氧化,促進肝細胞的再生和修復有關。更深入的作用機制有待進一步研究。【參考文獻】1 蔣水元，胡興華，趙瑞峰.巖黃連引種栽培研究J.廣西植物，2002，22(5)：4692 韋記清,蔣水元,蔣運水，等.藥用植物巖黃連研究概述J.廣西科學院學報,2006,22(2):108.3 孫寧玲，陸國才，袁伯俊，等.巖黃連研究進展J.中藥新藥與臨床藥理，2006，