1、1案例一 遺傳病的產(chǎn)前診斷2 產(chǎn)前診斷是在遺傳咨詢的基礎(chǔ)上，主要通過(guò)遺傳學(xué)檢測(cè)和影像學(xué)檢查，對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)胎兒進(jìn)行明確診斷，通過(guò)對(duì)患胎的選擇性流產(chǎn)達(dá)到胎兒選擇的目的，從而降低出生缺陷率，提高優(yōu)生質(zhì)量和人口素質(zhì)。產(chǎn)前診斷又稱(chēng)宮內(nèi)診斷。它是為了了解胎兒在子宮內(nèi)的健康情況，有無(wú)先天性畸形或遺傳病，用某些特殊檢查方法在子宮內(nèi)對(duì)胎兒進(jìn)行診斷，以便及早采取措施避免殘疾兒的出生，提高出生人口的素質(zhì)，是有生學(xué)的重要組成部分。3產(chǎn)前診斷對(duì)象 35歲以上的高齡孕婦； 夫婦雙方有一人為染色體畸變，或曾生育過(guò)染色體異?；純旱脑袐D； 曾生育過(guò)單基因遺傳病患兒的孕婦、已知或推測(cè)為AR或XR遺傳病攜帶者的孕婦夫婦； 夫婦之一有開(kāi)

2、放性神經(jīng)管畸形，或出生過(guò)這種畸形患兒的孕婦； 有原因不明的自然流產(chǎn)史、畸胎史、死胎及新生兒死亡史的孕婦； 具有遺傳病家族史又系近親婚配的孕婦； 夫婦之一有致畸因素接觸史的孕婦； 羊水過(guò)多、宮內(nèi)生長(zhǎng)發(fā)育遲緩或疑為嚴(yán)重宮內(nèi)感染的孕婦4產(chǎn)前診斷方法 1.X線檢查 2.超聲波檢查 3.胎兒鏡 4.羊膜穿刺術(shù) 5.絨毛吸取術(shù) 6.臍帶穿刺術(shù) 7.孕婦外周血分離胎兒細(xì)胞 8.植入前診斷 5一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握遺傳病的產(chǎn)前診斷過(guò)程，通過(guò)對(duì)21三體綜合征的診斷設(shè)計(jì)，培養(yǎng)運(yùn)用遺傳學(xué)現(xiàn)代技術(shù)解決醫(yī)學(xué)實(shí)際問(wèn)題的能力。6二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 1. 羊水中有一定數(shù)量胎兒脫落細(xì)胞，通過(guò)羊膜穿刺獲取羊水中的胎

3、兒細(xì)胞，經(jīng)體外培養(yǎng)后通過(guò)G顯帶實(shí)驗(yàn)進(jìn)行核型分析，判斷染色體是否畸形，診斷是否患有21三體綜合征。7 2. G顯帶是指以Giemsa染料染色后，使染色體顯帶的技術(shù)。Giemsa染料是由噻嗪和曙紅組成的，著色時(shí)DNA先于2個(gè)噻嗪分子結(jié)合，然后再與一個(gè)曙紅分子結(jié)合，形成沉淀物，而DNA的某些部位對(duì)染料不敏感，由此形成明暗相間的條帶。8三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑及器材三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑及器材 （1）器材：離心管，離心機(jī)，天平，37溫箱，載玻片，蓋玻片，恒溫水浴鍋，光學(xué)顯微鏡，標(biāo)本板，玻璃鉛筆，定時(shí)鐘，染色缸，直柄虹膜鑷，滴管。 （2）藥品：pH6.8 PBS，Giemsa，0.025%胰蛋白酶（取0.9%氯化

4、鈉100ml，加0.25%胰蛋白酶1ml）。9四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟取材體外細(xì)胞培養(yǎng)制片顯帶核型分析10取材取材 1、腹部備皮，排光膀胱，平臥位常規(guī)消毒后鋪無(wú)菌洞巾。 2、麻醉，一般不必需要，精神緊張者或可用普魯卡因或利多卡因麻醉。11取材取材 3、選擇穿刺部位，經(jīng)B超胎盤(pán)定位后避開(kāi)胎盤(pán)。 中期妊娠時(shí)，一般選擇在恥骨聯(lián)合上3橫指相當(dāng)于子宮下段處，于腹中線或其左右側(cè)旁，捫及囊樣感的部位做穿刺；也可于宮底與恥骨聯(lián)合連線中點(diǎn)或左右任何一側(cè)穿刺。 晚期妊娠時(shí)，先捫清胎先露，然后上推先露部，在先露部下方穿刺；也可在胎兒頸背部空隙處或胎兒肢體側(cè)空隙處穿刺。12取材取材 4、確定穿刺部位后，以2021號(hào)腰

5、椎穿刺針垂直刺入腹壁，通過(guò)腹壁及宮壁兩次阻力，當(dāng)有落空感時(shí)即進(jìn)入羊膜腔，抽出芯針，見(jiàn)羊水溢出，接上注射器，順利抽得清亮羊水，再次證實(shí)在羊膜腔內(nèi)后，可注射藥物。如欲做羊水檢查，則抽取羊水20ml立即送檢。 5、穿刺完畢后拔出穿刺針，局部壓迫5分鐘，穿刺部位敷以無(wú)菌紗布，膠布固定。13四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟取材體外細(xì)胞培養(yǎng)制片顯帶核型分析14細(xì)胞體外培養(yǎng)細(xì)胞體外培養(yǎng)15四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟取材體外細(xì)胞培養(yǎng)制片顯帶核型分析16制片制片17四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟取材體外細(xì)胞培養(yǎng)制片顯帶核型分析18顯帶顯帶 1、將制好的染色體標(biāo)本，置7275烤箱中烤片3h。 2、放入預(yù)溫至37的0.025%胰酶

6、溶液中（pH=7.27.4）消化1min左右，每次的作用時(shí)間并不完全相同，可先試一張片子，再根據(jù)顯帶效果調(diào)整胰酶作用時(shí)間。19顯帶顯帶 3、在Giemsa 染液中染色10min，自來(lái)水沖洗干凈，晾干后，即可閱片。 4、鏡檢：在顯微鏡高倍目鏡下檢查顯帶標(biāo)本，在染色體上若出現(xiàn)清晰的深淺相間的帶型，即為可取標(biāo)本，可供攝像分析20四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟取材體外細(xì)胞培養(yǎng)制片顯帶核型分析21核型分析核型分析 純 合 型22核型分析核型分析 易 位 型 23核型分析核型分析24五、注意事項(xiàng) （1）胰蛋白酶濃度和處理時(shí)間隨氣溫高低有所不同。一般規(guī)律是標(biāo)本存放時(shí)間越長(zhǎng)，在胰蛋白酶當(dāng)中處理時(shí)間越長(zhǎng)。太新鮮的標(biāo)本

7、，染色體會(huì)出現(xiàn)毛茸現(xiàn)象。片齡很長(zhǎng)的標(biāo)本往往會(huì)導(dǎo)致斑點(diǎn)狀的染色體。 （2）胰蛋白酶溫度：溫度越高，反應(yīng)的速度就越快，一般是室溫，但溫度必須穩(wěn)定至少20min。 （3）胰蛋白酶處理的時(shí)間：如果細(xì)胞呈紫藍(lán)色，說(shuō)明胰蛋白酶的作用時(shí)間不夠，如果細(xì)胞呈桃紅色，說(shuō)明作用時(shí)間剛好。25結(jié)果判斷結(jié)果判斷 (1)標(biāo)準(zhǔn)型標(biāo)準(zhǔn)型 占患者總數(shù)的92.5%，患兒體細(xì)胞染色體有47條，有一條額外的21號(hào)染色體，核型為47，XX（或XY）+21。其發(fā)生機(jī)制為親代（多為母親）的生殖細(xì)胞在減數(shù)分裂時(shí)染色體不分離所致。 26結(jié)果判斷結(jié)果判斷 (2)嵌合型嵌合型 僅占21-三體綜合征的2.5%-5%，是指受精卵在有絲分裂期間染色體不分離而導(dǎo)致的，因此只是部分而不是所有的細(xì)胞存在缺陷?；純后w內(nèi)含有正常和21-三體細(xì)胞二種細(xì)胞株，形成嵌合體，核型為46，XX（或XY）/47，XX（或XY）+21，其臨床表現(xiàn)隨正常細(xì)胞所占百分比而定。嵌合型的患兒的智商較其它兩型高，臨床并發(fā)癥的發(fā)生率也相對(duì)較少。 27結(jié)果判斷結(jié)果判斷 (3)易位型易位型 約占全部病例的2.5%5%，多為羅伯遜易位，即著絲粒融合，其額外的21號(hào)染色體長(zhǎng)臂易位到另一近端著絲粒染色體上。最常見(jiàn)為D/G易位，D組中以14號(hào)