1、嘌呤霉素Puromycin編碼品名規格單位北京華越洋生物GT001304-25mgGT001304-10ml嘌呤霉素（Puromycin）嘌呤霉素（Puromycin）25mg10ml瓶瓶嘌呤霉素Puromycin作用機制：嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑鏈霉菌（Streptomyces alboniger）發酵代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素，嘌呤霉素Puromycin通過抑制蛋白質合成而殺死革蘭氏陽性菌，各種動物和昆蟲細胞。嘌呤霉素Puromycin某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。嘌呤霉素Puromycin作為氨酰-tRNA分子3末端的類似物，能夠與核糖體的A位點結合并摻入到延伸的肽鏈

2、中。但是嘌呤霉素同A位點結合后，不會參與隨后的任何反應，從而導致蛋白質合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。 嘌呤霉素Puromycin抗性基因： 對嘌呤霉素的抗性取決于編碼嘌呤霉素N-乙酰轉移酶(PAC)的 Pac基因，遺傳工程研究使用的Pac基因分離自嘌呤霉素產生菌Streptomyces alboniger。 嘌呤霉素Puromycin最普遍應用：1）嘌呤霉素如今普遍應用于篩選和維持培養含Pac基因的哺乳動物穩定轉染細胞。嘌呤霉素在細胞穩轉株篩選中的普遍應用與慢病毒載體的特性有關，現在商業化的慢病毒載體多數都攜帶pac基因。2）在某些特定情況下，嘌呤霉素亦可以用來篩選轉

3、化攜帶pac基因質粒的大腸桿菌菌株。 化學特性：化學名稱：3 (a -Amino-p-methoxyhydro cinnamamido)- 3deoxy- N,Ndimethyladenosine·2HClCAS No.：58-58.2， 分子式：C22 H29 N7 O5 .2HCl， 分子量：544.43 g/mol純度：98%（HPLC）,易溶于水5-50mg/mL，-20度保存。嘌呤霉素Puromycin應用濃度：哺乳動物細胞的推薦使用濃度為1-10 g/mL，最佳濃度需要殺滅曲線來確定。LB瓊脂培養基篩選穩定轉化pac基因的大腸桿菌，使用濃度為125g/mL。使用嘌呤霉素篩

4、選大腸桿菌穩轉株需要精確的pH值調節，而且受宿主細胞本身的影響。嘌呤霉素Puromycin使用步驟：（哺乳動物細胞篩選）嘌呤霉素殺滅曲線的確定（shRNA穩定轉染細胞株，僅作參考）嘌呤霉素Puromycin為了篩選到穩定表達待研究shRNA的細胞株，確定殺死未轉染/轉導細胞的最低濃度嘌呤霉素至關重要。所以初次做實驗的客戶一定要建立適合自己體系的殺死曲線（kill curve） 。（1）24孔板內以58 x 104 cells/孔的密度鋪板，鋪足夠量的孔以進行后續的梯度實驗。細胞孵育過夜；（2）準備篩選培養基-含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養基（如0-15g/mL，至少5個梯度）；（3）細胞孵育過夜

5、后加入篩選培養基，孵育細胞；（4）約2-3天更換新鮮的篩選培養基；（5）每日監測細胞觀察存活細胞比例。嘌呤霉素的最佳作用時間一般在1-4天之間。（6）最小的抗生素使用濃度就是指從抗生素篩選開始1-4天內殺死所用細胞的最低篩選濃度。嘌呤霉素Puromycin篩選穩定轉染細胞（1）day 0：24孔板內以58 x 104 cells/孔的密度鋪板，孵育過夜；（2）制備篩選培養基：含有最佳篩選濃度嘌呤霉素（由殺滅曲線確定）的新鮮培養基；（3）day 1：篩選第一天，去除舊的培養基，加入一定量MOI的病毒顆粒；（加入無血清培養基的總量必須充分覆蓋住細胞。）（4）病毒轉導后約6-8h，再添加1ml完全培

6、養基（血清和雙抗，如果已經使用雙抗。）到細胞內，然后孵育過夜；（5）病毒轉導后48h，使用嘌呤霉素篩選培養基替換舊的完全培養基。孵育。（6）約每2-3天替換新鮮配制的篩選培養基；（7）每天檢測細胞并觀察活細胞生長比例，以及turboGFP表達的水平及所占比例。在某一個時間點幾乎所用存活細胞都可以表達TurboGFP。嘌呤霉素最佳的作用時間在3-10天之間。注：病毒的MOI越高，每個細胞含有的shRNA拷貝和嘌呤霉素耐性基因越多。在做嘌呤霉素篩選時，需記住越高MOI,含越多pac拷貝的細胞能耐受更高的嘌呤霉素濃度。調整嘌呤霉素的濃度去篩選預定量的轉導細胞，但是嘌呤霉素的量不能低于殺死曲線建立的最

7、低濃度。嘌呤霉素Puromycin儲存方法和穩定性：嘌呤霉素穩定性高，可以常溫運輸，收到產品后4存放；嘌呤霉素在室溫條件下可存放3個月，4條件下保質期一年。為了達到最理想的穩定狀態和最長的保質期，最好存放于-20°C，保質期為2年。嘌呤霉素Puromycin應用文獻： 1.為了說明Parp1基因和ADP核糖多聚體位于Dnmt1啟動子上和說明Parp1能夠保護自己的非甲基化狀態，向培養基中加入2g/mL的嘌呤霉素篩選穩轉株，質粒為 pBabe-puro（Addgene公司）；2.為了研究生化信號通路能夠在嘈雜的分子環境下傳遞信息，采用6ug/mL的puromycin進行細胞篩選。3.為

8、了研究IRP2（離子調控蛋白2）特定的73個氨基酸插入與該蛋白致瘤特性的關系，采用2µg/ml 的嘌呤霉素篩選穩定轉染的人H1299肺癌細胞系。4.為了證實在p53缺失的細胞中，被O-GlcNAc修飾的IKK的催化活性有所增強，使用了1g/ml的嘌呤霉素來篩選感染腺病毒（載體為pBabe HA-IKK wild type）的細胞。5.為研究跨膜交互作用在KAI1/CD82介導的對癌癥侵入和轉移的抑制作用中所發揮的角色，使用2g/ml的嘌呤霉素用于篩選穩定的Du145-sh2和-sh3轉導子，并用1g/ml的嘌呤霉素維持培養 （pSIREN-RetroQ 逆轉錄病毒轉染）。 6.為了研究Per1在調節肝臟對四氯二苯并-p-二惡英反應中的作用，使用了4g/ml的嘌呤霉素篩選穩定感染腺病毒的 Hepa1c1c7細胞，腺病毒載體為 pSilencer 5.1-U6 Retro Vector (Applied Biosystems/Ambion)。