1、利康保對斷奶仔豬生產性能、腸道菌群及免疫水平影響的研究       （四川農業大學） 摘要：選用72頭28±2日齡斷奶杜×長大三元雜交仔豬，隨機分為四個處理，每個處理三個重復，每一重復6頭豬(3、3)，自由采食和飲水。結果表明：日糧中添加低利康保對斷奶仔豬平均日增重(ADG)、腹瀉率有明顯的影響(P<0.05)；與對照組相比，添加利康保能極顯著的降低仔豬腸道大腸桿菌的濃度(P<0.01)，抑制其他病原菌的生長。所有的試驗組都能顯著(P<0.05)促進結腸、盲腸和直腸中雙歧桿菌的

2、增殖。不同利康保添加量對結腸中乳酸桿菌的增殖效果與對照組相比，差異不顯著(P>0.05)；但對盲腸、直腸乳酸桿菌的增殖效果不一致；與對照組相比，添加利康保沒有顯著提高血清豬瘟抗體效價、免疫球蛋白A以及免疫球蛋白M(P>0.05)，但是能顯著提高血清免疫球蛋白G的含量(P<0.05)。關鍵詞：利康保；斷奶仔豬；生長性能；抗體水平；腸道菌群 飼用抗生素的應用在帶給人們極大利益的同時, 它的濫用也給人類帶來了越來越大的麻煩：濫用抗生素會使細菌產生抗藥性、長期使用抗生素造成畜禽機體的免疫力下降，從而對疫苗的接種產生不良影響、長期用抗生素可引起畜禽內源性感染、會在畜產品和環境

3、中造成殘留。隨著微生態學理論的發展，人們發現腸道有益菌群如雙歧桿菌、乳酸桿菌等與宿主在免疫、營養、急性和慢性感染等方面都有密切的聯系。許多研究表明，利康保具有促進雙歧桿菌等動物體內有益菌增殖、抑制有害菌及減少腸內腐敗物質等多種生理性功能，從而從多方面改善宿主動物健康。本實驗研究的目的，主要是考察不同利康保添加水平對斷奶仔豬生產性能、腸道菌群、免疫水平的影響，找出利康保的最適添加量，為利康保在飼糧中的應用提供理論依據。1 材料和方法1.1 試驗品  試驗材料為重慶雨潤生物制品有限公司生產的利康保。1.2 試驗動物及分組  試驗選用72頭28±2日齡杜×長&

4、#215;大仔豬按照單因素4處理3重復隨機設計，各組基礎日糧相同。實驗從28日齡斷奶時開始，為期42天。具體分組情況如下：A基礎日糧+ 2金霉素預混劑2kg/t；B基礎日糧利康保4%；C基礎日糧5%利康保；D基礎日糧利康保6%；每個處理3個重復，每個重復6頭仔豬 (3、3)，A為對照組，B、C和D為試驗組。1.3 基礎日糧  試驗基礎日糧的配置參照中國瘦肉型豬飼養標準（GB847187），結合豬場實際情況設計而成，試驗日糧為粉料，飼料原料配比及營養水平見表1：表1    基礎日糧配比和主要營養水平原料配比（%）營養水平玉米Corn52消化能DE（MJ/k

5、g）15.41脂肪粉Fat3.0粗蛋白CP（%）21.04豆粕Soybean20.0賴氨酸Lys（%）1.35魚粉Fish meal7.0蛋氨酸+胱氨酸Met+Cys（%）0.85預混料Premix8.0鈣Ca（%）0.82  有效磷AP（%）0.63代乳粉Milk placer10.0  合計Total100.0飼料單價Cost：3.5元/千克預混料為每公斤全價料提供: VA5500IU, VD32200IU, VE50mg,VK32.2mg, VB1228 mg, 核黃素5.0mg, 硫胺素1.5mg, 尼克酸25mg, D-泛酸12mg, 膽酸80

6、0mg, Cu220mg, Fe110mg, Mn30mg, Zn160mg, I20.3mg, Se0.3mg, 賴氨酸1350mg, 蛋氨酸500mg。1.4 飼養管理  試驗于2005年3月10日至2005年4月22日在四川農大試驗豬場進行。試驗在同一保育舍內，用自動食槽，每日加料一次，準確記錄投料量，每天清洗豬欄2次，每周消毒一次，觀察試驗豬只生長、采食情況，記錄腹瀉頭數和死亡頭數，常規防疫。1.5 測定指標與方法 生產性能  試驗開始和試驗結束早飼前個體空腹稱重，以計算日增重，以欄為單位測定采食量，根據采食量及增重計算料重比。 腹瀉頻率  試驗開始后，每

7、日觀察仔豬排糞情況，記錄腹瀉個體和持續時間，最后以每重復仔豬發生腹瀉的頭日數除以總的飼養頭日數計算出腹瀉頻率。 腸道菌群  .1 取樣  試驗最后一天，每重復隨機挑取一頭健康仔豬進行屠宰，立即剖腹并結扎所取腸段的兩頭（分別為結腸、盲腸和直腸），用酒精棉球消毒各結扎口后，放入已滅菌塑料袋中，運回實驗室備用。.2 稀釋  樣品運回實驗室后，立即在超凈工作臺上稱取1.0g左右腸內容物于無菌試管中，加入先配好并已滅菌的稀釋液9ml，加入玻璃珠振蕩30秒鐘，此為10-1；靜置一段時間，吸取上清液1ml于盛有9ml稀釋液的試管中進行10-2稀釋，振搖34秒鐘，并依次進行10-

8、310-7倍稀釋。.3 接種與培養大腸桿菌  用微量取液器分別取結腸、盲腸和直腸內容物10-410-6稀釋液0.1ml涂布接種于麥康凱NO.3培養基平皿上（各稀釋度設3個重復，并編號），置37培養箱中有氧培養24小時后，選取粉紅色或紅色，表面光滑、凸起，邊緣整齊不透明，質地軟、粘，直徑1.03.0mm的菌落進行計數，并進一步作理化鑒定。乳酸桿菌  用微量取液器分別取結腸、盲腸和直腸內容物10-510-7稀釋液0.1ml涂布接種于Rogosa瓊脂培養基平皿上（各稀釋度設3個重復，并編號），置37培養箱中有氧培養48小時后，選取乳白色，稍偏黃，表面光滑、凸起，邊緣整齊不透明，質

9、地軟，直徑0.62.7mm的菌落進行計數，并進一步作理化鑒定。雙歧桿菌  用微量取液器分別取結腸、盲腸和直腸內容物10-510-7稀釋液0.1ml涂布接種于雙歧桿菌分離選擇性培養基（羅澤民，1995）平皿上（各稀釋度設3個重復，并編號），置37培養箱中厭氧培養48小時后，選取乳白色，表面光滑、凸起，邊緣整齊不透明，質地軟，直徑0.72.5mm的菌落進行計數，并進一步作理化鑒定。沙門氏菌  挑取各腸段的10-1稀釋液各一環于裝有氯化鎂孔雀綠增菌培養基的試管中進行增菌，37培養18小時以后，用微量取液器取0.1ml涂布接種于SS瓊脂培養基上，37培養24小時后進行菌落計數。1.

10、6 豬瘟抗體效價  在仔豬斷奶后的第21天皮下注射豬瘟弱毒活苗，并于注射前和注射后第14天前腔靜脈采血，取血清，采用正向間接血凝試驗測定豬瘟抗體效價。1.5 血清IgG、IgA、IgM  于試驗結束時，每重復隨機挑取1頭仔豬，前腔靜脈采血，用免疫比濁儀測定血清中IgG、IgA和IgM的含量。1.7 統計分析  試驗數據采用SPSS10.0統計軟件進行方差分析和鄧肯氏多重比較, 記錄平均值和標準差, 并檢查各處理間的差異是否達到顯著水平。2 結果與分析2.1 利康保對仔豬生長性能的影響  通過42d的飼養試驗，測定了利康保對斷奶仔豬ADG、ADFI、F/G

11、以及腹瀉頻率的影響，結果見表2. 表2   利康保對仔豬生長性能的影響項目A組B組C組D組始重（Initial BW）7.50±1.217.60±1.037.55±0.857.58±0.88末重（End BW）23.80±1.90a25.20±1.26a27.20±0.80b25.50±1.70a增重（Gain of BW）16.30±0.42a17.60±0.34a19.65±0.28b17.92±0.44a平均日增重（ADG）388±20a4

12、20±30b469±40c427±30b料重比（F/G）1.75:1±0.17a1.65:1±0.22a1.45:1±0.12b1.68:1±0.15a日采食量（ADFI）679±56.32a691±47.25a678±58.61a717±67.54b由表2可知： 增重與料重比性狀C組與其他各組差異顯著（P<0.05），平均日增重性狀差異極顯著（P<0.01），其比A、B、D組ADG分別提高17.27%，10.44%，8.96%； 同時B組提高斷奶仔豬日增重8.2%，D組提

13、高斷奶仔豬日增重10%。在料重比性狀上，C組與其他3組差異顯著（P<0.05），A、B、D之間差異不顯著。在日采食量性狀上，D組與其他3組差異顯著（P<0.05），A、B、C之間差異不顯著。表3  利康保對仔豬腹瀉的影響項目A組B組C組D組樣本數18181818腹瀉豬頭數1512615腹瀉豬飼養日2004828196試驗日數42424242腹瀉指數0.2646±0.02a0.0635±0.01b0.0370±0.02b0.2593±0.03a在腹瀉指數性狀上，B、C組都能顯著降低豬腹瀉發病率（P<0.05），B組降低斷奶仔豬腹

14、瀉發病率60.7%(絕對值)，降低腹瀉頻率77.88%。C組降低斷奶仔豬腹瀉發病率80.3%(絕對值)，降低腹瀉頻率90.3%。D組雖然降低斷奶仔豬腹瀉發病率5%(絕對值)，降低腹瀉頻率13.3%，但與對照組差異不顯著。由此可以看出，利康保6%的添加量可能過量，從而導致腹瀉。2.2利康保對斷奶仔豬腸道菌群的影響  利康保對斷奶仔豬腸道菌群的影響結果見表4。表4   利康保對斷奶仔豬腸道菌群的影響項目A組B組C組D組大腸桿菌E.coli    結腸Colon7.25±0.05 A6.15±0.01B6.19

15、±0.04B6.41±0.01C  盲腸Cecum  7.23±0.22A6.10±0.09B6.33±0.20C6.33±0.05C直腸Rectum7.20±0.01A6.22±0.11B6.43±0.07B6.46±0.32B雙歧桿菌Bifidobacterium    結腸Colon8.67±0.03 a8.65±0.18 a9.08±0.07 b9.04±0.16 b盲腸Cecum8.17

16、±0.07 a8.89±0.03 b8.73±0.07 b7.85±0.13 a直腸Rectum8.59±0.02 a8.94±0.09 a9.34±0.06 b9.37±0.06 b乳酸桿菌Lactic bacteria    結腸Colon8.24±0.198.65±0.148.30±0.048.21±0.11  盲腸Cecum8.18±0.05 a8.17±0.15 a8.67±0.02 b

17、8.87±0.10b直腸Rectum8.64±0.01b8.27±0.23 a8.44±0.02 a8.02±0.04 a2.2.1 利康保對大腸桿菌的影響   健康仔豬小腸中大腸桿菌一般為l05.9個，大腸中為107.1個。從表中可以看出，不同利康保添加量都能極顯著(P<0.01)抑制結腸、盲腸和直腸中大腸桿菌的增殖，B、C組的利康保添加量效果最好。在對照組中，由于金霉素主要對革蘭氏陽性菌有效，而大腸桿菌為革蘭氏陰性菌，因此其對大腸桿菌的抑制不明顯。2.2.2 利康保對雙歧桿菌的影響  據報道豬的結腸、盲腸

18、、直腸內定居的正常微生物群占優勢的菌群中，雙歧桿菌就是其一，每克腸內容物所含不同菌群的菌數對數值均達到8.0-8.5。從表中可以看出，不同利康保的添加量都能極顯著（P<0.01）抑制結腸、盲腸和直腸中大腸桿菌的增殖，C組的添加量效果更好。用遞增方式添加利康保能顯著（P<0.05）促進結腸、盲腸和直腸中雙歧桿菌的增殖。B組的利康保添加量能顯著（P<0.05）促進結腸和直腸中雙歧桿菌的增殖，但對盲腸中的雙歧桿菌的增殖效果不明顯。2.2.3 利康保對乳酸桿菌的影響  在健康動物消化道占優勢的乳酸桿菌其定植位置和數量是相對穩定的。在定植部位上，豬以盲腸和直腸定植最多，直腸為

19、每克內容物含108個。但也受種屬、年齡、飼料、疾病、藥物等而發生演替。從表中可以看出，B組和C組的利康保添加量能顯著提高盲腸中乳酸桿菌的濃度（P<0.05），但是在結腸和直腸中，不同利康保添加量對乳酸桿菌的增殖效果與對照組相比差異不顯著（P>0.05）。2.2.4 利康保對沙門氏菌的影響  本次試驗中無論是對照組還是試驗組，所取腸段內容物中均未檢出有沙門氏菌。2.3 利康保對斷奶仔豬豬瘟抗體效價的影響  本試驗發現，二免后第15天對照組豬瘟抗體效價沒有變化，各利康保組的豬瘟抗體效價普遍有所上升。表5  利康保對斷奶仔豬豬瘟抗體效價的影響項目A組B組C組

20、D組注射前3.34±1.133.68±0.563.35±0.573.01±0.0014天后3.34±0.564.01±1.003.01±0.003.68±0.562.4 利康保對斷奶仔豬血清中免疫球蛋白的影響  利康保對斷奶仔豬血清中免疫球蛋白的影響結果見表6。  表6    利康保對斷奶仔豬血清IgG，IgA，IgM的影響 項目A組B組C組D組免疫球蛋白G  IgG(g/l)1.19±0.08a1.58±0.08b

21、2.05±0.16d 1.89±0.07c免疫球蛋白A  IgA(g/l)0.49±0.150.60±0.340.77±0.510.53±0.13免疫球蛋白M  IgM(g/l)0.83±0.111.03±0.161.15±0.211.04±0.06          經顯著性檢驗，不同利康保添加量能顯著（P<0.05）提高斷奶仔豬血清中IgG的濃度，其中C、D組差異極顯

22、著（P<0.01）。對血清IgA和IgM也有提高的趨勢，但統計上差異不顯著（P>0.05）。 利康保對血清IgG的影響  從上表可以看出，不同利康保添加量能顯著提高斷奶仔豬血清IgG水平(P<0.05)，其中以C組效果最好。 利康保對血清IgA的影響  與對照組相比，B、C、D組的IgA都有所提高，以C組對其影響最大。 利康保對血清IgM的影響  從上表來看，以C組效果最好，B、C、D組均比對照組高，各組差異不顯著（P>0.05）。從以上分析可看出，利康保能提高斷奶仔豬血清抗體水平，以5%利康保組為最好。2.5 經濟效益分析  表

23、7顯示經濟效益分析情況，結果表明飼料中添加利康保可明顯提高經濟效益，C組平均每kg增重飼料成本比對照組節約了8%，而D組節約3%。由此可見，5%利康保組能夠顯著提高經濟效益，降低生產風險。表7  添加利康保對斷奶增重經濟效益的影響     kg, 元/kg項       目A組B組C組D組全期平均耗料量 Feed consumption22.3721.5624.2720.71相對耗料量 Relative feed consumption1009610892飼料單價 Feed price

24、1.922.082.002.05相對飼料單價 Relative feed price100108104106全期平均增重 Average gains12.3512.6215.0612.49相對增重Relative average gains100102121101增重飼料成果Feed cost/gain3.483.553.223.40相對成本Relative feed cost/gain10010292973 討論3.1 利康保對仔豬生產性能的影響  仔豬的生產性能較高時，其日糧中添加利康保對生產性能未見有影響；相反，仔豬的生產性能較差，處于惡劣環境或患病時，其日糧中添加利康保可進一

25、步改善仔豬生產性能。也就是說，低生產性能仔豬飼喂利康保更有利于其生產性能的改善。艾武(2002)指出這種反應模式與抗生素的相似，但反應程度低于抗生素。本次試驗是在管理嚴格的飼養場進行，選用28日齡斷奶仔豬作為試驗對象，這是與當地的飼養方式相一致的。與對照組相比，添加利康保對仔豬ADFI、F/G、ADG和腹瀉頻率都有所改善。其中對ADG和腹瀉頻率的影響大于對ADFI、F/G的影響。這種反應機制與抗生素的相一致。3.2 利康保的添加量對其使用效果的影響  試驗結果表明，不同水平利康保添加量對斷奶仔豬生產性能都有不同程度的改善。C組增重比對照組提高17.27%，比B、D組ADG分別提高10.44%，8.96%，這與Bolduan的結果是一致的；且C組的腹瀉頻率是最低的，這與設計該組的目的和斷奶仔豬大腸桿菌的排泄情況相符合。本試驗中