1、阿司匹林抗血小板凝集和抗血栓作用及機制研討設計成員：設計成員：研討背景研討背景阿司匹林: 解熱鎮痛抗炎藥； 對血小板聚集有抑制造用，阻止血 栓構成； 臨床可用于預防暫時性腦缺血發作、心肌堵塞、心房顫抖、人工心臟瓣膜、動靜脈瘺或其他手術后的血栓構成研討背景研討背景血栓：活動物機體在心臟或血管內某一部分因血液成分發生析出、凝集和凝固所構成的固體狀物質血栓構成的機理：心、血管內膜損傷血流形狀改動血液性質改動研討背景研討背景抗血栓藥分為：抗凝血藥、抗血小板聚集藥和溶血栓藥抗血小板聚集藥分為三代：阿司匹林為第一代，噻氯匹啶為第二代，血小板糖蛋白b/a受體拮抗劑為第三代。其中，血小板糖蛋白b/a受體拮抗劑

2、的問世是抗血小板治療中的一個重要里程碑。實驗目的實驗目的討論阿司匹林抗血小板的聚集和抗血栓作用及機制實驗資料實驗資料實驗動物：雄性實驗動物：雄性SDSD大鼠大鼠4040只只, ,體體重重200g200g左右左右實驗器材：微循環察看分析系實驗器材：微循環察看分析系統，冷光源，統，冷光源， ChronoLog 591ChronoLog 591全血血小板聚全血血小板聚集儀及配套設備，集儀及配套設備， TXB2 TXB2和和6-6-keto-PGF1keto-PGF1放射免疫分析測定放射免疫分析測定盒，低速離心機，聚苯乙烯離盒，低速離心機，聚苯乙烯離心管，一次性無菌塑料注射器，心管，一次性無菌塑料注射

3、器，溫浴槽，胃管，開口器溫浴槽，胃管，開口器實驗藥品：實驗藥品：0.25mg/ml0.25mg/ml二磷酸二磷酸腺苷腺苷ADPADP，3.8%3.8%枸椽酸鈉枸椽酸鈉( (檸檬酸鈉檸檬酸鈉), ),阿司匹林注射液，阿司匹林注射液，生理鹽水，孟加拉紅溶液，生理鹽水，孟加拉紅溶液，0.3%0.3%戊巴比妥鈉戊巴比妥鈉TXB2和和6-keto-PGF1放射放射免疫分析測定盒免疫分析測定盒ChronoLog 591全血血小板全血血小板聚集儀聚集儀實驗步驟實驗步驟復制血栓大鼠模型復制血栓大鼠模型尾部靜注孟加拉紅溶液尾部靜注孟加拉紅溶液15mg/kg15mg/kg；0.3%0.3%戊巴比妥鈉麻醉戊巴比妥鈉

4、麻醉60mg/kg60mg/kg；耳部平鋪，察看并記錄大鼠耳廓耳部平鋪，察看并記錄大鼠耳廓目的血管的血流形狀；目的血管的血流形狀；用波長為用波長為540nm540nm的冷光源照射大的冷光源照射大鼠耳廓目的血管，察看并記錄血鼠耳廓目的血管，察看并記錄血流形狀，以不同時間點血流速度流形狀，以不同時間點血流速度及血流完全停頓的時間作為評價及血流完全停頓的時間作為評價血栓構成的目的。血栓構成的目的。實驗步驟實驗步驟阿司匹林抗血小板聚集測定阿司匹林抗血小板聚集測定 1. 1. 分組及給藥分組及給藥 3030只只SDSD雄性大鼠稱重標志，雄性大鼠稱重標志，隨機分為隨機分為6 6組，每組組，每組5 5只只

5、2 2血小板聚集率測定血小板聚集率測定 取阿司匹林灌胃前自每組取阿司匹林灌胃前自每組大鼠腹腔取血大鼠腹腔取血0.5ml0.5ml測定血小板聚測定血小板聚集率集率 3 3TXB2TXB2、6-keto-PGF16-keto-PGF1測定測定原理原理 膜磷脂膜磷脂磷脂酶磷脂酶A2環氧酶環氧酶COX-1花生四烯酸花生四烯酸PGG2,PGH2PGG2,PGH2TXA2合成酶合成酶PGI2合成酶合成酶PGI2TXA2促進血小板聚集；促進血小板聚集；收縮血管收縮血管抑制血小板凝集抑制血小板凝集;擴張血管擴張血管TXB26-keto-PGF1aTXB2TXB2、6-keto-PGF16-keto-PGF1測

6、測定定在以上結果中找出阿司匹林抗凝效果最正確時劑量。取十只老鼠分兩組，a空白組，b治療組，按原方法復制大鼠模型。第一天，空腹靜脈抽血0.5ml，試管3500r/min離心20min，取上清液，放射免疫法測定TXB2、6-keto-PGF1程度。a組大鼠生理鹽水灌胃7d，按上面選出的最正確時劑量;b組大鼠阿司匹林注射液灌胃7d，按上面選出的最正確時劑量。第8天，按照上述方法反復測定TXB2、6-keto-PGF1程度。免疫組化免疫組化SPSP法測定法測定COXCOX一一1 1在血小板中在血小板中表達表達 空腹，腹腔靜脈采血空腹，腹腔靜脈采血5 mL5 mL； 離心分別富血小板血漿；離心分別富血小

7、板血漿； 血小板制片血小板制片 SPSP染色染色 光鏡下結果判別：血小板染色呈棕褐光鏡下結果判別：血小板染色呈棕褐色或棕黃色為陽性色或棕黃色為陽性(cox-1(cox-1的定位的定位) )，每，每張切片高倍鏡下隨機取張切片高倍鏡下隨機取5 5個視野，經圖個視野，經圖像分析儀進展定量吸光度掃描，求其像分析儀進展定量吸光度掃描，求其陽性信號平均吸光度值。陽性信號平均吸光度值。察看記錄察看記錄阿司匹林抗血小板作用凝集率阿司匹林抗血小板作用凝集率組別組別 灌胃前灌胃前 灌胃后灌胃后minmin123450察看記錄察看記錄治療前后治療前后TXB2，6-keto-PGF2含量比較含量比較組別組別AB TX

8、B2 6-keto-PGF2 TXB2 6-keto-PGF2 治療前治療前 治療后治療后 治療前治療前 治療后治療后組別組別對照組對照組低凝組低凝組中凝組中凝組高凝組高凝組 吸光度值吸光度值 1 2 3 4 5 平均值平均值COX-1蛋白染色后吸光度測定值記錄表蛋白染色后吸光度測定值記錄表預期結果預期結果血小板聚集率的測定中，對照組的血小板聚集率的測定中，對照組的聚集率最大，實驗組都不同程度地聚集率最大，實驗組都不同程度地降低；降低；TXB2TXB2明顯下降，明顯下降，6-keto-PGF1a6-keto-PGF1a細細微下降；微下降；各組血小板各組血小板COXCOX一一1 1表達程度表達程度( (即吸即吸光度值光度值) )大小不一，其中對照組吸大小不一，其中對照組吸光度最小、其他三組吸光度值隨所光度最小、其他三組吸光度值隨所測血小板凝聚率值的增大而增大測血小板凝聚率值的增大而增大預期結論預期結論阿司匹林具有抗血小板凝集作用；阿司匹林具有抗血小板凝集作用；阿司