1、質量控制相關定義l質量控制：滿足質量要求的操作技術和活動。l質量保證：為了滿足實驗室質量要求 ，制定相應的計劃，實施證明（記錄）所進行的一系列的系統活動l外部質量控制：通過互相校準和/或檢驗對實驗室的操作和結果所進行的控制l內部質量控制：實驗室內部采取的以對比分析、跟蹤以及相關方法，對實驗室工作的連續性控制計劃。l質量手冊：是描述質量系統元素的文件或文件的集合。 實驗室要求l組織：按國家實驗室認可的概念，是指一個能夠承擔法律責任的實體。這里所指的是實驗室（微檢室）內建立的質量管理的保證體系。l人員l房屋 滿足檢測工作需要。l設備人員要求l實驗室人員的分類：管理人員、技術人員、技術支持人員等。l

2、相應崗位的人員，應具備相應的技術能力，相應的技術能力證明（證書及證件）。l微生物檢驗室因有相應技術能力的人負責室內的技術工作。并設立質量監督員。房屋條件要求l房屋要求：具有適宜、足夠寬敞、通風有良好的照明。l房屋內墻面及地等應采用易于清潔的材料，保持房間清潔。l房間的設置，以其開展的工作內容加以分用，設立專用房間。l房間的大小還應根據從事實驗人員的進入數量上加以考慮。環境設施要求l專用房間的溫濕度控制與記錄（樣品存放室）l特殊環境的微生物指標控制與記錄（無菌室等）l專用工作室的標準操作規程和定期的檢測校準程序。（潔凈室等）l特殊環境中的專用設施質量控制應符合有關要求（凈化工作臺）環境設施的相關

3、技術指標l凈化室、凈化工作區域、潔凈環境按國家及部頒標準進行檢測。l空氣潔凈度指標：l檢測頻率及檢測方法。一次/月；空氣細菌檢測（沉降法）。級別0.5m塵粒(個/L)5m塵粒(個/L)活菌顆粒平均數(cfu/平板)1003.50.01.010000350.02.53.0設備/儀器要求總則l滿足開展相關檢測項目的要求。l制定相關設備/儀器的作業指導書。l設備/儀器的檢定校準，特別室新購儀器的檢定。設備/儀器分別以送檢、送校、自檢、自校表示其所檢定的狀態。l設備/儀器的運行檢查計劃。l設備/儀器的運行狀況及適用記錄l維修后設備/儀器的再校準或檢查，并具有完整的檢查記錄。設備控制和程序l微生物檢驗常

4、用需監控的設備和儀器l1培養箱（生化培養箱或CO2培養箱等）、干燥箱、高壓滅菌鍋、凈化工作臺、pH計、 冰箱，（低溫冰箱或冷柜）溫度計、紫外燈、顯微鏡、離心機、天平、。l2小計量容器l3微生物測定儀器、微生物檢定儀器、空氣采樣器、酶標儀專用等。溫度計l實驗室必須要有工作溫度計和參照溫度計。l工作溫度計：用于日常溫度檢查。l參照溫度計：用于校正工作的溫度計。l溫度計運行檢查：一般可采用一次/半年的運行檢查。l日常檢查、校準檢查、運行檢查等都應做好相應的技術記錄。培養箱、水浴箱和冰箱的溫度控制l根據培養物性質及溫度要求，培養箱應分別設置（以用途和溫度分）l培養箱的溫差要求，一般顯示值與實測值相差不

5、大于1，箱體內各點溫差（內部的溫度均衡性）以及溫度波動同樣不大于1。l溫度監控方法：可將工作溫度計置甘油中，放入待測箱體內，觀察工作溫度計的溫度，最好1-2次/天監控記錄，高壓滅菌鍋的溫度控制（一）l高壓滅菌鍋；生物指示菌法（常用）、化學變色紙片及高壓滅菌鍋溫度計等方法進行檢測。l生物指示菌法是一種高壓滅菌鍋的效果顯示法。l高壓滅菌鍋由專人按作業指導書操作，并做好每一次的作業記錄。l高壓滅菌鍋使用時，內置物品不能太多，單位體積內的內容物（每瓶內的培養基）不能太多。同時應注意內容物不同耐受溫度。總的暴露時間最好不要超過45min。高壓滅菌鍋的溫度控制（二）l高壓滅菌鍋日常工作記錄應包含以下信息：

6、高壓滅菌的材料、開始時間、壓力/溫度、取出時間、高壓滅菌膠帶的顏色變化（日常常用無菌培養代替）l高壓滅菌鍋溫度波動范圍：110，115和1212。l高壓滅菌鍋校準周期一般在半年。干燥滅菌箱溫度控制l干燥滅菌箱日常工作記錄中應包括以下信息：開始的時間、到達滅菌溫度時的時間、取出的時間（或關閉時間）。l干燥滅菌箱的溫度校準；用參考溫度計進行溫度測試。l干燥滅菌箱溫度要求與精確度：1605 或180 5 。前者為滅菌2h，后者為30min。l干燥滅菌箱校準時間一般為一年。培養基配制用蒸餾水的控制l對于蒸餾水器來說：按設備說明，定期清潔離子交換器和更換離子交換材料。l檢測要求：西歐標準為微生物檢驗用蒸

7、餾水的特定電導率0.5ms/m；細菌數50cfu/ml。我們日常用的標準為 10ms/m，未見有細菌指標。l檢測頻率：1次/每月。l蒸餾水定點供應，并做好相應的質量控制，記錄檢測結果。天平的管理l天平放置要求：無振動、無氣流影響及水平臺面上。l天平要有使用及運行檢查記錄。l天平作為計量儀器是列入國家強制檢定的范圍，一般1次/年進行檢定。l運行檢查頻率按運行計劃或按產品（天平生產廠家）給出的標準重量單位進行對照。容積的控制（一）l通過一定的控制方法，保證高壓滅菌后的稀釋劑滿足標準用量。l采取稱中法來測定蒸發量，體積100ml的稀釋劑起重量為101g。高壓夠體積偏差不得超過1%。l采取先高壓后定量

8、分裝，可避免因高壓造成的體積誤差。l對保存的定量液體應在使用時，注意補充容積。容積的控制（二）l吸管的控制：通過小計量容器校準，后使用。l小計量容器吸管、容量瓶、量筒等玻璃器皿，校準周期一般為1-2次/一年。l小計量容器日常使用檢查可每周進行一次，包括容器的完整性。并做好相應的記錄。pH計lpH計使用前應用標準液進行校準。l緩沖液使用有效期：PH4.00 約1年 l PH7.00 約6個月l pH9.00 約6個月lpH計的維護：電極外表的定期清洗；l 電極敏感性檢測及極性恢復。凈化工作臺的控制l水平流凈化工作臺工作區域，要求潔凈度為100級。空氣沉降30min，細菌數1個/皿。垂直流凈化工作

9、臺，細菌數0.49個/皿.l凈化工作臺運行檢查頻次：1次/月主要是細菌沉降檢測。l凈化工作臺高效過濾膜一般為一年更換一次，并同時進行粒子與細菌沉降檢測。紫外線燈的控制l檢測方法：儀器測試法和生物測試法。前者是通過專用儀器檢測紫外燈管發射的紫外光強度。國家消毒技術規范中表明在距離照射無1米處，要求其強度為90。l生物測試法：采用一定的菌培養物，經一定比例稀釋，菌量控制在200-250個/0.5ml，涂布平板在紫外燈光下照射，2min，同時設置普通光源的對照組，后置3748h，計算其殺滅率。要求殺滅率達99%。顯微鏡的控制l顯微鏡應制定作業指導書，日常維護記錄及自校記錄。l顯微鏡應置于無振動，避免

10、灰塵，防潮等要求的環境。其它微生物檢測專用儀器的控制l細菌鑒定儀、酶標儀等設備，工作中常用陽性對照檢測其功能的正常性。l儀器的檢定則按有關的部門檢定或按自校作業指導書進行。l儀器的使用登記、校準計劃、校準記錄等文件存檔。l儀器專人使用、操作者應取得相應的崗位培訓合格，持證上崗。培養基質量控制l正確進行培養基質量控制，并作為一項經常性的工作，建立完整的檢驗資料，是實驗室今后通過相應級別的認證，在整個檢驗質量控制體系中所必須具備的文件資料。 l現有的依據：衛生部1993年發布的食品檢驗用干燥培養基生產質量控制。但這個標準不完善。培養基的分類l按其成分分類按其成分分類：有天然培養基和合成培養基。l按

11、用途分類按用途分類：基礎培養基、增菌培養基、選擇性培養基、鑒別培養基及厭氧培養基。按培養基的形態分類按培養基的形態分類：液體培養基、流體培養基、半固體培養基及固體培養基。l根據培養基的劑型不同分類根據培養基的劑型不同分類：新鮮配制培養基和干燥培養基兩種。檢驗中常用的培養基l水質檢測用培養基：7種l化妝品檢驗用培養基 ：8種l食品檢驗用培養基 ：常用的有3 7 種，110種被列入了GB4789中，其中生化試驗培養基23種，一般和專用培養基89種。l食品、化妝品及涉水產品等產品微生物檢驗常規項目中所用的增菌分離培養基有所不同，對于菌種鑒定所用的培養基，各類產品分離的菌種其鑒定所用的培養基基本相同。

12、l 常用培養基的質量控制常用培養基的質量控制 （一）l檢驗項目與方法檢驗項目與方法：對新批號的干燥培養基物理、化學及生物學指標鑒定lA：感官（外觀）研細程度和顏色（溶解前后），透明度，雜質等；lB：PH測定，按各種培養基要求的PH0.2，蒸餾水的PH應在6.4-7.0之間。lC：生物學指標檢定，被檢培養基相應細菌生長率測試；菌落大小及特征的檢測。常用培養基的質量控制常用培養基的質量控制 （二）l生長率測試：生長率測試：適用與液體和固體培養基：將菌培養液，用生理鹽水做倍比稀釋，取合適稀釋度進行平板計數或接種被檢的培養基試管，同時以按相關的培養基國標配方新鮮配制的培養基進行對照。不低與10%。常用

13、培養基的質量控制常用培養基的質量控制 （三）l菌落大小測試：劃線分離測試菌，取10個菌落測量直徑大小，其直徑均值與新鮮配制的培養基無統計學差異。常用培養基檢定用標準菌株常用培養基檢定用標準菌株 甲型副傷寒沙門菌50002 傷寒沙門菌 50096 乙型副傷寒沙門茵 鴨沙門茵50083 鼠傷寒沙門氏菌 痢疾志賀菌1型5157Ol福氏志賀菌2 大腸埃希菌25922（ATCC）金黃色葡萄球菌25923（ATCC 普通變形桿菌肺炎克雷伯菌肺炎亞種 弗勞地枸櫞酸桿菌4197l綠膿桿菌27853（ATCC） 副溶血性弧菌常用培養基質量標準常用培養基質量標準 l外觀和理化標準：l干粉顏色：淡黃色粉末或呈現本培

14、養基特有的顏色l溶解后培養基色澤：清晰透明（含瓊脂除外）淡黃色或特有的色澤；l滅菌后的培養基PH：7.22為多；個別弧菌檢驗用培養基pH值偏高為：8.0 2l生物學指標：菌落特征及菌落大小 。培養基保存環境培養基保存環境l制成的培養基保存環境為4冰箱，如制成平板則用塑料袋包裝置冰箱保存， l干燥培養基干粉含有活性物質、遇熱易分解的物質應仔細查看存放條件，多數也須放在2-8 條件保存。l有的培養基則以存放于10-15 條件為易。如含有高濃度膽鹽的培養基。養基制備控制程序養基制備控制程序 l培養基配制所用的儀器設備培養基配制所用的儀器設備必須經過相應的鑒定 。l配制培養基所用的用具及容器配制培養基

15、所用的用具及容器必須是清潔或是滅菌的，一些特殊不易洗刷清潔的玻璃器皿，必要時可用重鉻酸鉀硫酸清潔浸泡后，取出置5%氫氧化鈉溶液浸泡數分鐘，再用3%鹽酸溶液進行中和，然后用清水沖洗，烘干后備用。 l培養基配制原料，試劑質量控制 培養基的配制程序（一） l不同的培養基配制的程序有所不同，但一般培養基配制程序主要有以下7個步驟、調配、融化、矯正pH、澄清過濾、分裝、滅菌及鑒定 。l注意點：配制時注意各類成分的用途。lpH測定干燥培養基在工廠生產時，對培養基PH進行了一定的調試，在實際工作中，由于配制的環境、配制所用的溶劑（蒸餾水）PH等條件有所不同，都會對所用的培養基PH要有所影響。因此對于干燥培養

16、基配制，同樣需要進行PH測驗。培養基的配制程序（二）l配制好的培養基（尤其是糖發酵管）不宜久放。，因為培養培養基吸收空氣中的二氧化碳，會使培養基變酸，從而影響細菌的生長。l培養基中的抑制劑及指示劑一定要精確稱量，抑制劑要注意合理配伍。培養基主要原料的質量控制， l 配制培養基的主要原料有蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、膽鹽、無機鹽和瓊脂等，這些主要原料的有劣，直接影響到培養基的質量，由此也將影響檢驗質量。l指標有感官、理化、物理、生物學。培養基相關試劑的質量控制 l培養基相關試劑的質量控制及陰、陽性對照菌株試驗。對做生化反應的各類試劑，在配就后均應進行各項必要的鑒定。用已知陰、陽性菌株進行對照試驗

17、。對于其它如氧化酶、觸酶、染色液等也同樣需要經鑒定后用于試驗。 不合格培養基可能的原因（一）不合格培養基可能的原因（一）l干燥培養基結塊干燥培養基結塊ll 培養基過于陳舊ll 培養基處于潮濕環境中ll 培養基生產時水分過高lPH偏離規定值偏離規定值ll 培養基過于陳舊ll 配制時所使用的蒸餾水非中性ll 培養基過度滅菌不合格培養基可能的原因（二）不合格培養基可能的原因（二）l培養基不清澈培養基不清澈ll 使用了劣質水ll 培養基PH值不對ll 使用了不同的容器制備ll 生產原料精度不夠ll 培養基過度滅菌l凝固溫度過高凝固溫度過高ll 培養基干粉用的太多ll 瓊脂質量發生了變化不合格培養基可能

18、的原因（三）不合格培養基可能的原因（三）l凝膠強度過低凝膠強度過低ll 培養基干粉用的太少ll 培養基未完全溶解ll 培養基過度滅菌ll 傾注前未振搖培養基瓶ll 瓊脂粉凝固強度較低l顏色不對顏色不對ll PH不正確（帶指示劑的培養基）ll 培養基過度滅菌ll 使用了不潔的容器制備不合格培養基可能的原因（四）不合格培養基可能的原因（四）l培養基被污染培養基被污染ll 培養基滅菌不徹底ll 滅菌后存放不當而污染ll 實驗時使用了污染的器皿l生長不良生長不良ll 可能由制備容器設備、水或樣品帶入抑制物ll 樣品中含有亞致死性損傷的微生物ll PH不正確ll 添加物（抑制劑）等濃度不當ll 培養基過

19、度滅菌ll 實驗時培養基或溶解樣品時溫度過高不合格培養基可能的原因（五）不合格培養基可能的原因（五）l過分生長過分生長ll 培養基過度滅菌，選擇性物質受到了破壞ll 添加物濃度不當l菌落蔓延菌落蔓延ll 瓊脂表面過濕ll 使用了過多的接種體積ll 培養基過度滅菌l非典型生長非典型生長ll 培養基制備不當ll 干燥培養基存放陳舊ll 制備成的培養基存放時間過長ll 生長條件不當（溫度、時間、氣體）檢測質量保證檢測質量保證 l定期使用有證標準物質和次級標準物質（參考物質）進行內部質量控制。l實驗室間的比對或能力驗證l利用相同或不同方法進行重復檢測l對留存的樣品進行在檢測。微生物檢驗質控方法微生物檢

20、驗質控方法 （一）l菌落計數精密度控制直接計數菌落計數精密度控制直接計數l選擇同一標本，要求檢驗人員進行菌落計數。l將大腸菌（25922）或經檢定標化的菌片，通過合適的梯度稀釋，選擇合適的稀釋度進行菌落計數實驗操作。361培養24h進行菌落計數。微生物檢驗質控方法（二）l菌落計數精密度控制重復計數法l選擇十個平板，每個平板具有合適的菌落數（100以內）。將平板編號，由實驗人員進行計數并記錄結果。去掉平板編號，將平板置冰箱保存過夜，次日取出，重新給予編號，由實驗人員重復計數并記錄。計算每位實驗人員每對結果的平均數（X）。X=（a+b）/2；相對誤差（rd）計算：rd=|a+b|/X100%。其它

21、實驗人員間的相對誤差范圍計算：先計算所有實驗人員的平均菌落數，X=x/n，要求每一結果均應在X18.2%范圍內。重復計數要求l自身同一平皿重復計數誤差 小于7.7%l實驗人員之間同一平皿重復計數誤差 18 .2%自身同一梯度平行加樣兩皿間相對誤 小于7.7%實驗人員之間同一梯度計數誤差X18 .2%范圍l不同梯度間菌落計數最終誤差 小于7.7%菌種鑒定質控菌種鑒定質控l菌種鑒定質控要求，對所給的微生物菌種，按有關的方法及指標進行生化、血清等方面的鑒定。l鑒定質量評價：鑒定程序是否正確；鑒定方法是否正確；具體操作技術是否熟練，結果報告是否正確。每一項設立分值為25分。總分為100分。內部質量控制的推薦頻率l菌落計數精密度控制： 1次/3月；l菌種鑒定控制： 1次/半年或1年l盲樣測定丟失的對照 1次/半年實驗室安全防護實驗室安全防護1 l培訓與告之培訓與告之l實驗室管理人員及實驗人員必須了解相關工作有關的危險。對招收新職工、工作開始發生變化或使用新方法，啟用新的設備時，這點尤為重要。所有工作人員，包括清潔和服務人員都要知道。需要進行口頭和書面兩種方式的通知。有關儀器必須要有