1、脊髓灰質炎診斷標準及處理原則GB 163941996 前 言脊髓灰質炎是由脊髓灰質炎病毒引起的急性腸道傳染病，臨床表現主要為急性弛緩性麻痹，一部分病例可能有永久性的肢體麻痹。世界衛生大會通過要求在2000年全球消滅脊髓灰質炎。診斷標準和處理原則的制定，不僅關系到病例的正確診斷、疫情的統計、病人的處理和疾病的預防對策，而且關系到該地區是否已經實現了消滅脊髓灰質炎的目標。我國目前從病例報告數和環境中野毒循環的分布范圍看，已經進入了消滅此病的后期階段，為此應有一個統一的與國際接軌的診斷標準和處理原則。本標準參考國際標準結合國內情況而制定。本標準由中華人民共和國衛生部提出。本標準負責起草單位：中國預防

2、醫學科學院病毒學研究所。本標準主要起草人：張禮璧。本標準由衛生部委托技術歸口單位衛生部傳染病監督管理辦公室負責解釋。1 范圍本標準規定了脊髓灰質炎的診斷標準和處理原則。本標準適用于全國各級醫療、衛生、防疫機構和人員對脊髓灰質炎的診斷、報告和處理。2 診斷原則脊髓灰質炎的診斷必須根據病史、臨床癥狀、體檢及實驗室檢查等進行綜合分析，作出診斷。2.1 病史應注意流行病史及接觸史。2.2 體檢應作全面的體格檢查，注意全身癥狀，四肢活動及肌力、肌張力、腱反射等體征，必要時作神經系統及其他系統的全面檢查。2.3 實驗室檢查3 診斷標準3.1 疑似病例病因不明的任何急性弛緩性麻痹(AFP)，包括15歲以下臨

3、床初步診斷為格林巴利綜合征的病例3.2 脊髓灰質炎臨床符合病例和脊髓灰質炎野病毒確診病例與確診的脊髓灰質炎病人有接觸史，經過235d(一般為714d)的潛伏期；或接觸史不明顯，有如下臨床癥狀者。 3.2，2.4 疑似病人60d后失訪。腦脊液為2004001)。3.3 排除病例a)格林巴利綜合征(經臨床或/與腦脊液蛋白與細胞檢測明確診斷)；b)有病毒分離或血清學依據確診為其他腸道病毒感染；c)橫斷性脊髓炎；d)創傷性神經炎；e)其他疾病(應注明診斷的病名和依據)。3.4 疫苗相關病例發生率極低，且往往見于免疫功能低下之兒童。服用活疫苗(多見于首劑服苗)后435d內發熱，640d出現急性弛緩性麻痹

4、，無明顯感覺喪失，臨床診斷符合脊髓灰質炎。麻痹后未再服用脊髓灰質炎活疫苗，從糞便標本只分離到脊髓灰質炎疫苗株病毒者。如有血清學檢測脊髓灰質炎IgM抗體陽性，或中和抗體或IgG抗體有4倍增高并與分離的疫苗株病毒型別一致者，則診斷依據更為充分。與服活疫苗者在服苗后35d內有密切接觸史，接觸660d后出現急性弛緩性麻痹，符合脊髓灰質炎的臨床診斷。麻痹后未再服脊髓灰質炎活疫苗，糞便中只分離到脊髓灰質炎疫苗株病毒者，如有血清學特異性IgM抗體陽性或IgG抗體(或中和抗體)4倍以上升高并與分離的疫苗株病毒型別相一致者則診斷依據更為充分。4 處理原則4.1 傳染病報告與調查以下)送省級實驗室作病毒分離。有條

5、件者應盡量同時收集血液或腦脊液作出快速診斷。4.2 免疫預防4.3 病人的隔離與治療4.4 自然環境中野病毒的檢測附錄A(標準的附錄)病毒的分離與定型A1 標本的采集、運送糞便是分離脊髓灰質炎病毒的主要標本，由于脊髓灰質炎病人糞便排出病毒主要是在麻痹前期和麻痹后二周內，排毒呈間歇性，故標本的采集應在病人麻痹后14d內采集二份糞便，二次采集的間隔為2448h，每份標本量58g。由于病毒對熱和對紫外線的不穩定性，因此采集的糞便應放在無菌的干凈容器內，4以下冷藏保存和帶冰運送，采集后應按規定貼好標簽，一周內送到指定的實驗室進行病毒分離。A2 病毒的分離A2.1 將糞便標本的半量(4g)放入含有小玻璃

6、珠的50mL耐三氯甲烷塑料(帶蓋)離心管中，加含1/10三氯甲烷的pH7.0的磷酸緩沖液(或1/10三氯甲烷的Hanks液)，擰緊蓋后用力振蕩10min，制成20的糞便懸液。A2.2 3000r/min，離心沉淀30min，無菌法吸出不含三氯甲烷的懸液層，一部分接種細胞，一部分保存于30中備用。A2.3 將標本懸液接種到生長良好并剛成片的Hep2細胞和RD細胞管，每種細胞至少接種2管，每管加0.1mL懸液，并加0.9mL含2牛血清的Eagles液(pH7.2，內含青霉素100單位/mL，鏈霉素100g/mL)，另留二管正常細胞不加病毒只加1mL2牛血清的Eagles液作為正常對照。A2.4 試

7、管放3637C傾斜5°靜置培養。A2.5 每天在顯微鏡下觀察試管中的細胞病變，至少觀察1014d，當出現“”時(即75100病變時)將試管凍存于20以下，備作病毒定型和型內鑒別應用。A2.6 如第一代培養不出現細胞病變，則培養10d后將細胞凍化三次，取其懸液0.1mL再接種到同樣的細胞管，進行盲目傳代(接種和培養方法同第一代)，逐日觀察細胞病變，如陽性則凍存備用，如14d仍為陰性則作為病毒分離陰性。A3 病毒的鑒定和定型A3.1 準備4份組合的脊髓灰質炎病毒標準抗血清，各組的組合如下：1)組合抗1，2，3型3個型的血清，每型血清在0.05mL內含20個單位的中和抗體；2)組合抗1和2

8、型血清，每型血清在0.05mL內含20個單位的中和抗體；3)組合抗1和3型血清，每型血清在0.05mL內含20個單位的中和抗體；4)組合抗2和3型血清，每型血清在0.05mL內含20個單位的中和抗體。A3.2 4份組合血清，每份用1個吸頭吸0.05mL加到96孔微量板的指定各個孔里，如圖A1，每組4孔，另4孔只加0.05mL維持液。A3.3 用維持液將分離株的病毒分別稀釋成10(上標始)3(上標終)和10(上標始)4(上標終)。A3.4 加0.05mL10(上標始)3(上標終)病毒液于已加混合抗血清的孔內4組，每組只加2孔，另2孔則各加10(上標始)4(上標終)病毒懸液。A3.6 同時在E至H

9、排分別做病毒分離株的滴定，每滴度加4孔，從10(上標始)8(上標終)加起至10(上標始)3(上標終)。A3.7 充分振蕩，混合后放37 30min，于96孔板的每孔中各加0.1mL細胞懸液，含細胞10(上標始)4(上標終)/0.1mL。A3.8加蓋后再搖勻并放37二氧化碳孵箱培養，逐日觀察每孔的細胞病變，至少觀察710d。A3.9結果的判定如下：表A1A4 野毒株與疫苗株的鑒別目前國際上采用的方法有：1)單克隆組合抗體中和試驗；2)疫苗株核酸探針雜交試驗；3)多聚酶鏈擴增試驗；4)多聚酶鏈擴增后內切酶切割電泳分析；5)核酸序列分析；6)ELISA法型內差異檢測。按國際規定只有被指定的國家級實驗

10、室或地區參考實驗室和世界衛生組織總部參考實驗室的結果才被認可，故方法從略。附錄B(標準的附錄)特異性IgM抗體測定脊髓灰質炎病毒感染機體，IgM抗體的免疫應答反應最早在感染后1015d即可被捕捉ELISA法檢測到。一般持續一個月后消失。在疑似脊髓灰質炎病人血液中，尤其是腦脊液中查到IgM抗體有助于本病的診斷，由于方法簡便，而且可以分型診斷，一般在2d內即可得到結果，故是一種早期快速特異診斷的方法。早期確診有利于爭取時間采取防治應急措施。但目前所測的IgM抗體不能區別疫苗株和野毒株，故IgM陽性的意義，只有在明確近期無服苗的情況下才能應用。但從腦脊液中查到特異性IgM抗體，如血腦屏障正常，則即可

11、結合病史診斷為疫苗相關病例或為野毒病例。在AFP病人因故未收集到合格的糞便標本如在麻痹一月內血液IgM抗體陰性有助于排除診斷。B1 捕捉法ELIsA法檢測IgM抗體B1.1 加0.1mL抗人IgM鏈抗體于塑料微孔板，37過夜。B1.2 倒掉液體，不洗，用10牛血清的0.05吐溫(Tween20)生理鹽水0.2mL封閉每孔，放于37。B1.3 1h后倒去上述牛血清封閉液加1100稀釋的待測病人血清(或1：2稀釋的待測病人腦脊液)，37C作用1.52h。B1.4 倒出待測血清(或腦脊液)，用0.05吐溫生理鹽水液洗三次，然后分別于上述孔內分別加已知1型、2型和3型的脊髓灰質炎抗原，每型加2孔，每孔0.1mL，置4過夜。B1.5 吸出抗原，洗3次后，各相應孔加已知對應的抗血清(即加1型病毒抗原孔加1型抗血清，2型抗原孔加2型血清)0.1mL。B1.6 3711.5h后倒去抗體，洗三次后各加酶標抗抗體0.1mL。B1.7 37結合11.5h后倒出酶標抗體，用洗液洗三次，加鄰苯二胺底物(上標始)1(上標終)，每孔0.1mL。B1.8 避光作用515min。B1.9 待加正常細胞為對照