1、一、手和皮膚黏膜消毒效果監測1、采樣時間:在消毒后立即采樣。2、采樣方法(1) 手的采樣:被檢人五指并攏，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦 2 次(一只手涂擦面積約 30cm2)，并隨之轉動采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入 10ml 含相應中和劑的無菌洗脫液試管內，立即送檢。(2) 皮膚粘膜采樣:用 5cm×5cm 的標準滅菌規格板，放在被檢皮膚處，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子 1 支，在規格板內橫豎往返均勻涂擦各 5 次，并隨之轉動棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入 10ml 含相應中和劑的無菌洗脫液的試管內，立即送

2、檢。不規則的粘膜皮膚處可用棉拭子直接涂擦采樣。3、檢測方法(1) 細菌總數檢測:將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打 80 次，用無菌吸管吸取 1.0ml 待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個平皿，內加入已溶化的 4548 的營養瓊脂 15ml18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置 36±1溫箱培養 48h，計數菌落數。采樣結果計算方法：平板上菌落數 × 稀釋倍數細菌總數(cfu/cm2)采樣面積(cm2)(2) 致病菌檢測:致病菌的檢測依據污染情況進行相應指標檢測的原則執行。4、結果判定(1) 消毒洗手、類區域工作人員：細菌總數5cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球

3、菌、大腸桿菌、銅綠假單孢菌為消毒合格。類區域工作人員：細菌總數10cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。類區域工作人員：細菌總數15cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。(2)皮膚黏膜：參照手的衛生學標準執行。5、注意事項皮膚粘膜采樣處，若表面不足 5cm×5cm 可用相應面積的規格板采樣。二、物品和環境表面消毒效果的監測1、采樣時間:在消毒處理后進行采樣。2、采樣方法:用 5cm×5cm 的標準滅菌規格板，放在被

4、檢物體表面，采樣面積100cm2，連續采樣 4 個，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子 1 支，在規格板內橫豎往返均勻涂擦各 5 次，并隨之轉棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入 10ml含相應中和劑的無菌洗脫液試管內，立即送檢。門把手等不規則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。3、檢測方法(1) 細菌總數檢測：檢測方法將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打 80 次，用無菌吸管吸取 1.0ml 待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個平皿，內加入已溶化的 4548 的營養瓊脂 15ml18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置 36±1溫箱培養 48h，計數菌落數。小型物體表面的結果計

5、算，用 cfu/件表示。(2) 致病菌檢測：致病菌的檢測依據污染情況進行相應指標檢測的原則執行。4、結果判定、類區域：細菌總數5cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。類區域細菌：總數10cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。類區域細菌：總數15cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。母嬰同室、早產兒室、嬰兒室、 新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門菌。5、注意事項(1) 采樣時間:在滅菌處理后，存放有效期內采樣。三、空氣消毒效果的監測1、采樣時間：在消毒處理后、操作前進行采樣。2、采樣方法：平板暴露法(1) 布點方法:室內面積30m2，設內、中、外對角線3點，內、外點布點部位距墻

6、壁1M處；室內面積30m2，設 4 角及中央 5 點，4 角的布點部位距墻壁 1m 處。(2) 采樣方法：將普通營養瓊脂平板(直徑為 9cm)放在室內各采樣點處，采樣高度為距地面 1.5m 采樣時將平板蓋打開，扣放于平板旁，暴露 5min，蓋好立即送檢。平板暴露法結果計算公式：細菌總數（cfu/m3）=50000N/（A × T）式中A為平板面積（cm2）；T為平板暴露時間（min）；N為平均菌落數（cfu）。4、結果判定類區域：細菌總數10cfu/m3(或0.2cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；類區域：細菌總數200cfu/m3(或4cfu/平板)，未檢

7、出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；類區域：細菌總數500cfu/m3(或10cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。5、注意事項采樣前，關好門、窗，在無人走動的情況下，靜止10min 進行采樣。四、醫療器械滅菌效果的監測1、采樣時間: 在滅菌處理后，存放有效期內采樣。2、無菌檢驗無菌檢驗是指檢查經滅菌的敷料、縫線、一次性使用的醫療用品、無菌器械以及適合于無菌間查的其它品種是否無菌的一種方法。無菌檢驗應在潔凈度為100級單向流空氣區域內進行，應嚴格遵守無菌操作，避免微生物污染；對單向流空氣區域及工作臺面，必須進行潔凈度驗證。（1） 無菌檢驗前準備1）洗脫液與培養基無

8、菌性試驗:無菌試驗前 3d，于需-厭養培養基與霉菌培養基內各接種 1ml 洗脫液，分別置 3035與 2025培養 72h，應無菌生長。2）陽性對照管菌液制備:在試驗前一天取金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003的普通瓊脂斜面新鮮培養物，接種1環至需-厭氧培養基內，在 3035培養 16h18h 后，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至10 cfu/ml100cfu/ml;取生孢梭菌CMCC(B)64941的需氧菌、厭氧菌培養基新鮮培養物1接種環種于相同培養基內，于3035培養 18h24h后，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至10 cfu/ml100cfu/ml;取白色念珠菌CMCC（F）98001真

9、菌瓊脂培養基斜面新鮮培養物1接種環種于相同培養基內，于2025培養 24h后，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至10cfu/ml100cfu/ml。（2）無菌操作: 取縫合針、針頭、刀片等小件醫療器械5件直接浸入 6 管需-厭氧培養管(其中一管作陽性對照)與 4 管霉菌培養管。 培養基用量為 15ml/管。1)取5付注射器，在 5ml 洗脫液中反復抽吸 5 次，洗下管內細菌，混和后接種需-厭養菌培養管(共 6 管，其中 1 管作陽性對照)與霉菌培養管(共 4 管)。 接種量：1ml注射器為 0.5ml，2ml注射器為 1ml，5ml10ml 注射器為 2ml，20ml50ml注射器為 5ml，培養

10、基用量：接種量為 2ml 以下為 15ml/管，接種量5ml為 40ml/管。2)手術鉗、鑷子等大件醫療器械取 2 件用沾有無菌洗脫液的棉拭子反復涂抹采樣，將棉拭子投入 5ml 無菌洗脫液中，將采樣液混勻，接種于需-厭氧培養管(共 6 管，其中 1 管作陽性對照)與霉菌培養基(共 4 管)。接種量為 1ml/管，培養基用量為 15ml/管。（3）培養:在待檢樣品的需-厭氧培養管中，接種預先準備的金黃色葡萄球菌陽性對照管液 1:1000 稀釋 1ml，將需-厭氧培養管以及陽性與陰性對照管均于 3035培養 5d，霉菌培養管與陰性對照管于 2025培養 7d，培養期間逐日檢查是否有菌生長，如加入供試品后培養基出現混濁或沉淀，經培養后不能從外觀上判斷時，可取培養液轉種入另一支相同的培養基中或斜面培養基上，培養 48h72h 后，觀察是否再現混濁或在斜面上有無菌落生長，并在轉種的同時，取培養液少量，涂片染色，用顯微鏡觀察是否有菌生長。（4）結果判定:陽性對照在 24h 內應有菌生長，陰性對照在培養期間應無菌生長，如需-厭氧菌及霉菌培養管內均為澄清或雖顯混濁但經證明并非有菌生長，判為滅菌合格；如需-厭氧菌及霉菌培養管中任何1管顯