1、成年小鼠心臟灌流實驗材料：需要觀察腦切片的小鼠試劑/試劑盒：乙醚；生理鹽水（37水浴）；4%PFA；30%蔗糖儀器：蠕動泵；剪刀；鑷子；針頭；導管實驗步驟：1、籌備實驗器材：兩個錐形瓶（1個裝生理鹽水，一個裝4%多聚甲醛，記得要用封口膜封口）2、用生理鹽水沖洗導管，并排解管內氣體。（灌流時選用雄性動物比選用雌性動物要好，緣由是雌性動物受其激素周期影響，雄性的結果更為牢靠）3、在密閉容器內加適量乙醚，麻醉小鼠。（需要注意的是，小鼠糊涂一點比死掉要好，防止血液凝固給灌流帶來阻力）4、待小鼠麻醉后立即將其用針頭固定在泡沫板上（用針頭插住四肢）。5、一只手用鑷子扯起胸部皮膚，另一只手用剪刀剪開胸腔的皮

2、膚和肋骨，暴露出心臟和肝臟。6、將注射針頭插入小鼠左心室（如針頭不穩(wěn)可用鑷子將其固定在泡沫板上），同時將小鼠肝臟減掉，以使血液流出。灌流速度5.8rpm。（灌注生理鹽水的時間維持在10min左右，血液排解后四肢、肝臟和舌頭會變白）7、對小鼠進行剪尾取樣，以備測定其基因型。同時，將小鼠信息卡片上記錄灌流信息，并將灌流小鼠的信息記錄在自己的實驗記錄本上，以便利后續(xù)的重新基因型鑒定操作。8、待小鼠四肢、肝臟和舌頭變白之后，將導管始端從生理鹽水中拿出，將其放入冰浴的4%PFA溶液（4）中，用4%PFA灌流固定時，當PFA流至大腦處可能會使小鼠尾巴略有反射現(xiàn)象（有時可能沒有），此時可將灌流速度由5.8r

3、pm調至4.8rpm，以使固定更加充分。整個PFA灌流時間約為20min。（固定原理：多聚甲醛可以使蛋白質交聯(lián)）9、將導管始端從PFA中拿出，待管中液體流盡后，將心臟上的針頭拔下，如果固定的較好，可發(fā)現(xiàn)小鼠眼球呈現(xiàn)白色。將托盤中的血液倒至廢液桶內，并籌備下一步的取腦操作。10、拿出一條紙巾，將小鼠尸體放在上面，沿頸部剪下頭顱。11、剪開頭部皮膚，露出白色頭蓋骨。將延髓上包被的軟骨剪開，除去多余的結締組織。需要注意的時，眼睛要由剪刀剪下，不能夠直接扯下來，由于眼睛后部連著視神經(jīng)，如果扯的話有可能會損壞視交叉上核等其他腦部組織。12、將頭蓋骨當心剝開，露出白色的腦部，在剝嗅球部位時要特別當心，必要

4、的話可以先將嗅球前部的碎骨留著待進一步固定之后再去除。13、將頭蓋骨剝開后，將腦下部連接的神經(jīng)逐條剪短（可看到視神經(jīng)交叉），待全部剪斷后將腦整個剝離出來。14，將剝離出來的腦浸泡在4%PFA中，過夜固定。15、將PFA液換為30%蔗糖進行脫水（防止冷凍切片時形成冰晶和孔洞），初始脫水時腦會浮在蔗糖上面，待完全脫水后腦會沉底。此時可將腦取出進行冷凍切片。內容總結（1）成年小鼠心臟灌流實驗材料：需要觀察腦切片的小鼠試劑/試劑盒：乙醚（2）成年小鼠心臟灌流實驗材料：需要觀察腦切片的小鼠試劑/試劑盒：乙醚（3）5、一只手用鑷子扯起胸部皮膚，另一只手用剪刀剪開胸腔的皮膚和肋骨，暴露出心臟和肝臟（4）將托盤中的血液倒至廢液桶內，并籌