1、內(nèi)生真菌混合培養(yǎng)及其抗菌活性的初步研究楊民和 蘇經(jīng)遷（福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，福建 福州 350108） 侵染茶樹致病的病原微生物主要是病原真菌。目前世界上已記載的茶樹病害有500多種我國(guó)有138種，其中真菌病害72種，線蟲病害9種，寄生性顯花植物園16種，其它病原（類菌原體、細(xì)菌和類細(xì)菌）病害4種，地衣、苔蘚25種，藻類24種，非侵染性10種。針對(duì)茶樹病原菌，目前世界范圍內(nèi)主要使用化學(xué)農(nóng)藥來防治，但是化學(xué)農(nóng)藥的長(zhǎng)期使用帶來了許多問題 ,如昆蟲產(chǎn)生抗藥性并導(dǎo)致農(nóng)藥使用劑量的不斷加大 ,在糧食、水果、蔬菜中產(chǎn)生殘留 ,由于生物富集作用而使以這些農(nóng)作物為食物的野生和家養(yǎng)動(dòng)物的殘毒加大。因此 ,一

2、些國(guó)家很早就已經(jīng)開始研制一系列選擇性強(qiáng)、效率高、成本低、不污染環(huán)境和對(duì)人畜無(wú)害的生物農(nóng)藥1。 生物農(nóng)藥如植物內(nèi)生菌生產(chǎn)的抗菌劑、抗蟲劑及生長(zhǎng)素對(duì)植物病害起到了很好的防治及促生作用。這樣既減少了化學(xué)農(nóng)藥對(duì)環(huán)境的影響、又保證了農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)。所以植物內(nèi)生真菌的代謝物有的被開發(fā)為農(nóng)作物上用于抗蟲的藥物的潛力，這可能是更安全、更環(huán)保的治療農(nóng)作物病蟲害的潛在的生物資源庫(kù)2目前，關(guān)于茶樹內(nèi)生真菌的研究工件集中在：（1）針對(duì)單一菌株的分離、鑒定和培養(yǎng)；（2）側(cè)重單一菌株所產(chǎn)抗菌物質(zhì)的分離、純化和結(jié)構(gòu)鑒定。如果把植物內(nèi)生真菌群理解為植物組織內(nèi)的正常菌群，它們不僅包括了互惠共利的和中性的內(nèi)共生微生物，也包括了那些

3、潛伏在內(nèi)的病原微生物。如果將單一菌株分離出來進(jìn)行培養(yǎng)，可能會(huì)由于缺乏其它與之相互作用的微生物的刺激作用而使該單一菌株的代謝活性下降，抗菌物質(zhì)產(chǎn)量降低，甚至無(wú)法產(chǎn)生孢子。人類對(duì)微生物的利用，經(jīng)歷過天然混臺(tái)培養(yǎng)到純種培養(yǎng)兩個(gè)階段，分離純培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)明和應(yīng)用是微生物學(xué)發(fā)展的一個(gè)巨大進(jìn)步，但是在長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)實(shí)踐中，人們也不斷地發(fā)現(xiàn)很多生物過程是單株微生物不能完成或只能微弱地進(jìn)行，必須依靠?jī)煞N或兩種以上的微 生物共同培養(yǎng)完成3。研究表明：混合培養(yǎng)時(shí)各菌之間可能進(jìn)直接或間接地相互作用 ，互相提供所需的營(yíng)養(yǎng)，轉(zhuǎn)移或消除抑制產(chǎn)物，或通過一些物理或生化機(jī)制刺激彼此間的生理活性 4 。隨著內(nèi)生菌純培養(yǎng)技術(shù)的完

4、善和對(duì)內(nèi)生菌間互生和共生現(xiàn)象的研究，進(jìn)行人工的混合菌培養(yǎng)，力求在人工控制的條件下重現(xiàn)幾種內(nèi)生菌在茶樹中的相互關(guān)系，進(jìn)而獲取所需的抗菌物質(zhì)已漸為人們所重視。對(duì)混合菌資源的研究不僅具有深遠(yuǎn)的理論意義，更具有重大的應(yīng)用價(jià)值。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 菌株來源從采自江西廬山植物園、福建省泉州市安溪縣茶園、福建農(nóng)林大學(xué)茶園的茶樹上分離到內(nèi)生真菌。分離方法：取健康茶樹的葉、莖和根部先用自來水將新鮮植物組織表面沖洗干凈，自然晾干后將莖和根切成1cm左右的小段，用75酒精漂洗1min，無(wú)菌水沖洗34次，又用3次氯酸鈉溶液浸泡5min，無(wú)菌水沖洗34次，每次2min，取最后1次無(wú)菌水洗液涂于平板上，

5、在恒溫培養(yǎng)箱中28培養(yǎng)34d，若發(fā)現(xiàn)皿中無(wú)菌落生成，則證明該材料表面消毒徹底，否則，不能使用。將上述處理過的茶樹材料接種到PDA固體培養(yǎng)基置于28溫箱培養(yǎng)57d，待各植物組織切面長(zhǎng)出菌絲后挑取邊緣部分至試管斜面上，置于28溫箱繼續(xù)培養(yǎng)。1.1.2 測(cè)試用的病原菌的來源2007年45月份從福建農(nóng)林大學(xué)茶園采集出現(xiàn)病害癥狀的茶葉，進(jìn)行茶樹病原菌的分離、鑒定，并獲得多毛孢（茶輪斑?。?、黑腐菌（茶云紋葉枯?。┑募兣囵B(yǎng)。分離方法：選擇典型病斑的茶樹葉片，切下病健交界處組織0.5cm×0.5cm的長(zhǎng)段（片），將組織塊先用70%酒精浸5-6秒，后再用0.1升汞浸泡分鐘,無(wú)菌水洗次，每次min；組織

6、塊在無(wú)菌培養(yǎng)皿中適當(dāng)晾干后，用無(wú)菌鑷子（在火焰上燒）移到平板培養(yǎng)基上，在28恒溫下培養(yǎng)1.1.3 培養(yǎng)基 PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯瓊脂蔗糖培養(yǎng)基）、PD培養(yǎng)基（馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基）。1.2 方法1.2.1 實(shí)驗(yàn)用菌的選擇在內(nèi)生菌的分離過程中，根據(jù)各種菌內(nèi)PDA平皿上菌落分布及數(shù)量，從中篩選出實(shí)驗(yàn)用菌，作為混合培養(yǎng)篩選的菌種。1.2.2 各菌之間相互關(guān)系的初步確定采用兩點(diǎn)對(duì)峙培養(yǎng)法，對(duì)4種菌進(jìn)行活化后，切取培養(yǎng)6天同質(zhì)量的內(nèi)生真菌的菌絲塊接種于PDA平板上距中心2cm處同一直線的兩點(diǎn)上，同時(shí)設(shè)接單種菌為對(duì)照，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，于28恒溫培養(yǎng)，并觀察兩菌之間的相互關(guān)系。同時(shí)對(duì)能相互混合生長(zhǎng)或部分混合生長(zhǎng)

7、的用扦片法將蓋玻片插入兩菌之間的邊緣處，并在顯微鏡下觀察，做進(jìn)一步確認(rèn)57。1.2.3 發(fā)酵過程及發(fā)酵液的處理方法由對(duì)峙培養(yǎng)法確定的兩株木霉以1:1的接種量，用0.5cm的打孔器從平板上各取1塊同時(shí)接種到發(fā)酵培養(yǎng)基搖瓶發(fā)酵。三角瓶的裝液量為總?cè)莘e的2/5，即250ml三角瓶中裝100ml發(fā)酵培養(yǎng)基，搖床轉(zhuǎn)速150r/min，28發(fā)酵5d，設(shè)單獨(dú)純種發(fā)酵為對(duì)照。并觀察記錄發(fā)酵過程中菌種形態(tài)與發(fā)酵液顏色的變化。發(fā)酵完成后，發(fā)酵液先經(jīng)6層沙布過濾后，再用大容量離心機(jī)9000 r/min離心20分鐘，取上清液，然后用濾紙過濾除去未沉淀的菌體，最后用裝有2層0.22m過濾膜的細(xì)菌過濾器在無(wú)菌的條件下過慮

8、除菌。1.2.4 發(fā)酵液抗菌活性的測(cè)定將5ml發(fā)酵液與10ml融化的培養(yǎng)基混勻，倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿中制成帶毒培養(yǎng)基。培養(yǎng)基凝固后，在每個(gè)培養(yǎng)基平面放入1塊供試菌餅（直徑5mm）,使菌餅不帶菌絲的一面貼在培養(yǎng)基表面，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，同時(shí)以單一菌株的發(fā)酵液和無(wú)菌水作為對(duì)照。同時(shí)以無(wú)菌水作為對(duì)照，做發(fā)酵液的對(duì)其它病原菌抑菌實(shí)驗(yàn)。培養(yǎng)7296h后，用十字交叉法測(cè)定供試菌菌落生長(zhǎng)直徑，計(jì)算抑制率810×100對(duì)照菌落直徑處理菌落直徑對(duì)照菌落直徑5菌絲生長(zhǎng)抑制率1.2.5不同發(fā)酵周期對(duì)發(fā)酵液抑菌效果影響的實(shí)驗(yàn)根據(jù)發(fā)酵過程中發(fā)酵液顏色的變化情況，在相同的培養(yǎng)條件條件下分別取發(fā)酵周期為2d、4d、5d

9、、7d的發(fā)酵液，經(jīng)過經(jīng)6層沙布過濾后，再用大容量離心機(jī)9000 r/min離心20分鐘，取上清液，然后用濾紙過濾除去未沉淀的菌體，最后用裝有2層0.22m過濾膜細(xì)菌過濾器在無(wú)菌的條件下過慮除菌。然后做對(duì)不同發(fā)酵時(shí)間的發(fā)酵液進(jìn)行抗菌活性的測(cè)定。1.2.6 不同濃度的發(fā)酵液對(duì)茶樹病原菌孢子的作用效果 取供試病原菌的孢子在無(wú)菌水與發(fā)酵液中配成適當(dāng)濃度的孢子懸浮液，且兩種液體中孢子的濃度應(yīng)相當(dāng)，在10×10低倍鏡下，每個(gè)視野有5060個(gè)孢子。將兩種孢子懸液混合配制成含發(fā)酵液濃度為0100的11個(gè)等密度梯度濃度的混合液，各取一滴滴加到凹玻片下，將凹玻片迅速翻轉(zhuǎn)使液滴倒懸在凹玻片下表面，小心將凹

10、玻片放在保溫器架上，使液滴倒懸在保濕的小環(huán)境中，每個(gè)處理3次重復(fù)。在28的條件下培養(yǎng)8h后檢查孢子萌發(fā)的情況，同時(shí)計(jì)算孢子的萌發(fā)率。2 結(jié)果與分析2.1實(shí)驗(yàn)用菌的選擇結(jié)果 在內(nèi)生菌的分離過程中，根據(jù)各種菌內(nèi)PDA平皿上菌落分布及數(shù)量，從中篩選出4株菌種，編號(hào)為CN1、CN2、CN3、CN4，其中CN1為擬盤多毛孢、CN2、CN3為木霉、CN4為細(xì)菌。2.2各菌之間相互關(guān)系的初步確定的結(jié)果 通過兩點(diǎn)對(duì)峙培養(yǎng)法，兩菌之間的關(guān)系歸納起來有4種情況11：相互混合；部分相互混合；在接觸時(shí)互相阻止；在一定距離上互相阻止。其中前3種情況的兩株菌均可用于混合培養(yǎng)，尤其是在菌體相互混合的情況下，菌絲體互相交織，

11、相容性較好，更有利于菌體的生長(zhǎng)。4株菌在PDA培養(yǎng)基上的具體生長(zhǎng)情況見表1。CN2CN4CN1CN4CN1CN3混合組合觀察結(jié)果對(duì)峙照片CN1CN2CN2CN3CN3CN4兩菌關(guān)系244134 細(xì)菌與木霉接觸后都停止擴(kuò)展，接觸線清晰明確，與單獨(dú)培養(yǎng)相比，木霉CN2產(chǎn)生出黃色的物質(zhì)。兩菌落之間相互接近，木霉CN3對(duì)細(xì)菌形成包圍之勢(shì)，兩菌之間有接近2mm的間隔擬盤多毛孢的菌落呈絨毛狀，細(xì)菌的菌落緊密環(huán)繞在周圍，形成對(duì)峙，兩菌之間有接近3mm的間隔兩菌生長(zhǎng)都較快，由于CN3產(chǎn)生的孢子易擴(kuò)散到其他角落，且能在長(zhǎng)有CN2的平皿上生長(zhǎng)，與CN3接觸的CN2都有產(chǎn)生大量的黃色物質(zhì)擬盤多毛孢的菌落呈絨毛狀，木

12、霉CN2的菌落緊密環(huán)繞在周圍，形成對(duì)峙，兩菌之間無(wú)明顯交錯(cuò)生長(zhǎng)現(xiàn)象。木霉CN3逐漸包圍擬盤多毛孢，且兩菌之間有接近4mm的間隔。注：菌落相互作用模式：1相互混合；2部分相互混合；3在接觸時(shí)互相阻止；4在一定距離上互相阻止。 由對(duì)峙實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可知，CN2CN4能相互混合生長(zhǎng)，CN1CN2能部分相互混合生長(zhǎng)，通過扦片法在顯微鏡進(jìn)一步驗(yàn)證兩菌之間的關(guān)系（Fig.1,Fig.2）。Fig.2 CN1CN2兩菌混合培養(yǎng)顯微照片F(xiàn)ig.1 CN2CN4兩菌混合培養(yǎng)顯微照片 由于CN2CN3相互混合生長(zhǎng)，且與單獨(dú)純培養(yǎng)相比，CN2產(chǎn)生大量的黃色的物質(zhì)，所以選定CN2CN3作為混合發(fā)酵的菌種，進(jìn)一步驗(yàn)證其發(fā)酵

13、液的抑菌效果。2.3 發(fā)酵過程中混合發(fā)酵與純種發(fā)酵菌種形態(tài)與發(fā)酵液顏色的變化情況 不同的菌株之間由于生長(zhǎng)周期及營(yíng)養(yǎng)要求的不同，使各菌種在相同的培養(yǎng)條件下，反映出不同的現(xiàn)象，混合培養(yǎng)時(shí)菌種之間產(chǎn)生的胞外分泌物充當(dāng)了一種信息化學(xué)物質(zhì)的作用12，能刺激產(chǎn)生單獨(dú)培養(yǎng)是無(wú)法產(chǎn)生的代謝物質(zhì)。當(dāng)CN2與CN3混合發(fā)酵時(shí)，以兩菌單獨(dú)培養(yǎng)做為對(duì)照，每隔24小時(shí)觀察一次，具體情況見表2觀察結(jié)果發(fā)酵時(shí)間(h)CN3CN2CN3CN2發(fā)酵液呈灰白色，有大量的菌絲體產(chǎn)生，內(nèi)少量的球狀菌體發(fā)酵液內(nèi)吸人少量的球狀菌體生成迅速繁殖，同時(shí)有大量的灰白色菌絲體24，發(fā)酵液呈灰白色，菌體濃度增加，發(fā)酵液變稠有大量的白色球狀菌體生成

14、，體積比24h時(shí)大。發(fā)酵液呈黃綠色，內(nèi)清晰可見有大球狀菌體。48發(fā)酵液淡黃色，液體呈粘稠狀，球狀菌數(shù)量增加，但個(gè)體體積縮小球狀菌體數(shù)量增加，發(fā)酵液變成淡黃色發(fā)酵液呈灰色，少量菌體發(fā)生自溶72球狀菌體體積縮小，數(shù)量增加發(fā)酵液呈黃色，菌絲體短而多，球狀菌數(shù)量減少。大量菌體發(fā)生自溶，發(fā)酵液稠度增加96球狀菌體呈褐色，發(fā)酵液中有少量的絲狀體生成。發(fā)酵液呈黃褐色，靜置時(shí)發(fā)酵液與菌體能明顯分層。有的菌體發(fā)生結(jié)團(tuán)，發(fā)酵液中菌絲體含量明顯減少120發(fā)酵到120h與發(fā)酵96h的混合培養(yǎng)與單獨(dú)培養(yǎng)的比較圖片如圖3，4（Fig.3, Fig.4）CN3CN2CN3CN2CN3CN2CN3CN2Fig.3 發(fā)酵96h

15、時(shí)混合與單獨(dú)培養(yǎng)比較Fig.4 發(fā)酵120h時(shí)混合與單獨(dú)培養(yǎng)比較2.4 發(fā)酵液對(duì)病原菌的抑制作用從表3可以看出在帶有CN2CN3混合培養(yǎng)的發(fā)酵液的培養(yǎng)皿中茶花病菌的直徑只有2.81cm，與對(duì)照組6.15cm相比，對(duì)茶花病菌的抑制率在60左右，而在帶有CN2單獨(dú)培養(yǎng)發(fā)酵液的培養(yǎng)皿中茶花病菌的直徑高達(dá)6.47cm見圖5（Fig.5），這說明當(dāng)CN2單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)不但不產(chǎn)生抑制茶花病菌的物質(zhì)，而CN2本身在沒有CN3存在的條件下卻能產(chǎn)生促進(jìn)茶花病菌的物質(zhì)。試驗(yàn)結(jié)果表明CN2CN3混合培養(yǎng)的發(fā)酵液對(duì)茶花病菌有較強(qiáng)的抑制能力，且混合培養(yǎng)能產(chǎn)生單獨(dú)培養(yǎng)所不能產(chǎn)生的物質(zhì)。Fig.4帶發(fā)酵液的培養(yǎng)皿中茶花病菌的直

16、徑1. 混合培養(yǎng)發(fā)酵液對(duì)茶花病菌生長(zhǎng)生長(zhǎng)的作用效果2. CN3單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)對(duì)茶花病菌生長(zhǎng)生長(zhǎng)的作用效果3. CN2單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)對(duì)茶花病菌生長(zhǎng)生長(zhǎng)的作用效果 4. 加無(wú)菌水的對(duì)照表3 含不同發(fā)酵液的平皿中茶花病原菌菌落的直徑表4 CN2CN3混合培養(yǎng)的發(fā)酵液的抗菌譜病原菌 實(shí)驗(yàn)情況 在含發(fā)酵液的培養(yǎng) 在含無(wú)菌水的培養(yǎng) 抑菌率(%)基中的直徑(cm) 基中的直徑(cm) 稻瘟菌 1.05 4.31 85.60 茶花病原菌 2.81 6.15 59.12茶云紋葉枯病 2.37 4.90 57.50茶輪斑 3.92 8.18 55.402.5不同發(fā)酵周期的發(fā)酵液抑菌效果影響 同樣以茶花病原菌為指示菌，研究

17、不同發(fā)酵周期對(duì)CN2CN3混合培養(yǎng)的發(fā)酵液抑菌活性的影響影響。取混合發(fā)酵液顏色發(fā)生變化時(shí)為取樣點(diǎn)。結(jié)果見表4（以無(wú)菌的液體PDA培養(yǎng)基的抑菌效果為0,其它的時(shí)間下處理后的抑菌效果與其相比較所得的百分比為相對(duì)抑制效果）。在發(fā)酵周期為5d（120h）時(shí)，混合培養(yǎng)發(fā)酵液對(duì)茶花病原菌的抑制效果相對(duì)較強(qiáng)（70.6%），但隨著發(fā)酵周期的延長(zhǎng)，發(fā)酵液的抑制效果反而下降（從70.6%下降到44.7%），下降的十分明顯。表5不同發(fā)酵周期的發(fā)酵液抑菌效果影響2.6 不同濃度的發(fā)酵液對(duì)茶樹病原菌孢子的作用效果 從表5中可以發(fā)現(xiàn)，當(dāng)茶花病原菌孢子在無(wú)菌水中的萌發(fā)率為21.05時(shí)，含發(fā)酵液濃度為10、20、30的孢子懸

18、液中的孢子的萌發(fā)率分別為21.24、42.28、40.98，但當(dāng)孢子懸液中發(fā)酵液的濃度大于40（含40）時(shí)完全抑制了孢子萌發(fā)（抑制率達(dá)100）見圖68，所以在適當(dāng)濃度是混合培養(yǎng)的發(fā)酵液對(duì)病原菌的較強(qiáng)的抑制能力。表6不同濃度的發(fā)酵液對(duì)茶樹病原菌孢子的作用效果3 討論茶樹內(nèi)生真菌是寄生在茶樹內(nèi)的一類真菌，它們生長(zhǎng)在植物組織內(nèi)，但不會(huì)對(duì)宿主植物引起傷害在在內(nèi)生真菌和植物宿主之間存在著拮抗平衡?？茖W(xué)家們現(xiàn)在已認(rèn)識(shí)到內(nèi)生真菌是潛在的生物活性物質(zhì)的生產(chǎn)者，從中有可能找到生物控制劑和藥物1317在本實(shí)驗(yàn)室分離獲得的茶樹內(nèi)生菌中，部分菌種對(duì)一些真菌或細(xì)菌有較強(qiáng)的抗菌作用，如CN3對(duì)細(xì)菌及擬盤多毛孢具有良好的拮

19、抗性能，是一種廣譜性的抗菌微生物,CN3發(fā)酵液能有效的抑制茶花病原菌的生長(zhǎng)，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)有此內(nèi)生菌的代謝產(chǎn)物對(duì)病原菌不但沒有抑菌效果，反而能促進(jìn)病原菌的生長(zhǎng)，如CN2發(fā)酵液對(duì)茶花病原菌生長(zhǎng)的促進(jìn)作用。在單純使用優(yōu)化的菌株來進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上，考慮到自然界中天然的抗菌物質(zhì)是多種微生物協(xié)同作用的基礎(chǔ)上產(chǎn)生，同時(shí)嘗試通過一些菌種的混合培養(yǎng)來獲得較好的抗菌物質(zhì)，根據(jù)微生物之間能保持共生、互生或拮抗關(guān)系，將代謝類型不同的微生物適當(dāng)組合進(jìn)行混合協(xié)同培養(yǎng),具有純種培養(yǎng)所沒有的優(yōu)點(diǎn)，如在本實(shí)驗(yàn)中CN2與CN3的混合培養(yǎng)且有純種單獨(dú)培養(yǎng)所沒有的優(yōu)點(diǎn)，如混合培養(yǎng)的發(fā)酵液黏度比單獨(dú)純種培養(yǎng)小，能產(chǎn)生單獨(dú)培養(yǎng)所不能產(chǎn)生的

20、抗菌物質(zhì)，該抗菌物質(zhì)對(duì)絲狀病原菌有明顯的抑制，特別對(duì)稻瘟菌的抑制能力高85.6在這樣的混合體系中，正常的微生物菌群往往是優(yōu)勢(shì)菌群，雜菌基本上沒有生存空間，但是混菌培養(yǎng)的反應(yīng)機(jī)制較復(fù)雜18，同時(shí)隨著環(huán)境的變化，兩菌株之間的相互作用的結(jié)果也會(huì)發(fā)生明顯的變化，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)當(dāng)裝液量為容積的1/5時(shí)，到發(fā)酵后期CN2的菌絲體基本上發(fā)生自溶，發(fā)酵液的黏度明顯增加，其中的機(jī)理還有待闡明，此外，獲得的發(fā)酵液有一股芳香氣味，其中的有效成分還有待做進(jìn)一步的分離純化。參考文獻(xiàn)：1牛軍玲,賈素云. 生物農(nóng)藥發(fā)展趨勢(shì)的研究.山西化工. 2005 年 8 月第 25卷第3期2 Clay KC1avicipitaceous

21、endophytes of grasses：their potential as biocontrol agentJMyco1Res1989，92：1一123馮樹、張忠澤.混合菌一類值得重視的微生物資源.科技前沿與學(xué)術(shù)評(píng)價(jià)4 Holguin G,Bashan Y,et al.Nitrogen fixing by Azospirillum brasilense Cd is provided when co-culture with a mangrove rhizosphere bacteria.Soil Biol Biochem.1996.28(12):165116605高克祥，劉小光，郭潤(rùn)芳，

22、等.木霉菌對(duì)楊樹樹皮潰瘍病菌拮抗作用的研究J.林業(yè)科學(xué)，2001,37（5）：82886紀(jì)麗蓮，張強(qiáng)華。崔桂友.蘆竹內(nèi)生真菌F0238對(duì)植物病原菌的拮抗作用J.微生物學(xué)通報(bào)，2004,31(5):82867沈萍、范秀容等.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn).北京：高等教育出版社，第三版，1999,2648.）取兩菌之間相互關(guān)系明顯不同于單獨(dú)培養(yǎng)的組合，做進(jìn)一步的研究。8王雅琴，傅育紅，等.苦楝內(nèi)生真菌抗菌活性的研究J.西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2007,22(1):2022.9Grazia Campanile, Angela Ruscelli and Nicola Luisi. Antagoni

23、stic activity of endophytic fungi towards Diplodia corticola assessed by in vitro and in planta tests)10申屠旭萍，俞曉平，等.一株銀杏內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物抗菌活性初步研究。植物保護(hù)，2006,32（3）：5557.11曾光明，陳耀寧.白腐菌相容菌株的篩選及其混合培養(yǎng)產(chǎn)酶.長(zhǎng)沙理工大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2006,3（3）：107112.12 J Heilmann-ClausenLBoddyInhibition and stimulation effects in communities ofwood decayfungi：exudatesfrom colo- nized wood influence growth by other speciesJMicrob Eeol，2005，49(3):399-40613 RODRIGUES K F，PETRINI OBiodiversity of endophytie fungi in tropi