1、生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)講義生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)講義中藥藥劑學(xué)教研室編寫(xiě)2006年12月1 / 20生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)講義生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)須知目錄實(shí)驗(yàn)一片劑溶出度試驗(yàn)4實(shí)驗(yàn)二尿藥法測(cè)定水楊酸鈉片劑的生物利用度7實(shí)驗(yàn)三撲熱息痛血管外給藥的藥物動(dòng)力學(xué)研究10實(shí)驗(yàn)四大鼠在體小腸吸收實(shí)驗(yàn)13實(shí)驗(yàn)五氨茶堿藥物動(dòng)力學(xué)的研究153 / 20生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)屬于藥物臨床應(yīng)用學(xué)科的范疇，具有綜合性強(qiáng)、應(yīng)用性強(qiáng)、創(chuàng)新性強(qiáng)等特點(diǎn)。生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)是教學(xué)的重要組成部分，是理論與實(shí)踐結(jié)合的主要方式之一。通過(guò)實(shí)驗(yàn)課不僅能印證、鞏固和擴(kuò)展教學(xué)內(nèi)容，還能訓(xùn)練基本操作技能，培養(yǎng)良好的實(shí)

2、驗(yàn)作風(fēng)。為保證實(shí)驗(yàn)課順利進(jìn)行，并達(dá)到預(yù)期的目的，實(shí)驗(yàn)中必須做到以下六個(gè)方面：1 .預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容通過(guò)預(yù)習(xí)，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求，對(duì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容做到心中有數(shù)，并能合理安排實(shí)驗(yàn)順序與時(shí)間。要明確每個(gè)處方中藥物與輔料的用途。2 .遵守實(shí)驗(yàn)紀(jì)律不遲到，不早退，不曠課，保持實(shí)驗(yàn)肅靜，未經(jīng)許可，不得將實(shí)驗(yàn)室物品帶離實(shí)驗(yàn)室。3 .重視藥劑衛(wèi)生進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿整潔的白工作服,先將工作臺(tái)面擦洗干凈再開(kāi)始做實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)始終注意臺(tái)面、地而的整潔，各種廢棄物應(yīng)投入指定位置，不能隨手亂丟，更不能棄入水槽內(nèi)。完成實(shí)驗(yàn)后，應(yīng)將容器、儀器清潔，擺放整齊，臺(tái)而擦凈，經(jīng)教師同意后方能離開(kāi)。值日生負(fù)責(zé)整理公用器材，清掃實(shí)驗(yàn)室，關(guān)好水

3、、電、門(mén)、窗。4 .細(xì)心操作、勤于思考稱(chēng)量藥品、試劑時(shí)，要在稱(chēng)量前（拿取時(shí)）、稱(chēng)量時(shí)和稱(chēng)量后（放回時(shí)）進(jìn)行三次核對(duì)。稱(chēng)量完畢應(yīng)立即蓋好瓶塞，放回原處。對(duì)劇毒藥品更要仔細(xì)核對(duì)名稱(chēng)與劑量.并準(zhǔn)確稱(chēng)取。實(shí)驗(yàn)中要嚴(yán)格控制好實(shí)驗(yàn)條件，認(rèn)真操作每一道工序，以保證成品質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)成品應(yīng)標(biāo)明名稱(chēng)、規(guī)格、配制者、配制時(shí)間，并交教師驗(yàn)收。實(shí)驗(yàn)中遇到問(wèn)題應(yīng)先獨(dú)立思考，再請(qǐng)教他人。在實(shí)驗(yàn)中逐步形成整潔、細(xì)致、嚴(yán)謹(jǐn)、冷靜、善于觀察、善于思考、勤于動(dòng)手的實(shí)驗(yàn)風(fēng)格。5 .正確使用儀器、注意安全使用儀器時(shí)要按使用方法正確操作，不熟悉操作方法時(shí)，應(yīng)在教師指導(dǎo)下使用。各種儀器、容器使用時(shí)要注意輕拿、輕放，用中要清潔后放回規(guī)定位置。

4、6.寫(xiě)好實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告是考察學(xué)生分析總結(jié)實(shí)驗(yàn)資料能力和寫(xiě)作能力的重要方面，亦是評(píng)定實(shí)驗(yàn)成績(jī)的重要依據(jù)。實(shí)驗(yàn)報(bào)告的格式如下所示：【實(shí)驗(yàn)?zāi)康募霸怼繉?xiě)出實(shí)驗(yàn)?zāi)康募霸怼！緦?shí)驗(yàn)操作】寫(xiě)出具體實(shí)驗(yàn)步驟和實(shí)驗(yàn)條件。【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】記錄各采樣時(shí)間點(diǎn)及采樣的狀態(tài)，按要求對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，并將全班數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合,求其平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。【討論】闡述實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)收獲與教訓(xùn)、建議等。【思考題】回答實(shí)驗(yàn)思考題。每一實(shí)驗(yàn)內(nèi)容逐一按以上順序書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告。生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)講義實(shí)驗(yàn)一片劑溶出度試驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,掌握片劑溶出度測(cè)定方法及數(shù)據(jù)處理方法;2,了解溶出度測(cè)定的重要意義及其應(yīng)用。二、實(shí)驗(yàn)提示片劑溶出度是指片劑主藥

5、在體外協(xié)助適當(dāng)裝置于適宜介質(zhì)中溶出的速度和程度。測(cè)定溶出度的依據(jù)是Noyes-Whitney的擴(kuò)散理論，近年生物藥劑學(xué)的研究表明，難溶性藥物的片劑，崩解時(shí)限不能作為判斷難溶性藥物片劑吸收的指示，因?yàn)槠瑒┍澜夂蟮姆哿＿€不能直接被機(jī)體所吸收，溶解是吸收的主要過(guò)程，溶解度小于0.1Img/mL的藥物，其體內(nèi)吸收常受其溶出速度的影響，溶出速度除與藥物的晶型、粒經(jīng)大小有關(guān)外，還與制劑的生產(chǎn)工藝、輔料、儲(chǔ)存條件等有關(guān)。所以為了控制這些片劑的質(zhì)量，需測(cè)定血藥濃度或尿藥濃度，對(duì)于一些體外溶出度與體內(nèi)血藥濃度有相關(guān)性的藥物，則可測(cè)定其主藥成分的體外溶出度作為控制該片劑質(zhì)量的一項(xiàng)指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)以對(duì)乙酰氨基酚片為樣品

6、，測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚的溶出度.原理：對(duì)乙酰氨基酚在溶出介質(zhì)中，在257nm波長(zhǎng)處有最大吸收，因此可用紫外分光光度法進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定其在257nm的吸收度（A）,用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程計(jì)算其對(duì)應(yīng)濃度。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1 .測(cè)出比較法的A值，用A-w表示，作對(duì)照品。取樣品10片，精密稱(chēng)定，計(jì)算平均片重W,將稱(chēng)定的片子研細(xì)，再精密稱(chēng)取相當(dāng)于W的量，加約600mL溶出介質(zhì)（稀鹽酸24mL加水至1000mL）,水浴（4050）中攪伴溶解,冷至室溫,移入1000mL容量瓶中，加入介質(zhì)至足量，搖勻，過(guò)濾，精密吸取濾液1mL置50mL容量瓶中，加入0.04%氫氧化鈉溶液稀釋至50mL,搖勻，照分光光度法（中國(guó)藥典2005年版

7、二部附錄IVA）,在257nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度A值，用A-W表示。2 .對(duì)乙酰氨基酚片溶出度的測(cè)定A.儀器準(zhǔn)備轉(zhuǎn)籃是用40目不銹鋼制成的圓筒，3.66cm,直徑2.5cm,頂部通過(guò)金屬棒連接于變速小馬達(dá)上。轉(zhuǎn)籃懸吊于盛有溶媒的容器中，距溶出杯底2.5cm,使用前安裝就緒，開(kāi)動(dòng)電機(jī)空轉(zhuǎn),檢查電路是否暢通，有無(wú)異常噪音，轉(zhuǎn)籃的轉(zhuǎn)動(dòng)是否平穩(wěn)，加熱恒溫裝置及變速裝置是否正常，如一切符合要求，就可以開(kāi)始測(cè)定樣品。B.測(cè)定方法取溶出介質(zhì)（稀鹽酸24mL加水至1000mL）1000mL,加熱至37,置溶出杯中，調(diào)行轉(zhuǎn)籃轉(zhuǎn)速為100轉(zhuǎn)/分，將精密稱(chēng)定重量的藥片一片（W）放在轉(zhuǎn)籃內(nèi)，以溶出介質(zhì)接觸藥片時(shí)為零時(shí)

8、刻開(kāi)始計(jì)時(shí)，然后按2、5、10、15、20、30分鐘定時(shí)取樣，取樣位置固定在轉(zhuǎn)籃上端液而中間、距離杯壁1cm處，每次取樣5mL,將樣品液過(guò)濾，吸取濾液1mL,余按實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1,測(cè)出比較法A值項(xiàng)下，自“置50mL容量瓶”始，依法測(cè)定規(guī)定時(shí)間藥片溶出的A值，以As表示。注：（1）對(duì)所用的溶出度測(cè)定儀，應(yīng)預(yù)先檢查其是否運(yùn)轉(zhuǎn)正常，并檢查溫度的控制，轉(zhuǎn)速等是否精確、升降轉(zhuǎn)籃是否靈活等。（2）溶出方法分轉(zhuǎn)籃法、槳法和小杯法三種。本實(shí)驗(yàn)選用轉(zhuǎn)籃法，轉(zhuǎn)籃的尺寸和結(jié)構(gòu)應(yīng)符合藥典規(guī)定。（3）每次取出樣品液后，應(yīng)同時(shí)補(bǔ)充相同體積的空白溶液。（4）根據(jù)藥典規(guī)定，應(yīng)同時(shí)測(cè)定6片的溶出度，鑒于實(shí)驗(yàn)時(shí)間限制，每實(shí)驗(yàn)組僅要求完

9、成1片的測(cè)試。四、測(cè)定結(jié)果與數(shù)據(jù)處理1每片測(cè)定結(jié)果記錄5 / 20生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)講義No.123456取樣時(shí)間（min）2510152030AsAw累計(jì)溶出5Aw=溶出度的計(jì)算累計(jì)溶出=?2 .用普通坐標(biāo)紙作圖求t5。以累計(jì)溶出百分比對(duì)溶出時(shí)間逐一描點(diǎn)，用圖估法擬合-平滑曲線(xiàn)，過(guò)累計(jì)溶出百分比50%處引一與t軸平行的直線(xiàn)，與溶出曲線(xiàn)相交于A,過(guò)A點(diǎn)向t軸引垂線(xiàn)交于5此h即為Iso,此值供方差分析用，3 .用威布爾分布概率求t50,td和m三個(gè)參數(shù)從上而所作溶出曲線(xiàn)所見(jiàn)，累計(jì)溶出百分比對(duì)相應(yīng)時(shí)間各數(shù)據(jù)在一般直角坐標(biāo)紙上作圖，并不成直線(xiàn)關(guān)系，但可將累計(jì)溶出百分比與時(shí)間的關(guān)系看作統(tǒng)計(jì)學(xué)上

10、的概率分布函數(shù)，用威布爾概率紙使之直線(xiàn)化，從圖上即可極為方便的找到t5。（溶解50%所需時(shí)間），ta（溶解63.2%所需時(shí)間）及m（斜率）三個(gè)參數(shù)，在威布爾概率紙作圖的基本步驟如下：A.以F尺代替累計(jì)溶出百分比,t尺為釋放時(shí)間，用原數(shù)據(jù)描點(diǎn),若各點(diǎn)基本上呈直線(xiàn)分布，則可直接擬合一條直線(xiàn)，尤其注意照顧F在30%至70%范圍內(nèi)的點(diǎn)，使之優(yōu)先貼近該直線(xiàn).B.若各點(diǎn)排布呈曲線(xiàn)狀，則沿曲線(xiàn)趨勢(shì)延伸，與t尺交點(diǎn)的數(shù)值作為。的初步估計(jì)值，以F對(duì)t再作圖，若所得各點(diǎn)的排列接近直線(xiàn)，則擬合成直線(xiàn)，若F對(duì)t-a作圖仍為一曲線(xiàn)，則可用類(lèi)似的方法反復(fù)修改，直至作得一直線(xiàn)為止。C.在F對(duì)t（或F對(duì)t-。）所作圖上擬合一

11、直線(xiàn)，有X=1和Y釉的交點(diǎn)（稱(chēng)m點(diǎn)）作該直線(xiàn)的平行線(xiàn)，該平行線(xiàn)和Y軸交點(diǎn)在Y尺上投影點(diǎn)的讀數(shù)即為m值（取絕對(duì)值工D.所擬合的直線(xiàn)與X軸的交點(diǎn)在t尺上投影點(diǎn)的讀數(shù)即為n=3/m的估計(jì)數(shù)，本實(shí)驗(yàn)中稱(chēng)為匕值（溶出63.2%所需時(shí)間）：與溶出50%的交點(diǎn)在t尺上的投影點(diǎn)的讀數(shù)即為150cE.用威布爾概率紙求出tso,td和m三個(gè)參數(shù)后，可利用方差分析，相關(guān)與回歸分析的數(shù)理統(tǒng)計(jì)法來(lái)評(píng)定同類(lèi)產(chǎn)品不同批號(hào)或不同廠(chǎng)家的片劑質(zhì)量：另外，還可以評(píng)定同一產(chǎn)品體內(nèi)、體外的相關(guān)程度。4 .用溶出參數(shù)作方差分析將兩個(gè)批號(hào)共八片，按本實(shí)驗(yàn)方法測(cè)得的累計(jì)溶出百分比共八組數(shù)據(jù)，經(jīng)威布爾概率紙作圖得八條參數(shù)方差來(lái)源自由度離差平方

12、和方差F值顯著性組間（50組內(nèi)合計(jì)組間td組內(nèi)合計(jì)組間m組內(nèi)合計(jì)直線(xiàn)，由圖中求出ts。，td和m值，將所得參數(shù)列表如下，供方差分析用。思考題:檢查固體制劑的溶出度有何意義?哪些種類(lèi)的制劑需檢查溶出度？7 / 20實(shí)驗(yàn)二尿藥法測(cè)定水楊酸鈉片劑的生物利用度一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? ,通過(guò)實(shí)驗(yàn)掌握用尿藥速率法求算體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)；2 ,通過(guò)實(shí)驗(yàn)掌握藥物的生物利用度的一般研究方法；3 ,通過(guò)測(cè)定求出水楊酸鈉的生物半衰期0二、實(shí)驗(yàn)原理藥物在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄等過(guò)程既有區(qū)別，又有聯(lián)系，具有一定相關(guān)性。藥物在體內(nèi)的速度過(guò)程變化規(guī)律及生物利用度等相關(guān)參數(shù)的提取，要通過(guò)實(shí)驗(yàn)采用血藥濃度法、尿藥濃度法或唾液藥物濃度

13、法等方法獲得。在多數(shù)情況下，尿藥濃度高于血藥濃度，定量分析精密度好，測(cè)定方法較易建立，且取樣方便，可免除受試者多次抽血的痛苦。因此，在體內(nèi)藥物大部分以原型從尿中排出的條件下，通常可用尿藥法提取消除速度常數(shù)、生物半衰期等動(dòng)力學(xué)參數(shù)。生物利用度反應(yīng)藥物在體內(nèi)被吸收的速度和程度，它可分為相對(duì)生物利用度與絕對(duì)生物利用度。當(dāng)藥物的口服制劑與靜脈注射劑相比較，可求算絕對(duì)生物利用度：與其他制劑相比較，可求算相對(duì)生物利用度。本實(shí)驗(yàn)采用口服真溶液劑為參比，測(cè)定水楊酸鈉片劑的相對(duì)生物利用度。三、實(shí)驗(yàn)方法L繪制水楊酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)精密稱(chēng)取干燥恒重的水楊酸鈉0.5g,置100mL容量瓶中，加蒸偏水溶解并稀釋至刻度，各精密

14、吸取此溶液L5、2.5、3.5.4.5.5.5mL分別置50mL容4瓶中,加蒸儲(chǔ)水稀釋至刻度,搖勻,得濃度分別為。15、0.25.035、0.45x0.55mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液.取干燥潔凈的帶塞玻璃試管5支，分別精密吸取以上各溶液的水楊酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液1mL于試管中,再分別加入Fe（NO3）3試管5nL混合均勻，用72-100型分光光度計(jì)于540nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，將測(cè)得數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，得吸收度對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的回歸方程，即為標(biāo)準(zhǔn)直線(xiàn)。參比液以蒸儲(chǔ)水1mL代替標(biāo)準(zhǔn)液。2.測(cè)定生物利用度A.實(shí)驗(yàn)方法I. 選擇受試者的條件II. 對(duì)受試者的要求a）服藥前48小時(shí)開(kāi)始，不吃任何含水楊酸鹽類(lèi)食物。b）小

15、便應(yīng)按規(guī)定收集完全，不得損失，并保持尿樣不污染。在收集尿樣期間內(nèi)不作劇烈運(yùn)動(dòng)。c）早晨收集空白尿，空腹時(shí)口服水楊酸鈉片0.6g,對(duì)照組口服相當(dāng)于0.6g的水楊酸鈉真溶液.d）按以下時(shí)間喝水和收集尿樣，并記錄排尿量：服藥當(dāng)天：7：30喝水150mL7：55小便（收空白尿）8：00用250mL溫開(kāi)水吞服0.3g/片的水楊酸鈉片兩片8：30收集尿樣9：00收集尿樣10：00收集尿樣喝水200mL12：00收集尿樣喝水150mL14：00收集尿樣喝水100mL生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)講義16：00收集尿樣喝水100mL18：00收集尿樣20：00收集尿樣喝水100mL22：00收集尿樣第二天8：00

16、收集尿樣22：00收集尿樣每次收集尿樣的時(shí)間必須小便一次，在上一次收集尿樣后所排出的小便，均要收集完全，作為下一個(gè)時(shí)間尿樣，每次收尿容器必須洗凈，用蒸鏘水清洗，瀝干備用。III .受試者服用樣品的安排本實(shí)驗(yàn)僅作兩種劑型，同一受試者二次服藥之間應(yīng)間隔4天以上.IV .測(cè)定方法每次尿樣測(cè)量體積后，精密吸取1mL于干燥潔凈的試管中，加Fe（NO3）3試管5mL,按“繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)”項(xiàng)下進(jìn)行測(cè)定，參比液用空白尿1mL替代含藥尿樣，如顯色時(shí)發(fā)現(xiàn)色澤太深，則根據(jù)情況將尿樣稀釋后取樣測(cè)定（如果氣候炎熱，須將空白尿及尿樣置冰箱中保存，以防長(zhǎng)霉發(fā)酵，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性,）B.數(shù)據(jù)處理I. 將所測(cè)各時(shí)間尿樣的吸收度代

17、入標(biāo)準(zhǔn)直線(xiàn)，計(jì)算出該尿樣濃度（mg/n】L）再乘以尿量（如尿樣稀釋則需乘上稀釋倍數(shù)），計(jì)算出各時(shí)間的尿藥排泄量。II. 以lgZx/Zt對(duì)相鄰兩時(shí)間的中點(diǎn)時(shí)間（t中）作尿藥排泄速度曲線(xiàn)。x:各時(shí)間的尿藥排泄量.t：相鄰兩次集尿時(shí)間的間隔時(shí)間.作圖：HL根據(jù)作出的尿藥排泄曲線(xiàn)求出水楊酸鈉片劑和其溶液的動(dòng)力學(xué)參數(shù).斜率（b）=（Y2-Y）/（X2-Xi）或?qū)⑶€(xiàn)后部直線(xiàn)部分進(jìn)行回歸分析,求出直線(xiàn)斜率b消除速度常數(shù):k=2.303Xb劑型消除速度常數(shù)k半衰期（小時(shí)）總排泄量（mg）片劑真溶液生物半衰期：l】/2=0.693/kIV.生物利用度：以真溶液為參比，求片劑的相對(duì)生物利用度生物利用度（）=?

18、V,尿藥法數(shù)據(jù)記錄姓名：性別：產(chǎn)品廠(chǎng)家及批號(hào)：藥量：服藥時(shí)間：序號(hào)尿間小>集時(shí)1時(shí)口服水楊酸鈉真溶液口服水楊酸鈉片尿量<mL)件數(shù)一膘.吸收度平均濃度(mg/mL)排泄量(mg)尿量(mL)稀倍吸收度平均濃度(mg/mL)排泄量(nig)1020.53142546678810912101411241238累計(jì)累計(jì)序號(hào)集尿時(shí)間(h)中點(diǎn)時(shí)間(t中)間隔時(shí)間(1)真溶液片劑排泄量(X)平均尿藥速度(2X/t)Lg(AX/t)排泄量(X)平均尿藥速度(4X/DLg(AX/t)010.50.250.5210.750.5321.51443256526872710928121129141321

19、024191011383114思考題：血藥濃度法與尿藥法測(cè)定藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)各有何特點(diǎn)?11 / 20生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)講義實(shí)驗(yàn)三撲熱息痛血管外給藥的藥物動(dòng)力學(xué)研究一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? .通過(guò)本實(shí)驗(yàn)，掌握生物樣品分析方法的基本要求。2 .掌握撲熱息痛的血藥濃度測(cè)定方法及有關(guān)參數(shù)的計(jì)算。二、實(shí)驗(yàn)原理?yè)錈嵯⑼磁c亞硝酸發(fā)生親電取代反應(yīng)，生成2-亞硝基一4一乙酰氨基苯酚，用氨基磺酸鐵除去過(guò)量的亞硝酸，在堿性條件下，2-亞硝基一4一乙酰氨基苯酚于430nm波長(zhǎng)處有最大吸收。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容L標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)精密稱(chēng)取撲熱息痛lOOmg,以95%乙醉3mL溶解加適量水，轉(zhuǎn)移于100mL容量瓶中，加水至刻度，充分搖勻，得

20、撲熱息痛儲(chǔ)備液(Img/mL),精密吸取儲(chǔ)備液2.5mL準(zhǔn)確稀釋至10mL,得250ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。分別精密吸取250ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)液0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8mL于離心管中，分別加水使成2mL,各加家兔血漿1.5mL,搖勻，再加入2mLi0%三氯醋酸，充分混合再離心20分鐘(3000rpni)°吸取上清液4mL于25mL帶塞刻度試管中，加入ln】L6N鹽酸，lmL20%NaNO2溶液，搖勻，放置5分鐘，使反應(yīng)完全。慢慢加入2mLi5%叁基磺酸，振搖至無(wú)氣泡產(chǎn)生，流水冷卻，加入2.5mL2O%NaOH搖勻，用2cm比色杯于430nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。用蒸儲(chǔ)水

21、2mL代替標(biāo)準(zhǔn)液同法處理，作空白對(duì)照。標(biāo)準(zhǔn)液(mL)030.60.91.21.5l.S濃度(mg/mL)50100150200250300A(3次)A求出回歸方程標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)(回歸方程)2 .回收率試驗(yàn)分別精密吸取250“g/mL的標(biāo)準(zhǔn)液0.3、0.9、1.8mL于離心管中各三份，分別加水使成2mL,各加家兔血漿L5mL,搖勻,以下操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)項(xiàng)下“加入2mLi0%三氯醋酸,充分混合“起,依法操作，測(cè)定吸光度，代入回歸方程求其濃度，并與加入時(shí)濃度相比求出回收率.初始濃度(ug/mL)吸光度測(cè)得濃度(ug/mL)回收率(%)回收率均值RSD(%)21.4364.29128.583 精密度試驗(yàn)精密吸

22、取250ug/n】L的標(biāo)準(zhǔn)液0.3、0.9、1.8mL于離心管中各6份，分別加水使成2mL,各加家兔血漿L5mL,搖勻,以下操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)項(xiàng)下“加入2mLi0%三氯醋酸,充分混合“起,依法操作,測(cè)定吸光度，求其日內(nèi)精密度。初始濃度（ug/mL）吸光度吸光度均值RSD(%)21.4364.29128.584 .樣品穩(wěn)定性考察將上述標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)項(xiàng)下的“0.9mL”樣品處理好后于0.5h、lh、2h、3h、4h測(cè)定吸收度，考察處理后樣品室溫放置時(shí)的穩(wěn)定性。時(shí)間（h）（）0.51234吸光度均值RSD(%)5.樣品測(cè)定取家兔5只（雌兔不得懷孕），每只體重2.5kg3kg,給藥前先從耳靜脈取血3mL留作對(duì)照

23、。然后按200mg/kg的劑量，肌注給藥（給藥前禁食12小時(shí)）。給藥后按第3、5、10、15、25、30、40、60、100、140、180分鐘，定時(shí)從兔耳靜脈取血3mL,用干燥并帶有適量肝素鈉的離心管集血,輕輕搖勻，離心10分鐘（3000rpm）,吸取血漿于干燥試管中，置冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｈ〕鰺o(wú)藥血漿與各時(shí)刻的含藥血漿，室溫解凍后進(jìn)行測(cè)定：吸取1.5mL血漿，置刻度離心管中，加水2mL,混勻，以下操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)項(xiàng)下“加入2mLi0%三氯醋酸，充分混合“起，依法測(cè)定吸收度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算出該時(shí)刻的血藥濃度，以無(wú)藥血漿按同法處理作對(duì)照。6.結(jié)果記錄兔子體重：給藥劑量：測(cè)定記錄：編號(hào)123456

24、7S91011T(min)35101525304060100140180AAC(ug/mL)IgCT(min)C(yg/mL)尾段直線(xiàn)相外推線(xiàn)濃度的對(duì)數(shù)(IgCQ外推線(xiàn)濃度(CQ殘數(shù)濃度(ug/mL)Ch=C外棒-C殘數(shù)濃度的對(duì)數(shù)lgC«c尾段直線(xiàn)相斜率=K=殘數(shù)斜率=1<=四、數(shù)據(jù)處理1 .以血藥濃度(ug/mL)為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)，作吸收曲線(xiàn)圖(血藥濃度一時(shí)間曲線(xiàn))。2 .以血藥濃度(ug/mL)的對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間作血藥濃度一時(shí)間的半對(duì)數(shù)圖，從圖中求出消除速度常數(shù)K,再用殘數(shù)法求出吸收速度常數(shù)ka。3 .提取參數(shù)(h/25收、多/2制除、3、Cp)A.吸收半衰期：t1/2唳收

25、=0693/kaB.消除半衰期：ti/2滔近=0.693/KC.血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)下的總面積(AUCO-8)D.達(dá)峰時(shí)間(tp)根據(jù)ka及K求出達(dá)峰時(shí)間tptp=(lnka-lnK)/(ka-K)=2.3O3X(lgka-lgK)/(ka-K)拋物線(xiàn)擬合法用拋物線(xiàn)C=p+Qt_+Rt2的峰段代替藥時(shí)曲線(xiàn)的峰段，選取實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中最大濃度C(I)左右三點(diǎn)，瓜GmGi+iJ代入'則有：C(i/尸P+Qti.i=RE.Ci=P+Qti=Rt2iC(i+1)=P+Q-ti4.=R42i+i解上述方程組，求得P、Q、R的值拋物線(xiàn)的峰丟按橫坐標(biāo)(峰時(shí))為tp=-Q/2RE.峰濃度CpCp=A(e-Kl

26、p-e-Kalp)A-截距(可以從lgCt圖中求得)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：思考題：血藥濃度法求算藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的原理？血藥濃度法測(cè)定藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的要求？13/20生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)講義實(shí)驗(yàn)四大鼠在體小腸吸收實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? .掌握大鼠在體小腸吸收的實(shí)驗(yàn)方法。2 .掌握計(jì)算藥物的吸收速度常數(shù)（Ka）,以及每小時(shí)吸收率的計(jì)算方法。二、實(shí)驗(yàn)原理大多數(shù)藥物以被動(dòng)擴(kuò)散方式從生物膜的高濃度側(cè)通過(guò)膜向低濃度側(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)。被動(dòng)擴(kuò)散可用Fick第一定律來(lái)描述。該定律指出，擴(kuò)散速度（dC/dt）正比于膜兩惻的濃度差（：），因此有：-=KaC=Ka（C-Ch）（1）式中。是消化道中的藥物濃度，是血液中藥物濃度，Ka是吸收

27、速度常數(shù)，其值大小取決于藥物的擴(kuò)散常數(shù)、吸收膜的厚度與面積以及藥物對(duì)膜的穿透性。胃腸道吸收的生物學(xué)過(guò)程包括這樣一個(gè)系統(tǒng)，即藥物從胃腸道屏障的一側(cè)向另一側(cè)擴(kuò)散。因?yàn)檫M(jìn)入血液的藥物很快分布到全身，故與吸收部位比較，血中藥物濃度維持在很低的水平。幾乎在所有口服給藥的情況下，對(duì)于胃腸道來(lái)說(shuō),血液的作用猶如“水槽工并且在整個(gè)吸收相保持很大的濃度梯度，C»Cb,則七C,于是（1）式可以簡(jiǎn)化為：=KaC（2）dt此為一級(jí)速度方程式的標(biāo)準(zhǔn)形式。胃腸道按一級(jí)動(dòng)力學(xué)從消化液中吸收大多數(shù)藥物.用消化液中藥物量的變化）dXa/dt）表示吸收速度，則：一獨(dú)=K“Xdt將（3）式積分，并在方程兩側(cè)同取對(duì)數(shù)。In

28、Xu=InX（0）-Kat（4）式中Xa為消化液中藥物量，Xa（O）為零時(shí)刻消化液中藥物量，Ka為藥物吸收速度常數(shù)。以InXa對(duì)t作圖得一條直線(xiàn)，其斜率為藥物在小腸中的吸收速度常數(shù)（Ka）。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1 .實(shí)驗(yàn)操作（1） 取85ml供試液（100mlKrobsRinger試液含SD2mg,酚紅2mg）加入循環(huán)裝置中。（2）將實(shí)驗(yàn)前禁食一夜，體重200g左右的雄性大鼠，稱(chēng)重，腹腔注射戊巴比妥鈉（劑量為100g體重注射0.4ml）,麻醉后并加以固定。（3） 沿腹中線(xiàn)打開(kāi)腹腔。自十二指腸上部及回腸下部各剪開(kāi)一個(gè)小口，各插入直徑為0.5cm的玻璃管，用線(xiàn)扎緊，并用37的生理鹽水將小腸內(nèi)容物沖洗干凈，

29、然后將大鼠串聯(lián)到循環(huán)裝置中O（4） 開(kāi)動(dòng)蠕動(dòng)泵，以5nW分的流速循環(huán)10分鐘后流速調(diào)至2.5nW分。（5）自燒瓶中取樣1.5ml（Imk0.5ml各一份）為和酚紅零時(shí)間樣品,并補(bǔ)加2ml酚紅溶液（每亳升Krobs-Ringer試液含酚紅20ug）,其后每15分鐘取樣（1ml、0.5ml各一份），同時(shí)補(bǔ)加酚紅溶液2mL由于酚紅不被小腸吸收，用以測(cè)定水被小腸吸收的量，2.定量方法（1）磺胺嗑噬的定量取樣品1ml,加入lmol/L5ml.加入0.1%NaNO21mL搖勻，放置3分鐘，加入0.5%氨基磺酸氨1ml,搖勻,放置3分鐘。加入0.1%蔡乙二胺2ml,搖勻,放置20分鐘.在波長(zhǎng)555nm處測(cè)定

30、吸收度。參比溶液的配制：取1ml供試液按磺胺嗑蛇的定量方法不加荼乙二胺顯色劑°2） ）酚紅定量取酚紅溶液0.5ml,加入0.2mol/LNaOH5ml,搖勻,在波長(zhǎng)555nm處測(cè)定吸收度。參比溶液：0.2mol/LNaOH溶液。3） 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備（1）酚紅的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)精密稱(chēng)取酚紅lOOmg,置1000ml容量瓶?jī)?nèi)，加1%Na2cCh溶液溶解并稀釋至刻度，制成100ug/ml的儲(chǔ)備液。取1,2,3,4,5,6ml的儲(chǔ)備液于10ml容量瓶中，加蒸鏘水至刻度。自上述各溶液中吸取0.5mL按酚紅的定量方法測(cè)定吸收度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。（2）磺胺暗噬標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)精密稱(chēng)取磺胺嗑咤標(biāo)準(zhǔn)品10mg置100

31、ml容量瓶中，以蒸鐳水溶解并稀釋至刻度，使成100ug/ml的儲(chǔ)備液。取儲(chǔ)備液適量，稀釋成20100ug/ml的溶液，分別吸取2,4,6,8,10ml于10ml容量瓶中，加蒸儲(chǔ)水至刻度。從上述溶液中吸取1ml按磺胺喀吃定量方法測(cè)定吸收度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),四、數(shù)據(jù)處理1. 將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)按表1中公式進(jìn)行計(jì)算。表1大鼠在體小腸吸收量的計(jì)算式取樣時(shí)間（h）SD吸收度SD濃度酚紅吸收度酚紅濃度供試液體積剩余藥量循環(huán)前AoCoAoCoV（尸85mlPo=85xCo0AjClAtCl1G0.25a2c2A2c2v_（K-1.5）C1+4。2c；一12=CM+1.5ZG0.5AsC3A3C3_（V2-1.5）C2+403Q6=GK+i.5（G+g）InAnCnAnCn+4。G一|2=CM+1.5ZG2以剩余藥量的對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間作圖，求出吸收速度常數(shù)Ka和每小時(shí)吸收率（）。每小時(shí)吸收率（）=（零時(shí)間剩余藥量一60分鐘剩余藥量）/零時(shí)間剩余藥量x100%思考題：用小腸剩余藥量測(cè)定吸收速率常數(shù)的原理？17 / 20實(shí)驗(yàn)五氨茶堿藥物動(dòng)力學(xué)的研究一、實(shí)驗(yàn)