1、01.0 目的01.1 闡述潔凈室（區）空氣中沉降菌檢測操作規程，保證藥品的質量，防止生產環境對產品的污染，保證實驗室的環境達到檢測產品的要求。02.0 適用范圍02.1 適用于本公司的潔凈室（區）的沉降菌監測和潔凈度等級的驗證。03.0 人員職責測試人員對潔凈室（區）沉降菌的測試。04.0 內容04.1 術語和定義下列術語和定義適用于本規程。04.1.1 菌落：細菌培養后，由一個或幾個細菌繁殖而形成的細菌集落，簡稱CFU，通常用個數來表示。04.1.2 沉降菌：用GB/T16292-2010 提及的方法收集空氣中的活性微生物粒子，通過專門的培養基在適宜的生長條件下系繁殖到可見到的菌落數。04

2、.1.3 沉降菌菌落數：規定時間內每個平板培養皿收集到空氣中沉降菌的數目，以cfu/皿表示。04.2 測試原理：本測試方法利用沉降法，即通過自然沉降原理收集空氣中的生物粒子于培養基平皿，經若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數，以平板培養中的菌落數來評定潔凈環境內的活微生物數，并以此來評定潔凈區的潔凈度。04.3 監測周期：A級潔每次室驗做監控，B級每周一次，C級每季度一次，D級每半年一次監控。04.4 測試方法：04.4.1 使用設備與材料高壓滅菌鍋：使用時應嚴格按照操作規程進行。恒溫恒濕培養箱：必須定期對培養箱進行校驗。培養皿：一般采用90mm×15mm培養皿。培養基：胰

3、酪大豆胨瓊脂培養基（TSA）； 已滅菌配制好的培養基平皿放入30-35恒溫培養箱中培養72小時，若培養基平皿上確無菌落生生即可供采樣用，制備好的培養基平皿應放在2-8的環境中存放。清潔劑：75%酒精04.4.2 測試時間：（1）對單向流，如A級凈化房間內及超凈工作臺，測試應在凈化空調系統正常運行不少于10分鐘后開始。（2）對非單向流，如B級、C級、D級以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30分鐘后開始。（3）培養皿的采樣時間：靜態測試時，培養皿暴露時間為30min以上；動態測試時，培養皿暴露時間為不大于4小時。04.4.3 采樣點數及其布置（1）最少采樣點數目：面積(M)（m2）

4、潔凈度級別A級B級C級D級M102322210M20422220M40822240M10016422注：表中的面積，對于單向流潔凈室（區）、潔凈工作臺，指的是送風面積，對非單向流潔凈室（區），指的是房間面積。（2）最少培養皿數潔凈度等級所需90mm培養皿數（以沉降4h計）A級14B級2C級2D級2（3）采樣點布置潔凈室（區）采樣點布置宜力求均勻，避免采樣點在局部區域過于稀疏。下列多點采樣的采樣點布置圖示可作參考（見圖1）圖1平面采樣點布置圖A級單向流區域，潔凈工作臺或局部空氣凈化設施的采樣點宜布置在正對氣流的工作面上，氣流形式可參考圖2、圖3。圖2水平單向流的氣流形式圖3垂直單向流氣流形式工作

5、區采樣點的位置離地左右（略高于工作臺面）。取樣時，應盡量避免在回風口附近取樣（距離1m以上），且測試人員應在取樣的下風測，并盡量少走動。可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加采樣點。取樣時，取樣設備會對流產生干擾，取樣時應避免可能對氣流組織的干擾。04.4.4 測試步驟：04.4.4.1 采樣方法 用無菌容器將預先培養的培養基（無菌平皿）放至傳遞窗，紫外燈照0.5小時，待檢測用，將培養皿取出，用75%酒精擦平皿表面，放置在預先確定的取樣點，打開培養皿蓋，使培養基表面暴露時間不少于30min，現將培養皿蓋，蓋后倒置培養。檢測時記下培養皿打開的起始時間和結束時間。04.4.4.2 培養： 全部采樣結

6、束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。30-35培養，時間為72小時。每批培養基應有對照試驗，檢查培養基本身是否污染，可每批選定3個培養皿做對照培養。04.4.4.3 菌落計數 用肉眼直接計數，然后用5-10倍放大鏡檢查，是否有遺漏。若培養皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上計數。04.4.5 注意事項04.4.5.1 測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。04.4.5.2 采取一切措施防止人為對樣本的污染。對培養基條件及參數的詳細記錄。04.4.5.3 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般有透射光于培養皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，必

7、要時用顯微鏡別。04.4.5.4 采樣前應仔細檢查每個培養皿的質量，如發現變質、破損或污染的應剔除。04.4.5.5 測試狀態沉降菌測試前，溫度在18-26，相對濕度在45%-65%，潔凈區與非潔凈區和潔凈區與潔凈區之間的靜壓差10Pa。01.002.003.004.004.104.204.304.3.104.3.204.3.304.3.404.3.504.3.5.104.3.5.204.3.5.304.3.5.404.3.5.504.3.5.6 測試人員測試狀態有靜態和動態兩種，并在報告中注明測試狀態。靜態測試時，室內測試人員不多于2人。被測試潔凈區已消毒，測試人員必須穿戴符合環境潔凈度級別

8、的工作服。04.4 結果計算用計數方法得出各個培養皿的菌落數。平均菌落數的計算見下式：計算公式：M=Min 式中M為平均菌落數（CFU）Mi表示1，2，3，n號皿菌落數；n表示平皿總數。04.5 標準潔凈度級別沉降菌平均菌落數（CFU/皿）以4小時計A級1B級5C級50D級10004.6 結果評定04.6.1 每個測點的沉降菌平均菌落數必須低于所選定評定標準中的界限。04.6.2 在靜態測試時，若某測點的沉降菌落數超過評定標準，則重新測試兩次，兩次測試結果均合格才能判為合格。05.0 附件05.1 REC：JY-001-01沉降菌檢驗原始記錄06.0 參考文獻藥品生產質量管理規范