1、藥品衛生檢驗方法分類一:中國法規規章庫分類二:醫藥衛生頒布時間:1991-05-16有效時間:1991-05-16失效時間頒布機構:衛生部數據庫:法律法規資料庫前言中成藥、化學藥品、生化藥品的非滅菌制劑及藥用原料、輔料，除另有規定外，皆按本法進行檢驗。并按中華人民共和國衛生部頒布的藥品衛生標準及有關規定判定檢驗結果。注年月日衛生部發布的藥品衛生檢驗方法同時廢止。藥品衛生檢驗方法總則抽樣供試品一般按批號抽樣抽樣時，凡發現有異常或可疑的樣品，應抽選有疑問的樣品，但因機械損傷明顯破裂的包裝不得作為樣品。凡已能從藥品、瓶口（外蓋內側及瓶口周圍）外觀看出長螨、發霉、蟲蛀以及變質的藥品，可直接判為不合格品

2、，無需再抽樣檢驗。抽樣量一般應為檢驗用量（個以上最小包裝單位）的倍量。一般采用隨機抽樣方法抽樣。供試品保存供試品在檢驗之前，應保存在陰涼干燥處（勿冷藏或冷凍），以防供試品中的污染菌因保藏條件所引起致死、損傷或繁殖。供試品在檢驗之前，應保持原包裝狀態，嚴禁開啟。包裝已開啟的樣品不得為供試品。檢驗供試品檢驗項目按中華人民共和國衛生部頒布的藥品衛生標準確定。檢驗的全過程必須符合無菌技術要求。除另有規定外，供試品制備成供試液后，應在均勻狀態取樣。供試品制成供試液后，應在小時內注皿操作完畢。檢驗量所有劑型的檢驗均需取自個以上包裝單位。口服固體制劑中成藥丸劑、片劑、沖劑、散劑、膠劑、茶劑、曲劑、膠囊劑等檢

3、驗量均為。蜜丸除應取自個以上包裝外，還應取自丸以上。化學藥品、生化藥品的粉劑、膠囊劑、片劑、沖劑、滴丸劑等檢驗量為。口服液體制劑：糖漿劑、乳劑、合劑、溶液劑、混懸劑、酒劑等檢驗量為。半固體制劑：膏劑等檢驗量為。外用液體制劑：滴眼劑、滴鼻劑及其他液體制劑檢驗量為。外用栓劑、軟膏劑、眼膏劑等檢驗量為。膜劑，除另有規定外，中藥膜劑檢驗量取平方厘米，化學藥及生化藥膜劑取平方厘米，以上均需取自個以上包裝并片以上。特殊貴重的或極微量包裝的藥品，其檢驗量可酌減。除另有規定外，口服固體制劑不得低于；液體制劑采用原液者不得少于、采用供試液者不得少于；外用藥品不得少于。檢查活螨的取樣量，見活螨檢驗法。供試液的制備

4、一般供試品的供試液制備方法。固體供試品稱取，置研缽中，以稀釋劑（生理鹽水或磷酸鹽緩沖液（）分次加入研磨細勻，并轉移至錐形瓶中，使成供試液。或將供試品和稀釋劑同置勻漿儀中，以轉速轉分，開機-分鐘。對吸水膨脹或粘度大的供試品，可制成供試液。液體供試品量取，加入含稀釋劑的錐形瓶中，混勻成供試液。合劑（含王漿、蜂蜜者）、滴眼劑等可以原液為供試液。半固體供試品稱取，加入含稀釋劑的錐形瓶中，混勻成供試液。特殊供試品的供試液制備方法非水溶性基質供試品供試液的制備方法（）軟膏劑、乳膏劑吐溫西黃蓍膠（或羧甲基纖維素鈉）法稱取供試品，置研缽或燒杯中，加吐溫-，充分研勻。加入西黃蓍膠或羧甲基纖維素鈉，充分研勻以的稀

5、釋劑，邊加邊研磨，使成均勻乳劑，并移至錐形瓶中，即為供試液。注吐溫-預先以高壓滅菌分鐘。西黃蓍膠、羧甲基纖維素鈉預先以干熱滅菌分鐘。-原注液體石蠟吐溫法稱取供試品，分別量取液體石蠟（液體石蠟，預先以干熱滅菌小時），吐溫-，稀釋劑。先將供試品置研缽中，邊研磨邊加液體石蠟，然后再邊研磨邊滴加吐溫-，研磨均勻后，再邊加稀釋劑邊研磨，初始每次約，待起團塊時，加入量可增至約，稍停分鐘，再輕輕研磨至乳化，將稀釋劑加完為止。即得供試液。（）栓劑稱取供試品，置錐形瓶（內含玻璃珠若干粒）中，加適量稀釋劑，置水浴浸泡分鐘使融，加吐溫-，振搖使之乳化，再加稀釋劑（稀釋劑和吐溫總量為）制成供試液。（）油劑量取供試品，

6、加入吐溫-稀釋劑，混勻，制成供試液。膠囊劑、膠丸及膠劑供試液制備方法（）膠囊劑、膠丸劑稱取供試品置錐形瓶中，加入稀釋劑，于水浴中振搖至溶，即為供試液。（）膠劑取膠劑若干，搗碎，稱取，再用研缽研細，轉入錐形瓶中，加入稀釋劑，置于水浴中，振搖使溶，即為供試液。腸溶膠囊（片）劑供試液制備方法稱取供試品，置錐形瓶中并放入水浴，加入磷酸鹽緩沖液（附錄二），保溫、振搖，使腸衣溶解，混勻，即得供試液。氣霧劑供試液制備方法。將供試品置冰室內小時后，取出，用滅菌鋼錐小心鉆孔，使拋射劑緩慢釋放，然后再用滅菌注射器加入適量稀釋劑，混勻后吸取相當于或的供試品，再稀釋成供試液。膜劑供試液制備方法中藥膜劑除另有規定外，取

7、-平方厘米，將藥膜剪成碎片，置錐形瓶中，加稀釋劑適量，使每含平方厘米濃度，浸泡分鐘，搖勻，即得。化學藥膜劑除另有規定外，取平方厘米，置錐形瓶中，加稀釋劑，浸泡、振蕩使溶，即得。必要時，可置水浴中助溶。含抑菌成分供試品的供試液制備方法。凡含有防腐劑或抑菌成分且影響檢驗（陽性對照控制菌不生長）的供試品，可根據供試品的性質，控制菌的特性及檢驗條件等按下列方法之一（或兩種以上方法聯合應用）及其他適宜方法處理后，作控制菌檢驗。離心沉淀法可溶性供試液取供試液，置入刻度離心管中，以轉分以上離心沉淀分鐘，用毛細吸管吸取上清液棄掉，留下管底約殘余液，將其全部洗入增菌培養基中，作控制菌檢驗。混懸供試液取供試液，置

8、刻度離心管中，先以轉分離心沉淀分鐘，取其上層液移入另一離心管中，再經轉分以上離心沉淀分鐘，棄去上清液，保留約殘余液，全部洗入增菌培養基中，作控制菌檢驗。本法適用于一些抑菌作用不強的中、西藥品，如蜜丸、水丸、片劑、散劑、沖劑、膠囊劑及液體制劑。應用本法須嚴防操作污染，并注意上層液或上清液和管底殘渣的分離，避免沉渣混入其中。薄膜過濾法取規定量的供試液，按加生理鹽水約的比例，混勻，置入薄膜過濾器內，減壓過濾至干，再以生理鹽水或其他適宜溶劑沖洗濾膜次，每次。取出濾膜，剪成-片，使每片相當于供試品或。放入增菌培養基中，作控制菌檢驗。本法適用于水溶性抑菌成分的中、西藥品和滴眼劑等的制劑“滅活”處理。安放濾

9、膜時，注意濾膜與濾器應密合，防止濾膜破損、漏液。本法所用微孔濾膜孔徑應為。鈍化劑中和法磺胺類藥物中和法取規定量供試液，加入含對氨基苯甲酸的增菌液中，作增菌培養即得。本法適用于含磺胺較少的制劑、如三磺軟膏、消炎眼藥水、斑馬眼藥水等。應用本法可因供試品不同，對氨基苯甲酸的用量，可適當調整。含重金屬藥物中和法取規定量供試液，加入硫乙醇酸鈉-胱氨酸增菌液（附錄三）中，作增菌培養即得。本法適用于含重金屬鹽類藥物的檢驗，如磺胺嘧啶銀軟膏等。含洗必泰等制劑中和法取規定量供試液，加入含適量吐溫-等表面活性劑的增菌液中，作增菌培養即得。本法適用于洗必泰含片、洗必泰栓、霉滴栓及其他含抑菌成分的供試品。應用本法須注

10、意，由于供試品不同，用量應預試，表面活性劑的用量應預試，用量不可過大，否則本身亦產生抑菌作用。沉降法（）取規定量供試液，自然沉降分鐘，吸取上層液于增菌液中，作增菌培養即得。（）取規定量供試液，自然沉降分鐘，吸取上層液于含對氨基苯甲酸的增菌液中，作增菌培養即得。本法適用于水溶性小的抗菌制劑檢驗，如磺胺類藥。（）法適用于單一成分固體制劑，如磺胺嘧啶片檢驗；（）法適用于復方磺胺制劑，如復方磺胺嘧啶片、復方新諾明片等檢驗。應用本法時，供試品應充分研細，并與稀釋劑充分搖勻，使污染菌分散于液相中；沉降時間不宜超過分鐘，以防菌細胞下沉；取上層液時，避免吸入藥渣。稀釋法取供試液，加入較大量增菌液中（使該供試品

11、稀釋至陽性對照菌能生長的濃度），作增菌培養即得。本法適用于抑菌作用不強的中藥、化學藥品檢驗。對照試驗陰性對照試驗測試檢驗全過程無菌技術的可靠性。菌數測定陰性對照試驗：用吸管從供用的稀釋劑中各吸取于個無菌平皿中，分別按細菌數、霉菌數測定方法注皿培養、檢查，不得長菌。控制菌檢驗陰性對照試驗：用吸管從供用的稀釋劑中吸取于增菌液中，按控制菌檢驗方法檢查，不得長菌。陽性對照試驗檢查供試品是否對控制菌生長產生干擾作用及檢查培養條件是否適宜。陽性對照試驗方法同供試品檢驗，于供試液中加入一定量的相應對照菌，作平行試驗。規定陽性對照菌株：大腸桿菌（）、沙門氏菌（）、綠膿桿菌（）、金黃色葡萄球菌（）及破傷風桿菌（

12、）。對照菌的加入量為個，可事前預試確定。需氣菌常用計數方法，取培養小時的新鮮肉湯培養物，倍遞增稀釋至，取其于普通肉湯瓊脂平板表面涂抹或取稀釋液以注皿法進行菌數測定。當供試品未檢出供試菌時，而陽性對照試驗也未能檢出，不能做出供試品未檢出控制菌的結論。陽性對照試驗操作必須與供試品檢驗操作嚴格分開，避免交叉污染。檢驗報告單位細菌數、霉菌數和酵母菌數的測定一般以或為單位的菌落數表示。中藥膜劑以平方厘米、化學藥及生化藥膜劑以平方厘米為單位的菌落數表示。眼科用藥的霉菌和酵母菌數以或為單位的菌落數或“未檢出”表示。控制菌檢驗報告一般以或、中藥膜劑以平方厘米、化學及生化藥膜劑以平方厘米為單位報告“檢出”或“未

13、檢出”。復試菌數測定不合格者應復試。控制菌檢驗以次檢出為準，不再復試，但應保留檢出菌株個月備查。復試項目以不合格項目為準，作單項復試。復試需另取同批號樣品，測定次。復試報告以次測定結果的算術平均值報告。眼科用藥的霉菌和酵母菌數復試報告，須以二次復試結果均不得長菌，方可判定合格。特別抽樣不符合部頒藥品衛生標準規定的藥品，經衛生行政部門審批準予在不影響外觀與質量的前提下，充許采取適宜措施進行處理，處理后的藥品抽樣按本款進行。抽樣方法大包裝抽樣，按出廠的大包裝，件以下抽件，件以上每增加件加抽件，最后不足件者不加抽，超過件加抽件。小包裝抽樣，按規定手續，從大包裝中隨機抽取小包裝個以上單位為供試品。檢驗

14、項目：按部頒藥品衛生標準規定檢驗，不得單項檢驗。檢驗報告測定菌數報告：以各次測定結果全部平均值報告。控制菌按全部復試檢驗結果報告，如全部復試均未檢出控制菌時，報告為：“按規定抽樣檢驗結果未檢出菌”；如全部抽樣中任一樣品檢出控制菌時，報告為：“按規定抽樣檢驗，檢出菌，不符合藥品衛生標準規定”。注報告中寫出具體的控制菌名稱。細菌數測定細菌數是指規定單位的非規定滅菌藥品制劑中污染活細菌的數量。是判定藥品受到細菌污染程度的標志。其內含是多義的。細菌數愈多，表明藥品受到致病微生物污染的可能性以及藥品制劑的變質可能性也愈大，安全性也就越差。同時細菌數測定也是對生產單位的藥品原輔料、器具設備、工藝流程、生產

15、環境和操作者的衛生狀況進行衛生學評價的綜合依據之一。細菌數測定采用平板菌落計數法，是一種活菌計數法。測定結果只反映出在規定條件下生長的細菌數，不可能包括在本法條件下不生長的細菌，因而測定數只可能低于實際的污染數。此外，測定中個細菌可能繁殖成個菌落，而一群也可能只形成個菌落，以及污染的不均勻性等等原因，極易造成測定差異。故在測定細菌數時，必須嚴格按本法所規定條件操作。培養基、試劑肉湯瓊脂（或肉湯瓊脂）（附錄三，）磷酸鹽緩沖液（）或生理鹽水（附錄二）檢驗程序制備稀釋稀釋供試品供試液供試液供試液平皿平皿平皿個個個 注皿干燥培養小時菌落計數報告操作步驟供試液制備，經陰性對照取樣后，按各類制劑制備供試液

16、的方法（總則）制備。稀釋及吸樣稀釋級一般應采用級。稀釋取吸管支，吸取混勻的供試液（或原液、供試液），在離稀釋劑液面上約處，沿管壁注入裝有的稀釋劑的試管中，混勻成（或、）的稀釋液。吸樣用上述吸管分別取供試液（或原液、供試液），注入個平皿中。以另一支吸管，按上述操作，作下一級的稀釋與吸樣。操作時，應特別注意每次吸液前必須使稀釋液充分混勻（吸管反復吹吸數次或充分震蕩），以使菌體充分均勻分散，降低測定誤差。傾注瓊脂（注皿）與干燥事先將肉湯瓊脂融化、置水浴中，備用當供試液及各級稀釋液均注入平皿后，以上述瓊脂傾注入平皿，每皿約，隨即轉動平皿，使樣液與瓊脂混勻后置水平臺上待凝。干燥瓊脂凝固后，在凈化條件下開

17、蓋倒置或換滅菌的陶瓦蓋，使平板干燥，減少平板表面的水分，防止菌落蔓延生長。干燥時間一般在小時左右，干燥時間計入培養時限。將上述平板倒置于培養箱中，培養小時。菌落計數細菌菌落是個菌細胞或菌細胞團在局限位置上，經一定條件繁殖成肉眼可見的細菌群體。由于細菌種類繁多，形成菌落大小、形狀、色澤、透明度等皆因種而異，差別甚大。計數時一般用透射光于平板背面或正面仔細觀察。不要漏計瓊脂層內和平板邊緣生長的菌落。并須注意細菌菌落與藥渣或培養基的沉淀物，酵母菌及霉菌菌落的區別。必要時，用顯微鏡鑒別。用肉眼直接計數、標記或在菌落計數器上點計，然后用倍放大鏡檢查，有否遺漏。若平板上有個或個以上的菌落重疊，可分辨時仍以

18、個或個以上菌落計數。平板上有片狀菌落或花斑樣菌落蔓延生長以及平板受到污染的情況，該平板計數無效。計算各稀釋級平均平板菌落數。當用一稀釋級使用個平板時，應采用個平板菌落數的均值為平均平板菌落數。若個平板菌落數相差在倍以上時，該稀釋級不宜采用，但不包括個平板菌落數均在個以下的情況。注以下兩平板菌落數允許幅度、。當同一稀釋級使用個平板時，應采用個平板菌落數的均值為平均菌落數。若其中個平板菌落數與其他個相近的平板菌落數的均值相差倍以上時，該平板菌落數不能參與平均，但不包括平板菌落數均在個以下的情況。注以下平板最大與最小菌落數的允許幅度，、。菌數報告規則一般宜選取平均平板菌落數在間的稀釋級，作為菌數計算

19、的依據。若有個稀釋級的平均平板菌落數處在時，將該稀釋級的平均平板菌落數乘以稀釋倍數，為報告菌數。若有個稀釋級的平均平板菌落數處在時，先計算兩稀釋級菌落數的比值。高稀釋級的平均平板菌落數稀釋倍數比值低稀釋級的平均平板菌落數稀釋倍數當比值時，以兩級的菌落數均值為報告菌數。當比值時，以低稀釋級平均平板菌落數乘以稀釋倍數為報告菌數。若有個稀釋級的平均平板菌落數均處在時，采用后個稀釋級計算級間比值。當比值時，以兩級的菌落數的均值為報告菌數。當比值時，以低稀釋級平均平板菌落數乘以稀釋倍數為報告菌數。若各稀釋級平均平板菌落數均在以上，按最高的稀釋級的平均平板菌落數乘以稀釋倍數為報告菌數，或適當增加稀釋級，重

20、作測定后報告結果。若各稀釋級的平均平板菌落數均不在間，其中一稀釋級的平均平板菌落數大于，相鄰稀釋級的平均平板菌落數又小于時，以最接近或的稀釋級平均平板菌落數乘以稀釋倍數為報告菌數。若各稀釋級平均平板菌落數均小于時，按最低稀釋級的平均平板菌落數乘以稀釋倍數為報告菌數。但若應用原液為供試液，當稀釋級與原液的平均平板菌落數相等或大于時，應以培養基稀釋法測定，按測定結果報告菌數。培養基稀釋法：吸取供試液（原液或供試液），注入個平皿內（每皿，總量為）。共作份，共個平皿。每皿傾注融化并冷至左右的普通肉湯瓊脂約，旋轉混合，冷凝后按規定培養溫度與時限培養、計數。將每注入個平板的菌落計數結果合并為每菌落數，共得

21、組數據。取組數據平均值乘稀釋倍數，為報告菌數。若各稀釋級的平均平板菌落數均無菌落生長或測定數在個以下時，報告菌數為個。表細菌數報告規則舉例供試品稀釋倍數級間 報告數 規則原液菌落數 1 23 比值 書寫 1010 10 5.1 1365 16420 16400 1610或16000 35.2.1 276029546 1.6 37750 3810或38000 35.2.2 289027160 2.2 27100 2710或27000 35.3.1 239 20235 1.7 27600 2810或28000 3 5.3.2 236 19642 2.1 19600 2010或20000 45.4

22、不可計4650 513513000 5110或510000 35.5 不可計30512 30500 3010或300005.6 2419 12 2402410或2405.6 22.3277 2702710或2705.7 0.6 00610 報告數書寫菌落數在個以內時，按實測數書寫報告。菌落數大于時，取二位有效數字，第三位數按有效數字處理規則處理，為簡便計，也可用的指數報告。霉菌和酵母菌數測定霉菌和酵母菌數是指規定單位非規定滅菌藥品制劑中污染的霉菌和酵母菌的活菌數量。霉菌和酵母菌廣泛分布于自然界，土壤、空氣及水中都有它們的菌體及孢子存在。因而在藥品生產、貯藏等各個環節均可污染藥品，以致引起藥品變

23、質，危害人體健康。有些霉菌毒素也是重要的致癌物質。霉菌和酵母菌數是判定藥品受到污染程度的標志之一，也是對藥品原料、生產工藝、生產環境以及操作人員衛生狀況進行衛生學評價的綜合依據之一。霉菌和酵母菌種屬繁多，采用一種培養基和培養條件，不可能適合所有霉菌和酵母菌的生長繁殖。故本法測定結果只能是在一定條件下平板生長的霉菌和酵母菌菌落數。本法規定，一般制劑用虎紅瓊脂作霉菌數測定（液體制劑包括酵母菌數）。但含蜂蜜或王漿的合劑另以酵母膏，蛋白胨、葡萄糖（）瓊脂作酵母菌數測定，而霉菌數測定仍用虎紅瓊脂。培養基、試劑磷酸鹽緩沖液（）（附錄二）生理鹽水（附錄二）瓊脂培養基（附錄三）虎紅瓊脂培養基（附錄三）檢驗程序

24、供試品供試液供試液供試液合劑（含蜂蜜或王漿者）滴眼劑平皿個平皿個平皿個平皿個虎紅瓊脂，瓊脂（含蜂蜜或王漿的合劑用）注皿培養小時菌落計數報告操作步驟供試液的制備（總則）與稀釋，按細菌數測定項下的方法進行。稀釋級一般采用級。合劑（含蜂蜜或王漿者）和滴眼劑可用原液作第級供試液，分別在作倍遞增稀釋的同時，即可取該稀釋級的吸管吸取稀釋液于滅菌平皿內，每個稀釋級個平皿。各稀釋液注入平皿后，應及時將融化并冷至左右的虎紅瓊脂培養基（如供試品為含蜂蜜或王漿的合劑，加用瓊脂培養基測定酵母菌數）約傾注平皿內，搖勻待凝。凝固后，置培養箱內，一般培養小時，如有可疑，可標記后適當延長培養時間。菌落計數方法菌落形態霉菌菌落

25、形態：具有放射狀或樹狀分枝的菌絲是霉菌菌落的特征。初形成時，多無色透明，有明顯的折光性，在較暗的背景下，以透射光觀察，易于識別。少數生長在瓊脂表面的菌落，初起時，似為小塊水跡，需借助暗反射光才能看清。成熟的霉菌菌落多數有各種顏色的孢子形成，隨種而異，極易判定。酵母菌菌落形態：在虎紅瓊脂平板上，多數為圓形凸起，邊緣整齊，表面光滑濕潤，呈不透明乳脂狀，乳白色或粉紅色。少數表面粗糙或皺褶，有的菌落周邊呈細分枝狀。位于瓊脂內的菌落，可呈鐵餅形、三角形及多角形。菌落外觀與細菌菌落不易區別時，應挑取菌落，用水制片，置高倍顯微鏡下觀察，其細胞個體比細菌大數倍，多為圓形或卵圓形，絕大多數為出芽繁殖。當平板內酵

26、母菌菌落甚多時，常有酒香氣。在瓊脂平板上的菌落與虎紅平板上的形態相似，但稍大，多數為乳白色。菌落計數：一般在平板背面用肉眼直接點數，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。若有根霉或毛霉蔓延生長時，為避免影響其它霉菌和酵母菌計數，應及時將平板取出計數或從平板背面觀察霉菌生長中心點或霉菌蔓延生長區域來計數。固體制劑僅計數霉菌菌落；液體制劑應計數霉菌菌落和酵母菌菌落的總數；含王漿或蜂蜜的合劑則應將虎紅平板上的霉菌數加上平板上的酵母菌數為霉菌和酵母菌總數，計算各稀釋級的平均平板菌落數。菌數報告規則選擇菌落數在之間的稀釋級平板計數，以該稀釋級的平均平板菌落數乘稀釋倍數作為報告菌數。若鄰近的個稀釋級平均平板菌落數

27、均在之間，計算級間比值。當比值時，以兩級菌落數的平均值為報告菌數；比值時，按低稀釋級平均菌落數乘稀釋倍數為報告菌數。各稀釋級平均菌落數均不足時，以最低稀釋級平均菌落數乘稀釋倍數為報告菌數。菌數報告的書寫固體制劑報告霉菌數；液體制劑及半固體制劑報告霉菌和酵母菌的總數。菌數報告的書寫參照細菌數測定。眼科用藥各稀釋級（含原液）均未生長菌落時，報告“未檢出”。大腸桿菌檢驗法大腸桿菌為腸桿菌科埃希氏菌屬細菌，是人和溫血動物腸道內的常住菌，隨糞便排出體外，可直接或間接污染藥品及藥品生產的各個環節。藥品中檢出大腸桿菌表明該樣品已受到糞便污染，服用后有可能被糞便中存在的腸道致病菌或寄生蟲卵等病原體感染。因此，

28、大腸桿菌被列為糞便污染指示菌，是非規定滅菌口服藥品的常規必檢項目。培養基、試劑普通肉湯培養基（附錄三）膽鹽乳糖（）增菌液（附錄三）乳糖發酵管（附錄三）或乳糖發酵管（附錄三）蛋白胨水培養基（附錄三）磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培養基（附錄三）西蒙氏檸檬酸鹽培養基（附錄三）伊紅美藍（）瓊脂（附錄三）麥康凱瓊脂（附錄三）柯凡克試劑（附錄二）甲基紅指示劑（附錄二）試劑（附錄二）革蘭氏染色液（附錄二）檢驗程序供試品供試液增菌液小時或麥康凱瓊脂小時疑似菌落生長無菌落生長普通肉湯瓊脂斜面報告小時革鏡乳靛甲檸蘭檬氏基基酸染試鹽色檢糖質紅驗小時報告操作步驟增菌培養取供試液（總則），加入備妥的增菌液內，置培養小時。增菌液

29、呈現混濁。液面可見或未見氣泡都表明有菌生長，如未見明顯混濁，可延長增菌培養時間至小時。分離培養將上述增菌培養液輕微搖動，以接種環沾取環劃線接種于或麥康凱瓊脂平板上。置培養小時（必要時延長培養時間），觀察菌落生長情況，大腸桿菌在瓊脂平板上的典型菌落呈深紫黑色或中心深紫色，圓形，稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，常有金屬光澤；在麥康凱瓊脂平板上的典型菌落呈桃紅色或中心桃紅、圓形，扁平，光滑濕潤。由于藥物影響或非典型菌的存在，大腸桿菌可出現非典型形態；在瓊脂平板上呈現淺紫、粉紫、粉色，無明顯暗色中心；在麥康凱瓊脂平板上呈現微紅色或粉色，菌落形態、質地也有改變。以上形態均應作為疑似菌落進行鑒定，切勿遺漏。分

30、離平板上無菌落或無疑似菌落生長，可作出未檢出報告。以接種針輕輕接觸單個疑似菌落的中心，沾取培養物，每次應挑取個或更多個疑似菌落，接種于普通肉湯瓊脂斜面或三糖鐵瓊脂斜面上。置培養小時，供革蘭氏染色鏡檢及生化試驗用。在上述檢驗過程中若發現疑似的其它規定控制菌時，亦應繼續鑒定。革蘭氏染色鏡檢將上述普通肉湯瓊脂斜面培養物涂片，作革蘭氏染色鏡檢。大腸桿菌為革蘭氏陰性無芽孢短桿菌。由于菌齡等原因，菌體長短可有變化。生化反應將上述斜面培養物接種于乳糖發酵管，置培養小時，觀察結果。大腸桿菌應發酵乳糖并產酸產氣，或產酸不產氣。產酸者，以酸性復紅為指示劑的培養基顯紅色；以溴麝香草酚藍為指示劑的培養基顯黃色。產氣者

31、，倒管內有氣泡。為避免遲緩發酵乳糖造成假陰性，可選用乳糖發酵管。絕大多數遲緩發酵乳糖的細菌可于小時內出現陽性反應。試驗靛基質試驗將斜面培養物接種于蛋白胨水培養基中，置培養小時。沿管壁加入柯凡克試劑，輕微搖動，觀察液面顏色。陽性反應為玫瑰紅色；陰性反應為試劑本色。甲基紅試驗將斜面培養物接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培養基中，置培養小時。于每培養液中加入甲基紅指示劑滴，立即觀察結果，陽性反應培養液為鮮紅色或桔紅色；陰性反應呈黃色。試驗將斜面培養物接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培養基中，置培養小時。于每培養液中加入試劑甲液（萘酚酒精溶液），混勻，再加試劑乙液（），充分振搖，觀察結果。陽性反應立刻或數分鐘后出

32、現紅色。加試劑后小時無紅色反應時為陰性，如出現紅色亦應判為陽性。檸檬酸鹽利用試驗將斜面培養物接種于西蒙氏檸檬酸鹽斜面，置培養小時，觀察結果。斜面有菌苔生長，培養基由綠色變為藍色時為陽性反應；斜面無菌苔生長，培養基顏色無改變為陰性反應。若斜面有微量菌苔生長或顏色改變等可疑現象時，應將待檢菌株重新分離、純化后，再行試驗。大腸桿菌反應模式應為或。對出現可疑反應的培養物，應將所分離的待檢菌株于或麥康凱瓊脂平板上重新劃線分離后，再作生化試驗證實。表大腸桿菌同有關細菌的鑒別及應用靛基質甲基紅檸檬酸鹽典型大腸桿菌非典型大腸桿菌典型中間型非典型中間型典型產氣腸桿菌非典型產氣腸桿菌結果報告完全符合以下結果時，判定為檢出大腸桿菌（）染色鏡檢是革蘭氏陰性無芽孢桿菌；（）乳糖發酵產酸產氣，或產酸不產氣；（）試驗反應為或。沙門氏菌檢驗法沙門氏菌為腸桿菌科沙門氏菌屬細菌，廣泛分布于自然界，是人畜共患的腸道病原菌，常引起傷寒、腸炎、腸熱癥和食物中毒，危害人類健康。